药敏试验
药敏试验方法
一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2 肉汤稀释法三、抗生素浓度梯度法四、自动化仪器法一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
药敏试验判断标准
药敏试验判断标准药敏试验是测定细菌对各种抗菌药物的敏感程度，以指导临床合理用药的重要手段。
以下是药敏试验判断标准的主要内容：1. 耐药性耐药性是指细菌对某种抗菌药物不敏感或耐受。
在药敏试验中，如果细菌生长不受某种抗菌药物抑制或生长速度与对照菌株相比无明显减慢，则该菌株被认为对这种抗菌药物耐药。
2. 中介中介是指细菌对某种抗菌药物的作用处于不敏感与耐药之间。
在药敏试验中，如果细菌生长受到抑制，但生长速度仍高于对照菌株，则该菌株被认为对这种抗菌药物中介。
3. 敏感敏感是指细菌对某种抗菌药物高度敏感。
在药敏试验中，如果细菌生长受到明显抑制，甚至无法生长，则该菌株被认为对这种抗菌药物敏感。
4. 耐药谱耐药谱是指某一菌种对多种抗菌药物的耐药性。
通过药敏试验，可以测定某一菌种对各种抗菌药物的耐药谱，帮助医生了解该菌种对哪些抗菌药物有效，哪些无效。
5. 药敏试验结果与临床疗效药敏试验结果只能作为临床用药的参考，而不能完全替代临床疗效。
在实际治疗中，还需要结合患者的具体情况，如病情、生理状况、药物耐受性等因素来制定合理的用药方案。
6. 交叉耐药交叉耐药是指某种抗菌药物耐药的菌株对其他抗菌药物也表现出一定程度的耐药性。
这种现象在药敏试验中需要注意，避免误导临床用药。
7. 药物代谢和动力学药物代谢和动力学是影响药效的重要因素。
通过药敏试验，可以了解药物在体内的代谢途径和动力学特征，以便更好地掌握药物的使用方法，提高药效。
8. 药物配伍禁忌在联合用药时，需要注意药物之间的配伍禁忌。
某些抗菌药物之间可能存在配伍禁忌，这在药敏试验中需要加以注意，以避免用药不当引起的不良反应。
总之，药敏试验判断标准是指导临床合理用药的重要手段之一，可以帮助医生了解细菌对各种抗菌药物的敏感程度，为制定合理的用药方案提供依据。
同时需要注意交叉耐药、药物代谢和动力学、药物配伍禁忌等因素的影响，以提高药效并避免不良反应的发生。
药敏试验科普
药敏试验怎么做
E试验
E试条是一条5mm*50mm无孔试剂载体, 一面固定有预先制备, 浓度呈连续指数增 加稀释抗生素, 另一面有读数和判别刻度。 将E试条放在细菌接种过琼脂平板上, 经孵 育过夜, 围绕试条显著可见椭圆形抑菌圈, 圈边缘与试条交点刻度浓度即为抗生素抑 制细菌最低浓度。
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药敏试验方法对比
• 青霉素（R） 苯唑西林（R） 万古霉素（S）：对所有青霉素类、头孢类、和其他β- 内酰胺
类抗生素均耐药 ，此外对喹诺酮类和大环内酯类抗生素交叉耐药 ，严重感染唯一有效抗生 素是万古霉素 。因此 ，对于轻症感染可选择喹诺酮类、 四环素类、复方磺胺、磷霉素等联 合用药； 重症感染可选择糖肽类 ，如万古霉素或替考拉宁联合利福平； 尿路感染可以选择 呋喃妥因、复方磺胺、环丙沙星。
药敏试验科普
目录
一 、什么是药敏试验 二 、药敏试验怎么做 三 、药敏试验结果代表什么 四 、常见致病菌药敏结果
一 、什么是药敏试验
药敏试验概念
经过模拟体内环境条件, 测试分离自病 人体内感染部位病原菌对常见抗生素敏 感性, 即抗生素对目标细菌抑制能力, 从而估计抗生素诊疗效果一个体外试验 方法。
优点 : 操作简单, 反复性好 ; 成本低, 无需特殊设 备 ; 灵活选择抗菌药 品 ; 结果轻易了解
缺点 : 不适合生长缓慢或者 生长速率不一样菌株 以及一些苛养菌
纸片扩散法
稀释法
优点 : 标准化方法, 结果可 靠 ; 检测菌范围更广 ; 定量检测 ; 愈加好反 应菌株耐药情况
缺点 : 操作费事费力
√ 抗生素的选择： • 青霉素（S） ：表示对青霉素类、头孢菌素类均敏感 。因此 ，青霉素为首选抗生素 ，可选择
药敏试验方法简介
药敏试验误差来源及控制
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合理设置对照组
在药敏试验中，应设置对照组以排除干扰因素对结果的影响，确保结果的可靠性。
药敏试验对环境、温度、湿度等条件要求较高，需要严格控制才能保证结果的准确性。
药敏试验的局限性
试验条件限制
对于一些低浓度药物或间歇性发作的病原体，药敏试验可能会出现假阴性结果。
检测灵敏度不高
药敏试验只能检测药物对病原体是否敏感，无法预测患者使用药物后是否会出现不良反应。
应用范围
操作步骤
分子生物学药敏试验需要对细菌基因进行提取、扩增和测序等操作，然后根据测序结果分析细菌对抗菌药物的敏感性。
定义
分子生物学药敏试验是一种基于分子生物学技术的药敏试验方法，通过检测细菌基因序列的变化，判断细菌对某种抗菌药物的敏感性。
应用范围
分子生物学药敏试验适用于一些特殊类型的细菌感染性疾病，如耐药菌感染等。
微生物耐药性的传播方式
微生物耐药性可以通过多种方式传播，如基因突变、质粒传递、细胞重组等。
要点三
抗生素的抗菌谱和抗菌活性
抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性则是指抗生素对特定微生物的抑菌或杀菌能力。
抗生素的耐药机制
微生物对抗生素产生耐药性的机制包括抗生素泵出机制、药物靶点改变机制、药物修饰机制等。
药敏试验的实验方法
药敏试验的种类及方法
03
常规药敏试验
定义
常规药敏试验是一种测定细菌对抗菌药物敏感性的经典方法，通过在体外培养基上测定细菌生长情况，从而判断细菌对物稀释、细菌培养和结果观察等步骤。
应用范围
常规药敏试验适用于各种需要进行抗菌治疗的感染性疾病。
药敏试验名词解释
药敏试验名词解释药敏试验是一种常见的实验方法，用于评估不同细菌株对特定药物的敏感性或耐药性。
其目的是确定细菌是否对某种药物产生抗药性，并帮助选择有效的治疗方案。
下面是对药敏试验中常见名词的解释。
1.抗生素：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌的化学物质。
常见的抗生素包括青霉素、四环素、氨基糖苷类等。
