现代生化技术复习题

. 第一章提取与分离技术一、名词解释1、机械破碎法2、物理破碎法3、温度差破碎法4、压力差破碎法5、超声波破碎法6、渗透压变化法7、化学破碎法8、酶促（学）破碎法9、自溶法10、抽提11、盐溶12、盐析13、沉淀分离法14、分段盐析15、K S分段盐析16、β分段盐析17、等电点沉淀法18、有机溶剂沉淀法19、复合沉淀法20、金属盐沉淀法21、选择性变性沉淀法二、填空题1、细胞破碎的方法有、和。

2、机械破碎法按照使用机械的不同可分为、和。

3、常用的物理破碎法有、和等。

4、常用的压力差破碎法有、和等。

5、化学破碎法采用的表面活性剂有和两种。

其中之一按其带电荷性质又可分为和两种。

6、根据抽提时所采用的溶剂或溶液的不同。

抽提的方法主要有、、和等7、常用的沉淀分析法有、、、、和等。

8、常用的金属盐沉淀法有和。

9、蛋白质盐析时，带入大量盐离子杂质，可采用、和方法脱盐。

10、要分离和提纯核酸过程中，常用来沉淀DNA和RNA。

11、常用的使蛋白质沉淀的方法有、、、和等。

12、三、是非题（对的打√、错的打×）1、渗透压变化法可用于革兰氏阳性菌的破碎。

（）2、有机溶剂破碎细胞主要是使细胞膜磷脂结构破坏，从而使细胞膜的透过性增强。

（）3、用化学法破碎细胞提取酶时，经常用离子型表面活性剂。

（）4、用化学法破碎细胞提取酶时，用非离子型表面活性剂最好。

（）5、对于具有细胞壁结构的细胞采用酶法破碎时，应根据细胞壁结构选择不同的酶。

（）6、酸性物质易溶于酸性溶剂中，碱性物质易溶于碱性溶液中。

（）7、在等电点时两性电解质溶解度最小。

（）8、抽提两性电解质时应避开其等电点。

（）四、选择题1、利用突然降压法破碎革兰氏阴性大肠杆菌应选择期的细胞破碎效果最佳。

A 调整期B 对数生长期C 平衡期D衰退期2、提取膜结合酶采用法破碎细胞最佳。

A 高压冲击法B 突然降压法C 渗透压变化法3、超声波破碎法最适合于破碎。

A 动物细胞B 植物细胞C 微生物细胞4、利用超声波法破碎微生物细胞对期的细胞破碎效果最佳。

A 调整期B 对数生长期C 平衡期D衰退期5、破碎革兰氏阳性菌选用。

A 溶菌酶B β-葡聚糖酶C 几丁质酶6、破碎酵母细胞选用。

A 溶菌酶B β-葡聚糖酶C 几丁质酶7、破碎霉菌选用。

A 溶菌酶B β-葡聚糖酶C 几丁质酶8、纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶共用适合破碎。

A 动物细胞B 植物细胞C 微生物细胞9、胰蛋白酶可采用提取。

A 盐溶液B 酸溶液C 碱溶液D 有机溶剂10、在提纯α-淀粉酶时，常采用。

A 盐析沉淀法B 有机溶剂沉淀法C 复合沉淀法D 选择性变性沉淀法11、在DNA提取中起沉淀DNA作用的是。

A、EDTAB、SDSC、酚D、无水乙醇五、简答题、1、细胞破碎有哪些方法？2、突然降压法破碎细胞的效果取决于哪几个因素？3、抽提有哪些方法？4、沉淀法有哪些？5、蛋白质盐析沉淀时为什么选择中性盐硫酸铵？6、蛋白质用硫酸铵沉淀时应注意哪些事项？六、问答题1、试论述影响有效成分抽提的因素。

2、试用三种或三种以上的方法分离RNA和DNA。

3、用以下原料试剂，设计一个实验来提取RNA（粗品）原料：干酵母粉。

试剂：0.2%氢氧化钠溶液;乙酸;95%乙醇;无水乙醚仪器; 自选,但必须为生化实验室常用仪器。

4、请设计一种方法来纯化真核细胞裂解液中的成熟mRNA。

第二章过滤与膜分离技术一、名词解释1、过滤2、非膜过滤3、粗滤4、常压过滤5、加压过滤6、减压过滤7、过滤速度8、膜过滤9、加压膜分离10、微滤11、超滤12、反渗透13、电场膜分离14、扩散膜分离15、流率16、浓差极化17、透析二、填空题1、根据过滤介质的不同，过滤可以分为和两种。

