氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活
槲皮素对星形胶质细胞增殖及细胞周期相关蛋白cdc25A的影响
槲皮素对星形胶质细胞增殖及细胞周期相关蛋白cdc25A的影响苑召虎;胡子有;姚芳;张兰兰;颜晓慧;李科;曾勇;吴炳义【期刊名称】《中国神经精神疾病杂志》【年(卷),期】2013(039)001【摘要】目的通过体外星形胶质细胞的划痕模型,观察槲皮素对星形胶质细胞增殖和其细胞周期的影响,并探究可能的信号通路,分析cdc25A的表达变化.方法经划痕处理过的原代培养的新生SD大鼠的星形胶质细胞用槲皮素处理后,将其放入37℃ 5％CO2孵箱中进行培养.分别通过Click-iT Edu test,流式细胞术和Western Blotting检测槲皮素对其增殖、细胞周期的影响及细胞周期相关蛋白cdc25A表达的变化.结果与对照组相比,在第24h时就能明显观察到槲皮素抑制划痕的愈合；槲皮素处理24h后,其增殖细胞百分比从20.92％降低到2.74％,G1期星形胶质细胞百分比从82.04％增加到92.06％,其S和G2期有一个相应的减少；50μmol/L槲皮素处理24h以后细胞周期相关蛋白cdc25A的表达强度下调约50％,具有明显的统计学差异(F=40.579,P＜0.01).结论通过划痕模型的研究发现,槲皮素可以通过抑制星形胶质细胞的增殖来抑制划痕的愈合,并通过降低细胞周期相关蛋白cdc25A的表达将其阻断在G1期.%Objective To study the effects of quercetin on the proliferation and cell cycle of astrocytes and expressionof cdc25A in scratch-injured astrocytes. Methods Scratch injured primary cultured neonatal SD rat astrocytes were incubated with or without quercetin at 37℃ 5%CO2,Click-iT Edu test,Flow cytometry and Western Blotting were used to examine the influence of quercetin on theproliferation,cell cycle and the expression of the cell cycle related proteins-cdc25 A of astrocytes,respectively. Results Compared with control group,quercetin significantly inhibited scratch healing. Within 24 h following quercetin treatment,the proliferation ratio of astrocytes decreased from 20.92% to 2.74%. However,quercetin significantly increased the cells population in the G1 phase from 82.04% to 92.06% and caused a decrease in the S and G2 phase at 24 h following quercetin treatment,. After 24 h,50μmol/L quercetin treatment decreased the expression of cell cycle related protein-cdc25A at about 50% compared with control (F=40.579,P<0.01). Conclusions Quercetin can inhibit the scratch healing in scratched-injured astrocytes via inhibiting astrocytes proliferation and induce cell cycle arrest at G1 phase via decreasingcdc25A expression.【总页数】5页(P6-10)【作者】苑召虎;胡子有;姚芳;张兰兰;颜晓慧;李科;曾勇;吴炳义【作者单位】南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515;南方医科大学南方医院临床医学实验研究中心,广州510515【正文语种】中文【中图分类】R651【相关文献】1.高血压相关基因hrg-1对血管平滑肌细胞周期蛋白E和P27蛋白表达及细胞增殖的影响 [J], 姜广建;温进坤;韩梅;潘磊;黄秀英2.槲皮素对结肠癌细胞SW480增殖、细胞周期和cyclin B1蛋白表达的影响 [J], 李润青;单保恩3.