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扫描电镜组织处理流程

扫描电镜组织处理流程Scanning electron microscopy (SEM) is a powerful tool used in various scientific fields to examine the surface of materials at a high resolution. 扫描电子显微镜（SEM）是在各种科学领域中使用的强大工具，用于高分辨率地检查材料的表面。

SEM allows researchers to visualizethe microstructure of samples and obtain detailed information about their morphology and composition. SEM使研究人员能够可视化样品的微观结构，并获得关于其形态和组成的详细信息。

However, the process of preparing samples for SEM analysis can be complex and requires careful attention to detail. 然而，为SEM分析准备样品的过程可能会复杂，并需要仔细关注细节。

One of the key steps in the SEM sample preparation process is tissue processing, which involves fixing, dehydrating, and embedding biological samples to preserve their structure and allow for imaging with the electron microscope. SEM样品制备过程中的一个关键步骤是组织处理，它涉及固定、脱水和嵌入生物样品，以保留其结构，并允许使用电子显微镜进行成像。

菌种电镜检测标准操作规程

菌种电镜检测标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。

范围：适用于大肠杆菌为工程菌的菌种检测。

目的：检测以大肠杆菌为工程菌的菌种是否符合规定。

原理：以观察100个有效视野为底限，在所观察的视野中：（1）大肠杆菌菌体形态不应有可观察到的明显变异，即应为大肠杆菌的标准形态。

（2）不应有支原体、噬菌体、病毒样颗粒及其它微生物污染。

对有疑问的样品应加倍视野观察，并对有疑问处拍照。

内容：1 材料1．1试剂：2%磷钨酸、电镜铜网、火棉胶溶液1．2仪器电镜H600-A型2 方法2．1电镜样品制备2．1．1浓缩样品，使待检样品的密度在107/ml以上。

2．1．2负染法制备电镜样品（摘下“备用”标志牌，挂“运行”标志牌）：将浓缩后的样品滴于载有膜的电镜铜网上，用滤纸吸干多余的液体，然后将2%磷钨酸滴于其上，负染两分钟后吸干染液，此时样品制备完成，将制好的样品铜网置于样品盒中备用。

2．2准备工作2．2．1将制备好的铜网装入样品杯，将电镜调至合适状态并对样品进行观察。

2．3电镜检查标准：2．3．1对于以大肠杆菌为工程菌的样品，以观察100个有效视野为底限，在所观察的视野中：（1）大肠杆菌菌体形态不应有可观察到的明显变异，即应为大肠杆菌的标准形态。

（2）不应有支原体、噬菌体、病毒样颗粒及其它微生物污染。

对有疑问的样品应加倍视野观察，并对有疑问处拍照。

3 电镜检查报告所检电镜样品的观察结果应由观察者署名发出报告，一式两份，由观察科室和送检科室各保留一份。

4 清场4．1检查电源是否关闭，摘下“运行”标志牌，挂“备用”标志牌。

4．2认真填写工作记录及仪器设备使用记录。

4．3清理工作台面及地面，用专用抹布和拖布。

4．4使用后的玻璃器皿用纯化水洗净后，返回本室洗刷组处理。

5 清场后由车间工序负责人（质量监督员）检查合格后，摘下“待处理”标志牌，挂上“清场合格”标志牌。

扫描电子显微镜技术的使用方法与技巧

扫描电子显微镜技术的使用方法与技巧扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，SEM）作为一种非常强大的科学研究工具，在生物学、材料科学、纳米技术等领域都得到了广泛的应用。

