PAGE电泳原理与步骤
聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE
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凝胶浓度的选择与被分离物质分子量密切相关
二、电泳的原理
1. 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ native－PAGE）
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生物大分子在聚丙烯酰胺凝胶中泳动时，有电荷效应与分 子筛效应。不同的核酸或蛋白质，它们的分子量大小及构 型不同，所带净电荷的多少不同。电泳时的泳动率就不 同，从而分出不同的区带。在电泳分离后能保持蛋白质和 酶等生物大分子的生物活性。
三、电泳操作流程 (SDS-PAGE)
1.制备PAGE胶
固定玻璃板 灌注分离胶，水封, 静置待凝固 吸干水，灌注浓缩胶，插入梳子, 静置待凝固
注意： a.催化剂TEMED要在注胶前加入,否则胶凝结而无法灌注. b.空气中的氧气的存在影响凝胶的聚合，因此，水封的 目的是隔绝空气中的氧气，并且使分离胶顶部平整。
相对迁移率 mR ＝
蛋白质样品区带中心迁移距离(cm) 溴酚蓝区带中心迁移距离(cm)
四、电泳的应用
常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳适合于核苷酸多态性和蛋 白质的分析、分离。 SDS-PAGE则常用于测定蛋白质的分子量和蛋白质的 亚基数。目前已发现有些蛋白质不能用 SDS-PAGE测定分 子量。如电荷异常或构象异常的蛋白质，带有较大辅基的 蛋白质（某些糖蛋白）以及一些结构蛋白，如胶原蛋白等。
c.Acr和Bis具有神经毒，操作时应戴手套。Acr/Bis储液于棕色 瓶4℃保存。
2.加样
电泳槽内注入电极缓冲液， 使其完全淹没浓缩胶顶部， 小心拔出梳子
经SDS处理的样品， 于沸水中加热3 min， 以除去亚稳态聚合。
用微量移液器于距 槽底三分之一处进样
3.电泳
加样后的凝胶，应立即电泳。 样品进浓缩胶，电流控制在20－30 mA； 样品进分离胶，电流控制在40-50 mA。 待溴酚蓝条带泳动到距离胶板前沿约1-2cm处， 停止电泳。
sds-page电泳的基本原理
SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分析技术，通过电泳分离蛋白质样品的方法得到了广泛的应用。
本文将着重介绍SDS-PAGE电泳的基本原理。
一、SDS-PAGE电泳的概念SDS-PAGE是一种已经被广泛应用的蛋白质分离技术，它的全称是聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）。
这种电泳技术利用聚丙烯酰胺凝胶作为分离介质，通过直流电场将蛋白质样品分离出不同电荷和大小的蛋白质成分。
二、SDS-PAGE电泳的原理1. 聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE电泳中所使用的凝胶是由聚丙烯酰胺构成的。
聚丙烯酰胺凝胶具有一定的孔隙结构，可以根据蛋白质的大小和电荷来调整孔隙的大小，从而实现不同大小的蛋白质的分离。
2. SDS处理SDS是指月桂基硫酸钠，它是一种阴离子表面活性剂。
在SDS-PAGE 电泳中，将样品中的蛋白质经过SDS处理后，蛋白质表面都会均匀地吸附一定数量的SDS分子，并且使蛋白质呈负电荷。
这样，所有的蛋白质分子都会带有类似的电荷密度，可以消除蛋白质的本身的电荷特性，使蛋白质在电场作用下只受到电场力的作用，而不受到其他因素干扰。
3. 蛋白质分离将经过SDS处理的蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶上，然后通过电泳进行分离。
经电泳分离后，蛋白质会根据其大小和电荷迁移到不同位置，从而使不同的蛋白质分离开来。
三、SDS-PAGE电泳的应用SDS-PAGE电泳技术在生物化学和分子生物学研究领域应用广泛。
它可以用于研究蛋白质的分子量、纯度和比例，也可以用于检测蛋白质的存在和表达水平，同时还可以用于鉴定蛋白质的异构体等。
四、SDS-PAGE电泳的发展SDS-PAGE电泳技术自问世以来，经过不断的改进和完善，在蛋白质分离和分析领域一直处于领先地位。
未来，随着科学技术的不断进步，SDS-PAGE电泳技术也将会迎来新的发展，并在更广泛的领域得到应用。
