流式抗体的选择及美天旎新荧光染料的特点
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Байду номын сангаас
blue emission green emission infrared emission infrared emission
Vio dyes ---Performance
• Laser and filter compatibility
• Enhanced brightness
• Decreased spillover
③相同荧光素标记 ④相同剂量和浓度 ⑤但由未免疫动物血清纯化而来 •用此消除由于抗体非特异性结合到细胞表面Fc受体而产 生的背景染色
举例：双染实验
• 使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同 型对照抗体分别染色 • n色分析就要制备n 个补偿对照管
四、The Vio® Dyes-新型荧光染料
Brighter, Better Compensation, and More Stable
Vio® Dyes: Brand name - not only for violet laser dyes! •VioBlue violet laser (405 nm) •VioGreen violet laser (405 nm) •PE-Vio770 blue or yellow laser (488 or 561 nm） •APC-Vio770 red or yellow laser (635 nm or 561 nm)
FITC PE
laser
PC5
400
500 520 575
600
700
665
三、流式实验中流式抗体的选择
准备工作： •确定实验要检测的marker
•选择合适的荧光素标记的抗体
•选择合适的同型对照抗体
Fluorescent Signals: Extrinsic Structural & Functional Parameters (fluorescent probe) •Surface receptors e.g. labeled antibodies •Viability e.g. Propidium iodide (PI), 7-AAD •DNA/RNA content e.g. PI / acridine orange (AO) •Total protein e.g. covalent or ionic bonded acid dyes •Lipids e.g. Nile red •Apoptosis e.g. Annexin V/PI •Intracellular proteins e.g. Cytokines, signal transduction molecules (labeled antibodies) •Enzyme activity e.g. fluorogenic substrates (aldefluor) •DNA synthesis e.g. BrdU staining (proliferation) •Proliferation e.g. CFSE
• High stability during fixation
• Photo-induced conjugate degradation
• Laser and filter compatibility
• Enhanced brightness
• High stability during fixation
•抗原表达强弱
•染色系数
•荧光染料光谱重叠最小化 •采用多激光激发减少重叠
•慎用偶联染料
•自发荧光多的选择用红激光
同型对照抗体选择： •同型对照抗体：与实验染色的单克隆抗体特异性无关的 免疫球蛋白亚型 （Fc段相同，F（ab’）2段不同） •与染色的单克隆抗体：
①相同种属来源
②相同免疫球蛋白及亚型
• Decreased spillover
• Photo-induced conjugate degradation
Thank You
流式抗体的选择及美天旎 Vio系列新型荧光染料
德国美天旎生物技术有限公司
郝高克
一、荧光素的基本概念
•荧光的概念：
•激发光谱：特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光 •发射光谱：某一波长激发光引起荧光素发射的荧光
•荧光素的使用：选择正确的激光器；探测器（PMT）；
二、荧光信号的补偿
•什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 •为什么要进行补偿调节？
荧光染料的选择：
•根据机器的设置
• Vio® Dyes: Brand name - not only for violet laser dyes!
– VioBlue violet laser (405 nm) blue emission – VioGreen violet laser (405 nm) green emission – PE-Vio770 blue or yellow laser (488 or 561 nm) infrared emission – APC-Vio770 red or yellow laser (635 nm or 561 nm) infrared emission
blue emission green emission infrared emission infrared emission
Vio dyes ---Performance
• Laser and filter compatibility
• Enhanced brightness
• Decreased spillover
③相同荧光素标记 ④相同剂量和浓度 ⑤但由未免疫动物血清纯化而来 •用此消除由于抗体非特异性结合到细胞表面Fc受体而产 生的背景染色
举例：双染实验
• 使用单种荧光素标记的单克隆抗体和其余荧光素对应的同 型对照抗体分别染色 • n色分析就要制备n 个补偿对照管
四、The Vio® Dyes-新型荧光染料
Brighter, Better Compensation, and More Stable
Vio® Dyes: Brand name - not only for violet laser dyes! •VioBlue violet laser (405 nm) •VioGreen violet laser (405 nm) •PE-Vio770 blue or yellow laser (488 or 561 nm） •APC-Vio770 red or yellow laser (635 nm or 561 nm)
FITC PE
laser
PC5
400
500 520 575
600
700
665
三、流式实验中流式抗体的选择
准备工作： •确定实验要检测的marker
•选择合适的荧光素标记的抗体
•选择合适的同型对照抗体
Fluorescent Signals: Extrinsic Structural & Functional Parameters (fluorescent probe) •Surface receptors e.g. labeled antibodies •Viability e.g. Propidium iodide (PI), 7-AAD •DNA/RNA content e.g. PI / acridine orange (AO) •Total protein e.g. covalent or ionic bonded acid dyes •Lipids e.g. Nile red •Apoptosis e.g. Annexin V/PI •Intracellular proteins e.g. Cytokines, signal transduction molecules (labeled antibodies) •Enzyme activity e.g. fluorogenic substrates (aldefluor) •DNA synthesis e.g. BrdU staining (proliferation) •Proliferation e.g. CFSE
• High stability during fixation
• Photo-induced conjugate degradation
• Laser and filter compatibility
• Enhanced brightness
• High stability during fixation
•抗原表达强弱
•染色系数
•荧光染料光谱重叠最小化 •采用多激光激发减少重叠
•慎用偶联染料
•自发荧光多的选择用红激光
同型对照抗体选择： •同型对照抗体：与实验染色的单克隆抗体特异性无关的 免疫球蛋白亚型 （Fc段相同，F（ab’）2段不同） •与染色的单克隆抗体：
①相同种属来源
②相同免疫球蛋白及亚型
• Decreased spillover
• Photo-induced conjugate degradation
Thank You
流式抗体的选择及美天旎 Vio系列新型荧光染料
德国美天旎生物技术有限公司
郝高克
一、荧光素的基本概念
•荧光的概念：
•激发光谱：特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的光 •发射光谱：某一波长激发光引起荧光素发射的荧光
•荧光素的使用：选择正确的激光器；探测器（PMT）；
二、荧光信号的补偿
•什么是荧光补偿？纠正荧光素发射光谱重叠 •为什么要进行补偿调节？
荧光染料的选择：
•根据机器的设置
• Vio® Dyes: Brand name - not only for violet laser dyes!
– VioBlue violet laser (405 nm) blue emission – VioGreen violet laser (405 nm) green emission – PE-Vio770 blue or yellow laser (488 or 561 nm) infrared emission – APC-Vio770 red or yellow laser (635 nm or 561 nm) infrared emission