本文将介绍扫描电子显微镜技术的使用方法与技巧，帮助读者更好地理解和应用这一先进的技术。

一、原理概述扫描电子显微镜通过发射出高能电子束照射样本表面，并测量样本表面反射的电子信号来实现对样品的观察和分析。

与光学显微镜相比，扫描电子显微镜具有更高的放大倍数和更好的分辨率，使得细小结构和样品表面形貌得以清晰可见。

二、样品制备在使用扫描电子显微镜之前，首先需要将样品进行适当的制备处理。

不同的样品可能需要不同的制备方法，下面以常见的生物组织样品为例进行介绍。

1. 固定和固化：对于生物组织样品，通常需要使用一些化学物质进行固定，以防止样品变形和腐败。

常用的固定剂包括冷冻甲醛、乙醛和洗涤液等。

固定后，样品需要进行固化，通常使用环氧树脂或冷冻干燥等方法。

2. 切片：之后，需要使用超薄切片机将固定和固化后的样品切割成薄片。

切片要求非常薄，一般在50-100 nm之间。

3. 上膜：切割好的样品薄片需要粘贴在导电载体上，常见的载体有导电胶带或碳薄膜。

上膜过程中需要注意避免气泡和脏污。

三、仪器操作1. 样品装入和真空抽取：准备好的样品载体需要被正确地装入到扫描电子显微镜的样品台上，并确保样品与电子束之间有足够的距离。

2. 参数设定：在开始观察之前，需要根据样品的特性和所需观察的目的进行一些参数的设定。

如加速电压、工作距离和探针电流等。

这些参数的选择需要根据具体的样品类型和所需观察的目的来确定。

3. 对焦和调节：通过调节显微镜的对焦装置和样品台的三维移动装置，将电子束对准样品表面，并使其形成清晰的像。

同时，还需要通过调节探针电感补偿装置，以保持较高的分辨率。

四、图像获取与分析1. 图像获取：当样品合适地装载在扫描电子显微镜中后，可以开始进行图像获取。

用扫描电镜观察DFRIKN-1分离物菌体的方法研究

用扫描电镜观察DFRIKN-1分离物菌体的方法研究吉青战;张靠稳【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)010【摘要】[目的]选择合适的样品处理方式,在扫描电镜下清晰地观察DFRKN-1 分离物菌体的表面结构特征.[方法]以不经过固定液处理的菌体为对照.将使用戊二醛、卢戈氏碘液、福尔马林固定的DFRKN-1分离物菌体细胞采用离心法、直接干燥法收集,进行酒精梯度逐级脱水,干燥并真空喷金后在扫描电镜下观察.[结果]不经过固定液处理的菌体形态脱水变形,经过固定液固定后的样品仍然保持原细胞形态,且戊二醛的固定效果优于其他2种固定剂;离心法不能收集到游动孢子,而直接干燥法收集则弥补了这一缺陷.使用戊二醛固定,直接干燥法收集菌体是处理DFRKN-1 分离物样品的最优选择.在电镜下观察到DFRKN-1 分离物表面的假根、游动孢子以及孢子囊的释放孔.[结论]通过扫描电镜观察DFRKN-1 分离物的结构特征,为研究其与根结线虫的作用机制提供参考.【总页数】2页(P5833-5834)【作者】吉青战;张靠稳【作者单位】北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川,750021;北方民族大学生物科学与工程学院,宁夏银川,750021【正文语种】中文【中图分类】S121【相关文献】1.新疆分离细菌的提取物对λ噬菌体紫外诱导的抑制作用 [J], 邹颖颖;辛晓红;方呈祥;杨桥;罗雪松;周国玲;张磊;唐雅丽;李红;张珞玲2.粘细菌Sorangium cellulosum So0087-3-3菌体提取物的分离和鉴定 [J], 鲁春华;赵林;李越中;沈月毛3.多耐药鲍曼不动杆菌噬菌体IME-AB6的分离、生物特性及保存方法研究 [J], 彭帆;童贻刚;柏长青4.金黄色葡萄球菌烈性噬菌体的分离鉴定和最佳保存方法研究 [J], 李陇平;张智英5.发酵后处理方法研究（Ⅶ）——肌苷发酵液中菌体的分离 [J], 林远声;林波;李晓燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

