药物毒理学-动物实验基本知识与技术
补：毒理学动物实验基础PPT课件
重复性原则
实验应进行多次重复，以提高结果的稳定性 和可靠性。
实验设计的步骤和方法
确定研究目的
明确实验的目标和研 究问题，为后续实验 设计提供指导。
选择实验动物
根据研究目的和实验 需求选择合适的动物 种类、品系、年龄、 性别和数量。
设计实验分组
根据实验需求将实验 动物随机分为实验组 和对照组，确保两组 动物具有可比性。
实验动物福利和伦理审查
实验动物福利
关注实验动物的福利，提供适宜的生活环境和护理，尽可能减轻动 物的痛苦和不安。
伦理审查
进行实验动物伦理审查，确保实验方案符合伦理原则，审查实验的 必要性、替代方法、动物数量、痛苦程度等方面。
记录与报告
对实验过程进行详细记录，包括实验动物的基本信息、实验操作、药 物使用、动物反应等，并对实验结果进行客观、准确、及时的报告。
补毒理学动物实验基础
目 录
• 毒理学动物实验概述 • 实验动物的选择和管理 • 毒理学动物实验的设计与实施 • 毒理学动物实验的安全与防护 • 毒理学动物实验的评估和报告 • 毒理学动物实验的伦理和法规
01 毒理学动物实验概述
毒理学动物实验的定义
毒理学动物实验是指通过使用动物作为实验对象，研究外来物质对动物和人类的 毒性作用、作用机制和剂量-反应关系的实验方法。
应急处理
实验室应制定应急处理预案，确保实验人员在遇 到突发情况时能够迅速、正确地应对。
05 毒理学动物实验的评估和 报告
实验结果的评估和分析
数据分析
对实验数据进行统计分析，包括 描述性统计和推断性统计，以评 估实验结果的有效性和可靠性。
实验结果解读
根据实验结果，解读其对毒理学 研究的意义和潜在影响，以及其 对人类健康的潜在影响。
药物毒理学实验实验动物一般操作技术
二、实验内容
实验动物的健康状况的判定 实验动物的抓取、固定 实验动物的性别鉴定 实验动物的称重 实验动物的编号 生理指标的测定 生物材料的采集 血红蛋白的测定
实验动物的健康状况的判定
1)发育正常、体态丰满、外观无畸形； 2)被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 3)胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 4)眼睛明亮； 5)表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 6)各天然孔干净、无分泌物； 7)行动灵活、反应敏捷。
实验动物的抓取、固定
1. 小鼠抓取和固定
固定方法 手固定法
固定时注意，过Leabharlann 用力会使 小鼠颈椎脱臼，若用力过轻头部 能反转过来咬伤实验者的手。这 种固定方法是灌胃给药和腹腔注 射给药常用的方法。
（此方法一定要在动物安静的状态下测定，不是精确的测量方法。）
生物材料的采集
血液的采集：心脏采血、断头采血、腹主动脉采血、 眼眶静脉从采血、尾静脉采血、剪尾采血（示教）
尿液的采集：通常使用代谢笼（示教）
血红蛋白的测定
用剪尾采血的方法来测血红蛋白含量。 先吸0.38ml0.1N的HCL，加入试管，用上述采血的方法 取20μl血液，快速打入装有盐酸的试管中，弹指法混匀， 10分钟后倒入比色管中比色，要用水冲洗试管， 向比色管 中加蒸馏水，直至颜色与标准色板颜色一致时，读数g/L， （读蓝色侧数值），最后将管冲洗干净。
2. 大鼠抓取固定方法 抓取
固定方法
实验动物的性别鉴定
大、小鼠 主要依肛门与生殖孔间的距离区分， 间距大者为雄性，小者为雌性。
实验动物的称重
现在称重通常使用电子称，将动物放在篮子 或饭盒中，先进行去皮调零后再将动物放入 篮子中记录体重。
动物实验的基本操作技术实验报告
动物实验的基本操作技术实验报告实验报告一、实验目的1.学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术2.掌握健康小鼠的外观检查方法、性别鉴定、捉拿和固定方法、小鼠灌胃给药与小鼠腹腔注射给药等技术3.掌握小鼠颈椎脱臼法处死方法、小鼠脏器系数的概念及其测定方法、病理学意义4.熟悉小鼠的标记、小鼠解剖步骤及正常脏器观察5.了解实验动物的被毛去除方法、实验动物粪、尿的收集、小鼠血液样本采集方法二、实验材料和器材1.动物：小鼠2.器材：鼠笼、天平、注射器、灌胃针、止血钳、手术剪、平皿、托盘、烧杯若干。
三、实验方法1.对小鼠进行观察观察的指标主要包括：小鼠的体型、发育情况；毛发是否清洁浓密有光泽，是否顺贴不蓬乱；行动是否迅速，反应是否灵敏；眼睛是否明亮有神，瞳孔是否清晰等圆；天然孔道是否干净、有无分泌物。
2.小鼠的捉拿右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。