(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法
SDS-PAGE一. 实验原理SDS 是一种阴离子表面活性剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后，巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，形成蛋白质-SDS 复合物。
在一定条件下，SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。
由于十二烷基磺酸根带负电，使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量，因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。
SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。
蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样，约为 1.8nm ，而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。
基于上述原因，蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，而只与椭圆棒的长度有关，也就是蛋白质 Mr 的函数。
二. 试剂器材30%凝胶贮液(100mL)：称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中，向烧杯中加入约60mL双蒸水，充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL，置于棕色瓶内4℃贮存，每过1-2个月应重新配制；注意：丙稀酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套和口罩等。
分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.8，100mL)：称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水，用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl，pH 6.8，100mL)：称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水，用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8，加双蒸水定容到100mL，4℃ 贮存；电泳缓冲液(1L)：称取试剂Tris 3.03g和甘氨酸 14.4g置于500mL烧杯中，向烧杯中加入约400mL双蒸水充分溶解，再加入10%SDS溶液1.0mL，以双蒸水定容至1L (自然pH值为8.3，无需再调)，4℃ 贮存，可重复使用5-6次；2×加样缓冲液(10mL)：取下列试剂置于10mL塑料离心管中0.5mol/L Tris-HCl缓冲液(pH6.8) 2.0mL10%SDS溶液 4.0mL甘油 2.0mL巯基乙醇 2.0mL溴酚蓝 0.02g，混匀后1mL分装，-70℃可贮存6个月；10%AP：称取(NH4)2S2O3 1.0 g，溶于10.0mL双蒸水中，分装成每份1mL，-20℃贮存；TEMED：分装成每份1mL，4℃避光贮存；水饱和正丁醇(100mL)：在玻璃瓶中加入50mL双蒸水和50mL正丁醇，振摇。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳简单原理和步骤
1.2ml 4.3ml 1.9ml 112ul 5ul
精选版课件ppt
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2. 浓缩胶制备的方法
(1). 将丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体储备液 0.6ml，浓缩胶缓冲液888u1、水2ml、10 ％过硫酸铵56ul、TEMEDl0ul混合均匀后， 立即灌胶。
(2). 将预先制备好的浓缩胶慢慢地灌进狭槽中， 然后将所需的样品梳(形成加样孔)插于夹 心槽上部，并上下轻轻拉动梳子，小心地 去除粘附在梳齿顶部的小气泡，待聚合完 全后即可拔去梳子，准备电泳。