细胞外信号调节激酶的磷酸化水平对星形胶质细胞增殖及其细胞周期的影响 [J], 苑召虎;胡子有;王惠丽;吴炳义4.缺血缺氧对体外培养星形胶质细胞细胞周期和周期相关蛋白的影响 [J], 骆翔;喻志源;冯永东;王伟5.螯合白血病患者骨髓细胞内外钙离子对硫化氢生成影响的实验研究相关检索词免疫组化蛋白表达白血病硫化细胞增殖 cell proliferation bax h2s 骨髓胃癌硫化氢细胞周期 bcl-2 间充质干细胞图像分析单个核细胞电极乳腺癌钙离子leukemia 相关专家李杰张旻李艳平葛楚天相关机构· 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所· 中国科学院上海生命科学研究院· 北京师范大学· 浙江大学动物科学学院· 浙江大学螯合白血病患者骨髓细胞内外钙离子对硫化氢生成影响的实验研究 [J], 孙晓红;于志刚;张雪莉;庄宝祥;张圣明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活
氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活荆丽丽;吴淑华【摘要】目的研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用,为癫痫的治疗提供实验依据.方法分离新生SD大鼠海马,体外培养星形胶质细胞,经纯化鉴定后分为:对照组、戊四氮(PTZ)组、氯喹干预组(25、50和75 mg/L),经相应处理后,分别用MTT法、免疫荧光、Western blot测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及CyclinD1的表达量.结果与对照组比较,PTZ可激活星形胶质细胞的增殖,使GFAP、CyclinD1的表达量增加(P＜0.05);与PTZ组比较,氯喹阻滞了PTZ激活的星形胶质细胞的增殖(P＜0.05);氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞异常增加的GFAP的表达;氯喹可抑制PTZ激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量(P＜0.05);与对照组相比,3种结果均显示75 mg/L氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强,并可维持其在正常范围.结论氯喹具有抑制PTZ激活体外培养星形胶质细胞的作用,其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用.%Objective To investigate the effects of Chliroquine on Pentylenetetrazole(PTZ)- activated hippocampal astrocytes of rats. Methods eonatal rat (24h) hippocampal astrocytes were obtained and divided into control group, PTZ-activated group and Chliroquine groups with Chliroquine treatment at 25, 50, 75 mg/L. The cell proliferation , expression of glial fibrillary acidic protein ( GFAP) and CyclinDl after the treatments were detected with MTT assay, immunofluorescence cytochemistry and western blot respectively. Results N Results In comparison with control group, PTZ could induce the activation of astrocytes and increase the expressions of GFAP and CyclinDl (P<0. 05) , Incomparison with PTZ-activation group, Chliroquine treatment resulted in significant inhibition of the cell proliferation, GFAP and CyclinDl in the PTZ-activated astrocytes ( P < 0. 05 ). Chliroquine at 75 mg/L showed the strongest inhibitory effects against astrocyte activation while maintained nearly normal level of astrocyte activation in comparison with the control group. Conclusions Chliroquine could inhibit PTZ-induced activation of astrocytes, suggesting that chliroquine may function as potential medicine for epilepsy.