包埋技术
包埋的技术流程
包埋的技术流程
包埋是组织学研究中常用的技术手段，其主要目的是将组织标本固定在特定位置，方便切片和染色，以便于观察细胞结构、形态和组织结构等。
下面是包埋的技术流程。
1. 预处理组织标本。
将新鲜组织标本收集后，首先要用理化方法杀死组织中的细胞，并使细胞内部的结构保持在最佳状态。
目前常用的方法包括福尔马林固定、石蜡包埋等。
2. 嵌入组织标本。
将固定好的组织标本用其他化学和物理方法处理后，将其放置在一段预先制备好的塑料模具内，注入熔化的石蜡等物质，待其凝固后，即可形成包埋块。
3. 切制包埋切片。
使用组织切片机将包埋块切成薄片，通常厚度在4-6微米之间。
切片要求均匀，不得有气泡、碎屑等影响观察的因素。
4. 上色染色处理。
将切制好的薄片放置在染色盒内，加入相应的染色剂，待其染色后，可用显微镜观察其表观结构和组织形态等。
5. 封片和存储处理。
在包埋切片上涂上特定胶粘剂，放置于载玻片上，并覆盖一层玻璃片，待固化后，即可封存和存储。
以上是包埋技术的主要流程及注意事项，实践中还需要根据具体情况进行相应的调整和优化。
乳酸菌包埋技术原理
乳酸菌包埋技术原理
乳酸菌包埋技术是指将乳酸菌埋入载体或保护剂中，以增强其存活能力和稳定性的一种技术。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 载体选择：乳酸菌常用的载体有淀粉、辣根、果胶、海藻酸钠等，这些载体可以提供适宜的环境和营养物质供给乳酸菌生长和繁殖。
2. 保护剂选择：包埋过程中添加的保护剂可以保护乳酸菌免受外界环境的影响，如酸碱、温度、氧气等。
常用的保护剂有蔗糖、蛋白质、多糖等。
3. 包埋操作：将乳酸菌与适当的载体或保护剂混合，形成包埋物后，采用合适的方法将其固定在合适的容器中。
常见的方法有凝胶包埋、微胶囊包埋等。
4. 存活能力测试：包埋后的乳酸菌需要进行存活能力测试，常用的测试方法有菌落数计数、形态形状观察、活性代谢检测等。
只有通过测试表明乳酸菌在包埋过程中没有受到太多损失，才能确保其在后续应用中的效果。
乳酸菌包埋技术可以增强乳酸菌的存活率和稳定性，延长其保质期，同时还能便于携带和应用，因此在乳酸菌制品等领域中得到了广泛的应用。
包埋技术在生物组织切片中的应用
包埋技术在生物组织切片中的应用生物组织切片是研究生物学和医学的重要手段，而包埋技术是生物组织切片中不可或缺的步骤之一。
本文将介绍包埋技术的基本原理和在生物组织切片中的应用。
一、包埋技术的基本原理包埋技术是一种将组织样本固定在蜡块中的方法。
其基本原理是将组织样本经过一系列处理步骤，最终得到可切割的蜡块。
整个过程需要精确控制各个步骤的时间和条件，以保证样本的完整性和可切性。
包埋技术主要包括以下几个步骤：组织固定、脱水、浸透、包埋和切割。
首先，将组织样本固定在一定的处理液中，以避免组织的腐烂或改变。
然后，对样本进行脱水处理，使其从水中吸收到的液体转变为亲脂性的有机液体。
接着，将样本浸透于一系列逐步浓度的蜡液中，使其逐渐被蜡所替代。
最后，将样本放入定型模具中，加入熔化的蜡液中，使其与蜡完全溶合，形成坚硬的固体。
最后，通过显微镜等设备切割成薄片以供研究和观察。
二、包埋技术在生物组织切片中的应用包埋技术广泛应用于生物组织切片中，为生物学和医学研究提供了重要的手段。
下面分别介绍包埋技术在生物组织切片中的应用：1. 组织形态学研究组织形态学是研究组织结构和形态的学科。