(2). 将混合液充分混合后，缓慢地倒入已经固定在夹心垂直平 板电泳槽里的狭槽中，注意在本操作过程中不能产生任何 气泡。然后尽快地在分离胶的上面轻轻地覆盖一层水。
(3). 置于室温下15-30分钟，使凝胶聚合完全 (在水相和凝胶的交 界处有一明显的亮线)。除去上层水相，然后再用水或浓缩 胶缓冲液(0.125mol/m1Tris-HCI，pH6.8, 0.1%SDS) 洗凝 胶表面，准备灌制浓缩胶。
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4
不同浓度凝胶的制备
成
不同浓度所需的储备液体积
份
8.5% 10% 12.5％ 15％ 17.5%
H20
3.5ml
30% Acr和Bis分离胶 2.0ml
4X缓冲液
l.9ml
10% 过硫酸铵
112 u1
TEMED
5 ul
Байду номын сангаас
3.1ml 2.5ml 1.8ml 2.4ml 3.Oml 3.7ml 1.9ml 1.9ml 1.9ml 112 ul 112 ul 112 ul 5 ul 5 ul 5 ul
精选版课件ppt
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三、操作步骤
聚丙烯酰胺凝胶电泳dna
聚丙烯酰胺凝胶电泳dna聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称PAGE）是一种常用的生物分析技术，尤其在DNA分析中得到广泛应用。
本文将从原理、步骤和应用等方面介绍聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA技术。
一、原理聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA是基于DNA分子的电荷和大小差异来进行分离的技术。
聚丙烯酰胺凝胶是一种由聚丙烯酰胺单体构成的高分子网状结构，具有较小的孔隙大小。
DNA分子在电场作用下，根据其电荷大小和分子大小，通过凝胶孔隙的阻碍作用而分离出不同长度的DNA片段。
二、步骤1. 制备凝胶：将聚丙烯酰胺单体与交联剂TEMED和过硫酸铵混合，形成聚丙烯酰胺凝胶混合液。
将混合液倒入凝胶模具中，插入梳子，在混合液固化后去除梳子，得到凝胶板。
2. 样品处理：将待分析的DNA样品与加载缓冲液混合，加热至变性，使DNA分子解开双链，然后冷却至室温。
3. 载样：将处理好的DNA样品加入凝胶孔隙中。
4. 电泳：将凝胶板浸泡在缓冲液中，连接正负电极，通电进行电泳。
电场作用下，DNA分子向阳极（正电极）迁移。
5. 可视化：电泳结束后，将凝胶板进行染色或用荧光探针标记DNA分子，然后使用紫外光或激光扫描仪进行成像。
三、应用1. DNA测序：聚丙烯酰胺凝胶电泳是传统的DNA测序方法之一。
通过根据DNA分子长度的差异进行分离，可以得到DNA的序列信息。
2. DNA片段分析：聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于分析DNA样品中的片段大小和相对含量，用于DNA指纹图谱的构建、基因突变的检测等。
3. 蛋白质分析：类似于DNA分析，聚丙烯酰胺凝胶电泳也可以用于分离和分析蛋白质样品。
通过改变凝胶孔隙的浓度和pH值等条件，可以实现对蛋白质的分离。
4. RNA分析：聚丙烯酰胺凝胶电泳也可以用于RNA的分析，如分析RNA的大小和纯度等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳DNA技术是一种重要的生物分析技术，广泛应用于DNA测序、DNA片段分析、蛋白质分析和RNA分析等领域。
page电泳的原理和应用
page电泳的原理和应用一、page电泳的原理page电泳是一种电泳技术，通过电场作用使带电分子按照大小分离的原理，广泛应用于生物医药、生物化学、分子生物学等领域。
page电泳的原理主要包括以下几个方面：1.电泳基本原理：page电泳是利用电场将带电粒子（例如DNA、蛋白质等）从负极迁移到阳极的技术。
在page电泳中，带电粒子会受到电场力的作用，从而在凝胶中产生迁移运动。
由于不同粒子的质量、形状、电荷等特性不同，它们在凝胶中的迁移速度也不同，从而实现了分离和分析。
2.gel凝胶材料：在page电泳中，常用的凝胶材料包括聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）和琼脂糖凝胶（agarose gel）。
这些凝胶材料具有不同的孔隙大小和分子筛效果，可以根据需要选择不同的凝胶进行page电泳。
