肝素钠含量检测操作规程
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
检测血气前采血及抗凝要求
检测血气前采血及抗凝要求一、抗凝剂：1250单位/ml的肝素钠（或肝素锂)，配制方法：50ml生理盐水或注射用水加1支12500单位的肝素钠原液，混匀后无菌保存备用.二、采集标本要求：1、良好的抗凝:选用肝素钠或锂作为抗凝剂，确保全血中肝素最终浓度约为25 U/ml2、采集工具：若使用一次性针筒，需抽取稀释过的肝素溶液1 ml后，在一次推完抽取量的基础上,将针头朝下连续快速来回推2-3次后排空，进行标本采集,采血量至少1ml（建议使用2ML注射器采血）。
3、针刺深度：血液最好是自然流出,要保证血液以最快速度进入针筒,尽量减少血液与空气的接触时间。
4、排出气泡：血标本内是否混有空气或气泡，排出气泡。
5、密封：堵住针头，隔绝空气。
6、混匀:要求采血完成与检测前，均需将采血针手搓与反复颠倒混匀3～5来回，保证标本与抗凝剂混合充分。
7、立即测定：在采集标本后注明采集时间立即送检,如时间过长，则要求将标本置于冰水中运送。
8、在上机检测前弃去前两滴血.三、血气分析前的质量控制1、标本最好是动脉或动脉化毛细管标本：只有动脉血能真实反映血液中的氧合作用和酸碱状态，评价器官的氧和作用。
2、病人采血时的状态：pH、pCO2、pO2、SO2%都是不稳定参数,它们易受病人的状态变化而改变，下列状态是必须限制的：（1)病人的忧虑：要在心理上解决病人的忧虑，避免使用“动脉穿刺”，用各种方法使病人感到舒适，避免产生忧虑.由于害怕取样，有些病人呼吸急促，使pO2、pH增加pCO2减少；另一些病人瞬间憋气，引起pO2、pH减少，pCO2增加。
(2）病人的体位：在采血时病人必须处于稳定状态，以不卧床病人为例，取样前至少应躺3-5分钟。
3、调整呼吸机参数30分钟后进行血气分析。
四、抗凝血凝固有以下几个原因：1、血流不畅，造成未和抗凝剂混匀就已凝固。
2、抗凝剂量不够或失效。
3、血样和抗凝剂没有完全混合好4、压脉带使用时间过长，加速凝血反应，不易发现的微凝集会导致不正常五、结果偏差的几个原因：1、抗凝不当导致的血液凝固或出现小凝块。
肝素钠实验报告
一、实验目的1. 学习肝素钠的提取方法。
2. 掌握肝素钠的鉴定方法。
3. 了解肝素钠的药理作用和应用。
二、实验原理肝素钠是一种具有抗凝血作用的物质，主要由猪肠黏膜或牛肺中提取。
其分子结构中含有大量的硫酸基团，具有强大的抗凝血活性。
本实验采用酸碱沉淀法提取肝素钠，并通过硫酸铜法进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 猪肠黏膜- 醋酸- 硫酸铜- 碘化钾- 氢氧化钠- 乙醇- 无水硫酸钠- 蒸馏水2. 实验仪器：- 研钵- 烧杯- 烧瓶- 漏斗- 滤纸- 酒精灯- 铁架台- 移液管- 容量瓶- 滴定管- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 提取肝素钠（1）将猪肠黏膜剪成小块，放入研钵中，加入适量的醋酸，研磨至糊状。
（2）将糊状物倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水，煮沸30分钟。
（3）用滤纸过滤，收集滤液。
（4）将滤液加入适量的氢氧化钠，调节pH值至7-8，静置过夜。
（5）次日，用滤纸过滤，收集沉淀。
（6）将沉淀用乙醇洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，得到肝素钠粗制品。
2. 鉴定肝素钠（1）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的硫酸铜溶液，观察颜色变化。
（2）取一定量的肝素钠粗制品，加入适量的碘化钾溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 提取结果经过提取，得到了肝素钠粗制品，颜色呈淡黄色。
2. 鉴定结果（1）加入硫酸铜溶液后，溶液呈蓝色，证明肝素钠中含有硫酸基团。
（2）加入碘化钾溶液后，溶液呈棕红色，进一步证明肝素钠中含有硫酸基团。
六、实验结论1. 成功提取了肝素钠粗制品。
2. 通过硫酸铜法和碘化钾法鉴定，证明肝素钠中含有硫酸基团。
七、实验讨论1. 在提取过程中，酸碱沉淀法能够有效提取肝素钠，但提取率较低。
2. 在鉴定过程中，硫酸铜法和碘化钾法能够快速、简便地鉴定肝素钠。
3. 肝素钠作为一种重要的抗凝血药物，在临床应用中具有重要意义。
八、实验总结本次实验通过学习肝素钠的提取与鉴定方法，掌握了肝素钠的基本知识。
在实验过程中，注意了操作细节，确保了实验结果的准确性。
肝素钠简介检测及生产精制工艺流程
溶液的澄清度与颜色 取本品0.50g ，加 水10ml溶解后，溶液应澄清无色；如显 浑 浊，照分光光度法（附录Ⅳ A），在 640nm 的波长处测定，吸收度不得大于 0.018；如 显色，与黄色1 号标准比色液 （附录Ⅸ A第一法）比较，不得更深。 吸收度 取本品，加水制成每1ml 中含 4mg 的溶液，照分光光度法（附录Ⅳ A） 测 定，在260nm 的波长处，其吸收度不 得大于0.20；在280nm 的波长处，其吸 收度不得大 于0.15。
