11遗传性疾病的分子诊断
分子诊断技术分析
分子诊断技术分析分子诊断技术是一种通过检测个体的DNA、RNA或蛋白质等分子水平的方法，用来诊断和预测疾病。
随着生物技术的飞速发展，分子诊断技术已经成为医学领域的重要研究方向。
本文将介绍分子诊断技术的原理、应用和前景。
一、分子诊断技术的原理分子诊断技术通过检测和分析个体的遗传物质来判断健康状况和病理状态。
它使用了一系列的技术手段，如聚合酶链反应（PCR）、芯片技术、基因测序等。
其中，PCR技术是分子诊断技术的核心和基础。
它通过扩增个体的DNA序列，从而使其能够被检测和分析。
二、分子诊断技术的应用1. 遗传性疾病诊断：分子诊断技术可以检测和分析个体的基因组，从而判断是否患有遗传性疾病。
例如，通过检测染色体异常，可以诊断唐氏综合征、血友病等疾病。
2. 肿瘤诊断：分子诊断技术在肿瘤的早期筛查和诊断中发挥着重要作用。
它可以检测肿瘤相关基因的突变，并进行肿瘤的分型和分级，指导临床治疗。
3. 感染病诊断：分子诊断技术可用于检测和鉴定病原体，如病毒、细菌和真菌等，快速诊断感染性疾病，提供针对性的治疗方案。
4. 精准医学：分子诊断技术可以根据患者的基因组信息，个性化制定治疗方案。
例如，根据患者的基因型判断特定药物的疗效和副作用，以实现精准医疗。
三、分子诊断技术的发展前景分子诊断技术在医学领域具有广阔的应用前景。
随着基因测序技术的不断进步和降低成本，分子诊断技术将更加普及和便捷，为疾病的预防、筛查、诊断和治疗提供更加有效和精准的手段。
此外，分子诊断技术的发展还将推动疾病的分型和个体化治疗。
通过深入研究基因组信息，我们可以更好地理解疾病的发生机制，寻找新的治疗靶点，并开发相应的靶向药物。
同时，随着人工智能和大数据等技术的融合，分子诊断技术的数据处理和分析能力将大大提高，为疾病的早期预警和精准预测提供更高效和可靠的支持。
综上所述，分子诊断技术作为一种新兴的医学技术，具有巨大的应用前景。
随着技术的不断进步和创新，相信分子诊断技术将在疾病诊断和治疗中发挥越来越重要的作用，为人类的健康事业做出更大的贡献。
遗传性疾病的分子诊断
MstⅡ酶切位点(GCTNAGG)
5´
3´
1.15kb
正常基因
×
5´
3´
1.35kb
突变基因
镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
﹣
1.35kb 1.15kb
0.2kb
+
正常人 突变携带着 患者
二、ASO探针杂交
主要适用于检测已知点突变 受检者基因组DNA或含 突变位点的PCR扩增产物 与标记的ASO 探针杂交
遗传性疾病诊断策略
1. 点突变的诊断
方法有等位基因特异性寡核苷酸杂交（ASO）、 PCR － ELISA 、 等 位 基 因 特 异 性 扩 增 （ ASA ） 、 PCR－RFLP、基因芯片技术进行诊断；
对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链 构 象 多 态 性 （ SSCP ） 、 变 性 梯 度 凝 胶 电 泳 （DEEG）、异源双链分析（HA）、DNA序列测定 蛋白截短测试等方法。
单核苷酸多态性 （single nucleotid polymorphism，SNP）
定义:主要是指在P与STR不同, 它是直接以序列的变异作为标记,而不是以片段的 长度差异作为标记.
