BV-2 小鼠小胶质瘤细胞
BV2小胶质细胞经典激活及替代激活的诱导及鉴定
BV2小胶质细胞经典激活及替代激活的诱导及鉴定发表时间：2016-06-01T16:50:22.310Z 来源：《河南中医》2015年8月作者：吴非1,2 罗涛2 郭远瑾2 黎红华1 梅元武2[导读] 小胶质细胞是中枢神经系统内重要的固有免疫细胞，也是介导免疫反应的主要效应细胞。
吴非1,2 罗涛2 郭远瑾2 黎红华1 梅元武2（1.广州军区武汉总医院神经内科湖北武汉 430070）（2.华中科技大学协和医院神经内科湖北武汉 430022）【摘要】目的：观察BV2小胶质细胞经典激活及替代激活后代谢分子的变化，判断鉴别M1及M2极化型小胶质细胞的方法。
方法：小胶质细胞以100ng/ml的LPS及20ng/mL的IL-4分别经典激活及替代激活24小时，以ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-α的分泌量，以实时荧光定量聚合酶链反应检测iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12的mRNA表达，以流式细胞术检测细胞膜MMr蛋白表达。
结果：小胶质细胞被LPS 经典激活后呈M1型极化，IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、IL-12mRNA表达量明显升高，与生理对照组比较有统计学差异（p<0.05)。
小胶质细胞被IL-4替代激活后呈M2极化， IL-10分泌量、Arg-1mRNA及IL-10mRNA表达量显著升高，流式细胞术检测MMr蛋白荧光强度较生理对照组显著上升（p<0.05)。
结论：小胶质细胞的能够被LPS经典激活呈M1型极化，IL-4替代激活呈M2型极化，M1/M2极化状态的小胶质细胞能够通过检测炎性相关因子、精氨酸代谢分子及细胞膜特异性蛋白三个方面得到鉴别。
【关键词】小胶质细胞；经典激活；替代激活；M1/M2型极化；脂多糖；白介素-4【中图分类号】R741 【文献标识码】B 【文章编号】1003-5028（2015）8-0651-02The Identification of Classical or Alternative Activation on BV2 MicrogliaWu Fei1,2,Luo Tao2,GuoYuan-jing2,Li Hong-Hua1, Mei Yuan-wu2（1 Department of neurology, Wuhan General Hospital of Guangzhou Military 430070）（2.Department of neurology, Wuhan Union Hospital, HuaZhong University of Science and Technology 430022)【Abstract】Objective：To observe the changes in metabolic molecule of BV2 microglia after it is classical or alternative activated, and judge the methods to identify the M1 or M2 -type polarized microglia cells. Methods：BV2 microglia cells were classical activated by LPS in the concentration of 100ng/ml and alternative activated by IL-4 in the concentration of 20ng/mL for 24 hours, then ELISA was used to measure the levels of IL-12, IL-10, TNF-α , and Real-time PCR was used to detect the mRNA expression of iNOS,Arg-1, IL-10 and IL-12. Flow cytometry(FCM) was used to measure the levels of MMr membrane protein . Results：Microglia presented M1-type polarization state after it were classical activated, the secretion of IL-12 and TNF-α, the expression of iNOS mRNA and IL-12mRNA were significantly increased , and the difference were significant compare with that of in normal control group（P<0.05）. Microglia presented M2-type polarization state after it were alternative activated, and the secretion of IL-10, the expression of Arg-1mRNA and IL-10mRNA were significantly increased, and the difference were significant compared with that of in normal control group（P<0.05）. The levels of MMr were also increased significantly measured by Flow cytometry(FCM). Conclusion： BV2 microglia could present M1-type polarization state after it were classical activated, M2-type polarization state after alternative activated. The two type polarization could be identified detected from three aspects including inflammatory factors , arginine metabolic molecular and specific cell membrane proteins. 