遗传性皮肤病产前诊断研究进展
单纯型遗传性大疱性表皮松解症分子遗传学研究进展
ＫＲＴ５基因定位于１２ｑ１３，包含８个外显子，ｃＤＮＡ
的长度总共包括２１６４ ｂｐ，基因组长度大约６ ｋｂ。正常
基因产物是角蛋白５，由５９０个氨基酸组成。ＫＲＴｌ４
万方数据
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堡堕堕』堡匹坠望堕！：叁匹至Ｑ塑：№！：箜：塑！：兰 皮肤病，该病极大地影响了患者健康，甚至危及生命。 根据临床的表现不难诊断。本病尤特效治疗方法，产
Ｌ１、Ｌ１２和Ｌ２分为１Ａ、１Ｂ、２Ａ和２Ｂ ４段。两型角蛋白 通过杆区装配成更高级结构，形成成熟的角蛋白丝。 １Ａ的起始段和２Ｂ的尾段与相邻的角蛋白分子重叠， 对角蛋白丝的稳定性非常重要。常见的三型ＥＢＳ致 病突变集中于Ｋ５和Ｋ１４分子的四个区，即头段的Ｈ１
身任何部位的严重性水疱聚集，又称疱疹样型。此
后基因治疗指明了方向。
参考文献
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Ｋｅｍｐ等９对澳大利亚一个ｊ代患病的家系研究证明，
ＫＲＴ５的剪切位点突变将导致Ｈｌ区域和杆状ｌ Ａ区域
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常染色体隐性遗传性皮肤松弛症的相关基因研究进展
常染色体隐性遗传性皮肤松弛症的相关基因研究进展石武娟;薛珊珊【摘要】常染色体隐性遗传性皮肤松弛症是遗传性皮肤松弛症的常见类型,其发病机制尚未完全明确,但其可能的致病基因功能及其下游信号通路逐渐成为当前的研究热点.对与皮肤松弛症相关的基因及相应的信号通路的深入研究不仅为明确其发病机制奠基了良好的基础,同时,也为指导优生优育咨询指明了方向.本文主要综述近年来与常染色体隐性遗传性皮肤松弛症发病相关的基因及其信号通路的最新研究进展.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2018(046)009【总页数】6页(P1027-1032)【关键词】皮肤松弛症;突变;信号传导;常染色体隐性遗传【作者】石武娟;薛珊珊【作者单位】天津市儿童医院新生儿科,300134;天津市宝坻区人民医院儿科【正文语种】中文【中图分类】R394.3皮肤松弛症（cutis laxa，CL）是指因细胞外基质中的弹力蛋白合成受阻或结构异常引起的一种症候群，是一种罕见的结缔组织病［1］。
该病的典型特征为非衰老所致的皮肤弹性下降、松弛及下垂，其中以面部皮肤受累最为多见，可伴有眼睑、脸颊及颈部皮肤的松弛和下垂。
同时，患者还可伴有其他富含弹性纤维的组织器官的功能障碍［2］，如血管、心脏、肺等。
因为皮肤松弛症的遗传方式和临床表现具有多样性，所以给患者及时准确的诊治带来一定的困难与挑战。
本文旨在综述近年来常染色体隐性遗传性皮肤松弛症发病机制的研究进展，从而为该病的诊治及预防提供新的思路。
1 皮肤松弛症的分类按遗传特征，可将皮肤松弛症分为遗传性和获得性两大类。
获得性皮肤松弛症是指某些因素如感染或药物等作用使弹性蛋白结构和（或）数量发生不同程度的病理改变，最终导致皮肤弹性减退以致松弛［3-5］。
获得性皮肤松弛症通常表现为局部病灶，且在发病前无皮肤损害的表现，但亦可出现全身受累［5］。
与获得性皮肤松弛症相比，遗传性皮肤松弛症通常发病早，在出生时或婴儿期即可发病。
皮肤病专业新进展与研究方向
参考内容
基本内容