3.电解质缓冲液：在page电泳过程中，电解质缓冲液的选择对分离效果至关重要。
电解质缓冲液的pH值和离子浓度可以调节凝胶的酸碱性和离子强度，从而影响迁移速度和分离效果。
4.电泳条件：page电泳的分离效果受到电场强度、电泳时间和凝胶浓度等电泳条件的影响。
调节这些条件可以实现不同大小分子的分离和分析。
二、page电泳的应用page电泳作为一种常用的实验技术，在生物医药和生物化学领域有着广泛的应用。
以下列举了一些常见的应用领域：1.蛋白质分析：page电泳可以用于分离和分析复杂的蛋白质混合物。
通过调节凝胶浓度和电泳条件，可以将不同大小、电荷和形状的蛋白质分离开来，从而实现蛋白质的鉴定和定量分析。
2.DNA测序：page电泳可以用于DNA序列分析，通过将不同长度的DNA片段在凝胶上进行分离，可以得到DNA序列信息。
这种基于page电泳的DNA测序技术已成为目前常用的高通量测序方法之一。
3.核酸杂交：page电泳可以用于核酸杂交实验，通过将标记有荧光物质的DNA或RNA片段与目标基因进行杂交，然后通过page电泳将杂交产物分离和定量分析，可以研究基因的表达和功能。
PAGE电泳原理与步骤
PAGE电泳原理与步骤电泳是一种将带电粒子在电场中移动的技术。
它广泛应用于生物化学、生物分析、药学和分子生物学等领域。
电泳的原理和步骤如下：一、电泳原理：1.带电粒子在电场中移动：带电粒子在电场中受到电场力的作用，从而产生移动，移动的方向和速度取决于粒子的电荷、尺寸和电场强度。
2.电泳液：电泳液是电泳中的介质，一般是由缓冲剂和溶质组成。
缓冲剂主要用于维持pH值，避免电解质的游离和脱水，同时确保带电粒子的稳定性。
3.分离原理：电泳主要通过带电粒子在电场中的迁移速度的差异来实现分离。
根据带电粒子的质量、大小、形状、电荷以及所受到的摩擦力等因素不同，迁移速度也会有所差异，从而实现粒子的分离。
二、电泳步骤：电泳实验通常包括以下步骤：1.制备电泳装置：首先需要制备一个电泳装置。
常用的电泳装置有板式电泳和管式电泳。
板式电泳是将样品放置在平板上进行分离，而管式电泳是将样品注入毛细管中进行分离。
装置的选择根据具体实验需要来确定。
2.制备样品：将待分离物质溶解在适当的溶剂中，使其成为电泳液的一部分。
同时，可以加入一些染料或标记物，以便观察分离结果。
3.加载样品：将样品按照要求加载到电泳装置上。
对于板式电泳，将样品通过特定偏移滤纸或溶胶将其加载到凝胶槽中。
对于管式电泳，将样品通过毛细管导入毛细管电泳装置。
4.施加电场：将电泳装置连接到电源上，在适当条件下施加电场。
电场的选择根据待分离物质的特性和所需的分离效果来确定。
5.电泳分离：在施加电场后，待分离物质开始移动。
移动过程中，不同成分依据其电荷、尺寸和形状的差异，以不同的速度迁移。
6.停止电泳：根据实验要求，适时停止电泳过程。
停止电泳后，可以通过染色、标记或其他检测方法，对分离结果进行观察和分析。
7.结果分析：根据不同实验目的，使用相关方法对分离结果进行分析。
可使用紫外可见光谱、荧光等技术进行定量或定性分析。
同时，可以根据分离结果进行下一步骤的实验设计和分析。
电泳是一种重要的分离和分析技术，具有广泛的应用前景。
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
（三）凝胶浓度的选择 由于SDS电泳分离并不取决于蛋白
质的电荷密度，只取决于分子解聚后 SDS-蛋白质胶束的大小，因此凝胶浓 度的选择会直接影响分辨率。
不同分子量范围的蛋白质应选用不 同的凝胶浓度
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
三、方法 1、分类 （1）根据对样品的处理方式的不同
还原SDS电泳 非还原SDS电泳 带有烷基化作用的还原SDS电泳
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
（2）根据缓冲系统和凝胶孔径的不同
连续电泳 不连续电泳
（3）根据电泳的形式
圆盘电泳 垂直电泳
平板电泳 水平电泳
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
（3） 二硫键是否完全被还原 当二硫键被彻底还原后，蛋白质分
子才能被解聚，SDS才能定量地结合 到亚基上而给出相对迁移率和分子量 对数的线性关系。
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
（二）缓冲系统的选择 一般情况下，在被分析的蛋白质稳
定的pH范围，凡不与SDS发生相互作 用的缓冲液都可以使用，但缓冲液的 选择对蛋白质的分离和电泳的速度是 非常关键的
