光合细菌的分离、培养及应用
高活性光合细菌的分离纯化培养及水处理应用研究
明： 在 同化 氨 氮 方 面 ， Ｊ ０ ０ １ 号茵效果最佳 ， Ｊ ０ ０ ２号 茵 次之 ； 在 同化 总磷 方 面 ， Ｊ ０ ０ ｌ号 茵 效 果 最佳 ， Ｊ ０ ４ 号 茵 次之 。 ０ 关键词 ： 光合 细 菌 ； 分 离纯 化 ； 脱 氮 除 磷 中 图分 类 号 ： Ｒ１ ２ ３ ． ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ４ — ５ ０ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ０ １ ７ — ０ ０ ０ ３
ｉ ｎ ｓ ｅ ｗ ａ ｇ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｂ ａ ｓ ｅ ，ａ ｎ ｄ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ ｔ ｏ ｓ ｅ ｗ ａ ｇ ｅ ｔ ｅａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｅ ｘ ｐ ｅ ｉ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ．Ｔｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ：Ｎｏ ．Ｊ Ｏ ０１ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｈ ａ ｓ
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光合细菌菌种的分离_富集培养_纯化和菌种鉴定及净化水质的研究
对照不加菌液 - 毫升 ( 升菌液 #" 毫升 ( 升菌液 #- 毫升 ( 升菌液 !" 毫升 ( 升菌液
!* 1* +
球形红假单胞菌净化水质的能力见表 +
表+
加入量
!* #* ! 净化水质的光合细菌菌株的分离与纯化 采 用分离培养基，把生长良好的富集液适当稀释，在厌
形态基本一致， 纯化工作才结束。菌株做鉴定备用。
#) 5) # 光合细菌富集 富集和分离不同类型的光合 细菌所用培养方法不完全相同。 首先， 取 %" : #"" 克生
长光合细菌的土壤， 灭菌后装入玻璃量筒内， 再加入采 集的样品水。 根据欲要分离的不同光合细菌选用上述相同的培 并与土壤搅拌均匀， 然后加流体 养基 #"" : !"" 毫升， 石蜡隔绝空气， 造成厌氧的环境。 在 !% : 5%; 温度下，用 % """ : #" """ 勒克斯的 光照强度进行光照培养 ! : < 周 $ 生活在海水中的菌株 光合细菌在 生长较缓慢， 需要培养 # : 5 个月 & 。这时，
表.
组份
多菌种净化水质效果
%2+ / 毫克 3 升 0 !#, *" #*, "1 #-, -# 氨氮含量 / 毫克 3 升 0 #, #" ", -# ", .1 亚硝酸盐 / 毫克 3 升 0 ", -$ ", 1" ", )(
", #1 毫 克 3 升 ， 至 试 验 !" 天 后 升 至 ", (1 毫克 3 升，而试验池至 !" 天后氨
光合细菌培养及使用方法
光合细菌培养及使用方法光合细菌，是20世纪70年代始用于水产养殖业而近年热用起来的，适用于绿色健康养殖的一大类有益微生物菌群，其绿色功能体现在作用广、效果显著、无残留、无毒副作用等特征，适用于鱼、虾、蟹、观赏鱼等各种水产动物。
现将其功用及特点介绍如下。
一、光合细菌在水产养殖中的功用光合细菌是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称。
光合细菌属红螺菌目，分属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、绿色丝状菌科，共4科23属80余种。
应用较多的为紫色非硫菌。
光合细菌具有多种功能：固氮、脱氮、固碳、硫化物氧化等，与水体中的氮、磷、硫循环密切相关，在水体的自净过程中扮演着重要角色，从不同方面看，光合细菌在水产养殖中具有以下六大功效。
1.水质净化剂。
随着养殖水体日趋严重的污染和富营养化，氨氮、硫化氢等有害物质已严重影响到养殖动物的生长发育，如饲料转化率低、病害多、产量低等等。
光合细菌在水底层缺氧的情况下，能将有害物质吸收，成就自体生长进而形成优势种群并释放出大量的抑菌酵素，可使其他的病原菌生长受阻，从而起到了水质净化剂的作用。
大连水产学院的养虾试验结果表明，使用光合细菌提高单产23.1%。
2.饲料添加剂。
将光合细菌的菌液以3%～5%的量添加到饲料中,可降低饲料系数、增强水产动物机体抗病能力，促进其生长，大幅度提高养殖产量。
试验表明，添加菌液优于添加干燥的菌体。
3.鱼虾苗种培育的保护神。
光合细菌应用于鱼虾蟹贝的育苗中，可促进幼体生长、变态，提高成活率。
光合细菌可通过净化水质来改善幼体的发育环境，也可直接被幼体作为适口饵料而增加营养源。
4.营养丰富的饵料。
光合细菌菌群可直接被鱼虾滤食，更是浮游动物的好饵料，而浮游动物则是虾、第1月 下半月刊蟹、鱼类苗种及鳙鱼等成鱼的直接食料。
5.预防鱼病。
（1）光合细菌通过对有害物质的作用，起到净化水质，减少疾病发生的作用。
（2）通过降解鱼药及污水的有害物质，改善鱼类的生长环境，增强鱼体体质。
第一章光合细菌培养
• • •
第一节光合细菌生物学特征 第二节光合细菌的分离、 第二节光合细菌的分离、培养与保存 第三节光合细菌的应用