皮肤病生活质量指数（Dermatology Life Quality Index，DLQI）是一种用 于评估皮肤病对患者生活质量影响的量化工具，近年来在皮肤科临床实践和科 研中得到广泛应用。本次演示将概述皮肤病生活质量指数的内涵和测量方法， 阐述皮肤病生活质量指数的构建原理和方法，以及其在临床实践、科研创新等 方面的应用，最后探讨皮肤病生活质量指数的未来发展。
二、紫草外用治疗皮肤病的应用
1、银屑病：银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，主要表现为皮肤鳞屑、 红斑。研究表明，紫草的有效成分可以抑制银屑病的关键炎性因子，减轻皮肤 炎症，缓解病情。临床试验也证实了紫草对银屑病的显著疗效。
2、湿疹：湿疹是一种常见的过敏性皮肤病，主要症状包括瘙痒、红肿、渗出。 紫草的抗炎、抗菌及皮肤修复作用可以有效缓解湿疹的症状。一项针对湿疹患 者的随机对照试验显示，紫草软膏外用能显著减轻湿疹的瘙痒程度，改善皮肤 状况。
3、遗传学研究：很多皮肤病具有遗传倾向，因此遗传学在皮肤病专业中具有 重要地位。遗传学研究主要探究皮肤病发病的基因和遗传因素，以及如何通过 基因检测和基因治疗来改善皮肤病的预后。
4、环境因素研究：环境因素在皮肤病的发生中也具有重要作用。环境因素研 究主要探究环境因素对皮肤病的影响，包括紫外线、化学物质、微生物等。
谢谢观看
4、环境因素研究：环境因素在 皮肤病的发生中也具有重要作用
1、皮肤微环境研究：皮肤微环境是指皮肤表面及真皮层的微生物群落和细胞 因子等环境因素的总和。研究表明，皮肤微环境在皮肤病的发病中具有重要作 用，因此未来的研究将更加注重皮肤微环境的研究，包括皮肤表面及真皮层的 微生物群落和细胞因子的组成和变化，以及如何通过调节皮肤微环境来治疗皮 肤病。
医学遗传学的新进展与研究热点
医学遗传学的新进展与研究热点随着科学技术的不断进步，医学遗传学作为研究遗传与疾病之间关系的学科，一直处于不断发展与创新之中。
本文将介绍医学遗传学的一些新进展和研究热点，以及相关的研究方法和应用前景。
一、基因编辑技术的崛起基因编辑技术是目前医学遗传学领域中的一个重要研究热点。
通过CRISPR-Cas9系统等基因编辑工具，研究人员可以实现对基因组的精确操作，包括基因的插入、删除和修复等。
这项技术的突破为疾病的基因治疗提供了新的途径。
例如，科学家们利用基因编辑技术成功纠正了一些遗传疾病模型中的基因突变，为治疗相关疾病提供了希望。
二、单细胞遗传学的突破传统的遗传学研究往往基于群体的分析，无法对细胞的个体差异进行深入研究。
而随着单细胞技术的发展，研究人员可以对单个细胞中的基因表达和突变进行精准测量和分析。
这项技术的应用将揭示细胞间遗传变异的机制，有助于深入了解疾病的发生和发展过程。
例如，在肿瘤研究中，单细胞遗传学已被广泛应用于揭示癌细胞的异质性和耐药机制。
三、遗传咨询与个体化医学的结合随着对基因与疾病关系认识的不断深入，遗传咨询在临床中的作用日益重要。
遗传咨询师通过了解个体的基因组信息，为患者提供遗传风险评估和筛查建议，以指导个体化的治疗和健康管理方案的制定。
例如，某些遗传性疾病携带者可以通过遗传咨询了解自己的遗传风险，并采取相应的预防措施，降低疾病的发病风险。
四、复杂疾病的遗传研究复杂疾病是受多个基因和环境因素共同作用所致，目前仍面临很大的挑战。
然而，随着高通量测序技术的应用，研究人员可以大规模地检测个体基因组的变异并与疾病风险相关性进行关联分析。
这些研究有助于发现新的致病基因和致病机制，为复杂疾病的早期诊断和治疗提供新的线索。
综上所述，医学遗传学在新进展和研究热点方面取得了显著的进展。
基因编辑技术的出现为基因治疗提供了新的可能性，单细胞遗传学的发展揭示了细胞间遗传变异的奥秘，遗传咨询与个体化医学的结合提供了更加精准的治疗方案，复杂疾病的遗传研究有望为疾病的早期预防和治疗提供新的手段。
