钉螺毛蚴感染湖北钉螺实验
人体寄生虫学实验设计-日本血吸虫动物实验模型
实验方法及步骤 （总体上三个板块）
01 尾蚴的培养
02 尾蚴的接种
03 观察和记录
尾蚴的培养
用去氯离子水培养钉螺以孵化尾蚴（自来水中的残余的氯气和氯离子对尾蚴有 毒性）
水温保持在20~25摄氏度,这个温度范围尾蚴溢出的最佳温度范围 水的PH值保持在6.6~7.8之间，这样才有利于钉螺中的尾蚴顺利释放 由于尾蚴具有趋光性和向上性，适宜的光照是尾蚴溢出必要的条件，同时为用
组
死
死
死
死
死
死
死
死
对实验设计的说明
实验分为两组：对照组和实验组，对照组是未接种尾蚴的组，实验组是接种过尾蚴的组， 控制无关变量：对照组和实验组的成年家兔的数目相同（各10只），将每组兔子随机编
号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，对照组的家兔虽然未接种尾蚴，但是其他处理 （麻醉处理、剃毛处理、饲料、笼舍温度等）均应该与实验组的成年家兔相同，已消除 无关变量对实验结果的影响，说明实验组家兔的病理变化是由于接种的血吸虫导致的而 不是其他因素导致的 本实验的目的之一（最重要的）是建立动物模型，观察动物感染血吸虫后组织的病理发 展变化过程，由于实验条件的限制，依据血吸虫病的致病过程，故采取每隔相同的时间， 处死编号相同的家兔（一只为对照组，一只为实验组），处死顺序从1~10依次进行（每 次处死后的实验组家兔的组织状况代表血吸虫病发展的一个阶段），观察其肝脏、肠及 肠系膜、肝门静脉的病理变化并做好记录（有无纤维化虫卵结节及其程度、有无成虫、 肝门静脉血管及其分支阻塞的程度、切片中有无何博礼现象），对于肝脏和脾脏应记录 其大小 对于对照组和实验组中的10号家兔，由于是最后被处死，从实验组家兔接种尾蚴后每天 观察其精神活动状态，观察有无腹水，每天定时对其粪便进行粪检查找虫卵
寄生虫学检验
寄生虫学检验1、夜现周期性：微丝幼在外周血中昼少夜多的现象。
2、棘球蚴砂：棘球蚴囊壁上脱落到内囊，并漂浮在囊液里的原头蚴、育囊、子囊、孙囊及胚层碎片等有形成分，统称为棘球蚴砂。
3、完全变态：生活史中包括卵、幼虫、蛹、成虫4个时期，各期形态和生活习性都不相同，称为完全变态。
如：蚊、蝇。
4、不完全变态：生活史中主要包括卵、幼虫、若虫、成虫四个基本时期（如螨），或卵、若虫、成虫三个基本时期（如虱），称为不完全变态。
5、医学原虫：寄生于人体细胞、组织、体液及官腔内的致病性与非致病性的原虫。
6、多分裂：一个母细胞分裂成多个子细胞的过程成为多分裂。
7、伴随免疫(concomitant immunity)活的成虫可使宿主产生获得性免疫力，这种免疫力对人体内原有的成虫不发生影响，但对再感染时侵入的童虫有一定的抵抗力。
8、复发：疾病初发后，红细胞内气疟原虫已被彻底清除，未经蚊媒传播感染，但肝细胞的内休眠体在某种因素的作用下结束休眠，开始裂体增殖，产生大量裂殖子释放入血，侵入红细胞又出现疾病发作，称为复发。
10、再燃：急性疟疾患者经过若干次发作后，由于人体对疟原虫产生免疫力，或药物治疗虽然发作症状停止，但还有少量残存的红内期疟原虫，在一定条件下又可出现疟疾发作。
11、寄生(parasitism) 两种生物生活在一起，其中一种生物从中获利，另一种受到损害，这关系成为寄生。
12、保虫宿主(reservoir host)也称储存宿主，某些蠕虫成虫或原虫的某一发育阶段即可寄生于人体，又可寄生于一些脊椎动物，在一定的条件下课传播给人。
