金属卡宾 Petasis试剂
卡尔费休试剂处理方法
卡尔费休试剂处理方法卡尔费休试剂（Carrez试剂）是一种常用于沉淀蛋白质的化学试剂。
它由铁氰化钾（K4Fe（CN）6）和锌醋酸（CH3COOZn）组成，分别称为卡尔费休I试剂和卡尔费休II试剂。
卡尔费休试剂的处理方法主要用于去除溶液中的杂质和沉淀蛋白质，使得待测物质的浓度更加准确可靠。
我们来了解一下卡尔费休试剂的成分及其作用原理。
卡尔费休I试剂主要由铁氰化钾组成，其作用是与溶液中的金属离子（如Cu2+、Fe3+等）反应生成一种可沉淀的金属铁氰化物沉淀物。
卡尔费休II 试剂则由锌醋酸组成，其作用是与溶液中的蛋白质反应生成一种可沉淀的蛋白质沉淀物。
通过这两种试剂的配合使用，可以有效地去除溶液中的杂质和沉淀蛋白质。
接下来，我们将详细介绍卡尔费休试剂的处理方法。
首先，需要准备好卡尔费休I试剂和卡尔费休II试剂。
根据待测溶液的体积，按照一定的比例将两种试剂加入到溶液中。
一般情况下，卡尔费休I 试剂和卡尔费休II试剂的比例为1:1，即将等体积的两种试剂加入到待测溶液中。
加入试剂后，需要进行充分的搅拌混合，以保证试剂与溶液中的目标物质充分反应。
搅拌的时间可以根据具体实验要求来确定，一般情况下，数分钟的搅拌时间即可。
随后，待测溶液中的杂质和沉淀蛋白质将会与卡尔费休试剂反应生成沉淀物。
为了方便沉淀物的分离，可以通过离心的方式将沉淀物沉淀下来。
离心的参数可以根据实验要求来确定，一般情况下，离心速度为3000-5000 rpm，离心时间为5-10分钟。
经过离心后，可以观察到溶液中的沉淀物已经沉淀到离心管的底部。
此时，可以将上清液倒掉，只保留底部的沉淀物。
为了去除沉淀物中的残余试剂和杂质，可以使用适量的去离子水或缓冲液进行洗涤。
洗涤的次数可以根据具体实验要求来确定，一般情况下，3次洗涤即可。
将洗涤后的沉淀物溶解或重悬到适量的溶剂中，即可获得纯净的待测物质溶液。
这样处理后的溶液中将不再含有杂质和沉淀蛋白质，可以用于后续的实验操作。
有机合成中碳链上增加一个碳原子的方法
有机合成中碳链上增加⼀个碳原⼦的⽅法⼀、以甲醛或甲醛等价物为底物进⾏反应增加碳链1、羟醛缩合反应（Aldol condensation）醛酮在碱性条件下得到烯醇盐和另⼀个羰基化合物缩合得到β-羟基醛酮的反应。
当利⽤甲醛作为底物时则底物增加⼀个碳。
Evans羟醛缩合反应，Abiko-Masamune羟醛缩合反应，Mukaiyama羟醛缩合反应2、Arens-van Dorp反应烷氧基⼄炔在强碱条件下对醛酮加成得到烷氧基炔甲醇的反应。
3、Stobbe condensation丁⼆酸⼆⼄酯及其衍⽣物和羰基化合物在碱性条件下进⾏缩合的反应。
4、Knoevenagel缩合反应羰基化合物和活泼亚甲基化合物在胺催化下缩合的反应。
5、Stetter反应醛和α,β-不饱和酮在噻唑盐的催化下反应制备1,4-⼆羰基化合物的反应。
噻唑盐是氰离⼦的安全替代试剂。
此反应也被称为 Michael-Stetter反应，机理和安息⾹缩合类似。
此反应直接利⽤甲醛作为底物的报道较少，但是有⽂献报道利⽤糖作为甲醛替代物进⾏反应可以得到多⼀个碳的1,4-⼆羰基化合物。
【J. Am. Chem. Soc. 2013, 135, 8113–8116】6、Barbier反应在有机⾦属试剂存在下，羰基化合物可以迅速与其反应，这类反应被称为Barbier反应。
7、Grignard反应（格⽒反应）格⽒反应有多多种⽅式增加碳链，可以考虑以甲醛为底物和格⽒试剂进⾏反应增加⼀个碳链得到醇，也可以以⼆氧化碳为底物进⾏加成得到羧酸，或者直接利⽤甲基格⽒试剂对其他亲电试剂进⾏延长碳链。
8、Kagan-Molander偶联反应9、贝蒂反应(Betti Reaction)酚与芳⾹醛和伯胺作⽤得到 α-氨基苯甲酚类。
这个反应可以视为苯酚的Mannich反应。
10、Mannich反应1903年，B. Tollens和von Marle发现苯⼄酮和甲醛，氯化铵反应可以⽣成三级胺。
碱性蛋白酶(Alkaline protease, AKP)活性测定试剂盒说明书
货号：MS2302 规格：100管/48样碱性蛋白酶（Alkaline protease, AKP）活性测定试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。
此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
测定原理：在碱性条件下，AKP水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在680nm有特征吸收峰，测定680nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。
自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5mL EP管和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 5mL 蒸馏水溶解。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