概念
• 光合细菌：又称光养细菌，是能进行光合作 光合细菌：又称光养细菌，是能进行光合作
用的一群原核生物。广义的光合细菌包括产 氧光养细菌和不产氧光养细菌。产氧光养细 菌，又叫蓝细菌，也称蓝藻；不产氧光养细 菌，即狭义的光合细菌。包括厌氧光合细菌 和最近发现好氧不产氧光合细菌。
光合细菌培养基）无机物：NaHCO3 无机物： • （2）有机物： CH3COONa 、 CH3CH2COONa 、葡萄糖、 有机物： 葡萄糖、 苹果酸、 苹果酸、CH3CH2OH 2、氮源 （1）无机物: NH4Cl 、 (NH4)2SO4 无机物: （2）有机物:蛋白胨 、氨基酸 、酵母膏 有机物: 3、生长因子： B族维生素和某些氨基酸或核酸 生长因子： 4、微量元素：铜、钾、镁、硫、磷、氯等 微量元素： 5、磷酸缓冲液： KH2PO4 、 K2HPO4 磷酸缓冲液： 6、还原剂：半胱氨酸、Na2S.9H2O 还原剂：半胱氨酸、
1000ml
pH
7.4
3、紫色非硫细菌的富集与分离培养基
• ④R培养基（刘军义，2003）：用于红假单胞菌属 培养基（刘军义，2003）： ）：用于红假单胞菌属
菌的培育。 菌的培育。
• • • • •
CH3CH2COONa NaHCO3 NH4Cl K2HPO4 pH
3.0g 1.0g 1.0g 0.5g
在自然界的碳、氮循环中起着重要的作用。同时，它 在自然界的碳、氮循环中起着重要的作用。同时， 们还能把下层水中残留的有机物经异养分解后产生有 们还能把下层水中残留的有机物经异养分解后产生有 机酸、硫化氢和氨等作为合成菌体的基础物质 作为合成菌体的基础物质， 机酸、硫化氢和氨等作为合成菌体的基础物质，起着 了净化水质的作用， 了净化水质的作用，有利于地球的水循环和水生生物 的生长繁殖。 的生长繁殖。 （二）光合细菌与其他生物的关系 光合细菌富含多种氨基酸和维生素，可用作为各种水 光合细菌富含多种氨基酸和维生素， 生动物的饵料和饲料添加剂， 生动物的饵料和饲料添加剂，构成了生物界食物链的 重要环节。而光合细菌和其他细菌、 重要环节。而光合细菌和其他细菌、浮游生物的共生 关系，使生物界更加和谐。 关系，使生物界更加和谐。
光合细菌的培养及其在畜牧业上的应用
光合细菌的培养及其在畜枚业上的应用摘要光合细菌广泛分布于自然界,在pH值6.5~7.5、光照1000~2000lx、温度10一35C条件T,可以分离出菌种,经进一步扩大培养,即可生产出大圣光合细菌。
光合细菌在畜牡业上用作饲料添加荆,可增加畜禽血清中免疫球蛋白的含童,提高增重和产蛋率;处理皮水,度水有机物去除率可达到国家排放要求.关键词光合细菌，培养，畜牡业应用光合细菌简称PSB,是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源,进行不放氧光合作用的细菌.由于其含有丰富而又较全面的营养成分和具有较强的净化水质的作用,因此光合细菌已经广泛地应用于畜牧业生产中,成为目前很有发展前景的生物饲料添加剂之一1光合细菌的培养1.1菌种光合细菌广泛分布于水田、江河、湖沼、土壤、活性污泥中,菌种可以从采集的池塘底泥中重复富集,分离纯化获得.若利用保存下来的菌种,在培养前必须提纯复壮才能有效地进行扩大培养.1.2培养基光合细菌在生长繁殖过程中需要一定的营养物质,把所需营养物质按一定比例可配成适合于菌体生长的培养基,基本配方为:氯化钱0.1%,碳酸氢钠。
.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾。
.03%、硫酸镁0.01写、酵母膏0.05%、蛋白陈。
.05%、微量元素母液0.1%,加水至100%.L3培养条件1.3.1pH值:光合细菌适宜pH值为6.5~7.5,在培养过程中要定时测定培养液的pH值变化.1.3.2光照:可用25~60W白炽灯作光源,光照强度一般为1000~2ooolx,培养物不能离光源太近.1.3.3温度:光合细菌适宜生长的温度为10一35C,最适温度为25~28C.L4培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法.1·4.1一级培养:采用试管,其生长培养基要先经高压灭菌,然后在无菌条件下,按规程进行接种,接种量为10%~2。
%,接种后在适宜温度与光照条件下进行培养.1.4.2二级培养:采用5000一20000ml玻璃瓶,生湖南畜牧兽医1997年第3期长培养基要经过煮沸消毒.待冷却到25C左右接种,接种量为10%~2。
光合细菌不同属类的分离培养
光合细菌的分离培养光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。
除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。
研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。
关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。
这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。
1光合细菌的富集培养的一般方法①分离源光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。
作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。