通过包埋技术可以将组织样本制成薄片，通过染色等方法观察组织细胞的形态、结构和分布等，从而了解其结构和功能。
比如通过组织切片，可以观察到神经元、心肌细胞、白细胞等的形态和数量，进而了解它们的生理功能和疾病发生的机理。
2. 病理学诊断病理学是病变的形态和功能的研究和诊断学科。
通过包埋技术可以制作组织切片，通过染色和显微观察，可发现疾病的形态学改变和细胞学特征，从而确定病变类型和病变程度。
比如通过组织切片，可以确定肿瘤的类型、分级和预后，指导临床治疗。
3. 遗传学研究包埋技术可以将组织样本制成薄片，通过染色等方法观察细胞的染色体结构和分布，从而了解基因的分布和遗传特征，为遗传学研究提供基础数据。
比如通过组织切片，可以观察到染色体的数目、形态和分布，进而了解基因的遗传规律和疾病的遗传机制。
包埋技术及其在组织学中的应用
包埋技术及其在组织学中的应用包埋技术是现代组织学中的一项关键技术。
它是将组织样本置于蜡块中，使其成为可切割和染色的固体组织块。
这样的技术可以帮助科学家们更好地研究动物和人类的组织结构、形态和生理功能。
包埋的基本步骤包埋技术的基本步骤包括：组织的采集、固定处理、脱水处理、清晰剂处理、浸渍蜡处理、包埋处理和切片染色等。
其中最关键的一步就是包埋处理。
包埋处理是将固定好的组织样本从蜡的浸渍液中穿梭到蜡的渗透层，再被置于蜡的包埋层中。
通过这个过程，组织样本的水被逐渐取代，使组织样本硬化。
最终，组织样本可被切片，并通过染色方法来观察组织结构和细胞形态。
包埋技术不仅有利于组织样本的研究，还广泛应用于组织学、病理学、药理学、生物医学工程等领域。
下面我们就来探讨一下包埋技术在这些领域中的具体应用。
组织学应用包埋技术对生物学和生物医学领域非常重要。
在组织学中，包埋技术可以用来制备生物组织和细胞样本玻片，以研究组织或细胞的结构和形态。
除了可以应用于常规的组织学研究外，包埋技术还可以帮助制备特定的组织标本，用于细胞生长分析、病理学分析和药物开发。
病理学应用包埋技术在病理学中也举足轻重。
它可以让组织医生观察肿瘤细胞的形态结构、血管、淋巴结以及其他重要的成分。
此外，包埋技术还可以制备出肝、肾等器官组织的标本，以用于真菌、细菌和病原体的检测。
药理学应用包埋技术在药理学中的应用也非常广泛。
它可以让药物研究人员进行新的药物开发和治疗研究。
通过包埋技术可以制备出药物试验的标本，以研究药物对细胞和组织的影响。
这种方法可以帮助药物研发人员选择最具有治疗效果的药物，而不必进行大规模人体试验。
生物医学工程应用包埋技术也可以应用于生物医学工程领域。
它可以用于制备生物材料和生物器件，如人造心脏瓣膜、血管替代物和组织工程材料等。
生物医学工程师可以使用包埋技术来制备三维生长和重构的生物材料，以模拟人体内部的结构和组织。
综上所述，包埋技术是现代组织学中非常重要的一项技术。
包埋技术在病理学研究中的应用方法
包埋技术在病理学研究中的应用方法病理学作为医学的重要分支之一，对于疾病的诊断、预防和治疗起着至关重要的作用。
而包埋技术作为病理学研究的一项核心工具，在疾病的研究中发挥着不可或缺的作用。
本文将就包埋技术在病理学研究中的应用方法进行探讨。
首先，我们来了解一下什么是包埋技术。
简单地说，包埋技术是将病理标本嵌入到固化剂中，形成固定的组织块，以方便后续的切片和染色观察。
包埋技术的核心要点在于保持标本的完整性和细胞结构，确保研究者能够从标本上准确地观察到组织的细微细胞结构和形态学特征。
包埋技术的首要步骤是固化。
固化剂选择对于保持标本完整性和细胞结构至关重要。