此时迅速用左手拇指和食指捏任小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。
3.小鼠性别鉴定主要观察肛门与生殖器之间的距离。
雄性大鼠的距离较大，雌性的距离较小，且成年雄鼠尾部可见睾丸，成年雌鼠可见乳头。
4.小鼠称重打开电子天平，待读数显示稳定后，将平皿置于天平上，去皮；将小鼠置于平皿中，待读数显示稳定后，读数得25.95g。
5.小鼠灌胃1）准备灌胃针头，将注射器针头拔下，更换为灌胃针头；根据小鼠的体重，按0.1ml/10g 灌胃量计算：V=25.950*0.1/10=0.26ml用注射器取0.26ml液体（自来水）；2）按“三-2-1）”的方法抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线；3）灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有一个刺空感，进入食道后即可推注药液，然后原方向将灌胃针抽出。
6. 腹腔注射1）吸取液体（自来水），将针头向上，吸取一段气体后，再缓慢排除气体，以达到取出气泡的效果。
药物毒理学动物实验基本知识与技术
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1.对照性原则
对照组： 在实验过程中不施加处理因素(实验因素)的组别。 目的： 1.消除或减少非实验因素的影响。 2.监控实验条件。 方式： 自体对照、组间对照。 类型： 阴性对照、阳性对照、溶剂对照
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PartⅡ .动物试验的基本操作技术
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一、动物实验的目的、要求、局限性
实验动物(Laboratory animals)是专门培育供实验用的动物，主 要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医 疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、 育成的动物。
豚鼠
新西兰家兔
ICR小鼠
Wistar 大鼠
Beagle犬
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使痛苦与不适感减少到最低限度
避免不必要的使用动物
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动物实验替代法的3R原则
1959年英国动物学家William和微生物学家Rex在《人性动 物实验技术原则》一书中提出：“正确的科学实验设计应 考虑到动物的权益，尽可能减少动物用量，优化完善实验 程序或使用其他手段和材料替代动物实验的3R原则”。
毒理学实验
七、毒理学实验（一）、急性毒性试验的定义、目的和意义急性毒性试验，又称单次给药急性毒性实验，是指在24h内一次或多次给予动物受试物后，所产生的毒性反应。
（二）、基本内容和技术要求1、实验动物可根据不同情况选用不同的实验动物，例如大鼠、小鼠、犬。
本实验随机选用健康成年的12只大鼠和12只小鼠，要求雌雄分别对半，动物初始体重不超过或低于平均体重的20%。
2、给药途径由于本品为浓缩丸，因此选用口服进行实验。
给药前将实验动物禁食24h。
3、给药剂量将大鼠和小鼠分别两只一组，分大鼠6组，小鼠6组。
然后编号。
分剂量0g/kg，1g/kg，2g/kg，3g/kg，4g/kg，5g/kg对小鼠和大鼠进行灌胃口服，20ml/kg。
然后观察小鼠反应。
一般认为口服5g/kg时未见急性毒性或死亡，可不必提高剂量进行实验。
4、观察时间及指标给药后几小时内应严密观察动物反应，之后每天上下午各观察一次，至少连续观察14d。
5、在口服给药24h后，如果没有实验动物死亡，则每组各选一只动物进行病理组织学检查；如果有动物死亡，则将死亡动物和未死亡的动物小组中选一只动物进行病理学检查。
6、实验动物临床表现与器官系统的关系急性毒性试验一般指征观察参考表（三）、长期毒性实验实验要求和内容1、实验药品要求选用符合相关制剂要求的同一批药品。
2、实验动物选用正常、健康、雌雄各半和动物体重应在平均体重的20%之内的成年各20只大鼠和小鼠。
将每种动物平均分四组，分别为高、中、低、和对照组。
3、实验动物饲养按照动物室正常标准进行饲养。
4、药物剂量根据相应动物急性毒性的最大无症状剂量（MTD）、1/3MTD、1/10MTD 分别设高中低三个剂量。
对照组为空白对照。
5、给药方法将药物加入到饲料中，依据确定的量进行。