五、肝素钠精制新工艺 本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素， 在该过程中采用低温离心技术,解决在除 酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂 蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。 在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂 蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程, 从而提高精品肝素钠的效价和效价回收 率。
1、工艺流程 2、溶解 称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI 溶液进行溶解。50℃水浴加热，用NaOH溶液 调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。 3、酶解法除蛋白 肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形 式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白 质成分，游离肝素。但在实际生产过程中， 复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的， 粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗品肝素 钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残 存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提 高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释 放而获得较高活性。
总氮量 取本品，照氮测定法（附录Ⅶ D第 二法）测定，按干燥品计算，含总氮量应 为1.3％ ～2.5 ％。 硫 取本品约25mg，精密称定，照氧瓶燃 烧法（附录Ⅶ C）进行有机破坏，选用 1000ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液0.1ml 与水10ml为吸收液，俟生成的烟雾完全吸 收后 ，置冰浴中15分钟后，加热缓缓煮沸 2 分钟，冷却，加乙醇－醋酸铵缓冲液 (pH3.7)50 ml，乙醇30ml，0.1 ％茜素红溶 液0.3ml 为指示液，用高氯酸钡滴定液 (0.05mol/L) 滴 定至淡橙红色。每1ml高氯 酸钡滴定液(0.05mol/L) 相当于1.603mg 的S， 按干燥品计算，含 硫量不得少于10.0％。
肝素含量测定法
附录ⅨP肝素含量测定法(凝固法)本法系依据硫酸鱼精蛋白能中和抗凝剂肝素，从而影响血浆凝固时间的原理，测定供试品中肝素含量。
试剂（1）缺血小板人血浆无菌采集人全血于3.8%枸橼酸钠抗凝剂（9∶1)中，混匀，以每分钟1500转在4℃离心30分钟，用塑料注射器取上层2/3的血浆，以每分钟3500转在4℃离心30分钟，取上层2/3血浆，分装于塑料管中，每支3ml，保存-40℃备用。
（2）三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液（pH7.5）取三羟甲基氨基甲烷7.27g、氯化钠5.27g，加水溶解并稀释至1000ml(用盐酸调节pH至7.5)。
（3）脑磷脂混悬液冻干脑磷脂加水复溶，取适量，用生理氯化钠溶液稀释，稀释后的脑磷脂混悬液应使空白凝固时间在200～300秒。
（4）0.025 mol/L氯化钙溶液取氯化钙(CaCl2·2H2O)147g溶于1000ml水中,制成1mol/L氯化钙贮备液。
临用时,用水将1mol/L氯化钙贮备液稀释40倍。
（5）硫酸鱼精蛋白溶液取硫酸鱼精蛋白适量，用pH7.5 Tris缓冲液溶解并稀释成每1ml含1～20 mg的溶液。
供试品溶液的制备于每支含不同浓度的硫酸鱼精蛋白溶液10μl的塑料管中,分别加入按标示量复溶后的供试品0.5ml，混匀。
测定法在已含有缺血小板人血浆0.1ml的塑料管中，加入脑磷脂混悬液0.1ml，混匀，37℃放置1分钟,加供试品溶液0.1ml、已预热至37℃的0.025 mol/L氯化钙溶液0.1ml,记录凝固时间。
用Tris缓冲液（pH7.5）0.1ml替代供试品溶液，同法操作作空白对照。
空白对照凝固时间不低于200秒试验成立。
取凝固时间最短的供试品管，作为硫酸鱼精蛋白中和0.5ml供试品中的肝素量。
硫酸鱼精蛋白10μg中和1IU肝素。
例如凝固时间最短的供试品管中含硫酸鱼精蛋白30μg，则中和供试品0.5ml中的肝素量则为3IU,即供试品每1ml 含6IU肝素。