我们常用的固化剂有福尔马林、乙醛等。
在固化的过程中，我们需要掌握好适当的时间和温度来确保细胞结构的最佳保持。
此外，为了保持样本的正常形态，我们还需要在固化之前进行适当的切片处理，如切片、染色等。
固化完成后，我们就需要将标本嵌入到包埋剂中。
包埋剂是一种特殊的物质，可以使得标本保持坚硬和固定的状态。
一般我们常用的包埋剂是石蜡。
在进行包埋之前，我们需要将标本进行脱水处理，即逐渐用浓度递增的醇溶液浸泡标本，以去除水分，然后再与石蜡进行融合。
包埋完成后，我们就可以进行切片了。
切片过程中需要使用显微切片机，将嵌入的石蜡块切成足够的薄片。
在切片之前，我们需要将石蜡块进行固定，通常使用丙酮和其他溶剂来溶解石蜡。
切片完成后，我们需要将薄片进行染色，以增强细胞和组织的对比度，便于观察和研究。
包埋技术在病理学研究中有着广泛的应用。
首先，它可以用于诊断疾病。
通过对病变组织的包埋、切片和染色，病理学家可以观察到异常细胞的变化，确定疾病的类型和分级。
其次，包埋技术也可以用于研究疾病的发生机制。
通过对标本进行包埋和切片，研究者可以观察到疾病相关的组织学变化，揭示疾病的病理生理学过程。
此外，包埋技术还可以用于药物研发。
通过对药物在病变组织中的作用进行包埋、切片和染色观察，研究者可以评估药物的疗效和毒性，为药物研发提供重要依据。
传统包埋技术与自动化包埋机的比较
传统包埋技术与自动化包埋机的比较包埋技术在医学领域起着重要的作用，它是一种将组织样本固定和保护起来的方法。
随着科技的发展，传统的手工包埋技术被自动化包埋机所取代。
本文将对传统包埋技术和自动化包埋机进行比较，分析它们各自的优缺点以及在医学研究和临床应用中的应用情况。
传统包埋技术是一种人工操作的方法，其过程包括杀菌、固定、脱水、透明化、浸渍和包埋。
首先，组织样本需要被杀菌以避免细菌和其他病原体的污染。
然后，通过固定处理，细胞和组织的结构得以保留。
接下来，通过连续的乙醇浓度递增浸渍，将水分从样本中去除。
随后进行透明化处理，以去除固定剂和乙醇，使样本能够与蜡相容。
最后，将组织样本浸泡在熔化的蜡中，并在冷却固化后进行切片。
然而，传统包埋技术存在一些缺点。
首先，手工操作需要较长时间，且操作者的技术水平会直接影响结果的质量。
此外，该方法需要较多的人力资源，增加了成本和劳动力。
手工操作还存在暴露于有害化学品的风险。
由于人的因素，易出现批次间的差异性，导致样本的可比性下降。
而且，手工操作容易受到环境条件的影响，如温度和湿度等，进一步影响了操作的一致性。
相比之下，自动化包埋机通过机械化的方式实现了包埋的自动化。
在自动化包埋机中，上述的包埋步骤能够通过设定程序自动进行。
自动化包埋机利用计算机控制系统进行操作，不仅能够提供更高的操作效率，同时也能够确保操作的准确性和一致性。
自动化包埋机的主要优点是提高了工作效率和样本质量的稳定性。
自动化包埋机可以持续工作24小时，节约了宝贵的时间和人力资源。
通过固定的程序和参数，操作结果有更高的一致性，保证了样本之间的可比性。
此外，自动化包埋机操作简单，不需要过多的操作员培训，成本较低。
然而，自动化包埋机也存在一些限制。
首先，由于自动化的原因，机器对于细胞和组织的变化不能做出及时的调整。
例如，对于坏死组织或含钙化物的样本，自动化包埋机的处理效果可能不如手工包埋技术。
此外，自动化包埋机的成本较高，需要投入相应的资金和设备。
药物剂型粉末包埋技术研究
药物剂型粉末包埋技术研究随着医药领域的不断发展，药物剂型的研究也日益受到重视。