皮肤性病学发展现状与前景
皮肤性病学发展现状与前景发表时间：2016-04-20T11:44:50.800Z 来源：《健康世界》2015年31期供稿作者：王艳梅[导读] 铁力林业局职工医院近年来,皮肤性病学在皮肤遗传学、皮肤流行病学、皮肤免疫学、皮肤病原生物学、皮肤病临床诊断、药物治疗、光疗法和性传播疾病等领域取得了显著进展铁力林业局职工医院黑龙江铁力市 152500摘要：近年来,皮肤性病学在皮肤遗传学、皮肤流行病学、皮肤免疫学、皮肤病原生物学、皮肤病临床诊断、药物治疗、光疗法和性传播疾病等领域取得了显著进展,但仍有相当一部分皮肤病和少数性病缺乏有效的治疗和控制手段,每位皮肤性病工作者必须面对挑战、广泛开展基础和临床研究、加快新药研发并积极开拓新的治疗手段。
本文通过解析皮肤性病学的发展现状与发展前景,为皮肤病的预防与治疗提供有力依据。
关键词：皮肤性病学；发展现状；前景；前言：近几十年来，生命科学已成为人类自然科学发展的先导，人们对自身生命及其价值的认识不断深入，皮肤性病学的内容也得到不断扩展，进入了一个飞跃发展的阶段。
目前在遗传性皮肤病研究领域，已有多种遗传性皮肤病的致病基因得以确定，对人民生活危害巨大的常见复杂疾病的病因学研究成为当今研究热点。
随着人类基因组单体型图计划的完成，高密度的单核苷酸多态性图谱及高通量低成本的SNP分型技术为复杂疾病易感基因的研究取得突破性进展提供了希望。
1.皮肤性病学的发展现状1.1皮肤遗传学领域研究步入世界先进行列皮肤遗传学是当今最活跃的医学研究领域之一，经过近十年的努力，我国皮肤遗传学研究已步人世界先进行列。
目前科研工作者正采用日臻完善的遗传学分析手段（如基于SNP的全基因组关联分析等）来揭示人类自身的DNA序列变异导致人类疾病个体差异或易感性的遗传学基础，并以“基因网络”的概念指导对基因-基因的相互作用的探索。
我国专家在国际上首次发现了家族性多发性毛发上皮瘤和红斑肢痛症的致病基因，对银屑病、白癜风等皮肤复杂疾病的流行病学、易感基因等方面进行了卓有成效的研究，在国际上首次定位了遗传性对称性色素异常症等一大批皮肤遗传病的致病基因位点，取得了一系列具有原创性的研究成果，得到国际学术界的高度肯定。
遗传性疾病的发病机理及预防策略
遗传性疾病的发病机理及预防策略在生命的长河中，遗传性疾病如同隐藏在基因密码中的阴影，给许多家庭带来了痛苦和困扰。
了解遗传性疾病的发病机理以及采取有效的预防策略，对于我们每个人来说都至关重要。
首先，让我们来探究一下遗传性疾病的发病机理。
简单来说，遗传性疾病是由于遗传物质（即基因）发生变异或突变所导致的。
基因就像是生命的蓝图，它们指导着细胞的生长、发育和功能。
当基因出现问题时，细胞的正常活动就会受到干扰，从而引发疾病。
基因突变可以分为多种类型。
有的是单个碱基的替换，就像在一段文字中错了一个字母；有的是基因片段的缺失或插入，好比一段话中少了几个词或者多了几个词。
这些突变可能发生在生殖细胞（精子或卵子）中，从而被传递给下一代，导致先天性的遗传性疾病；也可能在个体发育过程中发生在体细胞中，引起某些特定组织或器官的疾病，如某些癌症。
遗传性疾病的遗传方式也是多种多样的。
有的是常染色体显性遗传，这意味着只要从父母一方继承了一个致病基因，就可能发病。
比如亨廷顿舞蹈病，患者通常在中年发病，出现不自主的舞蹈样动作和认知障碍。
常染色体隐性遗传则需要从父母双方各继承一个致病基因才会发病，比如囊性纤维化，患者的呼吸道和消化系统会出现严重的问题。
此外，还有性染色体遗传，比如红绿色盲，就是一种 X 染色体隐性遗传疾病，男性患者远远多于女性。
了解了发病机理，接下来谈谈如何预防遗传性疾病。
预防策略可以分为三个主要方面：遗传咨询、产前诊断和基因治疗的研究进展。