微生物-菌体扫描电镜前处理

扫描电镜
1、收集培养好的新鲜菌体，用1×PBS（pH7.0）或0.9% NaCl漂洗样品2-3次，每次15min ，5000rpm离心3min,去上清；
2、加2.5%的戊二醛溶液1ml,轻摇充分混匀，重悬菌液，4℃固定4h或过夜；
3、5000rpm离心3min,去上清，加入500ul PBS漂洗样品三次，每次15min （可用枪轻轻吹打，然后离心再加入新鲜PBS，混匀离心）；
4、加1%锇酸500ul或适量,摇动充分混匀，固定1-2h；
5、5000rpm离心3min,去上清，加入PBS 500ul漂洗样品三次，每次15min；
6、用梯度浓度（包括20%，50%，80%，100%五种浓度）的乙醇溶液脱水，每种浓度处理10min，5000rpm离心3min；
7、用纯丙酮或100%叔丁醇转换100%乙醇2-3次，即乙醇菌液离心的后，去上清，加200ul纯丙酮4℃放置20-30min,5000rpm离心3min，再加入新鲜纯丙酮。

8、自然风干，密封4℃保存，等待上样。

细菌前处理方法

细菌前处理方法1、试剂和耗材所有试剂，除特别申明外，均为分析纯，水为去离子水。

甲醛：浓度不小于37.0%-40%（m/m）冰醋酸：浓度不小于99.5%（m/m）无水乙醇：浓度不小于99.5%（m/m）丙三醇：浓度不小于99%（m/m）叔丁醇：浓度不小于99%（m/m）离心机、量筒、离心管、塑料吸管、样品槽、导电胶、样品台FAA固定液配制：甲醛(37%—40%)5ml；冰醋酸5ml；50%酒精90ml；丙三醇5ml。

超声混匀。

2、样品前处理步骤：2.1取材：如果是细菌侵染植物组织，需将染菌部位的边缘剪下，按照植物样品前处理方法处理。

如果细菌被提取出来或在培养皿上离体培养的，那么挑取少量菌体至离心管中，加入固定液，过夜固定。

2.2乙醇梯度脱水：50%乙醇（15min，1次）→60%乙醇（15min，1次）→70%乙醇（15min，1次）→75%乙醇（15min，1次）→85%乙醇（15min，1次）→95%乙醇（15min，1次）→100%乙醇（15min，2次），每个步骤都得充分离心，将菌体离心至管底。

注意：梯度脱水过程中，管中液体倒出后，迅速加入下一梯度乙醇溶液，切不可一批全部倒完后，一个一个加溶液，这样很多样品就会变形。

2.3干燥：加入叔丁醇，放至4℃冰箱冷冻，30min观察叔丁醇是否凝固，若为液体需要更换叔丁醇。

叔丁醇全部固化后，放入冻干机中，冻干12h。

冻干的干净菌体呈粉末状，如果菌体粘在离心管壁上，或成块状，证明实验失败，需重新处理。

2.4粘托：用牙签挑取菌体，粘在导电胶带上。

用吹风机或洗耳球吹干净。

2.5镀膜：离子溅射仪中喷镀Pt。

2.6上机观测。

参考文献：谢家仪,董光军,刘振英.扫描电镜的微生物样品制备方法.电子显微学报.2005. 24(4):440-440。

透射电镜生物样品前处理步骤

透射电镜生物样品前处理步骤电镜样品制备步骤1、取材：放入2.5%戊二醛溶液中固定2-4h(4℃可保存1-2周，冷冻可保存2年)注：不可用自来水冲洗，被钳、镊夹取造成机械损伤的组织不可部分可取较大面积，但厚度必须小于1mm（戊二醛固定能力小于0.5mm）2、漂洗：牙签取出样品至新的1.5ml离心管，用0.1M pH7.0磷酸缓冲液（PBS）漂洗样品三次（摇床），每次15min3、锇酸固定与再漂洗：1%锇酸溶液固定样品1-2h（临用前计算用量≤50ul/样，用0.1M PBS将2%锇酸稀释至1%，通风橱操作），吸出固定液，用0.1M pH7.0 PBS漂洗样品三次，每次15min 注：漂洗以清除固定液，避免产生沉淀物干扰结构观察4、脱水剂梯度脱水：用梯度浓度（50%，70%，80%，90%和95%）乙醇溶液对样品进行脱水处理，每个浓度处理15min 再用100%乙醇处理20min （乙醇细胞内抽提少，但与包埋剂相容性差）最后用纯丙酮处理20min（若包埋剂为Epon改用环氧乙烷置换）注：脱水以清除游离水以便包埋剂均匀渗透；脱水剂易吸收空气中水分，密封，置换时应该迅速由低到高逐级脱水而不能急剧脱水，更换溶液时应迅速，以免组织内外产生气泡。