流行病学上这些动物被称保虫宿主13、转续宿主(paratenic host)某些寄生虫的幼虫侵入非正常宿主后不能发育至成虫，但能存活并长期维持幼虫状态。
这种非正常宿主就叫转续宿主。
14、寄生虫生活史(life cycle of parasite)寄生虫的生活史是指寄生虫完成一代的生长、发育和繁殖的整个过程。
钉螺的形态与解剖
钉螺与其它相似螺类的鉴别
在自然界环境中孳生的某些种类的螺蛳， 其外形同钉螺较相似，易与钉螺混淆。 在查螺、报螺过程中，我们经常能碰到 一些群众将相似螺类当作钉螺报上来， 因此我们必须加以鉴别。
在实际工作易与钉螺混淆的相似螺类主 要有：方格短沟蜷、管螺、细钻螺（菜 螺）、泥泞拟钉螺等。
钉螺属(Genus Oncomelania)
钉螺的种类
微小钉螺（ Oncomelania minima) 湖北钉螺（ Oncomelania hupensis)
指名亚种（O.h.hupensis) 丘陵亚种（O.h.fausti) 滇川亚种（O.h.robertsoni) 广西亚种（O.h.guangxiensis) 福建亚种（O.h.tangi) 台湾亚种（O.h.formosana) 滨海亚种（O.h.chiui) 日本亚种（O.h.nosophora ) 印尼亚种（O.h.lindoensis) 菲律宾亚种（O.h.quadrasi)
位于外套膜的后部，与外套膜相连，随着 螺旋的扭曲，上端几乎达到壳顶，其内包 藏内脏。 通常未被血吸虫寄生的健康钉螺在内脏与 螺壳之间有空隙，凡感染血吸虫的钉螺， 这个空隙常被因血吸虫寄生而引起的肿大 的肝脏所充满而消失。
钉螺各器官和系统
感觉器官 神经系统 肌肉系统 呼吸系统 •排泄系统 血循环系统 消化系统 生殖系统 所有这些器官和系统均包裹于内脏囊内。
循环系统
钉螺的血液循环为开放式循环。循环系 统由心脏、主动脉、静脉窦组成。心脏 位于胃的前左侧，分为一心室一心房。 钉螺的血液为无色或浅蓝色的液体，没 有红细胞与白细胞，只有少量的血淋巴 细胞。其内交换氧气的为含有铜质的蛋 白质称为血蓝素。
武汉市大东湖引水工程钉螺问题研究
关 键 词 ：引 水 工 程 ； 螺 ； 吸 虫 病 ；武 汉 东湖 钉 血 文献 标 识 码 ： Ａ 中 图 分 类 号 ：Ｒ ３ ． １ ５ ２ ２
武 汉 市 大 东 湖 引 水 工 程 钉 螺 问题 研 究
李 志 军 马 经 安 蔡 建 清
（ 长江水利 委员会 长江水 资源保 护科学研究所 ， 湖北 武 汉 ４ ０ ５ ） ３０ １
ห้องสมุดไป่ตู้
摘要 ： 钉螺是 血吸 虫的 中间宿主 ， 是血吸 虫病传播 流行必不 可少的一个环节。长江 中下 游地 区是我 国钉 螺分布 区和血吸 虫病 主要 疫区之一。近年来 ， 为改善湖 泊水环境 ， 长 江引水济湖 的工程越 来越 多， 从 钉螺会 不会 随着
表 １ 引水闸所在的青 山区钉螺面积消长情况 年份 江湖洲滩
２ ０ ０３ ２ ｏ Ｏ４ ２ ｏ ０５ ２ ｏ ０６
２ ｏ ｏ７
ｈ ｍ
沟港
ＯＯ ． ０Ｏ ． ０Ｏ ． Ｏ０ ． Ｏ０ ．
坑塘
００ ．
荒地 堤套防浪林 水田
００ ．
Ｏ０ ．
２３ ． １７ ． ０７ ． Ｏ７ ．
江湖连通后 ， 过水 体 的流 动 ， 通 增氧复 氧 ， 改善大东 湖水系 的水
质， 逐步实现水 网生 态环境 的根本 好转 。大东 湖引水 工程拟 通
