亲和色谱技术及其在药物发展中的应用
简述亲和色谱的原理及应用

简述亲和色谱的原理及应用亲和色谱(Affinity chromatography)是一种分离和纯化生物大分子(如蛋白质,核酸)的方法,通过利用生物大分子与特定结构或化学团的选择性相互作用,实现目标分子的吸附和洗脱。
亲和色谱的基本原理是利用亲和剂来特异性选择性地结合目标分析物,而不影响其他非目标分析物的分离。
亲和色谱通常包括固定相、饱和剂和洗脱剂。
亲和色谱的基本原理可以通过以下步骤来描述:1.固定相选择:选择合适的固定相材料,能够与目标分析物发生特异性的相互作用。
常用的固定相有分子筛、离子交换树脂、亲和剂固相。
2.亲和剂选择:选择合适的亲和剂,能够特异性结合目标分析物。
亲和剂可以是与目标分析物发生物理或化学相互作用的配体,也可以是其他与目标分析物有关的结构。
3.亲和剂固定:将亲和剂固定在固定相上,通常通过化学交联或其他方法实现。
这样可以将亲和剂与固定相材料紧密结合,避免在洗脱过程中亲和剂的流失。
4.样品处理:将待分离的样品加入到色谱柱中,使目标分析物与亲和剂发生结合。
在结合过程中,非目标分析物会通过无关亲和相互作用而被移除。
5.洗脱:通过改变洗脱剂的条件或温度,打破目标分析物与亲和剂之间的结合,使目标分析物从固定相上洗脱下来。
亲和色谱有着广泛的应用领域,其中一些重要应用包括:1.蛋白质纯化:亲和色谱是蛋白质纯化中最常用的方法之一、可以通过与目标蛋白质特异性结合的亲和剂来纯化目标蛋白质,例如通过与抗体或配体结合的蛋白A和蛋白G分离抗体。
2.药物筛选:亲和色谱可用于筛选和鉴定与特定药物分子发生高亲和力结合的分子目标。
这种方法在药物发现和药物研究中发挥着重要作用。
3.蛋白质-蛋白质相互作用研究:亲和色谱可以用于研究蛋白质-蛋白质相互作用,帮助揭示生物系统中蛋白质间的相互作用网络。
4.核酸纯化:通过与目标核酸特异性结合的亲和剂,如亲和树脂或亲和柱,可以高效地纯化目标核酸。
5.细胞分离:亲和色谱可以用于分离不同细胞亚群或纯化特定类型的细胞,通过与特定细胞表面标记物结合。
色谱分析技术在生物医药领域的应用

色谱分析技术在生物医药领域的应用色谱分析技术是一种非常重要的化学分析方法,已经得到了广泛的应用。
色谱分析技术具有高效、高灵敏度和高分辨率等优点,因此可以广泛应用于生物医药领域。
下面我们就来介绍一下色谱分析技术在生物医药领域的应用。
一、蛋白质分析蛋白质分析是生物药物研究和开发的重要环节之一。
在蛋白质分析中,色谱分析技术发挥了非常重要的作用。
比如,在蛋白质纯化过程中,可以利用离子交换色谱层析、凝胶过滤层析、逆相高效液相色谱、亲和层析等各种色谱技术提高蛋白质的纯度和产量。
另外,蛋白质分析也需要定量研究。
此时,可以利用逆相高效液相色谱等技术对蛋白质进行分离,并进行定量分析。
二、生物大分子分析生物大分子如核酸、糖类等,具有非常复杂的结构和特性。
在生物大分子研究中,色谱分析技术也是非常重要的。
比如,在核酸分析中,离子交换层析常用于DNA和RNA的纯化和分离。
另外,凝胶过滤层析可以用于寡核苷酸的纯化。
在糖类分析中,离子交换色谱和凝胶过滤层析也是常用的分离方法。
此外,差示扫描量热法(DSC)和核磁共振(NMR)是具有分辨力的生物物理化学技术,它们也经常与色谱分析技术相结合,用于生物大分子的结构分析和性质研究。
三、药物代谢分析药物代谢研究是新药开发的一项关键研究领域。
在药物代谢分析中,色谱分析技术也是一项重要的分析方法。
比如,在肝脏代谢药物中,可以利用高效液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术,对药物在体内的代谢产物进行分析和鉴定。
此外,毛细管电泳-质谱联用也可以用于药物代谢分析。
这些技术的应用,不仅可以快速、准确地鉴定药物的代谢产物,而且还能研究药物的代谢机制。
四、毒物分析对毒物进行分析和鉴定是毒物学的一项重要研究领域。
在毒物分析中,色谱分析技术也有着非常重要的应用。