遗传咨询是预防遗传性疾病的重要环节。
对于有家族遗传病史的夫妇，或者已经生育过患有遗传性疾病孩子的夫妇，在计划怀孕前，应该寻求专业的遗传咨询师的帮助。
遗传咨询师会通过详细了解家族病史、分析遗传模式，评估未来子女患病的风险。
他们还可以提供关于生育选择的建议，比如自然受孕、胚胎植入前遗传学诊断（PGD）等。
产前诊断是在怀孕期间对胎儿进行检查，以确定是否存在遗传性疾病。
常用的方法包括超声检查、羊水穿刺、绒毛取样等。
产前诊断文章
产前诊断文章
产前诊断是一种预防遗传性疾病和出生缺陷的重要手段，通过在怀孕期间对胎儿进行检测，以确定是否存在染色体异常、基因突变或其他遗传性疾病。
产前诊断的方法包括多种，如超声检查、羊水穿刺、脐血取样和基因检测等。
在产前诊断中，超声检查是一种无创、无痛、无辐射的检查方法，通过高频声波显示胎儿的外观和内脏器官，可以检测出胎儿是否存在畸形、染色体异常等情况。
羊水穿刺是一种通过抽取孕妇子宫内羊水样本进行检测的方法，可以检测出胎儿的染色体异常和基因突变。
脐血取样是通过抽取胎儿脐带血样本进行检测的方法，可以检测出胎儿的染色体异常、基因突变和血红蛋白病等疾病。
基因检测是一种通过检测胎儿基因序列的方法，可以检测出胎儿是否存在基因突变和遗传性疾病。
产前诊断的意义在于及早发现胎儿存在的异常情况，为孕妇提供及时的治疗和建议，避免遗传性疾病的发生和传播。
同时，产前诊断还可以帮助孕妇和家庭了解胎儿的健康状况，为未来的生育计划提供指导和建议。
然而，产前诊断也存在一定的局限性。
首先，产前诊断并不能检测出所有的遗传性疾病和出生缺陷，有些疾病可能无法通过产前诊断被发现。
其次，产前诊断有一定的风险，如羊水穿刺可能导致感染、出血等并发症，脐血取样
可能导致胎儿早产等风险。
因此，孕妇在进行产前诊断时应充分了解各种方法的优缺点，并在医生的指导下进行选择。
总之，产前诊断是预防遗传性疾病和出生缺陷的重要手段，可以帮助孕妇和家庭了解胎儿的健康状况，为未来的生育计划提供指导和建议。
虽然产前诊断存在一定的局限性，但通过科学的方法和合理的选择，可以最大程度地降低出生缺陷和遗传性疾病的发生率，提高人口素质。
产前筛查和产前诊断的技术进展
产前筛查和产前诊断的技术进展随着科技的不断发展，产前筛查和产前诊断技术也取得了很大的进展。
产前筛查是指在妊娠期间通过一系列测试，来评估胎儿是否存在染色体异常或其他遗传疾病的风险。
产前诊断则是通过采样分析，确认胎儿是否存在某种具体的异常。
产前筛查技术进展1. 非侵入性产前筛查（NIPT）：这一技术是通过从孕妇的血液样本中提取胎儿DNA，进行染色体异常的筛查。
相比传统的基因检测方法，NIPT具有较高的准确性和安全性。
此外，NIPT还可以提供关于胎儿性别和Rh血型的信息。
2. 超声波筛查：超声波技术被广泛应用于产前筛查中，可以检查胎儿的器官结构和发育情况，以及可能存在的染色体异常。
近年来，3D和4D超声波技术的发展，使得对胎儿的观察更加清晰和准确。
3. 疾病特异性筛查：针对特定遗传性疾病的筛查方法也得到了不断改进和发展。
例如，血液检测可以用来筛查地中海贫血等血液疾病；一些基因突变的检测方法则可用于明确特定遗传疾病的风险。
产前诊断技术进展1. 羊水穿刺：羊水穿刺是一种较为常见的产前诊断方法，通过穿刺采集胎儿的羊水，进行染色体分析或其他相关检测。
羊水穿刺可以提供准确的结果，但由于技术操作的复杂性和一定的风险，需要在专业医生的指导下进行。
2. 绒毛活检：这是一种采集胎盘组织样本进行诊断的方法。
通过绒毛活检，可以检测到染色体异常、先天性疾病等问题。
相比羊水穿刺，绒毛活检手术操作较简单，风险较低。