人类基因组图谱的初步分析表明，共有3万 至3.5万个基因。有300多万个单核苷酸多态 性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～ 1000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成 的单倍型（haplotype）就可有8-16种。
bA probe bS probe
Homo
Hetero
Normal
2）地中海贫血
珠蛋白基因缺失或基因中某些硷基替代
→ 影响a-或b-珠蛋白链的合成速率 → a-或b-地贫
分子诊断技术在遗传病诊断中的应用
分子诊断技术在遗传病诊断中的应用遗传病是由基因突变或遗传异常引起的一类疾病，它们对人类健康产生了严重的威胁。
传统的遗传病诊断方式通常是基于临床症状、家族史和一系列实验室检测，但这种方法存在着许多局限性。
近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，分子诊断技术在遗传病诊断中得到了广泛应用。
1. Polymerase Chain Reaction技术（PCR技术）PCR技术是一种在遗传病诊断中常用的分子生物学技术，它能够在短时间内扩增特定DNA序列，从而使得目标序列的数量达到可以被检测的范围。
通过PCR技术，医生可以对遗传病相关基因进行定性和定量检测，进行疾病的早期诊断和监测。
例如，PCR技术可用于检测常见遗传病如囊肿纤维化和地中海贫血等。
2. 基因测序技术基因测序技术是一种高通量的分子诊断技术，它能够解读个体基因组的全部或部分DNA序列。
通过对患者基因组的测序，医生可以发现患者是否存在潜在的遗传突变或变异，从而进行病因的明确诊断。
这种技术在罕见遗传病的诊断中尤为重要，因为这些病种通常具有高度异质性，临床症状难以确诊。
3. 即时聚合酶链反应技术（LAMP技术）LAMP技术是一种在遗传病诊断中应用广泛的分子检测技术，它能够在恒温条件下，通过酶的协同作用，迅速扩增并检测目标DNA序列。
与PCR技术相比，LAMP技术不需要复杂的设备和条件，更适用于基层医疗机构和资源匮乏地区的遗传病诊断。
LAMP技术可以快速、准确地检测多种遗传病，如新冠病毒、艾滋病和乙肝等。
4. 高通量基因检测技术高通量基因检测技术是一种在遗传病诊断中应用广泛的分子筛查技术，它能够同时检测数千个基因，用于快速筛查潜在的遗传病风险。
这种技术通过基因芯片或测序平台，将患者的基因样本与已知的遗传病相关基因进行比对，从而确定患者的遗传风险。
高通量基因检测技术可以大大提高遗传病的筛查效率，有助于早期发现并干预遗传病。
5. 引物扩增反应技术（Ligase Chain Reaction技术）Ligase Chain Reaction技术是一种在遗传病诊断中具有高灵敏度和特异性的分子诊断技术，它能够通过酶的催化作用，将特定引物与目标DNA序列连接起来。
遗传疾病的分子诊断技术
遗传疾病的分子诊断技术引言随着科技的发展，遗传疾病的分子诊断技术也逐渐成熟，可以高效、准确地检测出遗传病的基因突变，为疾病的早期诊断、预防及治疗提供了帮助。
本文将从遗传疾病的定义、分类以及分子诊断技术等方面进行论述，并介绍常见的几种遗传疾病的分子诊断技术。
一、遗传疾病的定义及分类遗传疾病指受遗传因素影响而引起的疾病，又称基因病。
目前已知的人类遗传疾病有上万种，其中包括单基因遗传疾病、多基因遗传疾病、染色体异常疾病等。
单基因遗传疾病是由单个基因的突变引起的遗传疾病，如囊性纤维化、地中海贫血等。
多基因遗传疾病是由多个基因的遗传变异共同作用引起的遗传疾病，如高血压、糖尿病等。