比如,在毒物分析中,逆相高效液相色谱(HPLC)和毛细管气相色谱(GC)都是常用的分析方法。
HPLC可用于毒物的纯度分析和成分分析,GC常用于气态毒物化合物的分析。
亲和色谱技术及其在药物研发中的应用

色谱分析结课综述亲和色谱技术及其在药物研发中的应用姓名:郭海耀班级: 2011级6班学号:2011110195亲和色谱技术及其在药物研发中的作用郭海耀内蒙古医学院 2011级6班摘要:亲和色谱法是利用化合物和药物作用靶之间的亲和活性,将目标化合物从大量无亲和活性的化合物中分离出来的一种方法,具有色谱分离和活性筛选可同时进行的特点,特别适合于研究复杂体系中的效应物质。
以生物和非生物来源物质为配基的各种亲和色谱在药物活性成分分析中得到了广泛应用,已逐渐成为一种重要的技术手段。
该文归纳了亲和色谱原理在药物研发中的几种应用形式,并对其应用概况和前景进行了讨论,以期更好地利用这一分析工具。
关键词:亲和色谱蛋白纯化分离筛选应用研究现代色谱法是药物研究中应用最为活跃的分离分析技术之一, 在药品质量控制、新药研发、生物医学分析等领域占据举足轻重的地位。
在种类繁多的现代色谱法分支中, 有一种利用生物分子间亲和力进行分离的液相色谱技术, 称之为亲和色谱法(affinity chromatography, AFC)[1]。
目前,新的提取分离技术尤其是各种色谱技术已广泛应用于天然药物的有效成分研究,但很多色谱分离、分析模式都是基于混合物间理化性质的差异,并未包含任何药理功能的信息。
AFC是根据生命现象中生物大分子间高亲和力与高专一性可逆结合而设计的一种独特的色谱分离方法。
在亲和色谱中,将能与潜在药物(配体)特异结合的物质(配基),如靶蛋白等固定于色谱填料上制备色谱柱,再将待分离混合物与色谱柱固定相一起孵育后,以洗脱液洗脱或不经孵育,使混合物缓慢、连续地通过色谱柱,即可实现混合物间以亲和性为基础的分离[2]。
亲和色谱一般使用生物来源的配基,但随着其应用范围的扩大,一些非生物来源的配基也逐渐被采用。
亲和色谱是利用偶联了亲和配基的亲和吸附介质为固定相来亲和吸附目标产物, 使目标产物得到分离纯化的液相色谱法。
亲和色谱已经广泛应用于生物分子的分离和纯化, 如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等;也可以用于分离细胞、细胞器、病毒等。
新冠疫苗 亲和色谱 -回复

新冠疫苗亲和色谱-回复新冠疫苗是当今全球关注的焦点话题之一,而亲和色谱则是一种常用的分离和纯化技术。
本文将会详细介绍新冠疫苗的亲和色谱进展,以及亲和色谱在疫苗研发中的应用。
一、新冠疫苗简介新冠病毒是一种由SARS-CoV-2引起的呼吸道传染病,其传播速度极快,严重威胁着全球人民的健康和经济。
为了应对疫情,科学家们积极开展了新冠病毒疫苗的研发工作。
二、亲和色谱的基本原理亲和色谱是一种分离和纯化生物大分子的方法,通过利用生物分子之间相互作用的特异性,使目标分子选择性地与固定相结合。
常见的亲和色谱方法包括亲和层析和亲和吸附。
三、亲和色谱在新冠疫苗研发中的应用新冠疫苗的研发是一个复杂而漫长的过程,其中亲和色谱技术发挥了重要作用。
下面将介绍亲和色谱在新冠疫苗研发中的几个典型应用。
1. 抗原纯化亲和色谱可以用于抗原的纯化,以获得高纯度和高活性的抗原。
研发新冠疫苗时,科学家需要从新冠病毒中提取出目标抗原,并将其纯化,以便后续的疫苗研究和制备工作。
2. 抗体纯化研发新冠疫苗的关键是获得高效的抗体。
亲和色谱可用于抗体的纯化,以去除杂质和其他非特异性成分。
纯化后的抗体可用于体外研究、体内动物试验以及临床试验等。
3. 抗体结构研究亲和色谱还可以用于抗体结构的研究。
通过利用与特定抗体亲和的配体分离,科学家可以更好地了解抗体的结构和功能。
这对于了解抗体的作用机制以及优化疫苗设计具有重要意义。
4. 结合亲和素的载体构建研发新冠疫苗时,科学家还需要将目标抗原与亲和素结合,以获得更好的免疫原性和稳定性。