6、给药时间给药6个月。
7、观察指标（1）一般指标实验动物的体重，和解剖后相关脏器的重量。
每周固定时间测1次大鼠体重及摄食量，试验期间详细观察大鼠一般状况，包括外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便等，必要时应测定大鼠饮水量。
动物实验的基本操作技术实验报告
实验报告一、实验目的1.学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术2.掌握健康小鼠的外观检查方法、性别鉴定、捉拿和固定方法、小鼠灌胃给药与小鼠腹腔注射给药等技术3.掌握小鼠颈椎脱臼法处死方法、小鼠脏器系数的概念及其测定方法、病理学意义4.熟悉小鼠的标记、小鼠解剖步骤及正常脏器观察5.了解实验动物的被毛去除方法、实验动物粪、尿的收集、小鼠血液样本采集方法二、实验材料和器材1.动物：小鼠2.器材：鼠笼、天平、注射器、灌胃针、止血钳、手术剪、平皿、托盘、烧杯若干。
三、实验方法1.对小鼠进行观察观察的指标主要包括：小鼠的体型、发育情况；毛发是否清洁浓密有光泽，是否顺贴不蓬乱；行动是否迅速，反应是否灵敏；眼睛是否明亮有神，瞳孔是否清晰等圆；天然孔道是否干净、有无分泌物。
2.小鼠的捉拿右手提起鼠尾，放在鼠笼盖或其他粗糙面上，向后方轻拉，小白鼠则将前肢固定于粗糙面上。
此时迅速用左手拇指和食指捏任小白鼠颈背部皮肤，并以小指与手掌尺侧夹持其尾根部，固定于手中。
3.小鼠性别鉴定主要观察肛门与生殖器之间的距离。
雄性大鼠的距离较大，雌性的距离较小，且成年雄鼠尾部可见睾丸，成年雌鼠可见乳头。
4.小鼠称重打开电子天平，待读数显示稳定后，将平皿置于天平上，去皮；将小鼠置于平皿中，待读数显示稳定后，读数得25.95g。
5.小鼠灌胃1）准备灌胃针头，将注射器针头拔下，更换为灌胃针头；根据小鼠的体重，按0.1ml/10g 灌胃量计算：V=25.950*0.1/10=0.26ml用注射器取0.26ml液体（自来水）；2）按“三-2-1）”的方法抓住小鼠，使其头、颈和身体呈一直线；3）灌胃针头从小鼠的嘴角进入，压住舌头，抵住上颚，轻轻向内推进，进入食管后会有一个刺空感，进入食道后即可推注药液，然后原方向将灌胃针抽出。
6. 腹腔注射1）吸取液体（自来水），将针头向上，吸取一段气体后，再缓慢排除气体，以达到取出气泡的效果。
2）按“三-2-1）”的方法捉拿小鼠，并使小鼠腹腔向上；3）事先吸取好液体的注射器针尖平面朝上，平行扎入皮内后，注射器与腹腔呈45度角刺入腹腔，感觉针尖部分可以移动，将注射针向后抽出一点，注射样品。
动物实验基础知识系列
动物实验基础知识系列之一：剂量换算关于剂量换算的问题最近不少战友询问关于不同实验动物之间或者实验动物与人之间的剂量如何作“等效”换算的问题。
这个问题对学习药理的战友来讲，可能是非常熟悉了。
但对于非药理专业但又需做药理实验的战友来说，仍然是令人困扰的问题。
下面我们分以下几点来探讨这个问题。
第一、等效剂量系数折算法换算第二、体表面积法换算第三、系数折算法与体表面积法的比较第四、系数折算法的相对误差第五、小孩与成人的剂量换算第六、少常用实验动物剂量间的换算第七、不同给药途径间的剂量换算第八、LD50与药效学剂量间的换算下面我来简单说一下这个问题。
我们在实验中估算一种药物或化合物的使用剂量的时候，差不多是来源于两条途径：一是查文献，参考别人使用的剂量。
有时有现成的，可直接用。
有时没有我们所用动物的剂量，但有其它实验动物的。
也有的是有临床用量的，但没有实验动物的。
这样，我们就得进行换算。
这是我们今天要谈的这种方法。
另一种方法就是根据自己或文献上有关急性毒性的数据来进行估算，以期采用合适的剂量。
一般参考数据是LD50。
至于该选择LD50的多少分之一来作为参考剂量，众说纷纭。
这个我们再另题讨论。
下面我来说一说用第一种方法进行如何换算。
目前我们大多数人用的方法，是参考徐叔云教授主编的《药理实验方法学》。
在其附录中有一个表，列出了人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值。
这个表，几乎被药理专业的人们奉为经典，一直在科研中沿用。
表如下所示：请注意最后一行，这个就是我们通常用到的。
把人的临床剂量转换为实验动物的剂量。
试着换算一个。
如：人的临床剂量为X mg/kg ,换算成大鼠的剂量：大鼠的剂量＝X mg/kg×70kg×0.018/200g＝X mg/kg×70kg×0.018/0.2kg＝6.3 X mg/kg. 这也就是说，按单位体重的剂量来算，大鼠的等效剂量相当于人的6.3倍。
药物毒理学实验动物