染色体异常疾病是由染色体数目或结构异常引起的遗传疾病，如唐氏综合征、克汀病等。
二、分子诊断技术分子诊断技术是一种利用分子生物学方法检测人类遗传疾病基因突变的技术。
其具有灵敏度高、特异性强、快速、准确、可重复等优点。
目前主要包括基因测序、基因芯片、多聚酶链式反应（PCR）等。
基因测序是一种检测基因序列的技术，可以检测出DNA序列的突变和变异。
基于Sanger测序技术，在经过PCR扩增后，使用DNA聚合酶及将特殊标记的ddNTPs加入反应体系中，逐个测序DNA碱基，从而检测出DNA序列的变化。
此外，近年来兴起的高通量测序技术，如Illumina测序、Ion Torrent测序等，可以快速获取大量的基因序列信息，同时也有助于对宏基因组研究和病原体检测等方面。
基因芯片（Microarray）是一种依赖于基因组、生物芯片技术建立的高通量分子诊断平台。
基因芯片可以用于检测单核苷酸多态性（SNP）、DNA甲基化、基因表达和蛋白质组学等，具有高效检测多个样品的同时，降低检测成本、减少检测时间等优点。
并且可以通过与生物信息学分析相结合，帮助更加准确、快速地筛查某些遗传病征。
PCR技术是利用DNA聚合酶扩增目标序列的一种方法。
PCR 除了可以为基因测序和基因芯片等技术提供检测依据外，也可应用于未知变异点突变的分子诊断，可以在短时间内批量检测患者基因样本，帮助进行遗传病的快速诊断和基因突变的筛查。
遗传性疾病的分子诊断教学课程
案例二：镰状细胞病的分子诊断
总结词
镰状细胞病是一种遗传性血液病，通过分子诊断可以检测出是否存在血红蛋白异常，为临床提供及时的诊断和 治疗方案。
详细描述
镰状细胞病患者红细胞形态异常，呈镰刀状。分子诊断技术通过对红细胞中血红蛋白的基因序列进行分析，可 以检测出是否存在镰状细胞病相关基因突变。对于疑似患者，通过血液样本采集和遗传学分析，可以确诊是否 患有镰状细胞病。
05
遗传性疾病的分子诊断前景与挑战
分子诊断技术的进步与挑战
分子诊断技术进步
近年来，分子诊断技术取得了显著的进步，包括基因测序、 基因表达谱分析、蛋白质组学等技术，为遗传性疾病的检测 和诊断提供了更精确和可靠的工具。
分子诊断挑战
尽管分子诊断技术不断进步，但仍存在一些挑战，如检测结 果的解读、临床应用的规范和标准化等问题，需要进一步研 究和探索。
03
在社会层面上，需要加强公众对遗传性疾病的认识和重视，提高医生的诊断和 治疗水平，同时加强相关法律法规的建设和完善。
02
分子诊断技术简介
分子诊断的基本原理
基于DNA和RNA等生物分子的特性，通过检测和分析这些 分子，对疾病进行诊断和预测。
分子诊断技术可以更精确地检测和识别遗传性疾病，相对 于传统诊断方法具有更高的敏感性和特异性。
有些遗传性疾病具有较高的致死率，如囊性纤维化、神经管缺陷等，对家庭和社会造成极大的负担。
遗传性疾病的诊断与治疗现状
01
遗传性疾病的诊断主要依赖于临床表型、家族史、基因检测和染色体分析等方 法，但往往存在诊断困难、误诊等问题。
02
针对不同类型的遗传性疾病，治疗方法各异，包括药物治疗、手术治疗、基因 治疗和细胞治疗等，但目前仍存在许多技术难题和伦理问题需要解决。
遗传性疾病的分子诊断和治疗研究
遗传性疾病的分子诊断和治疗研究遗传性疾病是指由基因突变引发的疾病，这些病症可能影响人体的任何器官和系统，给患者和家庭带来极大的困扰。
遗传性疾病的发生率在不断增加，同时也在不断地给医学研究带来挑战。
分子诊断和治疗研究是解决遗传性疾病问题的关键。
一、遗传性疾病的基础知识遗传性疾病是基因异常引发的疾病，主要包括单基因遗传病和常染色体遗传病。
单基因遗传病主要是由第一型基因突变引起的，如先天代谢障碍、遗传性视网膜变性等；常染色体遗传病则是由第二型基因突变引起的，如成人多囊肾、色盲等。