亲和色谱可以用于合成亲和素与目标抗原结合的载体,为疫苗研发提供有力支持。
四、新冠疫苗研发中的亲和色谱进展近年来,亲和色谱在新冠疫苗研发中得到了广泛应用,并取得了一些重要进展。
1. 抗原纯化的改进传统的亲和色谱方法在抗原纯化中存在一些问题,比如选择性不高、纯化效率低等。
研究人员通过改进亲和色谱的材料和工艺,提高了抗原纯化的效率和纯度。
亲和色谱技术在药物分析中的应用进展

亲和色谱技术在药物分析中的应用进展王嗣岑;贺晓双【摘要】亲和色谱是依靠键合在固定相上的配位体与生物活性目标分子间特异性的识别与可逆的亲和作用,实现生物分子选择性分离的一种液相色谱分析方法.该方法具有高选择性、高回收率等特点,可同时进行色谱分离及活性筛选,广泛应用于活性产物的筛选、分离和纯化.本文简述了生物特效亲和色谱、印迹分子亲和色谱、染料配基亲和色谱等几种常用亲和色谱技术,综述了近年来亲和色谱在手性药物拆分、天然药物中活性组分筛选、活性蛋白分离纯化及药物-蛋白相互作用研究中的应用,并对其应用前景进行了展望.%Affinity chromatography (AC)is a type of liquid chromatography that makes use of biological-like interactions for separation and specific analysis of bioactive components. It has been widely used as a high-throughput screening method for the separation,screening and purification of the target molecules from complex samples with advantages such as high selectivity and high recovery efficiency.This article summarizes the biological effects of affinity chromatography, molecular imprinting chromatography, and dye ligands affinity chromatography.The review also encompasses the application of AC in the separation of chiral drugs,screening of active components,purification of target protein,and mechanism of the drug-protein interaction.Moreover,the prospects of its applications are also discussed.【期刊名称】《西安交通大学学报(医学版)》【年(卷),期】2017(038)006【总页数】8页(P777-784)【关键词】亲和色谱;药物分析;手性药物拆分;活性成分筛选;药物蛋白相互作用;生物大分子【作者】王嗣岑;贺晓双【作者单位】西安交通大学药学院,陕西西安 710061;陕西省心血管药物工程技术研究中心,陕西西安 710061;西安交通大学药学院,陕西西安 710061;陕西省心血管药物工程技术研究中心,陕西西安 710061【正文语种】中文【中图分类】R917亲和色谱(affinity chromatography)是利用生物分子与亲和色谱固定相表面配位体之间的特异性亲和吸附作用,进行选择性分离生物分子的一类色谱方法[1]。
简述亲和色谱的原理及应用

简述亲和色谱的原理及应用1. 亲和色谱的原理亲和色谱(Affinity Chromatography)是一种利用生物分子之间相互作用特异性的柱层析技术,用于分离和纯化目标生物分子的方法。
其原理基于目标分子与某种具有亲和性的配体之间的结合。