生殖毒性实验主要研究药物对雌雄性生殖器官、生殖细胞、受精、胚胎发育、妊娠、分娩和哺乳期等方面的毒性作用。该实验有助于了解药物对生殖过程的影响，为药物的安全性评价提供依据。
详细描述
生殖毒性实验
发育毒性实验是评估药物对胎儿和新生儿发育的毒性作用。
发育毒性实验主要研究药物对妊娠期和哺乳期动物及其子代的发育毒性作用，包括对胎儿和新生儿的生长、发育和行为等方面的影响。该实验有助于了解药物对胎儿和新生儿发育的影响，为药物的安全性评价提供依据。
VS
慢性毒性实验是评估药物长期给药对实验动物的毒性作用。
详细描述
慢性毒性实验通常在较长时间内（如几个月到一年或更长）观察药物对实验动物的长期毒性作用，包括致癌性、致畸性、致突变性等方面的研究。该实验旨在评估药物长期使用或接触后的潜在危害，为药物的安全性评价提供重要依据。
总结词
慢性毒性实验
生殖毒性实验是评估药物对实验动物生殖功能的毒性作用。
操作规程
遵循实验操作规程，正确使用仪器设备和化学试剂，避免意外事故发生。
个人防护服
穿着符合要求的实验服，保护实验人员免受化学物质和微生物的侵害。
要点一
要点二
护目镜、口罩和手套
佩戴合适的护目镜、口罩和手套，防止化学物质和生物污染物的侵入。
个人防护措施与装备
废弃物分类
将实验废弃物进行分类，分别处理，避免对环境和人体造成危害。
详细描述
急性毒性实验
总结词
亚急性毒性实验是评估药物在较长时间内对实验动物的毒性作用。
详细描述
亚急性毒性实验通常在较长时间内（如几周到几个月）观察药物对实验动物的多方面毒性作用，包括生长、发育、生理生化指标、组织病理学变化等。该实验有助于更全面地了解药物的毒性作用，为药物的安全性评价提供依据。
药理学动物实验基本方法资料共46页文档
15、机会是不守纪律的。——雨果
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
药理学动物实验基本方法资料
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
42、只有在人群中间，才能认识自 己则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
药理学动物实验的基本知识和技术
药理学动物实验的基本知识和技术作者：李铁铮来源：《科技资讯》2016年第23期摘要：在药理学动物实验中，要根据实验目的和要求选用不同实验动物。
学生要严格掌握青蛙、蟾蜍、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、狗等实验动物的捉持方法，严格掌握各类实验动物的不同给药方法，保证自身安全，获得相应实验结果。
在此过程中，可以训练学生客观地观察、比较、分析、综合和解决实际问题的能力，培养学生严谨的科学态度、严密的工作方法和实事求是的作风，达到实验目的。
摘要：药理学；动物实验；基本知识；基本技术中图分类号：G420 文献标识码：A 文章编号1672-3791（2016）08（b）-0000-00实验是药理学教学的一个重要组成部分。
通过动物实验不仅可以验证理论知识，而且可以训练学生客观地观察、比较、分析、综合和解决实际问题的能力，培养学生严谨的科学态度、严密的工作方法和实事求是的工作作风。
1实验动物的选择和用途1.1实验动物的选择青蛙、蟾蜍、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、狗等为药理实验常用动物。
动物对药物反应具有种属差异性，应根据实验目的和要求选用不同的实验动物。
实验动物可分为4个级别，药理教学实验可选用一级普通动物，科研实验必须用二级以上实验动物，分别为二级清洁动物、三级无特定病原体的动物和四级无菌动物。
1.2实验动物的用途在离体情况下，青蛙和蟾蜍心脏节律性搏动保持时间较长，可观察药物对心脏的作用，药物对周围神经、横纹肌或神经肌肉接头作用的观察可选用坐骨神经腓肠肌标本。
小鼠易大量繁殖，是最常用实验动物，适用于需要大量动物的实验。
大鼠用途与小鼠基本相同，主要用于一些用小鼠不便进行的实验。
大鼠对炎症反应较为灵敏，其踝关节炎模型常用于观察药物的抗炎作用。
豚鼠对组胺特别敏感，是筛选平喘药和抗组胺药最理想的动物。
家兔性情温顺易饲养，常用于观察药物对心脏、血压、呼吸的影响。
狗易于通过驯养与人合作，适于慢性实验。
2实验动物的捉持方法2.1青蛙和蟾蜍用左手的食指和中指夹住左前肢，大拇指压住右前肢，下肢用右手拉直并在无名指和小指之间予以固定。
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动物实验的基本知识与操作技术
（Basic knowledge and technology for animal test）
王安
5/21/2019 8:57 AM