蛋白带迁移距离 固定前的凝胶长度 Rf= ————————— X —————————
干燥后的凝胶长度 溴酚蓝迁移距离
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
2、作图 以已知蛋白质分子量的常用对数值为纵坐
标，Rf为横坐标绘图
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
SDSPAGE原理和流程操作步骤详解
3、通过测定未知蛋白质的Rf值，便可在标 准曲线上读出他的分子量
SDS-PAGE电泳实验步骤
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一.实验目的学习SDS-聚丙烯跌胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。
二、实验原理蛋白质是两性电解质，在一定的pH条件下解离而带电荷。
当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pl)时，蛋白质本身带负电，在电场中将向正极移动；当溶液的pH小于蛋白质的等电点吋，蛋白质带正电，在电场中将向负极移动；蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少.蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。
聚丙烯酰胺礙胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。
本实验釆用不连续凝胶系统，调整双丙烯酰胺用量的多少，可制成不同孔径的两层凝胶；这样，当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时，受阻滞的程度不同而表現出不同的迁移率。
由于上层胶的孔径较大，不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时，受到的阻滞基本相同，因此以相同的速率移动；当进入小孔胶时，分子董大的蛋白质移动速度减慢，因而在两层凝胶的界面处，样品被压缩成很窄的区带。
这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。
同时，在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时，釆用两种缓冲体系；上层胶pH二一，下层胶pH=; Tris—HCI缓冲液中的Tris 用于维持溶液的电中性及pH,是缓冲配对离子：Cl-是前导离子。
在时，缓冲液中的Gly为尾随离子，而在卩日=吋，Gly的解离度增加：这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性，控制了慢离子的解离度，进而达到控制其有效迁移率之目的。
不同蛋白质具有不同的等电点，在进入分离胶后，各种蛋白质由于所带的静电荷不同，而有不同的迁移率。
由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应，分子拜效应及电荷效应，使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。
A B如果在聚丙烯酰胺;疑胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS),由于SDS带有大董的负电荷，且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性，特别是在强还原剂如疏基乙醇存在下，蛋白质分子內的二硫键被还原，肽链完全伸展，使蛋白质分子与SDS充分结合，形成带负电性的蛋白质一SDS复合物：此时，蛋白质分子上所带的负电荷董远远超过蛋白质分子原有的电荷量，掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。
SDS-PAGE电泳实验步骤
垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一、实验目得学习ＳDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法(ＳDS—ＰAGＥ)测定蛋白质得分子量得原理与基本操作技术、二、实验原理蛋白质就是两性电解质,在一定得ｐH条件下解离而带电荷。