在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。
在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。
采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。
将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。
②光合细菌富集培养基用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。
前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。
基本培养基I：KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2gNaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋性菌种，可加入3%NaCl等等。
光合细菌的分离培养与应用初探
光合细菌的分离培养与应用初探‘摘要光合细菌在无一氛条件下能分解利用氛、亚峭酸、硫化氮等有害物质,使养疽水休净化,同时能降低水质底质的生化耗氛号,从而间接提高溶解氧;光合细菌还可以门于欲虾经贝及禽言的养痊,对农作物与人体保健的应用亦有广阔的开发前景。
关健词光合细菌,分离,培养,应用.光合细菌(P三B)是一种f贻以光作为能源,以C02或有机物作为碳源而进行生长繁殖的微生物.它能利用氨、亚硝峻和琉化氢等有害物质,故在有机质丰富的水体中可大量繁殖,使污水的BOD下降,在净化水质中起到了独特的作用.PSB菌体又是一种含蛋白质(滩%)、脂肪(8%)、大量胡萝卜索、B族维生素和辅酶Q及活性促生长抗病因子的特殊细菌.PSB的作用已引起水产养殖界和环境保护界的重视.PSB亦可作为鱼虾贝类和禽畜的饵(饲)料,对水稻、蔬菜均有增产作用.我们于1993年2月开始对PSB进行分离培养,并在生产上作应用试验,现将初步结果报道如下.1分离与培养1.1材料的采集分离材料采集于宁德市某豆腐作坊灼排水沟,附着于石头上呈橙黄色或乳白色的沉积物。
1.2分离培养基的配制KZHpo‘0.69KHZpO;0.59(NH‘):50‘1.09Mgso‘0.29NaC10.29Na:S:0:0.19NaAeo.5~1.09pH6.7酵母膏0.19CaC工20.29蒸馏水lo00m18磅蒸压灭菌20分钟1。
3分离方法称取沉积物19,加无菌水5ml充分振荡打散,制成悬浊菌液,然后悬浊菌液与液体培养按1:5比例装入40x18omm的大试管中,在液面上加一层灭菌的液体石蜡形成厌氧,置温度28~30OC,光照强度为800oLox进行厌氧培养,三天后培养液明显呈深红色.尔后,以培养液进行琼脂平扳划线分离、纯化,平扳培养基成份如下NH‘Cl1.09工交。
HPO‘0.59MgCI:0.29NaCI2.09酵母膏0.19琼月旨l主一:·09水”01川劫戈份济解后,以1洲旁压力灭菌20分钟,然后无菌操作,加入(1)经过滤灭菌的收稿「J期:飞394年1月1994夕卜第6游第1户l阮少江光合务U菌的分离培养与应用初探3一!NaHCO35.o/6oml水;(2)沁ml经过滤灭菌的乙醇或戊醇或4%丙氨酸,用过滤灭菌的o.INH。
光合细菌的培养及应用技术
光合细菌的培养及应⽤技术光合细菌的培养及应⽤技术1 引⾔光合细菌（photosynthetic bacteria,简称PSB）是⼀群能在厌氧光照或好氧⿊暗条件下利⽤有机物作供氧体兼碳源，进⾏不放氧光合作⽤的细菌，⼴泛分布于⽔⽥、湖沼、江河、海洋、活性污泥和⼟壤中，依据《伯杰细菌鉴定⼿册》（第九版）可分为6 个类群，27 个属。
不产氧光合作⽤的红螺菌⽬分为紫细菌（purple bacteria）、绿细菌（Greenbacteria）和⽇光杆菌属（Heliobacteria）、红⾊杆菌属（Erybrobacter）。
其中紫细菌中包含有红螺菌科（Rhodolspirillaceae）、着⾊菌科（Chromatiaceae）、外硫红螺菌科（Eceothiorhodospiraceae），包含16属49种。
其中在⽣产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。
PSB 均为⾰兰⽒阴性细菌，⼀般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形，也可随培养条件和⽣长阶段⽽改变，⼤部分单个存在。
PSB的⼀般菌体组成及营养成分见表1[2].表1 光合细菌菌体的组成与⼩球藻等⽐较Tab. 1 Components comparison betweenphotosynthetic bacteria and ChlorellaP S B 含有较⾼的优良蛋⽩质，粗蛋⽩含量为65.45%，含有17 种氨基酸⽽且消化率较⾼；粗脂肪约7%；可溶性糖类约20%；粗纤维约3%[1]；维⽣素B12 含量是酵母的200 倍、⼩球藻的4 倍[2]，⽣物素含量也⽐较丰富；菌体的脂类成份含有⼤量的叶绿素、类胡萝⼘素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中分离出80 种以上的类胡萝⼘素。
叶绿素和类胡萝⼘素对养殖⽣物的健康⽣长，增强对疾病的抵抗⼒有很⼤的益处。
辅酶Q4 是与⽣命活动有重⼤关系的⽣理活性物质，PSB 中的含量特⾼，是酵母的13 倍。