临用前加入 5mL 试剂一，沸水浴中磁力搅拌溶解。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加 20mL 蒸馏水溶解。
试剂五：液体×1 瓶，4℃保存。
标准品：液体×1 支，0.25μmol/mL 标准酪氨酸溶液，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即粗酶液。
2. 血清或培养液：直接测定。
3. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到680nm，蒸馏水调零。
金属卡宾、卡拜
§6.1 金属卡宾（Metal Carbenes） §6.1.1 卡宾的制备与性质
1、亲电性卡宾(electrophilic metal carbene)
“Fischer型”卡宾
OC
CO
Ph
OC
Cr
C
OMe
OC
CO
1
M = VI- VIII族元素
金属原子或离子一般为 VI 到 VIII 族间的元素，金属处于低价态，通常被电子 受体类配体如 CO 稳定化。在这类络合物中 sp2 碳中心与其配体之间的距离比相应的 单键短，因此可能存在着三个共振结构
143
OHO
H3C
NR'
Rh R
144
O O
NR' R β - lactam
145
HO
Rh
N
O
Rh
SO2[C6H4(4-t-Bu)] 4
Rh2(S-TBSP)4
146
HO
Rh
N
O
Rh
SO2[C6H4(4-C12H25)]
4
Rh2(S-DOSP)4
147
R1 R2
R1 R2
Rh2(S-DOSP)4
N2
46
O
CO
C MLn
O +
MLn
47
C
+
MLn
LnM
CC
R. E.
CM
48
β - elimination C C
C MLnH
49
CC CM
50
MLn C CC
51
LnM poly(acetylene) 52
6.1.2 卡宾的复分解反应
北大中级有机化学讲义-第二版-3
4013PPh 3 Cl PCy 3 Cl ClRu PhPPh 3PhRu ClPCy Ph2829Grubbs 催化剂 1992年第一代Grubbs 催化剂 1995年NNCl RuH Cl PhPCy 3 N NCl RuH Cl PhPCy 3 3031第二代Grubbs 催化剂 1999年该反应是在Grubbs II 催化剂作用下反应的，若改用Grubbs I 催化剂，其产率和转化率均下降。
H4021. 20 mol %, Grubbs II, CH 2Cl 2 (0.7 mM), reflux, 84%PhGrubbs IIN MesRu PCy 3Mes N ClCl解答1415OTBDPSOTBDPSOTBDPSOTBDPSNONOO1.NOONO CH CH 2 CH CH 2403提示❖ 用乙酸脱硅保护基。
❖ 利用Dess - Martin 试剂氧化醇为醛。
问题 112. Dess - Martin periodinane, CH 2Cl 2, 0o C to rt, 70%3. t -BuOK, MePPh 3Br, THF/toluene,rtOTBDPSOTBDPS1516NO1. MeOH, AcCl, rtONOTBDPS较为稳定，可用氟离子(如Bu4N+F-等)在四氢呋喃溶液中脱去，也可用含水乙酸在室温下脱去。
在这部反应过程中，通过向反应中滴加甲醇与乙酰氯混合液，以及滴加HCl溶液，使反应物脱硅保护基。
Dess-Martin（DMP）试剂是在1983年首次报道，与其它高价碘化合物相比，DMP具有较好的溶解性，它可以C12等有机溶剂中选择性地把一级醇或二级醇分别氧在CH2化为醛或酮类化合物，而底物分子中的其它敏感基团不受影响。
OO OAcI OAcOAcDMP404R R RDess-Matin 氧化反应机理如下所示：AcO OAcI OAc OO H O OOOAc OOIHI AcO O OAcR 1 H 2OAcAcO O AcO -HR 1 H2AcO R 1 H2-HOAcO O ONO 2HOAcI OAcR 1R 2ONCHOOHC405O406ON16解答O NO1. MeOH, AcCl, rtON162. Dess - Martin periodinane, CH 2Cl 2, 0o C to rt, 70%3. t -BuOK, MePPh 3Br, THF/toluene,rtOTBDPS15OTBDPSO N O提示❖ ❖ ❖ GrubbsⅠ的结构式是什么？在关环复分解反应中形成了一个十五元环。
第3章 分子骨架的形成(2)——碳-碳不饱和键的形成
75%; > 97% Z
Mulzer J., et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1979, 52