随着人类基因组计划的完成，越来越多的遗传性疾病已经通过基因检测得到确诊。
例如，某些先天性失听、先天性心脏病、遗传性肝病等基因疾病，通过基因检测可以提前预防和治疗。
二、分子诊断技术在遗传性疾病中的应用分子诊断技术是近年来发展最快的遗传性疾病诊断技术之一。
它通过检测DNA或RNA等分子水平上的异常和变化，来鉴定致病基因和其表达水平，进而确定疾病类型。
分子诊断技术包括串联反应（PCR）、Southern blotting、Northern blotting、Sanger测序等技术。
其中，PCR技术的应用范围最广，可检测单基因遗传病、细菌、病毒等。
Southern blotting和Northern blotting则主要用于检测基因突变和RNA的稳定性和表达水平。
Sanger测序则是基于目标DNA序列的测序技术，主要用于检测大片段基因区域的变异情况。
分子诊断技术在遗传性疾病中的应用是十分广泛的，特别是在单基因遗传病和常染色体遗传病的诊断中。
例如，进行PCR扩增并检测亚细胞膜的胆固醇过高转移酶（ABCA1）基因，可以诊断出家族性高胆固醇血症；进行Sanger测序检测fktn基因突变可判断某些患者是否患上了肌萎缩性脊髓侧索硬化症（SMA）；进行Southern blotting和Northern blotting都可以检测肾功能障碍、膜性肾病和肾输尿管先天性畸形等其他遗传性疾病。
遗传性疾病分子诊断技术的研究
遗传性疾病分子诊断技术的研究遗传性疾病是由遗传因素引起的一类疾病，其中大部分疾病是由单个基因突变引起的，称为单基因遗传性疾病。
其余的疾病则称为多基因遗传性疾病。
在这些疾病中，基因的突变会导致蛋白质的功能异常或缺失，从而引起相关的疾病，如肌萎缩侧索硬化症，囊性纤维化等。
可以通过遗传检测技术，早期诊断这些疾病。
分子遗传学是研究个体遗传物质的结构、功能、变异和遗传性疾病发病机制的学科。
在分子遗传学中，分子诊断技术是一项关键的技术，包括PCR、Sanger测序、检测突变基因和类似的技术。
PCR技术是常用的核酸扩增技术之一。
它是以DNA聚合酶为媒介，通过引物二倍体沿模板DNA进行扩增，最终得到目的片段。
这种技术使用广泛，可以用于检测基因型和突变，如囊性纤维病突变检测。
Sanger测序是测定DNA序列的金标准技术。
这种技术的原理是，将DNA片段代入测序装置中的扩增过程中，通过加入不同特定的荧光含量的dNTPs（脱氧核苷三磷酸），以测序。
Sanger序列技术在研究遗传疾病的基因突变时也经常使用。
检测突变基因是单基因遗传病诊断的核心问题。
对于一些常见的单基因遗传病，部分疾病的基因定位和突变规律已被明确。
胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）等基因是有关巨细胞增生症（Gigantism）的遗传突变基因，其突变可以导致疾病发生。
研究发现，通过删除IGF-1R基因可以预防Gigantism的发生。
这种技术为控制疾病发生提供了一种新方法。
除此之外，还有其他分子遗传学技术广泛应用于遗传性疾病的诊断和预测，诸如荧光原位杂交、单细胞测序、功能分析和转录组分析等。
通过这些技术，不仅可以预测单个疾病发病的可能性，还可以填补遗传和保健之间的空白。
虽然分子遗传学技术已经具备了足够的实用性和安全性，但是在使用过程中仍然会存在一些问题和挑战，比如样本提取的困难、误差率高等问题。
这也需要逐步解决。
综上，分子遗传学技术在遗传性疾病的早期诊断、疾病治疗和疾病预防方面发挥着越来越重要的作用。
遗传性疾病的分子诊断