亲和色谱一般包括以下几个步骤:1.1 选择亲和配体亲和色谱的关键在于选择合适的亲和配体。
亲和配体通常是与目标分子特异结合的配体分子,可以是蛋白质、酶、抗体、核酸等。
这些配体分子可以与目标分子通过非共价键的方式相互作用,如氢键、离子键、范德华力等。
1.2 制备亲和柱选定亲和配体后,将其固定在柱子的填料上,形成亲和柱。
常用的填料材料有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
1.3 样品处理待分离的混合样品需要预处理,如移除杂质、调整pH值等,以保证目标物能够与亲和配体有效结合。
1.4 样品进样将处理好的样品加入亲和柱中,使样品中的目标分子与亲和配体结合。
1.5 洗脱目标物通过改变洗脱缓冲液的条件(如pH值、离子浓度等),使与亲和柱上的配体结合的目标物分离出来。
2. 亲和色谱的应用亲和色谱由于其选择性高、纯度好的特点,被广泛应用于生物分子的分离与纯化。
以下是亲和色谱在不同领域的应用:2.1 蛋白质纯化亲和色谱是蛋白质纯化领域中最常用的技术之一。
通过选择适当的亲和配体,可以高效地富集目标蛋白质并去除杂质。
常见的亲和配体有镍离子亲和、蛋白A/G 亲和等。
2.2 抗体纯化亲和色谱也被广泛应用于抗体纯化领域。
通过与抗体特异结合的蛋白质A/G或蛋白L亲和柱,可以高效地富集抗体。
2.3 酶分离亲和色谱还可以用于酶的分离与纯化。
通过选择酶的亲和配体(如底物类似物或抑制剂),可以实现对酶的高效富集。
2.4 药物筛选亲和色谱在药物筛选领域也有应用。
可以通过与药物靶点的亲和配体相结合,筛选出与目标结合能力较强的化合物。
2.5 核酸分离亲和色谱还可以用于核酸的富集与分离。
例如,通过与亲和配体寡聚核苷酸的亲和柱,可以纯化含有特定序列的DNA或RNA。
药物分析中的亲和层析法应用研究

药物分析中的亲和层析法应用研究亲和层析法(affinity chromatography)是一种基于亲和性的分离和纯化方法,广泛应用于药物分析领域。
本文将探讨亲和层析法在药物分析中的应用,并介绍其原理、操作步骤和优势。
一、亲和层析法概述亲和层析法是利用配体与目标分子之间的特异性相互作用进行分离和纯化的技术。
在药物分析中,亲和层析法通常用于研究药物与其靶标蛋白之间的相互作用、药物结合位点的鉴定和药物的筛选。
二、亲和层析法的原理1. 亲和剂的选择在亲和层析中,选择合适的亲和剂是至关重要的。
亲和剂通常是目标分子的衍生物或具有特异性结合能力的化合物,如抗体、金属离子等。
通过调节亲和剂与目标分子之间的结合条件,实现目标分子的选择性结合和纯化。
2. 亲和层析纯化步骤亲和层析法的纯化步骤一般包括样品处理、进样、洗脱和再生等过程。
首先,将样品与亲和层析柱填料之间的非特异性结合物洗脱,然后再用合适的洗脱缓冲液洗脱目标分子。
3. 分离效果评价亲和层析分离的效果主要通过检测目标分子在洗脱峰的峰面积或峰高来评价。
分离的效果好坏不仅取决于亲和剂的选择,还与样品的纯度、目标分子的亲和性以及平衡时间等因素有关。
三、亲和层析法在药物分析中的应用1. 药物与蛋白的相互作用研究亲和层析法可用于研究药物与蛋白质之间的结合特性以及药物-蛋白复合物的稳定性和解离动力学等。
通过该方法,可以揭示药物与蛋白之间的相互作用机制,为药物的设计和改进提供重要的依据。
2. 药物结合位点的鉴定亲和层析法可以用于鉴定药物在蛋白质分子中的结合位点。
通过与不同的亲和柱进行层析,可以确定药物与蛋白分子的结合位点,进而揭示药物与蛋白质之间的结构和功能关系。
3. 药物筛选与优化亲和层析法可用于筛选具有高亲和力和高选择性的药物。
通过将潜在药物与亲和剂结合,并利用洗脱步骤将药物从亲和剂中洗脱,可以筛选出具有良好亲和性的药物并进行后续的优化。
四、亲和层析法的优势1. 高选择性:亲和层析法可通过调节亲和剂和目标分子之间的结合条件,实现高度选择性的纯化和分离。
色谱分析技术在新型药物制造中的应用