3.2 由缩合反应合成烯烃
Alkene Synthesis by Elemination
3.2.1 Wittig反应及其相关反应 (Wittig and related reactions)
Anti elimination
Anti elimination
Example 1:
CH3 CH CH CH2 H Br H
KOC2H5 / CH3CH2OH 70 C
O
Example 2:
N(CH3)3 CH3 H
'
CH3 CH3
CH3
H OH
反式共平面消除
3.1.2 羧酸酯的热解反应 ( Chugave reaction )
苯砜形成的α-碳负离子与醛、酮反应合成烯烃的方 法，称为Julia烯烃合成法。
反应过程( Reaction Process ):
反应特点( Reaction characteristic point ):
立体选择性地得到反式烯烃。
Example :
Julia, M. et al., Tetrahedron Lett., 1973, 4833
合成上的应用：
合成烯烃，尤其是甲烯化合物。
合成羰基化合物和α,β -不饱和羧酸及其衍生物。
3.3 由还原反应合成烯烃
Alkene Synthesis by Reduction
3.3.1 Tebbe反应
——有关稳定化钛试剂的亚甲基化反应 (The Tebbe Reaction
免疫细胞化学常用试剂
免疫细胞化学常用试剂一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。
但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。
某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。
因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。
另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4·2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。
第7章-过渡金属卡宾和卡拜配合物
( C O 143pm )
(
O 127pm）
θ C卡 O CH3 121°
图7-1 Fischer铬卡宾配合物结构数据
Singlet
Triplet
C
X
Y
X,Y=O,N,S,Cl
X CY X,Y=H,R
• 图7-2 卡宾碳的结构
• 表 7-1 过渡金属卡宾配合物的类型
类型 典型例子
Fischer卡宾 OR＇
OMe
D
BuLi
O
CHR DCl
CHR R'CR2
(CO)5Cr C
(CO)5Cr C
OMe
OMe
BrCH2CO2R'
OH
(CO)5Cr
R' R2
CH R
C OMe
CH2CO2R'
CH R (CO)5Cr C
OMe
R'
R
R2
C
(CO)5Cr C OMe
3.亲电试剂与卡宾碳上杂原子反应
4.其他配体的置换反应
X Cr C R
OC
CO
Cr C
Cr
C(CO)
θ Cr C R
169pm 195pm ~180o
图7-10铬卡拜结构数据
• 7.6.1过渡金属卡拜的制法 1.从Fischer卡宾配合物
(CO)5M
OR1 R2 + BX3
(CO)5M
OR1BX3 -X2BOR1 R2
+
+X
(CO)5M
C H
R2
-CO
n
产率:100%
4.闭环交互置换反应(RCM)
+ CH2=CH2 + CH2=CH2
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
醛、酮、羧酸衍生物→ 烯
Petasis试剂(Cp2TiMe2)，氯化二茂钛(Cp2TiCl2)以及甲基锂(MeLi)或是甲基格式试剂(MeMgX)反应可制备的亚甲基化反应试剂。
它和Tebbe试剂一样，也能用于酯的亚甲基化。
和Tebbe试剂相比，它具有稳定性和重复性等优点，不含有路易斯酸性强的铝，更加温和的发生反应。
亚甲基化需要稍微加热(60℃左右)。
∙基本文献
・Petasis, N. A.; Bzowej, E. I. J. Am. Chem. Soc.1990, 112, 6392. doi:10.1021/ja00173a035・Payack, J. F.; Hughes, D. L.; Cai, D.; Cottrell, I. F.; Verhoeven, T. R. Org. Synth.2002, 7, 19. [website]
∙反应机理
生成的Schrock卡宾活性中间体和它的反应过程和Tebbe试剂一样。
将活性中间体加热到60℃得到产物。
∙反应实例
Gelsemine全合成[1]
通过TiCl4-RCHX2-Zn-TMEDA[2]的反应体系(Lombardo-Takai反应)，取代烯烃的合成(烷基烯
基化)也能够实现。
反应是Z-选择性进行。
实验步骤
Petasis试剂的制备方法[3]。