3. 无创产前诊断（NIPT）：与NIPT的产前筛查相对应，无创产前诊断（NIPD）是指通过孕妇血液中的胚胎细胞自由DNA片段，进行特定疾病或染色体异常的诊断。
这一技术的发展，为孕妇提供了避免侵入性检测的选择。
总结起来，产前筛查和产前诊断技术的进展，为孕妇提供了更多准确、无创、安全的选择。
然而，值得注意的是，这些技术虽然具有高度准确性，但并不意味着能够完全排除风险，还需要综合其他因素进行综合判断。
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遗传性皮肤病产前诊断研究进展吴 艳1,谢艳秋2综述 朱学骏1审校(11北京医科大学附属第一医院,北京100034;21天津长征医院,天津300001) 摘要:本文着重介绍对一些遗传性皮肤病的产前基因诊断方法及近来的发展。
包括:①4种获取胎儿DNA 的方法:羊膜腔穿刺、胎盘绒毛膜活检、孕妇外周血分离胎儿细胞,植入前裂球细胞取材;②基因分析的主要方法:已知突变位点的可采用DNA 直接测序法,等位基因特异性寡核苷酸探针法(A SO ),限制性内切酶片段长度多态性(R FL P s )等方法,对于突变位点未知者则进行家族单体性连锁分析。
关键词:产前基因诊断;遗传性皮肤病中图分类号:R 75815 文献标识码:A 文章编号:100121048(2000)0620309204收稿日期:1999210225作者简介:吴 艳,女,1973年出生,住院医生,博士 许多遗传性皮肤病如大疱性表皮松解症等缺乏有效的治疗手段,部分疾病有致死性,部分即使患者存活下来也会严重影响其生活质量。
因此进行产前诊断,以及早对患儿采取必要的防治措施是十分必要的。
在1992年以前,这类疾病的产前诊断只能在孕18～20周时,B 超引导下取胎儿皮肤活检,作组织病理检查电镜或单克隆抗体免疫荧光检查等以作出诊断[1～4]。
但这种有创伤性的方法会引起流产,胎儿皮肤瘢痕等弊端。
随着分子生物学研究的进展,人们对这类疾病的致病基因有了较清楚的认识,从而使产前基因诊断成为可能。
本文对近年来国际上进行遗传性皮肤病产前诊断的方法与进展作一综述。
1 获取胎儿DNA 的方法111 羊膜腔穿刺(am n i ocen tesis ,AM N )羊膜腔穿刺是在孕15～17周在超声引导下抽取10～15m l 羊水,对其中的胎儿细胞进行培养,经过一周左右在培养细胞约2×106个时收获[9],提取胎儿DNA 。
也可以直接从羊水离心提取胎儿DNA 。
后者所需羊水量比前者大,但母体细胞污染比前者轻。
因为培养时间长了,可让母体的生长缓慢的纤维母细胞和上皮细胞赶上羊水中胎儿细胞的生长[36]。
选择此孕期是由于羊水量大,约250m l ,且有足够的成活细胞用于培养。
随着高分辨超声的应用,早期即孕10～14周羊水穿刺也获得了类似孕中期羊水穿刺的结果[5,6]。
此方法相对简单,技术要求低,在产前诊断成功率高,是目前国内采用的主要方法。
主要并发症有:羊膜腔穿刺可造成自然流产,流产率0.5%～1.5%。
本方法要求高分辨超声,操作熟练,对有解剖不利因素如肥胖、子宫异常的患者不适合用本方法[7]。
112 胎盘绒毛膜活检(cho ri on ic villu s sam p ling ,CV S )即在孕9～11周B 超引导下吸取10～15m g 胎盘绒毛膜组织,进行细胞培养或直接提取胎儿DNA 。
有经腹(TA CV S )、经宫颈(TCCV S )和经阴道(TV CV S )三种途径。
CV S 是目前世界上最常用的,安全、可靠的孕早期产前诊断方法之一。
与AM N 相比它具有能在孕早期进行产前诊断,和可以不需要细胞培养等优越性。
但此方法对设备和技术的要求比AM N 高,国内普及情况不如AM N 。