2、根据过滤介质截留物质颗粒大小不同，过滤分为、、和4大类。

3、非膜过滤主要包括和两类。

4、根据推动力产生的条件不同，过滤分为、和3种。

5、根据物质颗粒或分子通过薄膜的原理和推动力的不同，膜拜分离可以分为、和3大类。

6、根据所截留物质颗粒大小不同，加压膜分离可分为、和3种。

7、电场膜主要包括和两类。

三、是非题（对的打√、错的打×）1、所有的微滤都属于粗滤。

（）2、膜过滤中要防止浓差极化现象。

（）四、选择题1、实验室和生产过程用的吊篮和吊袋过滤属于。

A 常压过滤B 加压过滤C 减压过滤2、实验室和生产中使用的各种真空抽滤机过滤属于。

A 常压过滤B 加压过滤C 减压过滤3、截留的主要物质是细胞的过滤属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透4、截留的主要物质是细菌和灰尘的过滤属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透5、截留的主要物质是病毒和生物大分子的过滤属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透6、截留的主要物质是生物小分子、盐、离子的过滤属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透7、营养物质过滤除菌属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透8、海水淡化属于。

A 粗滤B 微滤C 超滤D 反渗透五、简答题1、请把过滤进行分类并说明每一类的主要特征。

2、影响过滤速度和效果的因素有哪些？六、问答题1、论述电场膜分离的原理。

2、论述影响膜过滤流率的主要因素。

3、某一酶提取液，实验已证明在适宜条件下，它对底物有催化作用，用该酶制剂做如下实验：（1）取出上述提取液一部分，充分加热煮沸后，冷却至室温，在同等条件下，加底物，结果对底物无催化作用。

为什么？2）另一部分酶提取液置于透析袋内对蒸馏水充分透析，然后在同样条件下，进行酶反应实验，结果对底物也不起作用。

为什么？（3）如果将（1）中冷却溶液和（2）中透析袋中剩余物加在一起，混合后，在同样条件下用原底物试验，是否有催化活性？为什么？一、名词解释1、萃取分离2、有机溶剂萃取3、双水相萃取4、超临界萃取5、夹带剂（携带剂）6、反胶束萃取7、反胶束（反胶团）8、正胶束9、胶束二、填空题1、按照两相的组成不同，萃取可以分为、、和。

2、双水相萃取的效果是由组分在双水相体系中的决定的。

3、超临界萃取的工艺过程分为和两个过程。

4、二氧化碳超临界点的温度是0C，超临界压力为Mpa。

三、是非题（对的打√、错的打×）1、降低水相的离子强度，有利于极性物质进入反胶束中（）2、对于阳离子表面活性剂，当水相中pH低于蛋白质等电点时，有利于蛋白质进入反胶束中。

（）3、温度升高不利于反胶束萃取。

（）4、增加离子强度，有利于将反胶束内的物质反萃取出来。

（）四、选择题1、超临界CO2适合萃取物质。

A、酸性B、碱性C、极性D、非极性2、五、简答题1、简述双水相萃取的原理2、双水相萃取中影响组分在两相中的分配系数的主要因素有哪些？3、简述超临界萃取的操作过程。

4、简述反胶束萃取的过程。

六、问答题1、试论述超临界萃取的原理。

2、试论述反胶束萃取的原理。

一、名词解释1、层析分离2、固定相3、流动相4、吸附层析5、分配层析6、分配系数7、薄层层析法8、气相层析9、载气10、担体11、离子交换层析12、凝胶层析（分子筛层析、分子排阻层析）13、洗脱体积14、外体积15、内体积16、亲和层析17、层析聚焦18、多缓冲离子交换剂19、多缓冲溶液20、疏水层析21、免疫印迹二、填空题1、按照流动相不同把层析分为和两大类。