遗传性疾病的分子诊断遗传性疾病是由基因突变引起的一类疾病，它们可以通过分子诊断方法进行准确的检测和诊断。
分子诊断是一种利用现代生物技术手段直接检测基因或染色体异常的方法，可以帮助医生确定遗传性疾病的类型和患病风险。
本文将介绍遗传性疾病的分子诊断方法以及其在临床实践中的应用。
一、遗传性疾病的分类遗传性疾病按照遗传方式可以分为单基因遗传疾病和复杂遗传疾病两类。
单基因遗传疾病是由单个基因突变引起的疾病，如囊性纤维化、遗传性血小板疾病等；而复杂遗传疾病则涉及多个基因和环境因素的相互作用，例如糖尿病、高血压等。
针对不同类型的遗传性疾病，分子诊断方法也会有所差别。
二、分子诊断方法1. 基因突变检测基因突变检测是分子诊断的核心内容之一。
通过对染色体上的特定基因进行检测，我们可以判断该基因是否存在突变，从而确定患者是否患有遗传性疾病。
基因突变检测常用的方法包括PCR扩增、DNA测序、外显子捕获等。
例如，对于囊性纤维化，可以通过检测CFTR基因上的突变来诊断该疾病。
2. 染色体结构异常检测染色体结构异常是一类常见的遗传性疾病，如唐氏综合征、爱德华氏综合征等。
通过检测染色体的结构变异，可以对这些疾病进行诊断。
常用的方法包括荧光原位杂交（FISH）和比较基因组杂交（CGH）等。
这些方法可以捕获到微小的染色体缺失、重复或倒位等异常，为遗传性疾病的诊断提供准确的依据。
3. 蛋白质水平检测除了基因突变的检测，蛋白质水平的检测也是遗传性疾病分子诊断的重要方面。
蛋白质是基因表达的产物，它们的异常表达或功能失调常常与遗传性疾病的发生相关。
通过蛋白质的定量或定性分析，可以评估患者的疾病风险或诊断结果。
例如，肌萎缩性侧索硬化症患者的血液中神经元特异性烯醇化酶（HDAC6）蛋白质表达异常，可以通过蛋白质水平的检测来诊断该疾病。
三、分子诊断在临床实践中的应用分子诊断技术的发展为临床医生提供了准确诊断遗传性疾病的手段。
临床医生可以根据患者的症状和家族史，选择合适的分子诊断方法进行检测。
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血红蛋白HbA基因
（一）α 珠蛋白基因
16p13.3
全国高等医药院校教材-分子诊断学
（二）β 珠蛋白基因
11p15.5
不同阶段的血红蛋白基因表达 和血红蛋白组成
（二）镰状细胞贫血
镰刀型贫血症是一种遗传性贫血症，
属隐性遗传性疾病。患者的红细胞缺氧时
变成镰刀形，失去输氧的功能，破裂造成
严重贫血。
地中海贫血（thalassemia）是由于 珠蛋白链的合成不平衡所造成的一类常见 的单基因遗传性、溶血性疾病 。
血红蛋白H
α 地中海贫血
1. α 地中海贫血遗传特征 （1）由于基因缺失导致的α地中海贫血基因型 表 型 基因型
正常人
α地中海贫血Ⅱ（静止型）
αα/αα
α -/αα
α地中海贫血Ⅰ（标准型）
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多态性在人群中出现的频率应大于1%（如小 于1% 常认为是异常突变）。 在生物进化过程中形成的，它本身并不致病 或于遗传病有直接联系，故称为“中性突 变”。 人类的23对染色体中，每一条上都带有许多 遗传多态性位点，其中一些位点在染色体上 的位置与致病基因靠的很近，甚至连锁在一 起遗传，并且呈孟德尔式遗传。因此，可利 用这一多态性位点作为遗传指示标记。
（2）PCR-ASO法：
当基因的突变情况完全明了时，可以合 成等位基因特异的寡核苷酸探针（allelespecific oligonucleotide,ASO），长度通常为 20bp左右。一种探针与正常基因杂交，另一 种探针与突变基因杂交，即将突变的基因区 别开来.