色谱分析技术在新型药物制造中的应用近年来,随着科学技术的不断发展,新型药物在人类的生活中发挥着越来越重要的作用。
那么新型药物的研制过程中,需要用到哪些技术呢?其中一种核心技术就是色谱分析技术。
色谱分析技术是一种将混合物中各种物质分离(分开)并测定有关各种成分的方法。
在药物研制过程中,色谱分析技术主要用于新药的结构分析、活性成分的纯化、药品质量评价等方面,快速准确的分析品质对于新药研制是非常必要的。
一、色谱分析技术在新药结构分析中的应用药物研制过程中的一个重要部分就是对新药结构的分析,并确定药物分子结构验证新型药物的设计理念是否可行。
这时需要使用到一些分析仪器例如核磁共振和质谱仪,而色谱分析技术有着广泛的应用。
色谱分析技术常用于分离和分析新药中的杂质和常规化合物,以提供精确的结构分析。
通过检测样品在不同条件下的分离效果,从而确定样品不同组分之间的结构差异与相似点,优化分离条件,达到分离某一特定物质的目的。
二、色谱分析技术在新药纯化和纯度分析中的应用新型药物结构分析结束后,得到一种含有目标化合物和许多杂质的混合物。
随后需要纯化出单一的目标化合物并确认其纯度。
色谱分析技术可以用于识别、分离和净化新药中的目标成分,从而保证产品的质量。
同时,色谱分析技术还可以有效的检测蛋白质、核酸等大分子,达到药物纯度分析的目的。
三、色谱分析技术在新药品质量评价中的应用色谱分析技术在决定一种新型药物是否成为优秀品质的重要因素之一。
新型药物通过分离发现,分离纯化和结构鉴定之后,需要进行药品质量评价。
通过对药物的性质、热力学性质、化学稳定性、储存稳定性等方面的检验,以确定新药的质量标准,并控制最终药品的质量。
色谱分析技术通过高灵敏度、高精度等特点,为新药质量评价提供了强大的支撑。
综上所述,色谱分析技术在新型药物研制过程中扮演着不可或缺的角色。
对于药物的结构分析、分离纯化、药品质量评价等方面都有着广泛的应用。
随着科技水平的不断提高,相信色谱分析技术在新型药物的研制过程中会有更多的应用和发展。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
2012年1月内蒙古科技与经济Januar y2012 第2期总第252期Inner M o ngo lia Science T echnolo gy&Economy N o.2T o tal N o.252亲和色谱技术及其在药物发展中的应用X张薇薇,郭宝凤(内蒙古医学院研究生院,内蒙古呼和浩特 010059) 摘 要:亲和色谱技术应用越来越广泛,已成为生物工程中分离纯化最有效的技术之一,在药物的活性成分的提取和筛选中也发挥了重大作用。
本文对亲和色谱技术及其在药物发展中的应用进行综述。
关键词:亲和色谱技术;药物发展;生物工程 中图分类号:T Q460.7+2 文献标识码:A 文章编号:1007—6921(2012)02—0105—02 亲和色谱法是依据生物大分子能够与配体特异、可逆地结合在一起的特性,从复杂的生物样品中分离得到所需的目标产物。
它基于生物大分子与配体之间的生物学特异性,具有选择性强、纯化效率高、活性回收率高等优点[1]。
基于分子识别原理的亲和色谱常被描述为在蛋白质纯化技术中效率和选择性最高的分离方法[2],也为天然植物药中有效成分的提取、中药复方的定性定量分析等方面提供了实验依据。
1 亲和色谱技术1.1 免疫亲和色谱免疫亲和色谱(IAC)是一种将免疫反应与色谱的差速迁移理论结合而建立的一种色谱方法。
简单来说,它是利用抗体与其相应抗原的作用具有高度的特异性和高度结合力的特点,从而从复杂样品基质中分离出分析物和纯化各自互补的免疫物质[3]。
随着新的合成基质和偶联化合物的出现以及对免疫亲和色谱研究的深入,必将使免疫亲和色谱在工业性生产纯化蛋白质的应用上逐渐得到发展[4]。
1.2 细胞膜色谱(CMC)法细胞膜色谱法是研究药物与受体之间相互作用的一种新型亲和色谱技术,是将活性组织细胞膜固定于特定载体表面,制备成细胞膜固定相,用液相色谱法研究药物或化合物与固定相上细胞膜及膜受体的相互作用的方法。