2、吸附层析法装柱有和两种。

3、吸附层析法洗脱方法有、和三种。

4、根据固定相的不同气相层析分为和两种。

5、气固层析分离组分的依据是，气液层析分离组分的依据是。

6、离子交换剂是由、和构成的。

7、PAGE电泳分离蛋白质的主要依据是样品中各种蛋白质的和的不同。

8、在凝胶层析中，为了使物质能有效地分离，一般分配系数Kd选择的范围是___________，而当Kd＞1时，则表示有__________现象。

三、是非题（对的打√、错的打×）1、在吸附层析法中对于极性组分，用极性大的溶剂洗脱效果较好。

（）2、聚酰胺薄膜层析只适用于能够形成氢键的极性分子的分离。

（）3、凝胶层析中分离组分的唯一依据是分子量（）四、选择题1、DEAE-纤维素是一种交换剂。

A、阴离子B、阳离子C、中性分子2、在凝胶层析中，若被分离物质能全部进入凝胶网孔内，则洗脱体积为。

A、Vo+VgB、Vo+VtC、Vo+ViD、Vo+Ve3、已知甲、乙、丙三种物质其分子量大小顺序是甲﹥乙﹥丙，则通过凝胶过滤时，最先洗脱下来的是。

A、甲物质B、乙物质C、丙物质D、无法确定4、对一个富含组氨酸残基的蛋白质，在使用离子交换层析时应优先考虑。

A、严格控制蛋白质上样液的浓度B、严格控制盐浓度C、严格控制洗脱液的PH值D、严格控制洗脱液的体积5、SDS-PAGE测定蛋白质的相对分量是根据各种蛋白质。

A、在一定PH值条件下所带净电荷的不同B、分子大小不同C、分子极性不同D、溶解度不同6、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这技术属于。

A、吸附层析B、离子交换层析C、分配层析D、亲和层析E、凝胶过滤7、SDS是一种去污剂。

A、阴离子B、阳离子C、非离子8、亲和层析分离豌豆凝集素的实训中与豌豆凝集素特异结合的物质是。

A、半乳糖B、葡聚糖凝胶C、糖基D、氯化钠9、有关凝胶层析的说法错误的是。

A、凝胶层析也称为排阻层次B、凝胶的是一类具有三位多空网状的结构C、凝胶的网孔大小与交联度有关D、分子量大的组分移动较慢，后出峰10、进行疏水吸附作用层析时，以下哪种条件比较合理？A、在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱。

B、在有机溶液存在时上柱，高盐溶液洗脱。

C、低盐溶液条件下上柱，高盐溶液洗脱。

D、高盐溶液上柱，按低盐，水和有机溶剂顺序洗脱。

E、低盐缓冲液上柱，低盐洗脱。

11、有关Sephadex的叙述错误的是。

A、具有三维空间网状结构B、G后面的数字表示每克干凝胶吸水量×10C、网孔的大小取决于交联度D、数字越大，交联度越小，分离分子量大的物质12、以下哪种方法可测定蛋白质的相对分子量。

A、吸附层析B、凝胶过滤层析C、亲和层析D、离子交换层析13、以下哪种方法可测定蛋白质的相对分子量。

A、吸附层析B、密度梯度离心C、亲和层析D、离子交换层析14、用阳离子交换树脂来分离氨基酸，随着pH的升高，氨基酸洗脱下来的次序是。

A、先碱性氨基酸，再中性氨基酸，后酸性氨基酸。

B、先酸性氨基酸，再中性氨基酸，后碱性氨基酸。

C、先中性氨基酸，再酸性氨基酸，后碱性氨基酸。

D、先中性氨基酸，再碱性氨基酸，后酸性氨基酸五、简答题1、简述影响R f的主要因素六、问答题1、试论述吸附层析法的原理。

2、试论述分配层析的原理。

3、试论述离子交换层析的原理。

4、试论述凝胶层析的原理。

5、试论述亲和层析的原理。

.6、试论述层析聚焦的原理.。

7、在一抽提液中含有三种蛋白质，其性质如下：蛋白质相对分子量等电点A 20000 8.5B 21000 5.9C 5000 6.0试设计一个方案来分离这三种蛋白质。