药敏试验方法简介
药敏试验方法
药敏试验方法药敏试验方法：K-B法：1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。
2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。
3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。
4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。
每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。
每个纸片中心间距24mm。
纸片一旦与平板接触，不应再移动。
5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。
嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。
6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。
说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。
链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B 法.肺炎链球菌胶乳凝集测定法1. 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。
2. 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。
3. 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。
4. 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。
5. 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。
注：R3为阳性对照。
药敏纸片的选择1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦头孢噻吩（CF）4 、肠球菌氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎链球菌外链球菌氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，安曲南。
药敏试验方法
一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2 肉汤稀释法三、抗生素浓度梯度法四、自动化仪器法一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法一般包括以下步骤：
1. 菌株选取：选择适当的病原菌株进行测试，一般使用已知药敏性的参比菌株作为对照。
2. 菌液的制备：将菌株接种到培养基上培养，培养至菌量合适后，采用生理盐水调制成适宜浓度的菌悬液。
3. 菌液的稀释：取一定数量的菌悬液，根据草浆法或直接法进行适当稀释，使菌量达到目标细菌的浓度，一般为0.5-2×10^8个CFU/mL。
4. 抗生素的制备：按照制备好的抗生素试纸或试剂盒的说明，将抗生素溶液或药片溶解成合适浓度的抗生素溶液。
5. 稀释菌液的扩散：将已制备好的菌液均匀涂布在含有良好的抗生素稀释浓度梯度的培养基上。
6. 培养基的培养：将涂布了菌液的培养基在合适的温度（通常为35-37）下培养约16-20小时。
7. 结果的解读：通过观察培养基上微生物的生长情况，判断细菌对抗生素的敏
感性。
一般，对抗生素敏感细菌培养后，会在培养基上形成清晰的抑菌圈，直径会随着对菌体敏感程度的增加而扩大。
8. 数据记录和分析：记录抗生素的名称、浓度、菌株信息、抗菌圈直径等数据，并进行统计和分析。
需要注意的是，药敏试验的具体操作方法可能会因实验目的、试验样本、试剂等因素而有所不同，因此在进行药敏试验前应详细阅读试剂盒或试纸的使用说明，并按照说明书操作。
药敏试验方法1
药敏试验方法：K-B法：1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。
2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。
3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。
4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。
每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。
每个纸片中心间距24mm。
纸片一旦与平板接触，不应再移动。
5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。
嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。
6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。
说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。
链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.肺炎链球菌胶乳凝集测定法1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。
2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。
3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。
4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。
5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。
注：R3为阳性对照。
药敏纸片的选择1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ）氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN）头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM）庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA）头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB）奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC）2、铜绿假单孢菌/不动杆菌妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT）头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ）左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦3、金黄色葡萄球菌苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦头孢噻吩（CF）4 、肠球菌氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP）庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL）5、除肺炎链球菌外链球菌氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM)肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测MH培养基上贴头孢他定，头孢他定/克拉维酸，头孢噻肟/棒酸，安曲南。
药敏试验方法简介
药敏试验误差来源及控制
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合理设置对照组
在药敏试验中，应设置对照组以排除干扰因素对结果的影响，确保结果的可靠性。
药敏试验对环境、温度、湿度等条件要求较高，需要严格控制才能保证结果的准确性。
药敏试验的局限性
试验条件限制
对于一些低浓度药物或间歇性发作的病原体，药敏试验可能会出现假阴性结果。
检测灵敏度不高
药敏试验只能检测药物对病原体是否敏感，无法预测患者使用药物后是否会出现不良反应。
应用范围
操作步骤
分子生物学药敏试验需要对细菌基因进行提取、扩增和测序等操作，然后根据测序结果分析细菌对抗菌药物的敏感性。
定义
分子生物学药敏试验是一种基于分子生物学技术的药敏试验方法，通过检测细菌基因序列的变化，判断细菌对某种抗菌药物的敏感性。
应用范围
分子生物学药敏试验适用于一些特殊类型的细菌感染性疾病，如耐药菌感染等。
微生物耐药性的传播方式
