药敏实验
药敏试验
影响药敏结果的因素
一、培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注
平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，且培养基 内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子。 二、细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈 变小。 三、药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的 结果，需精确配制。
和肉汤稀释法（抗生素梯度稀释）
3. 抗生素浓度梯度法-E 试 验（E-test）
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二、实验原理
将含有一定量抗菌药物的纸片或药片，
平贴于已接种被检细菌的琼脂培养基上，纸 片或药片中的药物即呈梯度向周围扩散，敏 感菌株在纸片或药片的周围生长受到抑制， 而形成抑菌圈。根据抑菌圈的大小，可判断 细菌对抗菌药物的敏感性。
四、培养时间：一般在37℃下培养18-24小时。
三、实验材料与器材
1、实验材料
分离培养的细菌、平板，药敏纸片
2、实验器材 超净工作台、分光光度计、量尺或游标卡尺
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四、实验内容与步骤
（一）倒平板：固体培养基的准备
（二）细菌纯培养及菌悬液的制备
确定细菌的浓度：将细菌离心沉淀后用无菌PBS
稀释至OD值为0.2左右（细菌OD600吸光度在0.有哪几种？ 2、影响药敏结果的因素有哪些？
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③倒置在28℃培养箱中培养24h观察结果。
④用尺量包括纸片直径在内的抑菌环最大直径，判
定结果（敏感、中度敏感、耐药）。
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药物敏感实验判定标准
抑菌圈直径（毫米）
20以上
敏感度
极敏
15-20
10-14 10以下 0
高敏
中敏 低敏 不敏
* 具体对于不同的菌株，及不同的抗生素纸 片需参照NCCLs的标准或者CLSI标准。
药敏试验科普
药敏试验怎么做
E试验
E试条是一条5mm*50mm无孔试剂载体, 一面固定有预先制备, 浓度呈连续指数增 加稀释抗生素, 另一面有读数和判别刻度。 将E试条放在细菌接种过琼脂平板上, 经孵 育过夜, 围绕试条显著可见椭圆形抑菌圈, 圈边缘与试条交点刻度浓度即为抗生素抑 制细菌最低浓度。
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药敏试验方法对比
• 青霉素（R） 苯唑西林（R） 万古霉素（S）：对所有青霉素类、头孢类、和其他β- 内酰胺
类抗生素均耐药 ，此外对喹诺酮类和大环内酯类抗生素交叉耐药 ，严重感染唯一有效抗生 素是万古霉素 。因此 ，对于轻症感染可选择喹诺酮类、 四环素类、复方磺胺、磷霉素等联 合用药； 重症感染可选择糖肽类 ，如万古霉素或替考拉宁联合利福平； 尿路感染可以选择 呋喃妥因、复方磺胺、环丙沙星。
药敏试验科普
目录
一 、什么是药敏试验 二 、药敏试验怎么做 三 、药敏试验结果代表什么 四 、常见致病菌药敏结果
一 、什么是药敏试验
药敏试验概念
经过模拟体内环境条件, 测试分离自病 人体内感染部位病原菌对常见抗生素敏 感性, 即抗生素对目标细菌抑制能力, 从而估计抗生素诊疗效果一个体外试验 方法。
优点 : 操作简单, 反复性好 ; 成本低, 无需特殊设 备 ; 灵活选择抗菌药 品 ; 结果轻易了解
缺点 : 不适合生长缓慢或者 生长速率不一样菌株 以及一些苛养菌
纸片扩散法
稀释法
优点 : 标准化方法, 结果可 靠 ; 检测菌范围更广 ; 定量检测 ; 愈加好反 应菌株耐药情况
缺点 : 操作费事费力
√ 抗生素的选择： • 青霉素（S） ：表示对青霉素类、头孢菌素类均敏感 。因此 ，青霉素为首选抗生素 ，可选择
药敏试验方法简介
药敏试验误差来源及控制
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合理设置对照组
在药敏试验中，应设置对照组以排除干扰因素对结果的影响，确保结果的可靠性。
药敏试验对环境、温度、湿度等条件要求较高，需要严格控制才能保证结果的准确性。
药敏试验的局限性
试验条件限制
对于一些低浓度药物或间歇性发作的病原体，药敏试验可能会出现假阴性结果。
检测灵敏度不高
药敏试验只能检测药物对病原体是否敏感，无法预测患者使用药物后是否会出现不良反应。
应用范围
操作步骤
分子生物学药敏试验需要对细菌基因进行提取、扩增和测序等操作，然后根据测序结果分析细菌对抗菌药物的敏感性。
定义
分子生物学药敏试验是一种基于分子生物学技术的药敏试验方法，通过检测细菌基因序列的变化，判断细菌对某种抗菌药物的敏感性。
应用范围
分子生物学药敏试验适用于一些特殊类型的细菌感染性疾病，如耐药菌感染等。
微生物耐药性的传播方式
微生物耐药性可以通过多种方式传播，如基因突变、质粒传递、细胞重组等。
要点三
抗生素的抗菌谱和抗菌活性
抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性则是指抗生素对特定微生物的抑菌或杀菌能力。
抗生素的耐药机制
微生物对抗生素产生耐药性的机制包括抗生素泵出机制、药物靶点改变机制、药物修饰机制等。
药敏试验的实验方法
药敏试验的种类及方法
03
常规药敏试验
定义
常规药敏试验是一种测定细菌对抗菌药物敏感性的经典方法，通过在体外培养基上测定细菌生长情况，从而判断细菌对物稀释、细菌培养和结果观察等步骤。
应用范围
常规药敏试验适用于各种需要进行抗菌治疗的感染性疾病。
药敏试验实验原理
药敏试验实验原理
药敏试验是一种用于评估细菌对抗生素的敏感性或耐药性的测试方法。
在实验中，细菌被暴露于不同类型的抗生素，以确定哪种药物可以有效地抑制或杀死它们。
药敏试验通常用于指导医生选择治疗细菌感染的最佳抗生素。
药敏试验的原理是通过测量细菌在不同抗生素浓度下的生长程度来判断其敏感性或耐药性。
一般来说，实验分为两种类型：定量法和定性法。
定量法是一种测量细菌在不同抗生素浓度下的最小抑菌浓度（MIC）的方法。
MIC是指能够有效地抑制细菌生长的最低抗生素浓度。
在这种方法中，细菌被分配到一系列含有不同抗生素浓度的培养基上。
然后，通过观察细菌在不同浓度下的生长情况，确定最低抑菌浓度。
定性法则是在含有不同抗生素的培养基上观察细菌的生长情况，以确定其是否对该抗生素敏感。
这种方法通常用于筛选抗生素是否对细菌有抑制作用。
药敏试验是一种非常重要的实验方法，可以帮助医生确定最佳的抗生素治疗方案。
然而，需要注意的是，药敏试验只能指导医生选择最合适的抗生素，而不能代替正确的临床治疗方案和用药方法。
药敏试验方法简介
02
耐药性监测
药敏试验可用于监测细菌的耐药性，帮助医生和研究人员了解和预防耐药性的发展。