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1.动物实验的基本目的
评价化学物的生物学效应； 阐明可能的机制和影响因素； 补充人体资料的不足。
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【目的要求】
掌握动物实验的目的、要求与局限性，以及3R 原则； 了解动物实验设计的基本原则与方法； 熟悉动物实验常用的动物选择、动物的编号和 随机分组、染毒方法等技术； 熟悉常用生物材料的采集。
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使痛苦与不适感减少到最低限度
避免不必要的使用动物
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动物实验替代法的3R原则
1959年英国动物学家William和微生物学家Rex在《人性动 物实验技术原则》一书中提出：“正确的科学实验设计应 考虑到动物的权益，尽可能减少动物用量，优化完善实验 程序或使用其他手段和材料替代动物实验的3R原则”。
一、动物实验的目的、要求、局限性
实验动物(Laboratory animals)是专门培育供实验用的动物，主 要指作为医学、药学、生物学、兽医学等的科研、教学、医 疗、鉴定、诊断、生物制品制造等需要为目的而驯养、繁殖、 育成的动物。
豚鼠
新西兰家兔
ICR小鼠
Wistar 大鼠
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史上，作出了大量牺牲。
18世纪哲学家Jeremy指出：问题不在于它们能否思考，
也不是它们能否说话，而是它们痛苦不痛苦。
19世纪兴起动物保护主义，成立了动物保护组织，并且
通过立法来保障动物福利。《禁止虐待动物法》、《科学 动物实验法》、《动物福利法》、《实验动物管理条例》 等。
给予实验动物人道主义的管理与处理
2.动物实验的基本要求
健康(雌性曾交配与未孕)，均一性 要求阐明剂量-效应关系，有高剂量接触组 尽可能反映人类实际的接触途径
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3 .动物实验的局限性
种属外推的不确定性 高剂量向低剂量外推的不确定性 样本量到大样本外推的不确定性 无法观察主观指标
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二、 动物实验的职业道德-3R原则
实验动物在人类认识生命、预防与治疗疾病的医学发展
【主要内容】
Ⅰ.动物实验的基本知识
1.动物实验的目的、要求与局限性 2.动物实验的职业道德-3R原则 3.动物实验设计的基本原则与方法
Ⅱ.动物实验的操作技术
1.健康动物的选择，动物的抓取与固定 2.动物的性别与日龄鉴定 3.动物的标记与编号 4.给药途径(口、呼吸道) 5.生物材料的收集(血液、尿液) 6.动物的处死及生物材料的采集
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三、动物实验设计的原则与方法
(一)动物实验设计的基本原则 对照(Control) 重复(Repeat) 随机(Random)
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3R原则使全世界的生物化学、药理学、毒理学和生物医学界对 替代方法的发展、验证更加关注，因为替代方法的研究不单纯 是动物权益保护问题也是科学本身发展的问题，对于建立一个 合理的实验设计，使科研更人性化，科学技术更先进化具有重 要意义。
目前通过正式验证的替代方法有： 急性毒性实验：如上、下法、固定剂量法； 皮肤腐蚀性：大鼠皮肤经皮电阻实验和人重组皮肤模型实验； 皮肤变态反应：小鼠局部淋巴结试验； 皮肤光毒性：3T3中性红摄取光毒实验，猪皮经皮吸收实验， 诱变和光诱变性实验； 胚胎毒性：全胚胎培养、微团实验和胚胎干细胞实验等。
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Part Ⅰ.动物实验的基本知识
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1.减少(Reduction)： 减少是在满足实验要求，又不损失应得 信息的前提下，尽可能减少实验动物的数量；ห้องสมุดไป่ตู้
2.优化(Refinement)：优化是在动物实验时，尽可能选择和改 良实验操作技术，减轻动物可能遭受的痛苦；
3.替代(Replacement)：替代是不通过与动物相关的实验或过 程去获取所需的信息。