具有操作方便、稳定可靠、高效灵敏的优点。
目前,胸主动脉细胞、巨噬细胞等的细胞膜色谱都已建立并用于活性组分筛选工作[5]。
1.3 电泳亲和色谱电泳亲和色谱技术是将电泳与亲和色谱相结合形成一种新型制备规模的生物分离技术即电泳亲和色谱技术,其基本思想是利用电场强化扩散过程以加速分离过程的进行[6]。
1.4 开管毛细管亲和色谱开管毛细管亲和液相色谱(OT AC)是一种新的亲和色谱模式,由于其具有流动相和样品消耗量小、峰形尖锐、分析时间短等特点,对微量复杂生物体系中活性生物大分子的定量测定将有广阔的应用前景。
田瑞军等[7]使用内径为50L m的毛细管,在该毛细管内壁成功地键合了磺胺类药物磺胺甲基异嗯唑,采用流动相切换洗脱技术,利用毛细管电泳的压力系统进行了亲和色谱实验,可将胰蛋白酶和其他三种蛋白质(牛血清白蛋白,人血清白蛋白和卵清蛋白)进行了有效的分离。
1.5 染料配基亲和色谱染料亲和色谱是染料配基能通过共价键牢固地结合到亲和载体上。
染料配基由于价格低廉、与蛋白质的结合容量高,并且不易为物理或化学物质所降解,因此是一种较为理想的基团特异性配基[8]。
周冬梅等[9]以甲基丙烯酸缩水甘油酯、纤维素复合膜为基质,分别以蛋白A、人免疫球蛋白G、三嗪染料、铜离子为配基,用不同方法制备了适合于分析及小量制备的高效亲和膜色谱介质。
1.6 高效亲和色谱将高效液相色谱与亲和色谱两种色谱模式有机地结合起来,大大提高了亲和色谱的分离效率。
目前,大部分的高效亲和色谱柱以硅胶或有机聚合物作为基质材料,通过连接各种亲和配基对生物大分子进行分离纯化[10]。
蔡晓明等[11]采用高效亲和色谱技术(HP AC),首先采用点击化学的方法制备了表面键合有HSA蛋白的硅胶固定相并装填成亲和色谱柱,测定了葛根素和告依春两种中药成分与HSA 蛋白的结合率。
HP AC分析速度快,可以作为研究药物与蛋白相互作用的一种快速简便的方法。
2 亲和色谱在药物发展中的应用2.1 在中药复杂体系中有效成分的分离和筛选应用现代科学技术研究中药有效成分,是中药现代化研究的重要内容。
李剑勇等[12]利用分子烙印高分子制成亲和色谱柱,利用色谱分离技术的高速高效性和质谱测定技术的高灵敏度和独有的混合解析能力,在线连接HPL C—M S,可以直接从中药复杂体系中分离、筛选出有效成分并进行直接鉴定,实现中药有效成分的分离、筛选、鉴定一体化技术。
・105・X收稿日期:2011-11-29 总第252期 内蒙古科技与经济2.2 在制剂的质量控制上的应用对制剂的质量控制是医药工作者研究的关键问题。
明德松等[13]采用硼酸盐亲和层析高压液相法和高压液相法,对糖化血红蛋白(HbA1c)进行体外检测,结果用复合保护剂制备HbA1c检测用液体质控物具有与人全血性状相近,不需复溶,储存时间长,在室温(18℃~25℃)可保存1个月,在4℃~8℃至少可保存6个月。
2.3 在药物与蛋白结合中的应用HPAC常被用于分析药物与血浆蛋白的结合,可由药物的电泳迁移率的连续变化计算出药物与蛋白的结合常数。
药物在蛋白上的结合位点可采用已知结合位点的置换剂来鉴别[14]。
刘丽婷[15]采用前沿色谱法测定阿魏酸、丹皮酚、葛根素、绿原酸、香草酸这五种中药活性成分在固定化HSA柱上的吸附量,应用L ang rnuir和Bi—L ang muir两种结合等温线模型判断五种中药活性成分与固定化HSA的结合位点种类数。
结果阿魏酸、丹皮酚、绿原酸、香草酸与HSA均只存在一类结合位点,而葛根素与HSA存在两类结合位点。
具有分离功能的亲和色谱不仅可以测定药物和蛋白质的结合常数、结合位点,而且还可以模拟研究多种中药活性成分之间在动物体内与血清蛋白作用的竞争过程,因此在中药活性成分与蛋白质相互作用研究中具有广阔应用前景[16]。
2.4 用于药用植物活性成分的粗筛选郑晓晖等[17]以大孔硅胶为载体,采用温和的化学偶联方法,通过B2-AR色谱柱的保留特性,建立了B2-AR亲和色谱方法,并将该法用于苦杏仁粗提物中活性成分的筛选。