【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2011(031)010【总页数】5页(P1110-1114)【关键词】星形胶质细胞;癫痫;戊四氮;氯喹【作者】荆丽丽;吴淑华【作者单位】滨州医学院病理学教研室,山东烟台264003;滨州医学院病理学教研室,山东烟台264003【正文语种】中文【中图分类】R36癫痫的发病与胶质细胞有关，尤其是星形胶质细胞（astrocyte，Ast）在癫痫的发生中具有重要的作用，表现为细胞数目增多，体积增大、其特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表达明显增加［1－3］。
氯喹在肿瘤中的应用研究进展
氯喹在肿瘤中的应用研究进展史婷婷;肖洪涛【摘要】氯喹是传统的抗疟疾药物,近年来,发现其是一种具有抗肿瘤活性的药物.氯喹的抗肿瘤作用机制涉及凋亡、自噬、肿瘤干细胞的清除、血管正常化以及免疫反应.通过这些机制,氯喹在肿瘤治疗中发挥重要作用,可增强放疗与化疗的效果,但同时也存在一些不良反应.更重要的是,氯喹的剂量与其抗肿瘤活性息息相关.本文旨在对近年来氯喹在抗肿瘤方面的现状与进展作一综述.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2016(000)005【总页数】4页(P24-27)【关键词】氯喹;抗肿瘤活性;剂量【作者】史婷婷;肖洪涛【作者单位】电子科技大学医学院,四川成都610072;电子科技大学附属医院·四川省人民医院药学部,四川成都610072;电子科技大学医学院,四川成都610072;电子科技大学附属医院·四川省人民医院药学部,四川成都610072【正文语种】中文【中图分类】R453氯喹是一个经典的抗疟疾药物，近年来又被用来治疗自身免疫性疾病。
研究发现，氯喹具有抗肿瘤活性，对肿瘤有多种作用机制，如诱导肿瘤细胞凋亡，抑制自噬，抑制肿瘤干细胞生长，血管正常化以及对免疫反应的影响，并且这些机制与氯喹的使用剂量相关，氯喹与化疗药物的合用也引起人们关注。
因此本文拟对氯喹的抗肿瘤机制以及剂量选择进行综述分析，以期为氯喹的抗肿瘤活性研究提供分析思路。
1.1 诱导凋亡在体外实验中，氯喹可诱导许多株系的肿瘤细胞凋亡[1-4]。
特别是氯喹介导的线粒体凋亡，有重要作用[4]。
通过使用抑制剂和沉默细胞，发现氯喹诱导的溶酶体膜的透化作用可导致溶酶体酶(包括组织蛋白酶)释放进入细胞质，溶酶体酶激活Bax，随后导致线粒体膜透化和细胞色素C释放，从而激发凋亡复合体的生成[4]。
近年研究发现，在人类肾癌Caki细胞中，通过上调DR5，氯喹引起的溶酶体酶抑制作用可以增强TRAIL介导凋亡的敏感性[5]。
自噬参与肿瘤上皮间质转化的研究进展
·158·自噬参与肿瘤上皮间质转化的研究进展盛柏祥 浙江大学医学院附属第四医院 浙江义乌 322000摘 要：自噬和上皮-间质转化（(epithelial-mesenchymal…transition，EMT）均参与癌症的发生发展，自噬可使肿瘤细胞更适应周围环境，EMT使肿瘤细胞失去上皮细胞的表现并获得间充质细胞细胞特征，因此具有更强的入侵和迁移能力。
这与其对EMT的作用密切相关。
但是，不同环境下不同肿瘤细胞诱导的自噬对EMT的影响不同，本文就自噬在肿瘤EMT中的研究进展阐述如下。
关键词：自噬 肿瘤 上皮间质转化 分子机制自噬分为大自噬，小自噬和伴侣介导的自噬（CMA）三种。
在正常情况下，自噬通过消除衰老损坏的细胞成分来保护细胞和组织，这对于静止的终末分化细胞特别重要。
饥饿条件中，其将分解衰老的细胞成分，提供营养，从而维持存活。
自噬缺陷可能肝炎，神经退行性疾病相关。
肿瘤细胞大多处于资源相对缺乏的环境中，其对于调节肿瘤细胞代谢非常重要。
自噬与肿瘤的发生和发展密切相关，但是究竟是保护作用还是驱动作用仍存在很大争议。
一般认为，在肿瘤发展的早期，自噬具有抑癌作用。
在已经形成的肿瘤中，肿瘤发生的EMT与肿瘤侵袭、转移关系密切，有研究认为肿瘤的EMT与肿瘤自噬相关。
1自噬的分类根据底物的降解途径不同，自噬可分为大自噬、小自噬、分子伴侣介导自噬。
其中大自噬研究更多。
自噬体的形成是巨噬细胞的显着特征，在应激因素的刺激下，内质形成纯净的双层膜，其延伸到外周。
这个过程是前体的形成。
自噬前体封装降解的底物（可溶性蛋白，细胞器等），此过程是自噬体的形成。
最后，自噬体与溶酶体结合形成自噬体，然后降低溶解底物以提供细胞存活所需的物质；小自噬薄膜包裹基材的直接变形是其独特之处在于小自噬可分为非选择性小自噬，选择性小自噬和内体小自噬。
自噬可由细胞内或环境压力刺激，包括营养缺乏，缺氧、和受损的细胞器等，通常，完整的大自噬过程分为以下几个阶段：诱导，囊泡成核、囊泡伸长、对接以及融合、降解和回收利用。