微生物耐药性可以通过多种方式传播，如基因突变、质粒传递、细胞重组等。
要点三
抗生素的抗菌谱和抗菌活性
抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性则是指抗生素对特定微生物的抑菌或杀菌能力。
抗生素的耐药机制
微生物对抗生素产生耐药性的机制包括抗生素泵出机制、药物靶点改变机制、药物修饰机制等。
药敏试验的实验方法
药敏试验的种类及方法
03
常规药敏试验
定义
常规药敏试验是一种测定细菌对抗菌药物敏感性的经典方法，通过在体外培养基上测定细菌生长情况，从而判断细菌对物稀释、细菌培养和结果观察等步骤。
应用范围
常规药敏试验适用于各种需要进行抗菌治疗的感染性疾病。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药敏试验是一种常用的实验方法，用于确定某种药物对细菌的敏感性或抗性。
下面是药敏试验的一般操作方法：1. 菌株的培养与准备：首先，选择要测试的细菌株。
常用的菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
将菌株从冻存状态中转移到琼脂平板上进行培养，然后选取单个菌落进行继续培养。
2. 制备药物浓度梯度：为了测试细菌对不同浓度药物的敏感性，需要制备一系列药物浓度梯度。
可以选择常用的抗生素，如青霉素、利福平等。
根据药物的最小抑菌浓度（MIC）确定所需药物的最高浓度。
3. 制备洗涤液：制备1倍洗涤液，一般使用生理盐水或缓冲液。
如要进行中药药敏试验，可根据实验需求选择适当的提取液。
4. 制备菌悬液：从培养得到的菌落中选择单个菌落，接种到含有洗涤液的试管或培养皿中。
使用比例约为1:100（菌悬液：洗涤液），均匀混合。
5. 药物与细菌接触：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂平板上，然后使用定量器将一定量的药物滴在琼脂平板上。
确定滴药量时应根据具体药物的MIC进行调整。
6. 培养与观察结果：将涂有菌悬液和药物的琼脂平板进行孵育，时间和温度可以根据具体的实验目的和菌株要求进行调整。
观察培养后的平板上是否出现菌落生长，以及菌落的数量和形态特征。
7. 结果解读与分析：根据观察到的结果，分析不同浓度药物对细菌的抑菌效果，评估细菌对药物的敏感性。
可以根据菌落的出现与否、数量的多少和生长的形态特征来判断细菌是否对药物敏感。
总结：药敏试验是一种重要的实验方法，可以评估细菌对药物的敏感性或抗性。
操作时需要注意菌株的选择和培养方法、药物浓度的制备、菌悬液的制备和药物与细菌的接触方法，以及培养和观察结果等。
通过药敏试验的结果，可以帮助医生选择适当的药物治疗感染病情。
药敏试验方法简介
02
耐药性监测
药敏试验可用于监测细菌的耐药性，帮助医生和研究人员了解和预防耐药性的发展。
02
药敏试验方法种类
利用抗菌药物在琼脂平板上扩散，从而测定细菌对药物的敏感程度。
纸片扩散法
原理
将细菌接种在平板上，贴上含不同浓度抗菌药物的纸片，静置一定时间后测量抑菌圈大小。
方法
广泛应用于临床细菌药敏试验，简单易行。
03
药敏试验操作流程
细菌培养
将临床标本接种到固体培养基上，培养出单一菌落，纯化后再进行鉴定。
接种方法
使用无菌棉签或针头将细菌接种到培养基表面，确保细菌均匀分布。
细菌培养与接种
药敏纸片放置
将含有不同抗菌药物的纸片贴在培养基上，纸片之间需留有间隔。
结果观察
将培养皿放入35°C恒温箱中培养24-48小时，观察每个药敏纸片抑菌圈的大小。
标准化阶段
随着生物技术的进步，自动化药敏试验和高通量药敏试验逐渐成为主流，可快速、准确地检测细菌对多种药物的敏感性。
自动化与高通量阶段
03
药物研发
在药物研发过程中，药敏试验可用于评估新药的抗菌效果和比较不同药物之间的效果。
药敏试验的应用场景
01
感染性疾病治疗
对于细菌感染的疾病，如肺炎、尿路感染等，药敏试验可以帮助医生选择合适的抗菌药物进行治疗。
应用
通过稀释抗菌药物，在不同浓度下观察细菌生长情况，以判断药物的抑菌或杀菌效果。
原理
将细菌接种在液体培养基中，加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况。
方法
该方法更适用于定量测定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。
应用
稀释法
E-test法
原理
结合纸片扩散法和稀释法，利用琼脂平板上的梯度浓度来检测细菌对药物的敏感性。
药敏试验简介(1)
药敏试验简介(1)药敏试验简介药敏试验是一种用于检测感染病原体对抗生素的敏感性和抗性的实验方法，用于指导临床医生选择最佳的治疗方案。
以下是有关药敏试验简介的几个方面：1. 药敏试验的原理药敏试验的基本原理是，将已知浓度和种类的抗生素加入含有目标病菌的培养基中，观察在一定条件下细胞生长和杀菌效果的变化。
根据药物与细菌之间抑制、杀灭等反应的不同情况，可以确定细菌对各种抗生素的敏感性。
简单地说，药敏试验就是将不同的抗生素添加进培养基中，观察细菌的生长状况，从而确定细菌对各类抗生素的反应情况。
2. 药敏试验的步骤药敏试验包含多个步骤。
首先，需要从患者样本中分离出单个的病原菌株，并将其保持在适当的培养基中。
接着，将不同浓度的抗生素加入进相应的培养基中，混合均匀，培养一段时间后观察菌落的生长情况，记录生长的数量和质量。
后面，需要根据生长情况，计算并且解释作用的抗生素的最小抑菌浓度(MIC)，以及抗菌的抑制环直径等等。
最后，根据各种抗生素的药敏试验结果，医生可以选择最佳的治疗方案。
3. 药敏试验的意义药敏试验的意义非常重大。
抗生素的应用不当会导致抗生素的耐药性扩散，病原菌能够抵御原来有效的抗生素，导致其治疗效果降低或失效。
药敏试验可以为医生指导合理使用抗生素，从而减少抗生素的滥用和耐药性扩散。
4. 药敏试验的分类药敏试验主要分为传统的筛选法和自动化的酶发联试验法两种。
前者需要繁琐的历程，其对微生物的散布、环境、培养条件等都会提出种种宽泛的要求；后者则大大减少耗时，更为方便。
现在在医学领域，自动化的酶发联试验法形象化了检测的过程、提高了药敏试验的原准确度和精准性。
药敏试验在临床医学的治疗中有着重要的地位，因此药敏试验也被医学从业人员广泛运用。
开展药敏试验，能突破医学的局限性和瓶颈，得以精准测试、指导合理用药和提高病人康复率。
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药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照 CLSI标准用S、R和I报告。
对于稀释法的批量试验，有时需要报告 MIC50、MIC90。
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稀释法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值 7.2-7.4
• 气体环境
营养程度
– 所有需氧细菌均放普通
抗生素拮抗剂含量
大气环境。如果放CO2
4. 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化 的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；
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5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
A
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CLSI对K-B法的标准化规定
纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、 平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
A
6
葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
A
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肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组
A
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假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组
A
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不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组
A
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肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
A
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肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组