过青 山 港 引 水 闸 引 长 江 水 人 东 湖 。 由 于 东 湖 无 钉 螺 分 布 ， 长 而
医学寄生虫学 《寄生虫学》重要寄生虫生活史
（传播媒介）
【学习要点】 （1）姜片虫完成生活史需要一个中间宿主和水生植物媒介；成虫主要寄生在终宿主的十二指肠 或空肠上段； （2）姜片虫对人体的危害主要是成虫寄生引起的机械性损伤和虫体代谢产物引起的变态反应； （3）检获粪便中虫卵是确诊姜片虫感染的主要方法。姜片虫卵与肝片形吸虫卵和棘口类吸虫卵 的形态十分相似，应注意鉴别。 （4）姜片虫是人、猪共患寄生虫病。猪是重要的保虫宿主。 （5）治疗药物首选吡喹酮。
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【学习要点】 （1）肺吸虫完成生活史需两个中间宿主；囊蚴脱囊后有童虫阶段；常见由肝脏表面或经肝或直 接从腹腔穿过膈肌而入肺； （2）肺吸虫对人体的危害主要有急性期和慢性期两个阶段：急性期表现轻重不一；慢性期可以 分为三个阶段：脓肿期、囊肿期、纤维瘢痕期； （3）肺吸虫因寄生在适宜的终宿主肺脏而得名，肺吸虫病主要包括卫氏并殖吸虫病（人兽共患 型）和斯氏狸殖吸虫病（兽主人次型）。前者临床表现较复杂，可以分为：胸肺型、腹型、皮下 包块型、脑脊髓型、亚临床型及其他型；后者引起皮肤或内脏幼虫移行症。 （4）从痰或粪便中找到虫卵，摘除的皮下包块中找到虫体即可确诊。但因从痰或粪便中找到虫 卵困难，可用免疫学诊断作为辅助手段；ELISA （5）预防本病最有效方法是不生食或半生食溪蟹、蝲蛄及其制品，不饮生水。健康教育是控制 本病流行的重要措施。 （6）治疗药物首选吡喹酮。
【生活史】
疟原虫（Plasmodium）
【学习要点及难点】 （1）疟疾是由疟原虫寄生于人体红细胞而引起的一种严重寄生虫病，按蚊为传播媒介； （2）寄生于人体的疟原虫有 4 种，间日疟多见多发；恶性疟严重，来势凶，可引起脑型疟；凶 险型疟疾绝大多数由恶性疟原虫所致，多发生于流行区儿童、无免疫力的旅游者和流动人口； （3）人体的 4 种疟原虫生活史基本相同，需要人和按蚊两个宿主，疟原虫需要人-蚊转换宿主
钉螺调查原则、方法及相关统计20101014
3、方法－－应确定；
4、时间－－应适当； 5、人员－－应培训； 6、资料－－应齐全； 7、经费－－应预算； 8、组织－－应建立。
明确调查范围
现有钉螺环境
目前有钉螺分布的环境，原则上每年应调查1次， 对于距离人群居住地较远、环境偏僻的人畜很难 接近的地区每年调查1/3面积。
可疑环境
与有螺水系相连或与现有钉螺环境毗邻、引进有 螺区植物、水生物的环境以及洪水淹没区等可疑 环境，每年查螺1次。
长度（米）=最远点间距+50×2 宽度（米）=（最宽处间距+最窄处间距）÷2+50×2 即有螺片以纵向两端最远点的距离各延长50米为长度，以横向最宽处+最窄处 的距离除以2后各延长50米为宽度。
三、统计分析指标及计算方法
（2）计算公式 面积（平方米）＝长（米）×宽（米） （3）感染性钉螺面积 江湖洲滩地区感染性钉螺面积的计算方法按以下原则进行：发现1个 孤立感染性螺点，向四周各延伸50米，即按1 hm2计算面积。若2个感
内陆水网地区可按灌溉渠系（河道、主渠、支渠、分渠、毛渠、田块 等）进行设框查螺。
山丘地区现场查螺应遵循”三从、四追“的原则。即从源头到下游、 从平原到山上、从潮湿到积水的原则，追查有螺水系的源头、追查有 螺水系的末尾、追查孤立的螺点、追查螺点扩散面。