抑制自噬晚期阶段增强榭皮素诱导的胶质瘤细胞凋亡
抑制自噬晚期阶段增强榭皮素诱导的胶质瘤细胞凋亡高丹丹;曹军;徐远志;冯尽意;徐继;周莉;刘定胜;楼美清;毕云科【摘要】目的研究抑制自噬不同阶段对榭皮素作用于胶质瘤细胞的影响,并对其机制进行初步探讨.方法通过3-甲基腺嘌呤(3-MA)及转染Beclin 1 shRNA质粒抑制自噬早期阶段,通过氯喹(CQ)抑制自噬晚期阶段.噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞活性.通过透射电镜及Western Blot检测自噬水平.通过流式细胞技术及Western Blot 检测细胞凋亡.结果榭皮素可以诱导胶质瘤细胞凋亡及自噬的发生.抑制自噬的早期阶段会减弱榭皮素对胶质瘤细胞的毒性作用,抑制自噬的晚期阶段可以增强榭皮素诱导的胶质瘤细胞凋亡.结论氯喹与榭皮素联合用药具有协同作用,可能对胶质瘤的治疗提供新的思路.%Objective The cytotoxicity of Quercetin (Quer) to glioma when inhibiting autophagy at different stages was explored and the preliminary mechanism was discussed.Methods 3-methyladenine (3-MA) and Beclin 1 shRNA were used to inhibit the early stage of autophagy.Chloroquine (CQ) was used to block the late stage of autophagy.Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide assay (MTF) was adopted to assess the cell viability induced by Quer when autophagy was inhibited at different stages.Transmission electron microscopy and Western Blot were used to detect autophagy level.Flow-cytometry and Western Blot were used to measure cell apoptosis.Results Cell viability was inhibited and autophagy was induced by Quer in a dose-dependent manner.Inhibition of autophagy at an early stage attenuated Quer-induced cytotoxicity.In contrast,blockade of autophagy flux at late stage by CQ enhanced the cytotoxicity of Quer,and caused accumulation of degradativeautophagic vacuoles and robust apoptosis.Conclusion CQ and Quer have a synergistic effect,which may provide a novel opportunity for glioma therapy.【期刊名称】《中华神经外科疾病研究杂志》【年(卷),期】2018(017)001【总页数】5页(P13-17)【关键词】胶质瘤;凋亡;自噬;榭皮素【作者】高丹丹;曹军;徐远志;冯尽意;徐继;周莉;刘定胜;楼美清;毕云科【作者单位】上海市浦东新区周浦医院肿瘤血液科,上海201318;日照市人民医院神经外科,山东日照276826;上海交通大学附属第一人民医院神经外科,上海200080;上海市浦东新区周浦医院肿瘤血液科,上海201318;上海市浦东新区周浦医院肿瘤血液科,上海201318;上海市浦东新区周浦医院肿瘤血液科,上海201318;上海市浦东新区周浦医院肿瘤血液科,上海201318;上海交通大学附属第一人民医院神经外科,上海200080;上海交通大学附属第一人民医院神经外科,上海200080【正文语种】中文【中图分类】R739.4胶质瘤是成人中最常见、恶性程度最高的原发性颅内肿瘤[1]，多年来一直是广大神经外科医师的研究热点。
原花青素抑制脂多糖激活神经小胶质细胞的机制