药敏试验通过测试不同细菌对抗生素的敏感性，来确定最佳的治疗方案。
2.最小抑菌浓度（Minimum Inhibitory Concentration, MIC）：是指在药敏试验中，能够完全抑制特定细菌生长的最低药物浓度。
MIC越低，说明细菌对药物的敏感性越高。
3.抗生素敏感性：指细菌对抗生素的敏感程度。
当细菌的MIC 值低于临床常用浓度，细菌被认为是敏感的。
抗生素敏感性通常按照不同级别分类，如“敏感”、“中度敏感”、“耐药”等。
4.抗生素耐药性：指细菌对抗生素的抗性能力。
当细菌对某种抗生素的MIC高于临床常用浓度，细菌被认为是耐药的。
抗生素耐药性可能是天然的（细菌天生对某种抗生素具有抗性）、获得性的（细菌通过突变或基因水平的转移获得抗性）等。
5.药敏试验盘（Drug Sensitivity Test Plate）：是一种专门用于药敏试验的实验盘。
盘上含有不同种类的抗生素，通过在试验皿中施加抗生素盘来测试细菌对抗生素的敏感性。
6.纸片扩散法（Disk Diffusion method）：是常用的药敏试验方法之一。
在试验皿上，将含有不同抗生素的纸片放置，观察细菌生长的抑制情况。
通过测量细菌生长的抑制直径，来评估细菌对抗生素的敏感性。
7.自动化药敏试验系统：近年来，随着技术的进步，出现了许多自动化的药敏试验系统。
这些系统可以快速、准确地评估细菌对多种药物的敏感性，提高药敏试验的效率和精确度。
8.多重耐药（Multidrug-resistant, MDR）：指细菌对多种抗生素具有耐药性。
多重耐药细菌对抗生素的敏感性非常低，临床治疗难度较大，也容易引发传染病的控制问题。
药敏试验方法简介
02
耐药性监测
药敏试验可用于监测细菌的耐药性，帮助医生和研究人员了解和预防耐药性的发展。
02
药敏试验方法种类
利用抗菌药物在琼脂平板上扩散，从而测定细菌对药物的敏感程度。
纸片扩散法
原理
将细菌接种在平板上，贴上含不同浓度抗菌药物的纸片，静置一定时间后测量抑菌圈大小。
方法
广泛应用于临床细菌药敏试验，简单易行。
03
药敏试验操作流程
细菌培养
将临床标本接种到固体培养基上，培养出单一菌落，纯化后再进行鉴定。
接种方法
使用无菌棉签或针头将细菌接种到培养基表面，确保细菌均匀分布。
细菌培养与接种
药敏纸片放置
将含有不同抗菌药物的纸片贴在培养基上，纸片之间需留有间隔。
结果观察
将培养皿放入35°C恒温箱中培养24-48小时，观察每个药敏纸片抑菌圈的大小。
标准化阶段
随着生物技术的进步，自动化药敏试验和高通量药敏试验逐渐成为主流，可快速、准确地检测细菌对多种药物的敏感性。
自动化与高通量阶段
03
药物研发
在药物研发过程中，药敏试验可用于评估新药的抗菌效果和比较不同药物之间的效果。
药敏试验的应用场景
01
感染性疾病治疗
对于细菌感染的疾病，如肺炎、尿路感染等，药敏试验可以帮助医生选择合适的抗菌药物进行治疗。
应用
通过稀释抗菌药物，在不同浓度下观察细菌生长情况，以判断药物的抑菌或杀菌效果。
原理
将细菌接种在液体培养基中，加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况。
方法
该方法更适用于定量测定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。
应用
稀释法
E-test法
原理
结合纸片扩散法和稀释法，利用琼脂平板上的梯度浓度来检测细菌对药物的敏感性。
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告概述：药敏试验是一种用来测试细菌对不同抗生素的敏感性的实验方法。
本实验旨在通过观察不同药物对细菌的杀菌效果，评估药物的抗菌活性。
通过实验结果，可以为临床医生提供选择合适药物治疗感染的依据。
实验步骤：1. 细菌培养：从临床患者的感染部位采集样本，进行无菌处理后，接种于含有丰富营养物质的琼脂培养基上，利用恒温培养箱在37摄氏度下培养。
2. 药物制备：根据实验要求选用常见的抗生素药物，配制合适浓度的药物溶液。
3. 药敏纸片实验：将药敏纸片铺在含有培养菌的琼脂平板上，利用吸管滴取一定量的药物溶液滴在药敏纸片上。
将琼脂平板放置在恒温培养箱中培养。
4. 结果观察：观察培养基上的药物液滴周围是否出现抑菌圈，测量抑菌圈的直径。
根据抑菌圈的大小和药物浓度的对应关系，判断细菌对药物的敏感性。
实验结果：通过对不同抗生素药物的实验观察，我们得到了如下结果：1. 对照组：在没有添加药物的培养基上，细菌在一定时间内呈现正常生长。
2. 敏感性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围出现了抑菌圈。
抑菌圈的直径越大，说明细菌对该药物的敏感性越高。
根据抑菌圈的直径，我们判断药物的敏感性分为不同级别。
3. 抗药性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围未出现抑菌圈，或抑菌圈的直径很小。
这说明细菌对该药物的敏感性较低，甚至产生了抗药性。
讨论和分析：通过药敏试验的结果，我们可以根据细菌对不同药物的敏感性来选择合适的抗生素治疗感染。
药敏试验是临床医生进行抗生素选择的重要依据之一。
根据不同细菌的敏感性结果，医生可以根据药物的目标细菌的敏感性，选择合适的药物和剂量进行治疗。
同时，药敏试验也可以帮助医生监测和了解细菌对药物的抗药性情况。
随着抗生素的广泛使用，一些细菌逐渐产生了对药物的抗药性。
通过药敏试验，可以及早发现和监测细菌的抗药性情况，为防控细菌抗药性提供依据。
然而，药敏试验也存在一些限制。
首先，该试验只能测试抗生素对细菌的杀菌效果，不能完全模拟临床环境中抗生素的药效。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
药敏反应实验报告
一、实验目的1. 了解药敏试验的基本原理和操作流程。
2. 掌握最小抑菌浓度（MIC）的测定方法。
3. 分析细菌对不同抗菌药物的敏感性，为临床合理用药提供依据。
二、实验原理药敏试验是一种体外试验方法，用于检测细菌对特定抗菌药物的敏感性。
通过观察细菌在含有不同浓度抗菌药物的培养基中的生长情况，可以确定最小抑菌浓度（MIC），即抑制细菌生长的最低药物浓度。
根据CLSI标准，将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介和耐药三种。