其中，粉末包埋技术作为一种常用的剂型制备方法，在药物研发和生产过程中发挥着重要的作用。
本文将探讨药物剂型粉末包埋技术的研究进展以及其应用前景。
1. 粉末包埋技术概述药物粉末包埋技术是将药物粉末通过一定的工艺方法制备成具有一定形态和性质的固体颗粒。
这种技术能够有效地改善药物的稳定性、可溶性以及生物利用度等方面的问题。
目前，粉末包埋技术主要应用于以下领域：1.1 药物缓释剂型研究粉末包埋技术可以通过调整药物粉末的包埋比例和配方，来实现药物的缓释控制释放。
通过这种方式，可以有效地改善药物的疗效，并减少不良反应的发生。
1.2 包埋颗粒制剂研究粉末包埋技术还可以用于制备包埋颗粒制剂，这种制剂具有良好的可扩散性和生物可用性，并且便于携带和服用。
因此，在药物制备和临床应用中具有广泛的应用前景。
2. 粉末包埋技术的研究进展随着科学技术的不断进步，粉末包埋技术在药物剂型研究中也取得了许多突破性的进展。
目前，研究人员主要关注以下几个方面：2.1 包埋剂的选择和优化粉末包埋技术的关键之一是选择和优化包埋剂。
包埋剂不仅能够保护药物粉末不受环境影响，还可以调节药物的释放速度和稳定性。
因此，选择合适的包埋剂对于粉末包埋技术的成功应用至关重要。
2.2 包埋工艺的改进粉末包埋技术的包埋工艺也是研究的重点之一。
通过改进和优化包埋工艺，可以提高药物包埋的均匀性和稳定性，提高包埋效率和质量。
因此，研究人员一直在努力寻找更加高效和精确的包埋工艺。
2.3 包埋剂型的多样化除了传统的粉末包埋技术，研究人员还不断探索新的包埋剂型。
比如，纳米粉末包埋、纳米纤维包埋和微胶囊包埋等技术正在逐渐应用于药物剂型的研究和开发中。
这些新型包埋剂型可以进一步提高药物的可溶性和稳定性，拓宽粉末包埋技术的应用范围。
3. 粉末包埋技术的应用前景粉末包埋技术在医药领域具有广阔的应用前景。
病理制片技术――包埋
病理制片技术――包埋一、意义组织块经过固定、脱水、透明、浸蜡等处理后，用包埋剂(如石蜡、树脂、塑料等)将其包制成含组织块的蜡块或塑料块等的过程称为包埋。
不同的包埋方法有不同的要求，经包埋后，组织可达到一定的硬度和韧度，有利于切成理想的薄片。
二、包埋步骤先将熔化的石蜡注入包埋托内(模具)，而后用镊子将经过浸蜡的组织块从脱水盒中取出，放入包埋托中央，放在小冷台上，用镊子轻按组织块，以达到组织块平整，盖上脱水盒底，再加好石蜡，移至冷冻台上，待冷冻好后，卸下组织蜡块待切。
包埋时应根据组织的不同，选择大小型号适合的包埋托；有要求直立包埋的组织要用镊子将组织固定在蜡块中央稍停片刻，以使组织在蜡凝时立住，达到立埋的要求。
三、注意事项1．每次夹取组织块时，镊子用乙醇灯加热至温度适中。
2．包埋托内不要有水、碎蜡等异物，以免影响包埋质量。
3．包埋蜡的温度要控制好，包埋蜡的熔点应为58~60℃。
4．包埋蜡加入少量蜂蜡(蜜蜡)，可以增加韧度，利于切片。
5．夹取组织块放人包埋托内时，一定要注意包埋面。
6．包埋好的蜡块，用刀修整时，一定要适当保留蜡块中组织周边的白蜡边，以利于连续切片。
7．每包埋完一块组织，镊子必须擦干净或用乙醇灯烧。
四、自动包埋机简介自动包埋机是对组织经脱水、浸蜡后进行包埋处理的设备。
有多种类型，其设计具有人性化，一般整机由包埋部分和冷冻部分组合而成(一体化简洁紧凑)，全自动程序控制，具有延时自动开机功能，加热快速，温控准确，安全可靠，包埋效果好等特点，冷台最低温度可达一5℃，可进行快速冷冻处理包埋块，具有大冷台，冷冻面积大，可放置超大包埋盒或多个包埋盒。