PCR先将含有突变点的基因进行扩增， 然后再与ASO探针作点杂交。优点是灵敏、难 确，缺点是一次杂交只能检测一种突变。
βA βS βC βA βS βC
基因序列 密码子 5 6 7 …CCTGAGGAG… …CCTGTGGAG… …CCTAAGGAG… 对应氨基酸 …Pro Glu Glu… …Pro Val Glu… …Pro Lys Glu…
2.镰状细胞贫血的分子诊断方法
限制性内切酶MstⅡ识别序列为CCTNAGG， N为任意核苷酸。 因此β 珠蛋白基因的第5、6、7密码子中有 该内切酶的识别位点。发生镰状突变后该酶 切位点消失。
第二节 遗传病的分子诊断
一、血红蛋白病 hemoglobinopathy 血红蛋白由两条α 珠蛋白肽链和两条其 他珠蛋白肽链组成的四聚体。
血红蛋白病可以分为二类：
①由于珠蛋白一级结构的变化所导 致的异常血红蛋白病； ②由于珠蛋白多肽链的合成速率不 平衡所导致的地中海贫血。
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控制疾病的染色体和基因性质的不同，可 以将人类单基因病分为：
常染色体遗传 单基因病 X连锁遗传
线粒体遗传
遗传学的诊断方法可以简单的分为 以下的四类：
1.染色体水平的诊断：采用细胞遗传学技术进行染色体 核型分析，比如荧光原位杂交法（FISH）。 2.基因水平的诊断：包括限制性片段长度多态性的酶切 分析、基因型和单体型的连锁和关联分析、基因的 序列分析。 3.蛋白质水平的诊断：采用分子生物学技术分析异常表 达的蛋白质或代谢产物，如蛋白质芯片等。 4.疾病动物模型的辅助诊断：建立相应的转基因疾病动 物模型，辅助诊断或判定人类疾病的致病基因。
六种正常血红蛋白的肽链组成和正常人血中的浓度 血红蛋白种类 肽链组成 (分子式) 正常成人血中 的浓度（%）
HbA(A1)
HbA2 HbF Gower1 Gower2 Portland
α2 β2
α2 δ2 α2 γ2 ζ2 ε2 α2 ε2 ζ2 γ2
95～98
2～3 ～1(胎儿期) 无（胎儿期早期） 无（胎儿期早期） 无（胎儿期早期）
β0珠蛋白生成障碍性贫血，基因型为纯合子
β地/β地，两个β基因都发生突变，使其不
能合成正常的β珠蛋白，没有血红蛋白A的合
成，患者几乎靠输血维持生命。
（2）β珠蛋白生成障碍性贫血，又称为β+ 珠 蛋白生成障碍性贫血，其基因型为杂合子 β地/β，其中一个基因正常，贫血症状较轻。
β 地中海贫血常见突变位点
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第十五章 遗传性疾病分子诊断
生物化学与分子生物学学科 2011.4
Molecular diagnosis of genetic disease
遗传疾病分子诊断是指通过分析患者遗传物 质结构或表达水平的变化，对人体健康状态 和疾病做出或辅助诊断的方法。 评估基因的存在和缺陷---DNA 评估基因的表达量---RNA、蛋白质
密码子 5 6 7
… CCT · GAG · GAG…
… CCT · GTG · GAG…
βA βC
正常
βS 镰状突变
… CCT · AAG · GAG…
… CCT · NAG · … G
限制性内切酶识别序列
RFLP / MstII test for Sickle-Cell Anemia
（二）地中海贫血
PND和PGD的适应症
PND：通过对绒毛组织或羊水细胞的基因分 析，可诊断100多种单基因遗传病。 PGD：采用极体分析法对30多种遗传病进行 诊断。
PND和PGD的适应症
A．有可能孕育出严重遗传性疾病和先天性畸形胎儿 的孕妇。 B．夫妇一方有某种遗传病或曾生出过某种遗传病患 儿，或孕妇有X伴性隐性遗传病家族史。 C．夫妇任何一方为染色体异常、染色体平衡移位和 倒位携带者。 D．早孕阶段曾服用过致畸药物或曾有病毒感染史等 致畸情况。 E．羊水过多或过少。 F．原因不明的多次流产、死胎、死产的孕妇。 G．胎儿发育迟缓。 H．未触到正常的胎儿。 I．年龄超过35岁的孕妇等等。