三、实验材料1. 菌株：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗菌药物：青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星等。
3. 培养基：MH肉汤、MH琼脂、MH培养基。
4. 仪器：恒温培养箱、微量移液器、无菌操作台、显微镜等。
四、实验方法1. 菌株培养：将待测菌株接种于MH肉汤培养基中，37℃培养24小时，备用。
2. 制备药敏纸片：将不同浓度的抗菌药物溶解于无菌生理盐水中，制成药敏纸片。
3. 点种细菌：将培养好的菌株用无菌棉签涂布于MH琼脂平板上，待菌落生长后，用无菌镊子将药敏纸片贴于平板表面。
4. 观察结果：将平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时，观察细菌生长情况，记录抑菌圈直径。
5. MIC测定：将培养好的菌株用无菌生理盐水稀释至一定浓度，分别加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况，记录抑制细菌生长的最低药物浓度。
五、实验结果与分析1. 金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感。
2. 大肠杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均中介。
六、讨论1. 药敏试验是临床合理用药的重要依据，通过测定细菌对药物的敏感性，可以指导临床医生选择合适的抗菌药物，避免滥用和误用。
2. 本实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星均敏感，提示临床治疗金黄色葡萄球菌感染时，可以选择这些药物进行治疗。
药敏试验结果的解读
敏感度越高，说明细菌对药物的反应越强烈，治疗效果越好。在药敏试验结果 中，敏感度越高，通常表示该药物是治疗该细菌感染的首选药物。
中介度解读
中介度解读
中介度表示细菌对药物的敏感性降低，通常以M表示。如果药敏试验结果显示中介 度为M，说明该细菌对药物有一定的抵抗力，使用该药物治疗效果可能较差。
中介度解读
中介度越高，说明细菌对药物的抵抗力越强，治疗效果越差。在药敏试验结果中 ，中介度越高，通常表示该药物不是治疗该细菌感染的首选药物。
耐药度解读
耐药度解读
耐药度表示细菌对药物完全不敏感，通常以R表示。如果药敏试 验结果显示耐药度为R，说明该细菌对药物完全不敏感，使用该 药物治疗效果很差基因的变异和传播机制，
为新药研发提供理论支持。
耐药菌株的监测
02
加强耐药菌株的监测和预警，及时发现和遏制耐药菌株的传播。
耐药机制与药物作用机制的研究
03
通过研究耐药机制和药物作用机制，为新药研发提供新的思路
和方法。
个体化用药的探索
个体化用药方案的制定
临床实践与研究的结合
药敏试验的目的
01
02
03
指导临床用药
药敏试验结果可以帮助医 生选择合适的抗生素，避 免盲目用药和耐药性的产 生。
监测耐药性
通过药敏试验可以监测细 菌的耐药性变化，为抗生 素的研发和使用提供依据。
控制感染
药敏试验结果有助于控制 感染，减少传播和交叉感 染的风险。
药敏试验的分类
纸片扩散法
将含有不同浓度抗生素的纸片贴 在细菌培养皿上，通过测量纸片 周围抑菌圈的大小来判断细菌对
药敏试验结果的解读
目录
• 药敏试验简介 • 药敏试验结果解读 • 药敏试验结果与临床用药 • 药敏试验结果解读的注意事项 • 药敏试验结果解读的未来展望
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药敏试验2010-06-13药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），环丙沙星（CIP），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新诺明（SMZ）。
药敏结果判定标准按照NCCLs手册2005版。
1. 操作方法：（1）将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。
用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
（3）待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。
用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。
每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。
在菌接种后15分钟内贴完纸片。
（4）将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表6）。
抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。
有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。
结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。
（5）每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控。
只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。
ATCC 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。
0.5麦氏比浊管配制方法： 0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2 . 2H2O) 0.5ml 0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml 将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。
用前混匀。
有效期为6个月。