A
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药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的 CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R） 和中介（I）。
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MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
R
I
S
耐药
中介 敏感
d1 d2
A
抑菌圈直径（mm)
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1. 准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基；
2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐水 管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；
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3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余 菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周；
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15
三、药敏试验方法学
1.手工试验
• 纸片扩散法（K-B法） • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法 • E-test法
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2.自动仪器药敏系统
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纸片扩散法（K-B法）
原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈 负相关。
Increasing Antibiotic Conc.
MIC = 8
.25
0.5
1
2
4
8
16
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MIC (最小抑菌浓度) = 抗生素可抑制细菌生长 的最小浓度。
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常量稀释法
药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
理用药，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌
握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
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（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会
（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 Ø A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 Ø B组：可常规测试、选择性报告的药物 Ø C组：替代性或补充性药物 Ø U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物
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稀释法（MIC法）
MIC法：分为常量法和微量法
Ø 常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
Ø 微量法：微量肉汤稀释法
p 简化双浓度折点法 ATB药敏
p 简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
p 动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
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肉汤稀释法
不生长 = 抗生素抑制细菌生长 生长 = 抗生素无法抑制细菌生长
钙镁离子含量（钙10-25； ，由于碳酸的影响，药
镁10-12.5μg/ml）
物活性受到影响，形成
菌悬液（5×104CFU/ml）
假敏感或假耐药
接种效应
• 培养时间
浓度高MIC抬高
药敏试验方法简介
A
1
耐药菌问题日益严重
“目前药物失去作用的速度与科学家发 现新药物的速度差不多。”
摘自WHO报告
A
2
抗微生物治疗面临的困境
•抗药性问题始终存在 •细菌不断获得新的耐药机制 •以往对付耐药性的策略收效不显
A
3
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4
一、 抗菌药物敏感试验（AST）
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，指导合
钙镁离子含量、锌离子含量 （用27853氨基糖苷类和亚胺
– 苛养菌放普通环境生长 不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 培养时间
菌悬液
– 粘液性铜绿需48小时
浓度高抑菌环缩小（假耐药）• 测量方法
浓度低则扩大（假敏感）
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稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养 基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀 释），培养16～24h后，通过观察细菌生长 现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度 （MIC）。
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敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂 量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓 度所抑制
耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量 可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能 存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠
耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效
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二、抗菌药物的种类及作用机制
不同的药判定标准不同；不同的菌判定标 准也不同。
2020/5/2
2020/5/2
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扩散法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值7.2-7.4
• 气体环境
营养程度（肠球菌能生长）
– 普通细菌放CO2时由于
厚度
碳酸的影响，药物活性
抗生素拮抗剂含量（用29212 监控）
受到影响，形成假敏感 或假耐药
104 cfu/ml
mg/ml 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0
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微量肉汤稀释法
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30
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接种后应充分混匀，但不能有气泡产生
静置培养
培养温度；35℃ 气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大 气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微 需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时