当溶液得pH大于蛋白质得等电点(pＩ)时,蛋白质本身带负电,在电场中将向正极移动;当溶液得pH小于蛋白质得等电点时,蛋白质带正电,在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电场中移动得速度取决于其本身所带得净电荷得多少、蛋白质颗粒得大小与分子形状、电场强度等。
聚丙烯酰胺凝胶就是由一定量得丙烯酰胺与双丙烯酰胺聚合而成得三维网状孔结构、本实验采用不连续凝胶系统,调整双丙烯酰胺用量得多少,可制成不同孔径得两层凝胶;这样,当含有不同分子量得蛋白质溶液通过这两层凝胶时,受阻滞得程度不同而表现出不同得迁移率。
由于上层胶得孔径较大,不同大小得蛋白质分子在通过大孔胶时,受到得阻滞基本相同,因此以相同得速率移动;当进入小孔胶时,分子量大得蛋白质移动速度减慢,因而在两层凝胶得界面处,样品被压缩成很窄得区带。
这就就是常说得浓缩效应与分子筛效应。
同时,在制备上层胶(浓缩胶)与下层胶(分离胶)时,采用两种缓冲体系;上层胶ｐＨ=6、7—6。
8,下层胶pH=8.9;Tris—HCＩ缓冲液中得Triｓ用于维持溶液得电中性及pＨ,就是缓冲配对离子;ＣI－就是前导离子。
在pH6.８时,缓冲液中得Gly—为尾随离子,而在pH＝8、９时,Gly得解离度增加;这样浓缩胶与分离胶之间ｐH得不连续性,控制了慢离子得解离度,进而达到控制其有效迁移率之目得。
不同蛋白质具有不同得等电点,在进入分离胶后,各种蛋白质由于所带得静电荷不同,而有不同得迁移率、由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在得浓缩效应,分子筛效应及电荷效应,使不同得蛋白质在同一电场中达到有效得分离。
如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度得十二烷基硫酸钠(SDS),由于SDＳ带有大量得负电荷,且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性,特别就是在强还原剂如巯基乙醇存在下,蛋白质分子内得二硫键被还原,肽链完全伸展,使蛋白质分子与SDS充分结合,形成带负电性得蛋白质—SDS复合物;此时,蛋白质分子上所带得负电荷量远远超过蛋白质分子原有得电荷量,掩盖了不同蛋白质间所带电荷上得差异、蛋白质分子量愈小,在电场中移动得愈快;反之,愈慢。
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PAGE 电泳的操作步骤及试剂配方
聚丙烯酰胺凝胶电泳作为检测DNA 序列差异的有效手段，变性凝胶电泳在我室广泛使用，但是也有其使用范围。
在我室还有一种常用的非变性凝胶电泳技术，简称SSCP （Single Strand Conformation Polymorphism ，单链构象多态性）。
原理：在SSCP 测定中，双链DNA （dsDNA ）被变性成为单链DNA （ssDNA ），每一条单链DNA 都基于它们的内部序列而呈现出一种独有的折叠构象，即使同样长度的DNA 单链因其碱基顺序不同、甚至单个碱基的不同会形成不同的构象。
这些单链DNA 在非变性条件下，用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，单链DNA 的迁移率和带型，都取决于其折叠构象和电泳时的温度。
SSCP 与变性凝胶电泳基本一致，不同之处有以下几点：a ．SSCP 使用非变性凝胶进行电泳，即在凝胶配制中不加入变性剂。
我室常用8%非变性胶（丙烯酰胺80g ，N-N ，-亚甲双丙烯酰胺 2.76g ，10×TBE 50ml ，加水定容到1L ）b ．工作环境，由于SSCP 受温度影响，所以在电泳过程中应防止温度的升高，所以电泳环境为电压400V ，电流50mA ，单板电泳功率为9W ，不用预热。
缓冲液最好用新配制的。
c ．由于电泳功率较低，所以电泳时间较长，通常需要10小时以上，因此一般电泳需要过夜。
室温在25。
C 以下。
1.聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳适宜分离鉴定低分子量的蛋白质，小于1kb 的DNA 片段和DNA 序列。
分析装载的样品容量大，可回收，DNA 纯度高。
在催化剂TEMED （N-N-N ，-N ，-四甲基乙二胺）和过硫酸胺的作用下，丙烯酰胺聚合成长链，聚丙烯酰胺链在交联剂，N-N ，-亚甲双丙烯酰胺的参与下，聚丙烯酰胺链与链之间交叉联结形成凝胶。