2. 注意事项： (1) 制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。
琼脂厚为4±0.5mm（约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。
倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。
pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。
(2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。
使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。
过期纸片不能使用, 应弃去。
(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。
(4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。
然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保存。
每月取出一支，传出细菌供常规用。
待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。
如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
3.质量控制质量控制方法是用与常规实验相同的操作方法，测定质控菌株的抑菌环。
应使用新鲜传代的菌种。
接种菌液的涂布方法等均同常规操作，测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。
一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备：购买或自制2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
3.1.3将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
3.2牛津杯法3.2.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密。
）3.2.2以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（内径6nm、外径8nm、高10nm的圆形小管，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，并在小管处标记各种药物名称。
每个平板可放4-6支小管。
待分钟后，分别向各小管中滴加一定数量的各种药液，勿使其外溢。
置37℃培养8-18小时，观察结果。
3.2.3将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
3.3打孔法：该法较简单，成本低，易操作，比较适用于商品药物的检测。
3.3.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密。
）3.3.2以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3.3.3加样：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。
3.3.4将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
结果观察在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。
过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。
其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
判定标准一、药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。
表1药物敏感实验判定标准抑菌圈直径（毫米）敏感度20以上极敏15~20 高敏10~14 中敏10以下低敏0 不敏二、药物敏感实验判定标准参考表1，多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上为高敏，6—9毫米为低敏，无抑菌圈为不敏。
影响药敏结果的因素一、培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。
倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。
培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。
二、细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
三、药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。
商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
四、培养时间：一般培养温度和时间为37℃ 8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。
药敏试验的应用药物敏感实验后，应选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。
在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为我们药敏实验是药液直接和细菌接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在给禽用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到好的治疗效果。
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