原花青素抑制脂多糖激活神经小胶质细胞的机制张妍;张小强;梁晓瑜;王旭;刘静【摘要】目的:研究原花青素抑制脂多糖(LPS)激活神经小胶质细胞的机制.方法:采用1.0 μg/mL LPS刺激神经小胶质细胞建立体外炎症模型,再用不同浓度(0.1、0.5、2.5、10.0μg/mL)原花青素进行干预,四甲基噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度原花青素对神经小胶质细胞的毒性,ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,Western blot法检测TLR4、p38、p-p38蛋白的表达.结果:与对照组比较,1.0 μg/mL LPS组TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P＜0.05),TLR4和p-p38蛋白表达亦显著增加(P＜0.05);给予不同浓度原花青素干预后,与1.0μg/mL LPS组比较,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6分泌水平均下降(P均＜0.05),TLR4和p-p38蛋白表达水平均显著下调(P均＜0.05).结论:原花青素可能通过TLR4/p38 MAPK信号通路抑制脂多糖激活神经小胶质细胞.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2018(030)002【总页数】5页(P98-102)【关键词】原花青素;脂多糖;小胶质细胞;TLR4;p38 MAPK【作者】张妍;张小强;梁晓瑜;王旭;刘静【作者单位】东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京210009【正文语种】中文【中图分类】R994.6原花青素(proanthocyanidin，PC)是一类黄烷醇单体及其聚合体形成的多酚类化合物，广泛存在于水果、蔬菜、树皮中。
溶酶体抑制剂氯喹增加非小细胞肺癌细胞对硼替佐米的敏感性
氯喹抑制LPS和CpG DNA诱导人外周血单个核细胞释放促炎细胞因子的研究
氯喹抑制LPS和CpG DNA诱导人外周血单个核细胞释放促炎细胞因子的研究丁国富;王良喜;周红;刘玮【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2004(044)011【摘要】目的观察氯喹对脂多糖(LPS)和CpG DNA诱导人外周血单个核细胞释放促炎细胞因子的抑制作用.方法采用密度梯度离心法从新鲜人外周血中分离单个核细胞(hPBMC).先用LPS和CpG DNA刺激hPBMC分泌TNF-α、IL-6,再加入不同浓度氯喹进行拮抗,观察其量效关系;在不同时相点加入氯喹观察时效关系;用ELISA法检测培养上清中促炎细胞因子的含量.采用甲基四唑蓝(MTT)法检测氯喹对细胞活性的影响.结果氯喹在50μg/ml时显著抑制LPS和CpG DNA刺激hPBMC 释放TNF-α和IL-6(P＜0.01).若先给氯喹,则其拮抗细胞因子释放的作用非常显著(P＜0.01),提前给予LPS或CpG DNA,再给氯喹时也可观察到显著拮抗作用(P＜0.05).氯喹浓度小于100μg/ml时对细胞活性无显著影响(P＞0.05).结论氯喹对LPS和CpG DNA诱导人外周血hPBMC释放促炎细胞因子的抑制作用呈明显的剂量和时间依赖关系.【总页数】3页(P9-11)【作者】丁国富;王良喜;周红;刘玮【作者单位】第三军医大学药理教研室,重庆,400038;第三军医大学药理教研室,重庆,400038;第三军医大学药理教研室,重庆,400038;第三军医大学药理教研室,重庆,400038【正文语种】中文【中图分类】R967【相关文献】1.聚L精氨酸协同CpG-ODN增强和延长免疫应答并防止CpG-ODN诱导的促炎细胞因子的释放 [J], LingnauK;王剑虹;江丽君2.硫喷妥钠对CpG DNA诱导人外周血单个核细胞NF-κB表达和TNF-α、IL-6释放的影响 [J], 胡春林;罗远国;李洪;曾军;王沐;张旭;王东3.内毒素刺激诱导人外周血细胞促炎细胞因子的释放 [J], 董宁;祝筱梅;张庆红;于燕;张虹;姚咏明4.氯喹抑制EC DNA、内毒素协同诱导的IL-6释放 [J], 周红;罗平;郑江;鲁永玲5.DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达 [J], 朱桂军;李淑瑾;胡振杰;于占彪;张玉想;张勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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2011年10月第31卷第10期基础医学与临床Basic ＆Clinical Medicine October 2011Vol．31No．10收稿日期：2010－08－23修回日期：2011－03－07基金项目：山东省教育厅科技计划资助项目（JO8LG14）*通信作者（corresponding author ）：wsh6108@126．com文章编号：1001-6325（2011）10-1110-05研究论文氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活荆丽丽，吴淑华*（滨州医学院病理学教研室，山东烟台264003）摘要：目的研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用，为癫痫的治疗提供实验依据。