02
药敏试验方法种类
利用抗菌药物在琼脂平板上扩散，从而测定细菌对药物的敏感程度。
纸片扩散法
原理
将细菌接种在平板上，贴上含不同浓度抗菌药物的纸片，静置一定时间后测量抑菌圈大小。
方法
广泛应用于临床细菌药敏试验，简单易行。
03
药敏试验操作流程
细菌培养
将临床标本接种到固体培养基上，培养出单一菌落，纯化后再进行鉴定。
接种方法
使用无菌棉签或针头将细菌接种到培养基表面，确保细菌均匀分布。
细菌培养与接种
药敏纸片放置
将含有不同抗菌药物的纸片贴在培养基上，纸片之间需留有间隔。
结果观察
将培养皿放入35°C恒温箱中培养24-48小时，观察每个药敏纸片抑菌圈的大小。
标准化阶段
随着生物技术的进步，自动化药敏试验和高通量药敏试验逐渐成为主流，可快速、准确地检测细菌对多种药物的敏感性。
自动化与高通量阶段
03
药物研发
在药物研发过程中，药敏试验可用于评估新药的抗菌效果和比较不同药物之间的效果。
药敏试验的应用场景
01
感染性疾病治疗
对于细菌感染的疾病，如肺炎、尿路感染等，药敏试验可以帮助医生选择合适的抗菌药物进行治疗。
应用
通过稀释抗菌药物，在不同浓度下观察细菌生长情况，以判断药物的抑菌或杀菌效果。
原理
将细菌接种在液体培养基中，加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况。
方法
该方法更适用于定量测定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。
应用
稀释法
E-test法
原理
结合纸片扩散法和稀释法，利用琼脂平板上的梯度浓度来检测细菌对药物的敏感性。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
实验三药物敏感试验和消毒灭菌
• 结果判读：
– 用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI （Clinical and Laboratory Standards Institute）标准判读结果； – 报告：细菌对该抗生素是 敏感（susceptible，S）； 耐药（resistant，R）； 还是中介（intermediate，I）。
实验三 消毒灭菌和药敏试验
实验内容和要求
• 1.掌握药敏试验的原理、步骤、结果及 意义 • 2.掌握常用的消毒与灭菌技术 • 3.熟悉紫外线杀菌试验的原理 • 4.了解细菌L型的诱导和菌落类型
一、药敏试验在感染性疾病防治 中的意义
近年来，由于各种抗菌药物的广泛应 用，导致耐药菌株的迅速增多。尤其是广 谱及超广谱抗生素的普遍使用，造成耐药 菌株大量出现，给临床治疗带来极大的困 难。同时，由于不合理的使用抗生素，治 疗的失败率及不良反应均有增加。因此， 药敏试验在感染性疾病的防治方面具有日 益重要的实际意义。
五、纸片扩散法（K-B法）
• 原理：
– 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上， 纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周 围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度 范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。 – 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该 药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，M ̶
非电离辐射：紫外线
• 最佳杀菌波长为250～270nm
• 杀菌机理：干扰DNA的复制与转录
• 特点：紫外线穿透力较弱
• 适应范围：紫外线消毒适用于
• 空气消毒与物品表面的消毒。
消毒与灭菌技术
药敏反应实验报告
一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。
2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。
3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。
通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。
根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。
3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。
4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。
2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。
3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。
4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。
5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。
六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。
2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。
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药敏实验
检验原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断的向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，MIC越小。
样本要求:鉴定后的致病微生物纯菌落
检验方法：
1、菌液制备：挑选鉴定后的致病微生物纯菌落3~4个菌落置于灭菌0.9%氯
化钠液中，制成均匀悬液。
经与浊度管（0.5麦氏单位比浊管）比较，浊度一致。
2、接种平板：用灭菌的棉拭子蘸取制备好的接种菌液，在管壁上旋转挤压几
次，去掉过多的菌液，再用试子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60℃，最后沿平皿周边绕两圈，用镊子压平。
？每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
3、孵育：贴好纸片后在15min内放到35℃孵箱，将平板倒置培养。
平板孵
育16~18h后取出。
4、结果判定：培养后取出平板，测量抑菌环的直径，抑菌环的边缘以肉眼见
不到细菌明显生长为限。
【检测结果的解释】
用毫米尺量取抑菌环直径，参照下表判读结果，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。
纸片法药敏试验抑菌环直径判断标准（非苛养菌）。