突变。
第三节 产前遗传缺陷的分子诊断
产前诊断 PNBiblioteka Prenatal diagnosis
植入前遗传学诊断 PGD Preimplantation genetic diagnosis
诊断主要分二个层次
一、染色体水平的诊断 主要技术：FISH 染色体数目异常：非整倍体 染色体结构异常：染色体易位、带型改变 二、基因水平的诊断 采用的方法受样本量少限制 巢氏PCR
2．分子诊断方法
PCR和基因点突变检测技术是β地中海贫 血基因诊断的主要手段，常用的方法有： （1）PCR-RDB法(反向斑点杂交)：
先将探针固定在尼龙膜上，再将待测的 DNA样本(一般是经PCR扩增的产物)与之杂 交，一次就可以判断某一基因的各种突变 情况。
扩增的引物为： Bio-C1：5′-GTACGGCTGTCATCACTTAGACTTCA-3′
（二）片段性突变的检测
片段性突变是指DNA分子中较大范围的碱
基发生突变，如碱基的缺失、插入、扩增 和重组。 对于少数核苷酸缺失或插入，可以采用检 测点突变的方法； 而对于大的片段突变，则使用Southern印 迹技术和多重PCR技术。
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二、间接诊断策略和方法
目前大多数遗传性疾病的致病基因尚未被定 位和阐明，因此无法进行直接诊断，还有一些 基因长度数百到数千碱基，突变种类多且分布 广泛，这种情况下突变检测便十分复杂和困难， 此时要用间接诊断策略进行诊断 采用多态性连锁分析的方法，寻找具有基因 缺陷的染色体、相关基因的等位基因型和单倍 体型等，并判定被检者是否有这条存在基因缺 陷的染色体、相关基因的等位基因型和单倍体 型等。
（2）Southern印迹法
α地中海贫血的基因簇限制性酶切片段长度 α基因探针 δ 基因探针 Bam HⅠ Eco RⅠ Hind Ⅲ EcoRⅠ aa/aa 14 23 16.5，13 23，5 --/-20，13 17，5 -a3.7/aa 10.3 19.3 ND ND -a4.2/aa 9.8 18.8 ND ND
该病常见于非洲和美洲黑人，因为杂
合基因型细胞贫血症状轻微，但红血球内
的轻微缺氧对寄生在红血球里的疟原虫却
是致死的，有利于防止疟疾的流行。
1.镰状细胞贫血的分子机理 由于β珠蛋白基因中第6个密码子的序 列由原来的GAG改变成GTG，导致β珠蛋白 肽链的第6位氨基酸残基由原来的谷氨酸改 变成缬氨酸，改变后的血红蛋白称谓镰状 血红蛋白（HbS）。该血红蛋白四聚体在脱 氧时，聚集成阵列，几乎变为结晶体，使 红细胞发生镰变（sickling）,弹性几乎丧 失，无法通过直径比红细胞小的毛细血管。
（3）等位基因特异性PCR（ASPCR）:
突变引物
突变
TTTATTT AAATAAAGGC
PCR
产物
杂合子
AAAAAAAGGC TTTTTTT
正常引物
PCR
产物
无突变
（4）芯片技术 多采用PCR体外扩增结合DNA芯片反向点 杂交检测技术，可快速准确检测人临床全 血样本中β珠蛋白基因上多个基因位点的
Bio-C2：5′-TGCAGCTTGTCACAGTGCAGCTCACT-3′
Bio-C3：5′-GTGTACACATATTGACCAAA-3′
402bp
Bio-C4：5′-AGCACACAGACCAGCACGTT-3′
423bp
中国人中已发现有21种β珠蛋白基因的 突变型，使用固化在膜上的11种探针可以检 测出98%以上的中国人β地中海贫血突变基因 型。
第一节
遗传性疾病的
分子诊断策略和方法
遗传性疾病主要分为两大类： 符合孟德尔遗传规律的单基因遗传病 不符合孟德尔遗传规律的多基因遗传 病（又称多因素性疾病）
单基因遗传病的特点是病种多、在特定家系
中发病率高、对群体的影响小； 而多基因遗传病是以病种相对较少、不仅在 特定家系中发病率高、而且对群体的影响 大为其特征。