方法分离新生SD 大鼠海马，体外培养星形胶质细胞，经纯化鉴定后分为：对照组、戊四氮（PTZ ）组、氯喹干预组（25、50和75mg /L ），经相应处理后，分别用MTT 法、免疫荧光、Western blot 测定星形胶质细胞数量及活性、星形胶质纤维酸性蛋白（GFAP ）及CyclinD1的表达量。
结果与对照组比较，PTZ 可激活星形胶质细胞的增殖，使GFAP 、CyclinD1的表达量增加（P ＜0.05）；与PTZ 组比较，氯喹阻滞了PTZ 激活的星形胶质细胞的增殖（P ＜0.05）；氯喹可抑制PTZ 激活星形胶质细胞异常增加的GFAP 的表达；氯喹可抑制PTZ 激活星形胶质细胞的CyclinD1的表达量（P ＜0.05）；与对照组相比，3种结果均显示75mg /L 氯喹对体外培养星形胶质细胞激活的抑制作用较强，并可维持其在正常范围。
结论氯喹具有抑制PTZ 激活体外培养星形胶质细胞的作用，其可能通过抑制星形胶质细胞的增殖来发挥抗癫痫作用。
关键词：星形胶质细胞；癫痫；戊四氮；氯喹中图分类号：R 36文献标志码：AChloroquine inhibits the activation of astrocyte in vitroJING Li-li ，WU Shu-hua *（Dept．of Pathology ，Binzhou Medical College ，Yantai 264003，china ）Abstract ：Objective To investigate the effects of Chliroquine on Pentylenetetrazole （PTZ ）-activated hippocampalastrocytes of rats．Methodseonatal rat （24h ）hippocampal astrocytes were obtained and divided into controlgroup ，PTZ-activated group and Chliroquine groups with Chliroquine treatment at 25，50，75mg /L．The cell pro-liferation ，expression of glial fibrillary acidic protein （GFAP ）and CyclinD1after the treatments were detected with MTT assay ，immunofluorescence cytochemistry and western blot respectively．ResultsN Results In comparisonwith control group ，PTZ could induce the activation of astrocytes and increase the expressions of GFAP and Cy-clinD1（P ＜0.05），In comparison with PTZ-activation group ，Chliroquine treatment resulted in significant inhibi-tion of the cell proliferation ，GFAP and CyclinD1in the PTZ-activated astrocytes （P ＜0.05）．Chliroquine at 75mg /L showed the strongest inhibitory effects against astrocyte activation while maintained nearly normal level of astrocyte activation in comparison with the control group．Conclusions Chliroquine could inhibit PTZ-induced acti-vation of astrocytes ，suggesting that chliroquine may function as potential medicine for epilepsy．Key words ：astrocyte ；epilepsy ；pentylenetetrazole ；chliroquine荆丽丽氯喹抑制体外培养星形胶质细胞的激活癫痫的发病与胶质细胞有关，尤其是星形胶质细胞（astrocyte，Ast）在癫痫的发生中具有重要的作用，表现为细胞数目增多，体积增大、其特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表达明显增加［1－3］。
激活的胶质细胞可导致神经元的长期机能障碍，从而促使癫痫的发作。
氯喹为一种传统的抗疟疾药。
前期的研究证实［3－5］，氯喹可抑制戊四氮（pentylenetetrazole，PTZ）诱导的大鼠痫样发作，但是目前尚无从细胞水平研究来揭示氯喹的抗癫痫机制。