CV S 主要并发症为自然流产,流产率:TA CV S 3.5%,TV CV S 3.7%～5.5%,TV CV S 无统计资料[10]。
据B u rton 等报道,CV S 可导致胎儿肢体畸形。
他观察391例成活婴儿其中4例发生横断畸形(1%),比正常婴儿1.8 10000的几率要高[8]。
对于双胞胎其胎盘分界不清者最好选用AM N [7]。
目前世界上对遗传性皮肤病的产前诊断多采用CV S 方法[11,12]。
113 孕妇外周血分离胎儿细胞(m aterm alb loodsam p ling )[7]即从孕妇外周血中分离纯化出胎儿有核红细胞,用于产前诊断。
研究表明通过胎盘屏障进入母血的胎儿细胞有三种:有核红细胞、滋养层细胞和淋巴细胞,其中胎儿有核红细胞最适合用于产前诊断。
文献报道可利用抗转铁蛋白()单克隆抗体,经流式细胞计数仪分离得到胎儿单个有核红细胞[13]。
再选用针对CD38和GPA(glucop h rin A)的单抗结合使用提高敏感性。
此方法无创伤,较AM N 和CV S更易被孕妇接受。
但要排除母体细胞污染,提高其特异性;并需进一步开发合适的基因标志,以提高其敏感性。
尽管还没有报道用此方法产前诊断遗传性皮肤病,但随着分离技术的改进和常规化,此方法有可能取代AM N和CV S,成为一个实用的产前诊断方法。
114 植入前裂球细胞取材(p rei m p lan tati on b lastom ere analysis)对于体外人工受精的胚胎,可在8个细胞裂球期,取出其中一个细胞提取DNA进行产前诊断[12]。
同时将其余7个细胞用细胞培养或低温冷冻的方式保存,若基因分析结果表明没有携带异常基因,再将胚胎植入子宫中[14,15]。
此方法避免了孕期进行有创伤性产前诊断所造成的流产等副作用,而且可以在着床前诊断。
但技术要求高,且只适用于体外受精的病例。
目前此方法已应用在诊断囊性纤维化等疾病中[16,17]。
2 基因分析方法对于家系成员及胎儿的DNA进行基因分析,是产前诊断最关键的部分。
面对多种基因分析方法,应根据致病基因突变的特点,选择适合的方法。
可将遗传性皮肤病致病的基因突变分为缺失性突变和非缺失性突变(包括点突变,插入等)两大类。
对于缺失可以用基因定位法(gene m app ing)[7]。
因为遗传性皮肤病的基因突变没有缺失性突变,所以目前没有用此法诊断遗传性皮肤病的报道,故不详述。
对于非缺失性突变又可分为两类,一类是已知突变位点或其好发的热点区域者,可采用直接分析,常用的方法有:DNA直接测序、A SO、R FL P s、变性梯度凝胶电泳(denatu ring gradien t gel electrop ho resis,DD GE)等;另一类是基因突变定位不清或同一疾病存在多个突变,而这些突变又不能分别被检测出来,这些病例应采用家族单体型连锁分析(hap lo typ e linkage analysis)。
211 DNA直接测序适用于已知致病的基因突变的好发区域,且突变多为点突变者。
可根据好发区域设计特异引物,以PCR进行特异性扩增,然后对产物直接测序,检测有无突变。
应用时作正常对照以除外检测到的突变是正常多态性表现的可能。
此方法直接、简便、对于有多个好发区域者可结合异源双链分析(heterrodup lex analysis)筛选,对于出现异常条带的外显子再进行直接测序,使这种方法更经济、省时。
但其要求有直接测序仪,且测序的基因片段长度不能太长。
Jo sep h等[11]于1993年成功地应用此方法对一个表皮松解性角化过度的鱼鳞病家系进行产前诊断。