1.1配制30%丙烯酰胺：丙烯酰胺29g 、N-N ，-亚甲双丙烯酰胺1g 、加水至100ML ，40C 棕色瓶可保存1.2配制5×TBE 缓冲液：TRIS 碱54克、硼酸27.5克、EDTA 3.72克、加水至1L 1.3制备聚丙烯酰胺凝胶所用试剂体积
1.4DNA 在聚丙烯酰胺凝胶中有效分离范围
丙烯酰胺（%）
有效分离范围（bp ）
二甲苯氰FF
溴酚蓝3.51000-20004601005.080-500260658.060-4001604512.040-200702015.025-150601520.0
6-100
45
12
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳具体步骤
2.1从NaOH 池中捞出浸泡的玻璃板，取出上面的残胶2.2把玻璃板拿到流动水处洗刷干净2.3洗干净的玻璃板至于玻璃板架上晾干2.4用乙醇擦洗玻璃板
试剂制备不同浓度（%）凝胶所用试剂体积（ml ）
3.5 5.08.012.020.030%丙烯酰胺
11.616.626.640.066.6水67.762.752.739.312.75×TBE 20.020.020.020.020.010%过硫酸铵
0.7
0.7
0.7
0.7
0.7
2.5带凹口的背板涂上硅化剂，面板则涂上粘合剂，防止电泳完毕发生撕胶和脱胶的可能（涂摸要均匀）2.6面板在下，背板在上。
两侧用塑料板密封，并用夹子夹好。
底部调节使之水平
2.7将加催化剂后的凝胶沿凹口均匀倒下，插入适当的封条。
勿使封条下留下气泡。
用夹子夹紧封条部位2.8室温聚合30分钟，小心取出凹口处封条，用水冲洗加样孔（否则封条所残留的丙烯酰胺在加样孔聚合产生不规则表面，引起DNA带变形）
2.9将凝胶固定在电泳槽里。
带凹口背板朝里，面向缓冲液槽
2.10用0.5×TBE灌满电泳槽的缓冲液槽，接上电极，打开电源。
调试工作环境为电压2000-2200V，电流150-200mA，单板电泳功率为80W。
预热30分钟左右。
2.11点样之前需切断电源，用枪将点样孔的气泡及胶吹出，然后插入点样梳，注意不要插得太深，否则点样胶面会变形，影响美观及点样。
2.12枪吸加样品，PCR产物先加loading buffer10ul,再变性5分钟左右，接着在冰水中冷却5分钟以上方可点样，点样完毕，电泳开始。
2.13电泳至所需位置后，切断电源，拔出导线，回收缓冲液，卸下玻璃板。
在工作台上，将背板撬起，放回原处。
将面板进行银染
3.电泳后的银染检测
3.1原理：
影像产生是由于核酸在胶上所占部位与周围的氧化——还原势不同而产生。
银染液中的银离子（Ag+）可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成银颗粒，这样核酸电泳带就染成了黑褐色。
3.2银染
银染液的配制：称2.5至3.0g AgNO3加1200---1400ml水
银染:将电泳完的面板首先在银染漂洗盆了漂洗赶紧，使胶面上没有异物。
玻璃板反面没有污染物。
将加入银染液的银染盆放在摇床上后，将面板放入银染1小时左右。
3.3显影
显影液的配制：NaOH---20g,Na2CO3----0.6g,甲醛4.5ml，加水1200ml
显影：将面板从银染盆里取出，在银染漂洗盆里漂洗，震荡5-6次，取出后使其表面尽量无水，再放入已加入显影液的显影盆里（显影，显影液的配制及甲醛的加入都需要在通风橱的摇床上进行）显影过程大约10到15分钟，以DNA条带清晰可见为准。
将显现完毕的板子在显影漂洗盆里漂洗后，方可读带。
本实验室凝胶电泳相关常用试剂配方：
1.我实验室常用的聚丙烯酰胺凝胶是6%变性聚丙烯酰胺凝胶（简称变性胶，PAGE），就是在普通聚丙烯酰胺凝胶中加入变性剂。
我们使用的变性剂是尿素。
6%PAGE具体配制方法为:尿素210g，10×TBE25ml，丙烯酰胺28.5g，亚甲双丙烯酰胺 1.5g，加水定容至500ml，过滤后使用。
考虑到方便使用的问题，一般一次配制2L（尿素840g，10×TBE100ml，丙烯酰胺114g，亚甲双丙烯酰胺6g）。
2.10×TBE（Tris-硼酸-EDTA）的配制：EDTA7.44g，硼酸55g，Tris108g，加水定容至1000ml
3.10%过硫酸氨（AP）：10g过硫酸氨，纯水定容至100ml
4.硅化剂配方：二甲基二氯硅烷：无水乙醇=13ml：500ml
5.反硅化剂（粘合剂）配制：无水乙醇500ml（一瓶），44ddH2O，3.3冰醋酸，550ul Bind silnce（3，
-Trimethoxysilyl propyl），配置完遮光4。
C保存
6.loading buffer配制:0.1g二甲苯氰，0.1g溴酚蓝，1ml0.5molEDTA，100mL甲酰胺。