该法具有稳定性好和选择性强的特点,可对中药中与B2-A R作用的活性成分进行快速准确筛选,可为中药等复杂体系中药物活性成分的筛选提供新途径。
2.5 用于临床药物分析Vlat akis等[18]提出了一种新的放射性标记配体结合分析方法(M L A)测定人体血清中的药物,利用类似结构药物与标记药物竞争印迹聚合物结合部位的特点,采用茶碱或安定作为印迹分子,以甲基丙烯酸和双甲基丙烯酸亚乙酯共聚物为印迹高聚物,分析血清中的药物浓度。
利用此分析技术,他们准确测量了人体血浆中药物分子的含量。
3 结束语亲和色谱技术的高速向前发展使其应用越来越广泛。
亲和筛选法从药物和靶分子亲和作用的角度寻找活性物质,为天然植物药中有效成分的提取和天然药物活性筛选提供了新的途径[19]。
同时为研究药物与受体作用及创新药物的高通量筛选提供了细胞水平筛选平台。
并在生物技术产品、生物分子及组织的分离和纯化领域取得了令人瞩目的成就。
[参考文献][1] 孙维敏.抗体纯化中亲和色谱配体的研究进展[J].离子交换与吸附,2005,21(3):283.[2] 任军,贾凌云.亲和色谱仿生配基的筛选和设计[J].分析化学,2005,33(9):1345.[3] 张国华,赖卫华,金晶,等.免疫亲合色谱的原理及其在食品安全检测中的应用[J].食品科学,2007,28(10):578.[4] 刘望才,朱家文.亲和色谱技术研究进展[J].上海化工,2007,32(4):27.[5] 饶澄,黄显.亲和色谱法在天然药物活性成分筛选中的应用[J].药学专论,2010,19(12):19.[6] 酆韶骅,刘铮,丁富新,等.电泳亲和色谱技术分离蛋白质[J].生物工程学报,1999,15(3):408.[7] 田瑞军,谢传辉,董靖,等.固定化小分子开管毛细管亲和液相色谱初探[A].第十五次全国色谱学术报告会文集(下册)[C].北京:中国化学会,2005:704.[8] 陈天翔,聂华丽,朱利民.染料配基在亲和色谱研究进展及其在分离纯化中的应用[R].生物产业技术讨论会,2007:168.[9] 周冬梅,邹汉法,倪坚毅,等.高效亲和膜色谱快速分析及小量制备蛋白质[J].生物工程学报,1998,14(4):389.[10] 闫巍.复合配基亲和色谱填料的制备[D].杭州:浙江大学理学院硕士学位论文,2007:14.[11] 蔡晓明,张岩,于龙,等.高效亲和色谱法测定2种中药成分与人血清白蛋白的结合率[J].色谱,2011,29(4):358.[12] 李剑勇,杨亚军,张继瑜,等.中药有效成分的分离筛选鉴定一体化技术与分子烙印技术[J].时珍国医国药,2008,19(12):2901. [13] 明德松,林振忠.糖化血红蛋白液体质控物的制备及稳定性观察[J].检验医学与临床,2011,8(19):2382.[14] 刘睿,谢跃生,潘桂湘,等。
药物血浆蛋白结合率测定方法的研究进展[J].天津中医药,2007,24(6):526.[15] 刘丽婷.亲和色谱法研究五种中药活性成分与固定化人血清白蛋白的相互作用[D].西安:西北大学硕士学位论文,2009:2.[16] 雷根虎,刘丽亭,戴小军,等.中药小分子阿魏酸和丹皮酚与人血清白蛋白的竞争结合作用研究[J].化学学报,2010,68(1):60~61.[17] 郑晓晖,赵新锋,杨荣,等.B2-肾上腺素受体亲和色谱及其在苦杏仁活性成分筛选中的应用[J].科学通报,2007,52(18):2111. [18] Valt akis G,Ander sson I,M uller R,Mo sbchK.Drug assay using ant ibo dy m imics madeby mo lecul ar imprint ing[J].Nat ure,1993,361:645~646.[19] 屈晶,方唯硕,庾石山,等.新型结构活性天然产物的识别与获取新方法[J].中国天然药物,2008,6(1):6.・106・。