包埋部分温度可以从55～70℃，可储存3～5 L石蜡，自动熔解石蜡，可容纳70～100个样品包埋盒。
金属板表面容易清洗，有2个加热的抽屉，可收集多余的石蜡，进行重新利用，避免石蜡浪费。
具有冷却镊子架，方便使用。
可配放大镜利于小活检标本的包埋；可配脚踏：石蜡注入由脚踏开关控制或上手工控制。
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包埋剂embedding agent在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。
所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。
一股用光学显微镜观察的切片，用石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等作包埋剂；电子显微镜则用环氧树脂、聚苯乙烯树脂、异丁烯树脂及水溶性树脂。
石蜡制片法是将材料经固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法。
此法适用范围，制片手段完备，能将材料切成极薄的片子（可切至2-8微米左右），并能制成连续的片子，这是其它制片法难以达到的，因此在光学显微镜的制片技术上它是最常用的一种方法。
除了一些经不住石蜡切片法中所应用的各种药剂处理的材料不能应用石蜡切片以外，一般的材料都可以用此法制片，但有制作时间较长，操作过程复杂以及材料易发硬或发脆等缺点。
该法多采用旋转式切片机进行切片。
石蜡制片操作程序如下：（一）材料的采集与分割采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。
采下的材料应立即放在标本箱或湿布包起来带回实验室进行分割固定（如有条件也可在试验地采集后进行分割固定）。
为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。
分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。
分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。
（二）杀死与固定利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。
常用的固定有F.A.A固定液、卡诺固定液等。
将固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖。
用F.A.A固定液固定，时间至少24小时。
F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。
卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。
因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。
（三）脱水脱水的目的是除去组织中的水分，便于透明、浸蜡、包埋等步骤的进行，因为这些程序中所用的药品都不能与水混合，所以必须脱水。
常用的脱水剂为酒精。
脱水过程应缓慢进行，不能操之过急或时间过长，以免组织变硬变脆或发生收缩现象。
脱水采用等级脱水（系列脱水），即从较低浓度酒精开始，逐渐替换到高浓度酒精。