【Keywords】microglia，classical activation，alternative activation，M1/M2 type polarization， lipopolysaccharide，interleukin-4 小胶质细胞是中枢神经系统内重要的固有免疫细胞，也是介导免疫反应的主要效应细胞[1]。
褪黑素对低氧诱导的BV-2小胶质细胞CD45表达增高的抑制作用
褪黑素对低氧诱导的BV-2小胶质细胞CD45表达增高的抑制作用姚景春;张庆柱;张世玲;程艳娜;纪建波【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2004(18)4【摘要】目的研究褪黑素对低氧激活的小胶质细胞CD45表达的影响，以探讨褪黑素的抗衰老和抗阿尔茨海默病的作用机制。
方法体外培养BV-2小胶质细胞，用终浓度为2.0 mmol·L-1的连二亚硫酸钠作用48 h，造成慢性低氧模型，药物处理组在低氧的同时给予褪黑素。
相差显微镜下观察小胶细质胞形态学变化，流式细胞术测定缺氧状态下BV-2小胶质细胞表面CD45的表达；体外培养BV-2小胶质细胞用终浓度为0.01，0.1，1.0 μmol·L-1的褪黑素作用5 min，加入20mg·L-1的脂多糖37℃孵育12 h，Griess试剂法检测培养上清中NO的含量。
结果连二亚硫酸钠引起的低氧可明显增加BV-2小胶质细胞CD45的表达，荧光强度增至23.9±14.2(对照组为0.80±0.73)，低氧也可使小胶质细胞的形态发生阿米巴样变，而0.01，0.1，1.0 pmol·L-1的褪黑素可剂量依赖性地减少低氧诱导的CD45表达，抑制由低氧引起的小胶质细胞的阿米巴样变。
但褪黑素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞培养液中NO的升高无明显抑制作用。
结论褪黑素抑制小胶质细胞的激活与其抗氧化作用密切相关，可能是其抗炎和防治阿尔茨海默病作用的重要理论基础。
%AIM To study the action of melatonin on the expression of CDA5 in BV-2 microglia and the influence of melatonin on BV-2 microglia activation so as to explore the antiaging and anti-Alzheimer's disease mechanisms of melatonin.METHODS Hypoxia in cultured BV-2 microglia was induced bysodium dithionite 2.0 mmol· L- 1for 48 h.The expression of CD45 on the BV-2 microglia surface was measured by flow cytometry,the morphological changes of BV-2 microglia were photographed with the phase-contrast microscope.BV-2 microglia were exposed to 20 mg· L-1 lipopolysaccharides 5 min after treated with 0.01,0.1,1.0 μmol· L- 1 of melatonin,then incubated for 12 h.NO level in the medium was determined by Griess reagent.RESULTS The fluorescent intensity produced by CD45 expression in BV-2 microglia increased from 0.80 ± 0.73(normal control)to 23.9 ± 14.2(hypoxia model).Melatonin(0.01,0.1,1.0 μmol·L- 1 )significantly inhibited the elevation of CD45 expression in microglia in a concentration dependent manner,the fluorescent intensity is 9.3 ± 3.1,7.0 ± 4.85 and 5.4 ± 1.0,respectively.Melatonin could inhibit the morphologic al change of BV-2 microglia to amebocyte.But melatonin did not antagonize the increase in NO level in the medium induced by lipopolysaccharide.CONCLUSION Melatonin inhibiting the microglia activation by its anti-oxidative action might be an important theoretical basis of anti-inflammation and anti-Alzheimer' s disease effects.