以往的研究表明该病多为点突变造成核苷酸替换,Jo sep h等根据该病突变好发区域对该家系的K1的H1区、K1和K10的1A和2B区进行直接测序,发现了K10的1A区Y14N的致病突变,而家系中正常成员及50个对照者均无此突变,从而除外其是多态性表现,并对胎儿成功地进行了产前诊断。
Sh i m izu等[18]用类似方法对一个致死型—交界型EB家系进行产前诊断。
分别发现了来源于父母双方的突变位点,并对胎儿DNA可疑片段直接测序,从而进行产前诊断。
B ichak jian等[9]也于1997年成功地用此法产前诊断了一个携带有板层状鱼鳞病致病基因而表型正常的胎儿。
212 等位基因特异性寡核苷酸探针法(allele2 sp ecific o ligonucleo tide,A SO)即针对正常基因和致病基因分别设计了一个20bp左右的寡核苷酸探针,能分别与二者杂交,用这两个探针检测胎儿是否携带有致病基因。
方法有:酶切后电泳杂交法和酶切后直接杂交的斑点法,后者简便较粗略。
A SO为目前产前诊断最常用的方法之一[19,20]。
可用于大范围筛选患者和携带者。
但要设计并标计寡核苷酸探针,还需要特异的仪器读取结果,因此技术要求高。
Sh i m izu等[8]1992年首次运用此方法对日本一例眼2皮肤白化病(O TC)家系进行产前诊断。
针对日本O TC突变好发于3p22p3.21的外显子1、2分别设计了4条寡核苷酸链,与家系成员杂交发现此家系突变在外显子2而胎儿DNA与外显子2标记杂交显示其只与正常型杂交。
因此为健康胎儿。
Joelly2V ailly等[24]对一个致死性交界性大疱性表皮松解症(H2JEB)家系进行产前诊断。
针对该家系LAM B31760delC纯合子为患者,运用相同的方法准确地产前诊断了一个基因型和表型均正常的胎儿。
1994年Sh i m izu等又用此方法成功地对一个H 2JEB 家系进行产前诊断,成为该病亚洲第一例。
213 限制性内切酶片段长度多态性(restricti on fragm an t length po lym o rp h is m ,R FL P )由于人体基因组DNA 中核苷酸变异导致限制性内切酶酶切位点的变化(增加或消失)。
从而用特异的酶切DNA 后,正常人与患者的片段长度会出现多态性,借此可以区分二者。
此方法适用于满足下列条件的家系:①已知突变位点。
②该突变会产生或消失特定的内切酶位点。
这种方法具有一定的局限性,当突变位点没有引起内切酶位点改变时就无法使用,此时可采用A SO 杂交法。
由于要从众多的内切酶中找出合适的内切酶,此方法工作量较大。
M cGrath 等[23]曾用R FL P 对一个隐性遗传的营养不良性大疱性表皮松解症(RD EB )家系进行产前诊断。
研究发现此家系中致病基因为纯合点突变G 2570R ,产生了M n l I 酶切位点,对于家系成员DNA 酶切后结果与临床型一致。
对胎儿DNA 酶切后发现缺乏M n l I 酶切位点。
因此是一个纯合子正常胎儿。
Sh i m izu 等[19]等研究了一个日本H 2JEB 家系,直接测序发现父系致病基因为1929delCA 减少了M ac 的内切酶位点,而母系突变是W 610X 产生了B c 并消失了V an 91I 酶切位点。
用R FL P 方法成功地诊断了一个表型正常的杂合子。
214 家族单体型连锁分析(fam ily hap lo typ elinkage analysis )[24]原理是假定一种DNA 多态性标记和某一致病基因紧密相邻,在同一条染色体上,且比稍远离的基因位点与该致病基因之间有更小的重组几率。
如图1a 已知与正常基因A (黑方框)连锁的是T 2R +,而与突变基因a (白方框)连锁的T +R +,通过检测T (+ -)就可以得知其继承了正常 异常基因。