一般为：50%→70%→80%→95%（此时可加少许番红，使组织着色便于包埋时定位）→无水酒精（两次），每级停留时间2~4小时或更长（无水酒精中时间宜短）。
用95%酒精配制各浓度酒精的方法：设原有酒精浓度为A，所需配制酒精浓度为B，则取Bml原有酒精，加上A-Bml蒸馏水，即可获得Aml的B%的究竟。
例如：95%酒精配成70%的酒精，则取70ml的95%酒精，加上25ml蒸馏水，则配成了95ml的70%的酒精。
（四）透明透明的目的是将脱水剂从材料中除去，使材料透明，增记折光系数；同时便于下步的浸蜡和包埋等程序（因为究竟不能溶解石蜡）。
透明剂是一种既能与脱水剂混合，又能与包埋剂混合的药剂。
常用的透明剂为二甲苯和氯仿，适用原则也是逐级进行，可减少材料收缩。
一般步骤是：2/3纯酒精+1/3二甲苯→1/2纯酒精+1/2二甲苯→1/3纯酒精+2/3二甲苯→二甲苯（两次），每级停留时间0.5~2小时或更长些。
二甲苯穿透能力强，但又宜使材料收缩变脆，使用时不能在其中停留时间过长。
若材料放入二甲苯中时有白色混浊现象发生，说明材料脱水不彻底，应把材料退回至纯酒精中再行脱水。
（五）浸蜡浸蜡的目的是逐渐除去透明剂,并为包埋剂所代替。
常用的包埋剂是石蜡。
浸蜡过程是使石蜡慢慢溶于浸有材料的透明剂中，溶解在透明剂中的石蜡渐渐深入到材料的细胞中去，最后使透明剂完全被石蜡取代，以便切片。
一般所用的石蜡分软蜡（熔点40℃以下）和硬蜡（熔点40℃以上）。
浸蜡过程一般是从低温到高温、从低熔点到高熔点逐渐进行，这一过程不能操之过急，否则浸蜡不彻底影响切片。
此外，软材料可用熔点较低石蜡，较硬的材料可用熔点较高的石蜡；冬季可用熔点较低的石蜡，夏季可用熔点较高的石蜡。
石蜡必须纯净，不含杂质。
整个浸蜡过程需在恒温箱内进行（按需要调整温度）。
材料最后一次二甲苯透明后即可浸蜡，浸蜡过程中逐渐使二甲苯挥发，并不断加入纯石蜡，直至石蜡饱和为止。
浸蜡时间大约1~2天。
（六）包埋（埋蜡、沉床）材料浸蜡后再换两次已熔融的纯蜡，然后将材料和石蜡一起倒入提前叠好的包埋纸盒中，用加热的镊子迅速将材料按一定的间隔和所需的切面摆放整齐，同时用加热的镊子赶走材料周围的气泡，待纸盒表面的石蜡凝固后将纸盒平放入冷水中，使石蜡迅速凝固。
最后从纸盒中取出蜡块，以便保存。
注意将样品编号封于蜡块上，以免样品混淆。
（七）修块将已包埋好的蜡块切成小块，每一小块包含一块材料。
然后按照所需的切面，用单面刀片将小蜡块切成梯形，并可粗视到材料切面。
然后用烧红的蜡铲把蜡块底部牢固的粘接在载蜡器上。
（八）切片用切片机（如旋转切片机）将蜡块切成连续的蜡带。
切片时先把切片刀夹在刀架上，再把载蜡器夹在固定装置上（注意安装切刀的角度，刀口运行方向与材料切面平行），然后调整好所需厚度，一般可在7~14微米，视材料和所需观察对象而定，转动切片机切片。
（九）粘片切下来的切片经过镜检（根据情况也可不检），将符合要求的切片粘在洁净的载玻片上。
粘片时先在载玻片上滴上一小滴粘片剂（可用蛋青和甘油各50ml，加1g 水杨酸混合而成），加几滴蒸馏水，然后用镊子小心把切片放在水上，在35-40℃下，用拨针将切片伸直、展平，倾斜载片，使水流去并烘干。
（十）脱蜡、染色、脱水透明和封片粘片后要经过脱蜡、染色、再次脱水透明，然后封片永久保存。