肝素钠原液操作方法
肝素钠原液操作方法
肝素钠原液是一种抗凝血药物，通常用于预防和治疗血栓性疾病。
下面是一种常见的肝素钠原液操作方法：
1. 准备工作：戴上手套和口罩，确保操作台面干净，并准备好所需的注射器和针头。
2. 检查药物：先检查肝素钠原液的包装是否完好，并查看是否过期。
如果包装有损坏或过期，应该选择另一瓶。
3. 消毒：用酒精棉球擦拭注射瓶的橡胶塞，使其表面干净。
4. 抽取药物：拿起一支注射器，先打开包装，确保注射器是无菌的。
然后，将针头从包装中取出，并将其固定在注射器上。
打开注射瓶盖，将针头插入注射瓶的橡胶塞中。
5. 抽取药物量：缓慢地抽取所需的肝素钠原液量。
一般情况下，可以根据医生的指示来抽取药物的剂量。
确保注射器中没有气泡。
6. 准备注射：小心地将注射器放置在干燥的操作台上，确保针头没有碰到任何非无菌的物品。
7. 注射：找到一个适合皮肤注射的部位，用酒精棉球擦拭该部位，然后用拇指和食指拉开皮肤。
将注射器的针头插入皮肤下方的组织中，然后缓慢地注射药物。
注射完成后，缓慢地将针头取出。
8. 处理：将已使用的注射器和针头放入专用的医疗垃圾容器中。
请注意，以上操作方法仅供参考，具体的操作方法可以根据医生的指示和药物说明进行调整。
在操作过程中，要始终注意个人安全和无菌操作的重要性。
如果您对操作方法有任何不确定，请咨询医生或药师的建议。
肝素检验细则
肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。
精确加入蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
肝素钠含量检测操作规程
肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
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肝素钠含量检验操作规程
1范围
1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义
2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考
《美国药典》
4职责
4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序
5.1仪器、用具与试剂
5.1.1恒温水浴锅
5.1.2试管架
5.1.310ml具塞试管
5.1.4100ul或250ul微量进样器
5.1.510ml刻度吸管
5.1.62ml刻度吸管
5.1.71ml可调式加液器
5.1.820ml带塞样瓶
5.1.90.9%氯化钠溶液
5.1.100.25%氯化钙溶液
5.1.11经过标定的绵羊血浆
5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液
5.1.13计时器
5.2操作步骤
5.2.1取样
5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测
5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量
加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
5.2.2.4在上述各试管中，用10ml刻度吸管依次加入处理好的绵羊血浆，加入前用血浆在吸管内来回过三遍，以保证加入的血浆浓度的均一性，加入顺序为从量多→少的方向进行。
5.2.2.5用1ml可调式加液器再依次加入0.8ml的0.25(w/v)氯化钙溶液，加入的顺序为：从样品量多→少的方向加。
加完后盖紧瓶盖立即摇匀，摇时从样品量少→多的方向进行；注意摇动时不要有气泡产生，同时让试管内壁全部润湿。
5.2.2.6将试管架放入37±0.5℃水浴锅中，开始计时：在保温过程中，大约30分钟时将拿出观察，如果①-⑤全凝表示效价估高（在n+20或1400的后面补），如果①-⑤一管都没有凝表效价估低（在n-20或600的前面补），这时就应补做试验，一般情况下补做5管。
5.2.2.7试管在37±1℃水浴锅中保温60±1min后取出，观察各试管中血浆凝固情况，如果一组试验样品同时有0和1的状态，则试验成功。
然后根据血浆凝固情况判断结果。
5.2.2.8供试品的凝固状态：1100%的凝固
1/425%的凝固
1/250%的凝固
3/475%的凝固
0不凝固
5.2.2.8.1根据标准品的凝固点确定供试品1-0的凝固范围，再将其分成五个点即：1、3/4、1/2、1/4、0，观察凝固状态在哪一个点上，当其凝固在3/4点上，就在该点的样品体积上加(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点；如果其凝固在1/2点上，该点的样品体积就是供试品的凝固点；如果其凝固在1/4点上，就在该点的样品体积上减(进样间隔/4)便是该供试品的凝固点。
5.3结果计算
实际效价=﹙标准品的凝固点／供试品的凝固点﹚×8。