三、钉螺解剖
1、器材准备 包括解剖镜、烧杯、滴管、解剖针、平板玻璃（3mm厚度、 8cm×14cm左右大小）。 2、压碎钉螺 分框将钉螺置于平板玻璃上，每块玻片上放置钉螺20只左右， 另用一块大玻片将钉螺轻轻压碎，再用解剖针将粘附在上面玻片上的钉螺软 组织拨到下面玻片上，然后在每个螺体上加一滴清水。在压碎过程中，应同 时观察并记录钉螺死活情况，如压碎后钉螺软组织收缩为活螺，否则为死螺。 3、镜检 将压碎的钉螺置于解剖镜或显微镜下，用解剖针拔开外壳，依次撕 碎软体组织，发现血吸虫尾蚴（双尾蚴）、子胞蚴即为感染性钉螺。解剖针 每拨弄一次螺软组织后，应及时用卫生纸擦干净，防止尾蚴粘混。 4、记录解剖结果 将钉螺解剖结果逐框记录在钉螺解剖登记表上，包括查螺 地点、线号、框号、总螺数、死螺数、活螺数、感染性螺数。 5、废弃物处理 将用过的玻片及解剖的钉螺要用84消毒液或开水浸泡30分钟， 玻片用清水冲洗擦干后使用。
钉螺调查方法及要求
四、施药方法
（二）铲草皮沿边药浸 适用于积水多的河、沟、渠、塘等环境，不强
调保持水位。使用时将一定量药物沿水线上30～70cm撒布 于河岸，再将河岸滋生钉螺的草皮与药物一起铲入河边水 中，使土表、土内、水上、水下的钉螺同时受到药物的浸 杀作用，灭螺效果良好。铲草皮时先铲近水线处30cm，再 铲水线上较高处，铲的厚度一般在6～10cm,随铲随扫，将 草皮推到水线下，不使其露出水面，以免钉螺上爬。水利 防汛的堤岸不可采用本法。使用药物剂量为2g／㎡。
季。 5、钉螺的寿命一般为1年左右。 6、钉螺是水陆两栖，多孳生在土壤潮湿、杂草从生的河、
沟、渠、塘、田、滩等自然环境中。
-
五、钉螺的知识
一、钉螺的分布： 1、钉螺沿河、沟渠岸的水线上下1米范围内分布，主要分布
在水线上33cm范围内。 2、宏观上随水系交错蔓延而呈网状分布。 3、沿河道和灌溉水系呈线状分布，但不均一。 4、水流缓慢的河道斜坡、沟渠及浅滩、稻田进出口、涵洞、
五钉螺的知识10五钉螺的知识水网型血吸虫病流水网型血吸虫病流行区钉螺孳生环境行区钉螺孳生环境11五钉螺的知识湖沼型血吸虫病流湖沼型血吸虫病流行区钉螺孳生环境行区钉螺孳生环境12五钉螺的知识山丘型血吸虫病流山丘型血吸虫病流行区钉螺孳生环境行区钉螺孳生环境13常见的易与钉螺混淆的相似螺类主要有
钉螺调查方法及要求
3、大面积洲滩灭螺可采用出水量大、功效高的灭螺机。大 面积滩地喷洒灭螺时须增加人员移动输水管。因此，一个 灭螺机组通常需6～12人。内陆、山区小面积复杂环境可采 用出水量较小，但机动灵活，移动方便的灭螺机。使用药 物剂量为2g／㎡- 。
四、施药方法
（四）喷粉法 1、喷粉灭螺法是使用动力喷粉机械实施药物灭螺的一种方
框数。
武汉市大东湖引水工程钉螺问题研究
武汉市大东湖引水工程钉螺问题研究
李志军;马经安;蔡建清
【期刊名称】《人民长江》
【年(卷),期】2009(040)003
【摘要】钉螺是血吸虫的中间宿主,是血吸虫病传播流行必不可少的一个环节.长江中下游地区是我国钉螺分布区和血吸虫病主要疫区之一.近年来,为改善湖泊水环境,从长江引水济湖的工程越来越多,钉螺会不会随着引水进入湖区进而引起血吸虫病流行的问题受到越来越广泛的关注.从武汉市大东湖引水工程的实例出发,结合长江武汉市江段钉螺分布现状,研究钉螺随水流进入东湖的可能性,并提出了规避风险的对策措施.