本实验通过研究氯喹对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用来探讨氯喹可能的抗癫痫机制。
1材料与方法1.1材料1.1.1动物：清洁级24h SD大鼠20只，体质量2 5g，雌雄不限。
［山东烟台绿叶制药有限公司，合格证号：SCXK（鲁）20030008］。
1.1.2试剂：氯喹、戊四氮和hoechest33342（Sigma 公司）；噻唑蓝（MTT）和二甲基亚砜（DMSO）（Am-resco公司）；兔抗-GFAP和兔抗-CyclinD1（Santa Cruz公司）；FITC标记的羊抗兔IgG（H+L）、HRP 标记的羊抗兔IgG（H+L）和羊血清（北京中杉公司）。
1.2方法1.2.1Ast的体外培养与鉴定：断颈处死乳鼠后浸泡于75%乙醇5min消毒。
分离海马，体式显微镜下剥离被膜，剪碎、离心，按106/cm2接种于25cm2细胞培养瓶，于37ħ，5%CO2培养箱中进行培养，待细胞长满瓶底90%左右进行传代，获得的Ast进一步经免疫荧光鉴定，鉴定后分组培养，相应处理［6］。
1.2.2氯喹对PTZ激活体外培养大鼠海马Ast活性的影响：运用MTT比色法检测各组Ast的活细胞数量。
将传代细胞按8ˑ104个/cm2的密度接种于96孔板，每孔100μL。
含10%胎牛血清培养基培养24h后，用5%胎牛血清培养基配制药物干预组：a 为正常组，b为PTZ激活组（10mmol/L），c为PTZ +氯喹低剂量组（10mmol/L和25mg/L），d为PTZ +氯喹中剂量组（10mmol/L和50mg/L），e为PTZ +氯喹高剂量组（10mmol/L和75mg/L）。
每组6个复孔，每孔加入100μL含药培养基继续培养24h 后，弃培养基，D-Hanks洗2遍，加入含MTT20μL 的培养基，37ħ孵育4h，吸净上清液，加入DMSO 150μL，于电动摇床摇动10min左右，待结晶物充分溶解后，于酶标仪上测A值，测定波长492nm，以A 值反映各组Ast活细胞的数量。
1.2.3氯喹对体外培养PTZ激活大鼠海马Ast GFAP表达的影响：运用免疫荧光法检测各组Ast GFAP的表达。
传代细胞进行爬片，37ħ，5%CO2培养箱孵育24h，用5%胎牛血清培养基配制药物，分组。
作用24h后，弃培养基，多聚甲醛固定4h，0.2%曲拉通破膜15min，羊血清37ħ封闭30min，兔抗-GFAP4ħ孵育过夜，FITC标记的羊抗兔IgG （H+L）37ħ孵育30min，hoechest33342染核10min （避光）。
以上各步骤之间用0.01mol/L PBS充分洗涤。
甘油封片，荧光倒置显微镜观察照相。
于病理图像分析系统分析吸光度值，以积分吸光度值（IA）反映各组细胞的情况。
1.2.4氯喹对体外培养PTZ激活大鼠海马AstCy-clinD1表达的影响：运用Western blot法检测各组AstCyclinD1的表达量。
将传代细胞以5ˑ105个/cm2的密度种植于24孔板中，含10%胎牛血清培养基培养24h后，用5%胎牛血清培养基配制药物，分组。
作用24h后，弃去含药培养基，以预冷PBS清洗，加入细胞裂解液（含PMSF）于冰上裂解，30min后将裂解液吸出装入EP管，以4ħ、12000r/min离心5min，将上清吸出，分装于EP管内，－20ħ保存。
用BCA法绘制标准蛋白曲线，求出各样品蛋白浓度，确定含20μg蛋白的上样体积。
将变性后的样品上样，并加入预染Marker，确定所需蛋白CyclinD1及内参β-actin的条带位置。
电泳（浓缩胶80V，分离胶110V），电泳完毕后根据预染Marker提示的位置将2条蛋白带分别切下，湿转转印槽转膜（100V，70min），37ħ封闭2h，然后分别加入兔抗CyclinD1及β-actin4ħ孵育过夜，二抗37ħ孵育1h，ECL曝光，分别分析吸光度值。
以CyclinD1及β-actin吸光度值之比来比较CyclinD1蛋白表达量。
1.3统计学分析计量数据以均数ʃ标准差（x—ʃs）表示，应用SPSS13.0统计软件进行处理，多组计量资料组间差异比较采用单因素方差分析，组间比较用LSD法。
1111基础医学与临床Basic ＆Clinical Medicine2011.31（10）2结果2.1Ast 的培养及鉴定原代培养的大鼠海马Ast ，倒置显微镜下可见细胞生长较好，贴壁良好，胞突明显，细胞向外伸出长短不一的突起，胞质丰富，其中可见清晰的卵圆形细胞核。
原代培养的细胞经免疫荧光鉴定，GFAP 免疫反应阳性率达90%以上（图1）。
图1GFAP 免疫荧光染色激光共聚焦图片Fig 1GFAP immunofluorescence staining cell pictureby confocal microscope （bar =10μm ）2.2氯喹对PTZ 激活体外培养大鼠海马Ast 活性的影响PTZ 可以显著激活体外培养的Ast ，氯喹对PTZ激活的细胞活性具有显著的抑制作用，以75mg /L 浓度的氯喹抑制效果最好（表1）。