5、包埋剂梯度渗透：①用包埋剂丙酮混合液（V/V=1/1）处理样品1h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)②用包埋剂丙酮混合液（V/V=3/1）处理样品3h：计算用量80ul/样再配制(参考样品大小)③纯包埋剂渗透样品过夜：将样品移至干燥的新离心管中，常温过夜(所用器具均应干燥)注：样品周围不能有气泡6、加热聚合：牙签取出经渗透处理的样品至0.5ml干燥离心管（预先装入约300ul包埋剂），加热聚合仪70℃加热过夜。

7、莱卡EM UC 7超薄切片仪修快、切片（50-70nm）8、正染色：塑料包埋模具（刀划几道缝隙），染色时温度低影响染色效果，冬天空调醋酸双氧铀50%乙醇饱和溶液100ul染色（15min-1h），双蒸水冲洗柠檬酸铅100ul染色15min（极易吸收空气中CO2产生PbCO3,染色时毋对着说话、呼吸，同时放置数块NaOH）9、日立H-7650透射电镜观察spurr包埋剂配制：ERL 2.5gNSA 5.2 g 混合均匀后再加入催化剂DMAE，搅拌30min；低温干燥保存DER 2.5 gDMAE 0.1g宜新鲜配制但由于使用期限长(3-4天)，混合物可在使用前一天制备。

《不同前处理方式对枯草芽孢杆菌固态发酵过程的影响及机制研究》范文

《不同前处理方式对枯草芽孢杆菌固态发酵过程的影响及机制研究》篇一一、引言枯草芽孢杆菌作为一种重要的微生物资源，在生物肥料、生物农药以及生物制造等领域具有广泛的应用价值。

近年来，固态发酵技术因其高效、环保等优点在枯草芽孢杆菌的发酵过程中得到了广泛应用。

然而，不同的前处理方式可能会对枯草芽孢杆菌的固态发酵过程产生显著影响。

本文旨在探讨不同前处理方式对枯草芽孢杆菌固态发酵过程的影响及机制，以期为优化发酵工艺提供理论依据。

二、材料与方法2.1 材料本研究所用枯草芽孢杆菌菌种、发酵原料以及其他实验试剂均采购自正规供应商。

2.2 方法2.2.1 前处理方式设置实验设置了三种前处理方式：自然晾晒、热处理（60℃）、化学处理（0.5% NaOH溶液）。

每种前处理方式均设置对照组（无前处理）。

2.2.2 固态发酵过程将经过前处理的原料与枯草芽孢杆菌混合，进行固态发酵。

定期取样，分析各组分的变化。

2.2.3 分析方法采用高效液相色谱法、气相色谱法、扫描电镜等技术手段，分析固态发酵过程中各组分的变化及菌体形态的差异。

三、结果与分析3.1 不同前处理方式对固态发酵过程中菌体生长的影响实验结果显示，经过不同前处理方式的原料对枯草芽孢杆菌的固态发酵过程产生了显著影响。

其中，热处理组在发酵初期菌体生长较快，但后期增长速度逐渐减缓；自然晾晒组和化学处理组在发酵过程中菌体生长较为平稳。

各组在发酵结束时，菌体数量均达到较高水平，但具体数值存在一定差异。

3.2 不同前处理方式对固态发酵过程中代谢产物的影响实验发现，不同前处理方式对固态发酵过程中的代谢产物产生了明显影响。

热处理组在发酵过程中产生的代谢产物较多，尤其是某些酶类物质和有机酸类物质；自然晾晒组和化学处理组在代谢产物的种类和数量上较为均衡。

各组之间在代谢产物的具体组成和含量上存在差异。

3.3 不同前处理方式对菌体形态的影响扫描电镜观察结果显示，不同前处理方式对枯草芽孢杆菌的形态产生了影响。