【总页数】5页(P259-263)【作者】姚景春;张庆柱;张世玲;程艳娜;纪建波【作者单位】山东大学药学院药理学教研室,山东,济南,250012;山东大学药学院药理学教研室,山东,济南,250012;山东大学药学院药理学教研室,山东,济南,250012;山东大学药学院药理学教研室,山东,济南,250012;山东大学药学院药理学教研室,山东,济南,250012【正文语种】中文【中图分类】R971【相关文献】1.乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小鼠小胶质细胞株caspase-8和caspase-3表达的影响 [J], 李梅;孟庆慧;蔡巧英;赵荣艳2.姜黄素对脂多糖激活的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用 [J], 杨开艳;顾建兰;施建华;沈勤3.姜黄素衍生物对激活的小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶表达的抑制作用 [J], 李云鸿;王银;杨文君;丁娟;牟青春4.美满霉素对脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响 [J], 王岚;沈伟5.青蒿琥酯对缺氧诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用及其可能机制 [J], 张洪喜;吕水清;王敦敬;唐蛟;刘永海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
PDTC抑制吗啡诱导的BV-2小胶质细胞炎症因子合成增多
PDTC抑制吗啡诱导的BV-2小胶质细胞炎症因子合成增多姜辰;韩园;唐娟娟;刘文涛;张广钦【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2014(008)002【摘要】目的利用吗啡刺激小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,研究NF-κB抑制剂PDTC对吗啡诱导的炎症因子表达的作用.方法应用实时定量PCR检测 BV-2细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达.结果吗啡处理BV-2细胞,可以导致IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA水平显著升高,而PDTC可显著抑制吗啡诱导的炎症因子mRNA水平的升高(P＜ 0.05),同时PDTC对基础状态下BV-2细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的表达无显著性影响(P＞ 0.05).结论 PDTC显著抑制吗啡诱导的小胶质细胞活化,利用安全有效的药物来抑制NF-κB可能成为提升吗啡镇痛作用的新策略.【总页数】2页(P1-2)【作者】姜辰;韩园;唐娟娟;刘文涛;张广钦【作者单位】211198,中国药科大学临床药学教研室;徐州医学院,江苏省麻醉学重点实验室;南京中医药大学,生理学教研室;南京医科大学,江苏省神经退行性疾病重点实验室;211198,中国药科大学临床药学教研室【正文语种】中文【相关文献】1.褪黑素对低氧诱导的BV-2小胶质细胞CD45表达增高的抑制作用 [J], 姚景春;张庆柱;张世玲;程艳娜;纪建波2.丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多 [J], 王正东;黄娜;陈婧娴;郑作兵;胡鑫宇;李梅;苏晓;苏学森;颜南3.丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多 [J], 王正东;黄娜;陈婧娴;郑作兵;胡鑫宇;李梅;苏晓;苏学森;颜南4.基于NF-κB信号通路探讨清眩降压汤抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应机制 [J], 刘菲;张铃;熊晓满;蓝文香;黄思涵;赵春雨;陈炎森;蔡巧燕5.青蒿琥酯对缺氧诱导的BV-2小胶质细胞激活的抑制作用及其可能机制 [J], 张洪喜;吕水清;王敦敬;唐蛟;刘永海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
原花青素对脂多糖诱导BV2小胶质细胞炎症介质分泌的影响
原花青素对脂多糖诱导BV2小胶质细胞炎症介质分泌的影响陈金枝;张小强;曲志华;周亚盼;张妍;梁晓瑜【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2016(028)003【摘要】目的:探讨原花青素对脂多糖(LPS)激活小鼠小胶质细胞(BV2)炎症介质分泌的影响.方法:以LPS激活BV2细胞构建神经炎症模型.分别采用0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL原花青素预处理后,1.0μg/mL的LPS刺激BV2细胞24 h.采用MTT法检测细胞存活率;Griess法检测BV2细胞培养液上清中一氧化氮(NO)水平;ELISA 法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的分泌水平.结果:在实验剂量范围内,原花青素及LPS对BV2细胞活性均无显著影响(P＞0.05).但1.0 μg/mL LPS可引起BV2细胞各炎症因子NO、TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高(P＜0.05).