下面以植物生物学中观察组织结构最常用的番红-固绿染色法说明脱蜡、染色、脱水透明和封片的过程：二甲苯→二甲苯（每次均10~15min.）→1/3纯酒精+2/3二甲苯（1~2min.）→1/2纯酒精+1/2二甲苯（1~2min.）→2/3纯酒精+1/3二甲苯（1~2min.）→纯酒精两次（每次1~2min.）→95%、85%、70%、50%梯度酒精复水（每级1~2min.或更长）→用1%番红配50%酒精染色1小时→50%、70%、85%、95%梯度酒精脱水（每级1~2min.或更长）→用0.1%固绿配95%酒精复染2~5秒→95%酒精脱水1~2分钟→纯酒精两次（每次1~2min.）→2/3纯酒精+1/3二甲苯透明（1~2min.）→1/2纯酒精+1/2二甲苯透明（1~2min.）→1/3纯酒精+2/3二甲苯透明（1~2min.）→二甲苯→二甲苯（每次均10~15min.）→加拿大树胶封片→贴标签镜检及保存。
组织石蜡包埋和切片技术1、切取组织，浸泡在4％用pH7.4 BS配成的甲醛固定剂中，室温24小时。
附：4％甲醛固定剂（5ml）：4.5ml 1×PBS(pH7.4)+0.5ml甲醛2、倒掉甲醛固定剂，加pH7.4 BS,每隔8小时更换一次，4℃保存，换液共3天。
3、打开烘箱，调温至62℃，融石蜡。
4、酒精梯度脱水（30％、50％、70％、80％、90％、95%、100％×2），隔30分钟更换一次。
5、50％酒精＋50％二甲苯30分钟（过渡步骤）。
6、100％二甲苯，时刻观察组织块至透明。
7、放入烘箱中已经预融的50％石蜡＋50％二甲苯中，30分钟。
8、100％石蜡两遍，每次2小时。
(若石蜡浸润不够，仍有二甲苯，则包埋后的石蜡块较脆，易分层、断裂。
) 9、100％石蜡纸盒内凝固（先用蜡打底，再放入组织块，浇上蜡包埋，放入4℃冰箱或水中冷凝，标明组织块放入方向），4℃存放备用。
10、修块。
11、融化石蜡抹于块底，贴在木块上，压实。
12、切片（5－10μm）,将切片平展于平板上，光面朝上。
13、将光面朝下，将石蜡薄切片放于水面上（水温40℃），使其伸展。
（时间勿太长）14、将石蜡薄片贴在预先处理好的玻片上。
15、40℃烘烤过夜。
附：玻片的处理切片前对洗净的载玻片用粘附剂进行处理是防止免疫组化过程中组织掉片的关键：洗净的载玻片于1:50丙酮稀释的APES中浸泡10～30s，取出后再放入纯丙酮中10～20s，涮去未与载玻片结合的APES，取出晾干备用。
一、石蜡切片方法步骤：在每次操作切片刀和标本，或更换标本前一定要锁定手轮，并用护刀罩将刀刃遮住！1. 锁定手轮，应先夹紧标本再装切片刀！2. 将预先休整好的石蜡块装在标本夹上，在使用切片刀和一次性切片刀时，一定要十分小心，其刀刃锋利无比，误操作后会导致严重伤害！3. 转动粗转轮，将标本退到后面的极限位置。
4. 将护刀罩移向刀架中间。
5. 将切片刀插入刀架，夹紧。
6. 调节切削角度。
7. 将基体上的刀架尽可能靠近标本。
8. 调整标本的表面位置，使之与刀刃尽可能平行。
9. 松开手轮。
在切片时，匀速转动手轮！当切较硬标本时，放慢手轮转动速度！10. 转动手轮，可以再次修片。
11. 当修片达到所希望的表面时，停止修片。
12. 选择想要的切片厚度。
13. 顺时针匀速转动手轮，切片。
二、调换标本或停止切片在操作切片刀和标本前，或调换标本和切片刀前，或是在休息时，应锁定手轮，用护刀罩盖住刀片边缘！1. 锁定手轮。
2. 用护刀罩遮盖住刀刃。
3. 从标本夹上取下标本，换块新的。
三、切片结束1. 锁定手轮。
2. 将切片刀从刀架上取出，把它放入刀盒中。
3. 将标本从标本夹上取下。
4. 把切片机上所有的废片清理干净。
5. 最后盖上罩子，填写记录本。