【总页数】3页(P97-99)
【作者】李志军;马经安;蔡建清
【作者单位】长江水利委员会,长江水资源保护科学研究所,湖北,武汉,430051;长江水利委员会,长江水资源保护科学研究所,湖北,武汉,430051;长江水利委员会,长江水资源保护科学研究所,湖北,武汉,430051
【正文语种】中文
【中图分类】R532.21
【相关文献】
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4.南水北调中线配套兴隆河引水工程钉螺扩散可能性评估 [J], 范强;李义斌;张滨;徐灿
5.防止涵闸引水扩散钉螺两种工程模式简介 [J], 杨先祥;徐兴建;刘建兵;张威;熊正安;潘庆燊;黄安生;盛琴华;刘聚芝;李永生
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湖北钉螺人工感染日本血吸虫毛蚴的实验
(一)钉螺采集:作为水陆两栖螺类，钉螺喜欢在水中生活，成螺喜欢在潮湿阴暗的地方生活，幼螺喜欢在水中生活。
采集钉螺地应注意到一些钉螺孽生地（如：江西九江星子，彭泽等地），采集时使用橡胶手套在江滩地区草丛中捡取钉螺近3000只左右成螺。
带回途中要保持钉螺湿润。
带回实验室后用清水冲洗3次后进行阴阳性鉴别。
（将钉螺放在指形试管内，每管放60只钉螺，管内加水浸满。
用尼龙纱罩盖好。
在20~25度光照环境下放置4~8小时后，用金属耳蘸取上层清液做玻片，在显微镜下观察。
如果观察到有尾蚴，再将该指形管中的钉螺均分成两组重复上述操作。
最后找出阳性钉螺）。
将阴性钉螺放用30cm×40cm×3.5cm 搪瓷盘培养钉螺，盘底铺6层草纸，保持湿润，上层加沙罩以免钉螺外爬，每天洒水2次。
阳性钉螺单独培养，条件相同。
培养过程中定期丢去死的钉螺。
(二)毛蚴制备：1.将阳性钉螺放在20℃~25℃下，阳光下放置2天后的水中光照的条件下放置4h备用。
2.取两只小白鼠，有夹子将其固定。
剪去腹部的毛备用。
3.用金属耳蘸取（1）中液面，将水滴点在玻片上，马上将其贴在小白鼠剪去毛的腹部，5min后拿掉玻片。
将两感染后的小白鼠培养，冬季要将老鼠放于15℃以上的环境中，以防老鼠不测。
阳性钉螺用血防-67药液灭杀。
4.自感染42d后，收集家鼠粪便，用生理盐水直接涂片或水洗
沉淀法检查虫卵，发现虫卵后便可解剖老鼠，分离出肠系膜静脉和肝脏,用清水冲洗分离新鲜虫卵。
5. 将虫卵放在经阳光照射2天的自来水中（渗透压接近12mOsm的水），ph控制在7.5~7.8，温度30℃左右，同时辅以光照。
毛蚴孵出后会受向光性向上性的影响分布于水的表面。
毛蚴在水中能存活15~94小时，孵出后经过时间愈久，感染钉螺的能力愈低。
温度愈高活动越剧烈，死亡也越快，当遇到中间宿主钉螺，就主动侵入。
（三）、感染钉螺。
在毛蚴孵化前一两天就可将培养的阴性钉螺进行筛选，在剩余钉螺中选活动性较强的2000只，将2000只钉螺再次进行尾蚴逸出法测试。
确定无尾蚴后，将2000只钉螺分成两组，每组1000只，分别标以A、B。
将钉螺放在直径为25cm平皿上，加入400ml清水备用。
毛蚴孵化速度比较快，所以将虫卵孵化后就可将毛蚴与钉螺20:1的比例投放于A平皿中；B中不投放毛蚴，用清水代替投放。
，控制温度在20℃―25℃,ph控制在7.5—7.8。
，都在25℃光照生化培养箱培养4H。
将多余的钉螺和尾蚴用血防-67药液灭杀。
(阴性钉螺要再检是为了防止出现第一次检验时钉螺刚刚感染了毛蚴，却没有尾蚴的逸出）
（四）钉螺培养：用两个30cm×40cm×3.5cm搪瓷盘分别标以A、B。
内垫海绵,仍铺人工草纸,用脱氯自来水浸湿海绵和草纸,加少许浸泡后的兔饲料和泥土于草纸上,将两个平皿中的钉螺分别放入对应的搪瓷盆中,加盖纱网,置于25～30℃不同的生化培
养箱饲养。
每天拣去死螺(（实验与钉螺要接触过程中要戴好橡皮手套，脱橡皮手套前先用乙醇棉花擦洗手套外表，在脱去冲洗干净，擦干，若有尾蚴的水污染与桌面或皮肤上时，应立即擦干或用酒精棉花擦洗），清洗，7—10天换洗一次饲养盘。
至45天后A、B分别取上清液于显微镜下观察是否有尾蚴。
（五）：验证感染：自感染后45天后，每隔两天将A、B组钉螺分别取20只放在指形试管内，每管放一只钉螺，管内加水浸满。
用尼龙纱罩盖好。
在20~25度环境下放置4~8小时后，对着光用肉眼或放大镜检查水面有无摆动或停止摆动的毛蚴。
记录两组出现感染的情况。
连续记录3--5次。
实验结束后钉螺全部用血防-67药液灭杀。
（六）结论：通过实验结果比较若能得出若A盘检验有尾蚴逸出B盘没有尾蚴逸出，则说明实验方案成功。
否则失败。