与LPS组相比,原花青素(0.1、0.5、1.0、5.0 μg/mL)预处理能使激活的BV2细胞培养液上清中NO释放量减少(P＜0.05),TNF-α、IL-1β和IL-6含量降低(P＜0.05),抑制作用呈剂量-效应关系.结论:在体外实验中,原花青素对LPS诱导小胶质细胞所致的炎症反应具有保护作用.【总页数】4页(P214-217)【作者】陈金枝;张小强;曲志华;周亚盼;张妍;梁晓瑜【作者单位】东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009;东南大学公共卫生学院,江苏南京210009;东南大学环境医学工程教育部重点实验室,江苏南京 210009【正文语种】中文【中图分类】R994.6【相关文献】1.线纹海马乙醇提取物对脂多糖诱导BV2小胶质细胞炎症反应的作用 [J], 颜玲;杨志友;黄文哲;张永平;杨文聪;刘亚月;张翼;崔玉华;宋采2.氯喹通过抑制NF-κB和MAPK信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应 [J], 方明楚;林振浪3.黄连解毒汤含药血清通过TLR4/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应 [J], 王俊力;杨运;邵卫;罗卫东;张忠文;梅俊华;陈国华4.白藜芦醇通过调节BDNF/Akt/CREB及TREM1/2表达失衡抑制脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应1 [J], 徐静娴;刘森;高欣冉;高叶俊;夏清荣;葛金芳5.TLR4-IN-C34通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3信号通路减轻脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应 [J], 张姗姗;刘漫;刘冬妮;杨滢霖;王月华;杜冠华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
姜黄素对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用
姜黄素对小胶质细胞介导的神经炎症反应的抑制作用摘要：目的：本文通过探讨在小鼠小胶质细胞（BV-2）中由TLR2介导下产生及释放的炎症因子在加入姜黄素后其释放量的变化情况，探讨姜黄素对TLR2活化引起的神经炎症及其反应的抑制作用, 为姜黄素延缓和治疗神经退行性疾病提供新的思路和理论依据。
关键字：姜黄素；小胶质细胞；神经炎症；TLR2姜黄素（Curcumin）是一种从姜科植物例如姜黄或者天南星科植物的根茎中提取得到的黄色色素，为酸性多酚类物质，是一种天然小分子化合物[1]。
通常用作肉类食品着色剂和酸碱指示剂，研究证明姜黄素具有抗炎、抗氧化等药理作用[1]。
应用抗炎疗效较好的天然植物中的活性成分延缓神经退行性疾病的发展已成为该领域目前的研究热点。
BV-2是小鼠的小胶质细胞，是脑内中枢系统的免疫效应细胞，有免疫监视、组织修复等作用。
在特定的病理条件下小胶质细胞的过度激活会分泌炎症因子，促进神经炎症的发生，引起神经损伤，导致阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）和帕金森病（Parkinson’s disease，PD）等神经退行性疾病的发生[2]。
神经炎症反应是以小胶质细胞为介导，通过小胶质细胞过度激活，促进NO、TNF-α、等相关炎症因子产生及释放，引起神经炎症反应。
小胶质细胞介导的起神经炎症反应是神经退行性疾病的重要病理特征之一。
TOLL样受体（TOLL like receptors）家族是模式识别受体家族，已报道的Toll样受体共有10个 (TLR1、2、3、4、5、6、7、8、9、10)。
TLR2作为其中一员，其在炎症反应发生过程的作用受到广泛关注。
TLR2通过识别病原体相关的分子模式（PAMPs），激活TLR2下游信号通路[5]。
TLR2信号转导途径包括两种不同的方式，一种为髓样分化因子（myeloid differentiation factor 88,MyD88）依赖型，通过MyD88诱导I Bα活化并使其磷酸化降解，释放I Bα所携带的核转录因子（NF-κB）中的两个亚基p50与p65，调控目的基因转录以及炎症因子的激活。
bv2细胞
BV2细胞BV2细胞是一种常用的小鼠巨噬细胞株，源自小鼠海马的微胶质细胞。
这种细胞株广泛用于炎症相关研究，特别是在神经科学领域被广泛应用。
本文将介绍BV2细胞的特点、用途以及在研究中的重要性。
BV2细胞的特点BV2细胞是一种表达巨噬细胞标记物如CD11b的细胞株，具有巨噬细胞的功能和特性。
这种细胞生长迅速，易于培养，并且对于体外研究具有很高的稳定性。
BV2细胞在感染和炎症刺激后能够产生一系列炎症因子和细胞因子，比如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6），因此被广泛用于炎症相关研究。
BV2细胞的用途BV2细胞被广泛用于研究炎症、神经退行性疾病和神经保护等领域。
在阐明炎症反应机制、探索疾病发生发展机制方面发挥着重要作用。
研究人员常通过感染BV2细胞模拟疾病炎症过程，评估新型药物的抗炎作用，以加深对相关疾病的认识。
此外，BV2细胞还被用于研究神经保护机制，特别是在中枢神经系统疾病的治疗策略中。
通过模拟神经炎症环境，BV2细胞的研究有助于阐明神经保护作用的分子机制，为新的神经保护药物的研发提供理论依据。
BV2细胞在研究中的重要性BV2细胞在炎症和神经科学研究中起着重要作用。
它们作为一种常用的巨噬细胞模型，为研究疾病的发病机制、药物治疗策略提供了方便的工具。
通过利用BV2细胞，研究人员可以更好地理解炎症反应和神经保护机制，为相关领域的进一步研究奠定基础。
综上所述，BV2细胞是一种重要的细胞株，在炎症及神经科学领域具有重要应用价值。
通过不断深入的研究，我们有望更好地揭示疾病的发病机制，为新药的开发和治疗策略的制定提供更好的理论支持。
BV2细胞将继续在科研领域发挥重要作用，促进相关领域的发展。
以上是关于BV2细胞的简要介绍，希望对您有所帮助。
bv2小胶质细胞培养方法
bv2小胶质细胞培养方法bv2小胶质细胞是一种常用于神经科学研究中的细胞系，它是从小鼠大脑中的胶质细胞中分离出来并进行培养得到的。
在研究神经炎症、神经退行性疾病等领域，bv2小胶质细胞的培养方法非常重要。
本文将介绍一种常用的bv2小胶质细胞培养方法。
准备培养基和培养器具。
常用的培养基包括DMEM/F12、FBS、青霉素和链霉素等，可以根据实际需要添加其他补充物。
培养器具包括细胞培养板、离心管、移液器等。
接下来，收集小鼠大脑组织并分离胶质细胞。
可以选择小鼠的新生仔或成年小鼠进行实验。
将小鼠的大脑取出，去除外膜和血管，并切成小块。
将切好的组织块转移到含有消化酶（如胰蛋白酶）的消化液中，然后在37摄氏度的恒温培养箱中进行消化。
消化时间一般为30分钟至1小时，根据组织的大小和样本量进行调整。
消化结束后，用培养基停止消化反应，并用离心将细胞沉淀下来。
将沉淀的细胞用培养基重新悬浮，并通过筛网过滤掉组织碎片和大颗粒。
然后，将细胞计数，并根据实验需要进行稀释。
将细胞悬浮液均匀分配到预先涂有培养基的细胞培养板中，使其在培养基中均匀分布。
将细胞培养板放入培养箱中，调节温度为37摄氏度，湿度为95%，并提供适当的CO2气氛（一般为5%）。
每2-3天更换一次培养基，并观察细胞的生长情况。
当细胞达到80%的密度时，可以进行下一步的实验。
在培养过程中，需要注意细胞的健康状态。
细胞应该呈现出典型的胶质细胞形态，即星形或梭形，并有良好的附着性。
如果细胞呈现不正常的形态，或者细胞死亡较多，可能是培养条件不适合，需要进行调整。
培养过程中还需要注意细胞的污染问题。
保持培养器具的清洁和消毒，避免细菌、真菌等污染源的进入。
如果发现培养基出现异常，如呈现黄色或浑浊，可能是细菌污染，需要立即更换培养基。
在bv2小胶质细胞培养过程中，还可以进行相关实验，如细胞增殖实验、分化实验、细胞活力检测等。
这些实验可以进一步研究bv2小胶质细胞的生物学特性和功能。
BV2（小鼠小胶质细胞）说明书
武汉普诺赛生命科技有限公司 Procell Life Science&Technology Co.,Ltd.使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：全国免费电话：400-650-3656销售电话：************销售邮箱：*****************.cn官方网站：CL-0493BV2（小鼠小胶质细胞）武汉普诺赛生命科技有限公司——您身边的细胞培养专家Copyright ©2020-2021 Procell Life Science&Technology Co.,Ltd. All Rights Reserved 细胞株培养扩增技术服务申明本公司受贵单位委托，进行细胞株的技术服务工作，并收取相应细胞株技术服务费用，细胞株技术服务具体项目清单见订购合同。
本公司提供完善的技术支持及售后服务，收到产品后处理方式及相应售后条款参见《细胞售后条例》。
收到常温细胞后如何处理？（细胞培养详细操作步骤请参照《普诺赛细胞培养操作指南》）1. 收到常温细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。
2. 用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。
先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4. 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5. 管内离心，吸去上清，管底沉淀加入80%，可接回原瓶培养，若大于80%6. 培养瓶或用移液器轻轻吹打使其脱落，若通过吹打的方式不易脱落的细胞则需要用胰蛋白酶消化后收集细胞传代。
7. 注意事项有疑问的，可跟我们的技术支持交流。
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BV-2 小鼠小胶质瘤细胞
简单介绍
BV-2 小鼠小胶质瘤细胞，ATCC细胞|细胞系|细胞株|肿瘤细胞株|细胞|贴壁细胞|悬浮细胞|；细胞库管理规范，提供的细胞株背景清楚，提供参考文献和最优培养条件；
BV-2 小鼠小胶质瘤细胞的详细介绍
BV-2 小鼠小胶质瘤细胞
培养条件：
完全培养基：RPMI 1640+10%胎牛血清
培养条件：37.0C carbon dioxide(CO2),5%
传代方法：
收到细胞后，取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况。
（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，仅留下10ml培养液在瓶内继续培养。
(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。
具体步骤如下：
1. 弃去培养液，用PBS（不含钙，镁离子）洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37度培养箱1-3分钟预热，然后又将培养瓶倒转大约30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆分散，轻敲几下培养培养瓶，细胞随即脱落下来。
3. 加入6-8ml完全培养基，吸出，分到新的培养瓶中。
一传二。
注意：传代后一半用我们的培养基，一半用你们的，以免细胞不适应而造
成生长不好。
冻存方法：冻存液：95%完全培养液，5%DMSO
储存：液氮储存。