HPLC同时测定多种维生素检测方法
高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理
高效液相色谱法同时测维生素a和维生素d的原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种分离技术，常用于分析和测定复杂的样品中目标化合物的含量。
在测量维生素A和维生素D时，HPLC可以提供高效、准确和灵敏的分析结果。
HPLC的基本原理是将一种混合物分离成为其组成部分。
它涉及到一个流动相（溶剂）和一个固定相（填充物）。
样品在流动相中通过固定相，根据不同化学性质的相互作用以及在两者之间的亲和力选择性地分离出来。
在测量维生素A和维生素D时，下面是HPLC的基本步骤：1.样品制备：对于维生素A和维生素D的测量，样品通常是食品、血液、营养补充剂等。
样品需要进行前处理步骤，如提取、稀释和过滤，以获得可测量的分析样品。
2.色谱条件设置：选择适当的色谱柱和填料，以确保目标化合物的高效分离。
维生素A和维生素D的分子结构不同，因此可能需要使用不同的填料和溶剂体系。
3.流动相选择：选择合适的溶剂系统以实现维生素A和维生素D的分离。
流动相通常是有机溶剂和缓冲溶液的混合物。
溶剂的选择应考虑到色谱柱类型、填料性质和化合物的亲和力。
4.柱温和流速控制：控制色谱柱的温度和流速以优化分析条件。
柱温度可以影响化合物的分离性能，而流速可以影响分析时间和色谱峰形。
5.峰检测：使用适当的检测器检测样品中维生素A和维生素D的峰。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-VIS）、荧光检测器和质谱仪。
检测器的选择应根据目标化合物的特性和所需的灵敏度进行。
6.标准曲线与定量：根据一系列已知浓度的标准物质制备标准曲线，并根据样品中的峰面积与标准曲线进行定量。
通过比较样品峰的面积和标准曲线上对应峰的面积，可以确定维生素A和维生素D的浓度。
7.数据分析与结果解释：根据定量结果进行数据分析和结果解释。
可以计算样品中维生素A和维生素D的浓度，并进行统计比较或评估。
总结起来，HPLC同时测维生素A和维生素D的原理是通过将样品分离并进行检测来确定目标化合物的含量。
HPLC法同时测定复方罗布麻片Ⅰ中硫酸双肼屈嗪和3_种维生素的含量
中国药房2018年第29卷第5期China Pharmacy 2018V ol.29No.5Δ基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（No.81303216）；北京医院“科技新星”项目（No.BJ-2016-039）＊主管药师，博士。
研究方向：药物分析。
电话：010-********。
E-mail ：jessica 06250917@#通信作者：副主任药师，博士。
研究方向：药物分析。
电话：010-********。
E-mail ：j 790101@复方罗布麻片Ⅰ是由罗布麻叶、野菊花、防己、硫酸双肼屈嗪、氢氯噻嗪、盐酸异丙嗪、维生素B 1、维生素B 6和维生素B 5组成的中西药复方制剂，临床用于治疗高血压[1-3]。
现行国家标准仅对其中的氢氯噻嗪进行了含量测定[4]，而对处方中其他活性成分的含量没有规定，显然HPLC 法同时测定复方罗布麻片Ⅰ中硫酸双肼屈嗪和3种维生素的含量Δ徐硕＊，金鹏飞#（北京医院药学部/国家老年医学中心/药物临床风险与个体化应用评价北京市重点实验室，北京100730）中图分类号R 927.2文献标志码A 文章编号1001-0408（2018）05-0607-04DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.05.08摘要目的：建立同时测定复方罗布麻片Ⅰ中维生素B 1、硫酸双肼屈嗪、维生素B 6、维生素B 5含量的方法。
方法：采用高效液相色谱法对2家企业共8批次样品进行含量测定。
色谱柱为Waters XBridge C 18，流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液（梯度洗脱），流速为0.5mL/min ，检测波长为285nm （维生素B 1、硫酸双肼屈嗪、维生素B 6）、210nm （维生素B 5），柱温为30℃，进样量为10μL 。
结果：维生素B 1、硫酸双肼屈嗪、维生素B 6、维生素B 5检测质量浓度线性范围分别为41.66～208.3、127.0～635.0、40.74～203.7、22.72～113.6μg/mL （r 均为0.9999）；定量限分别为0.267、0.274、0.062、0.124μg/mL ，检测限分别为0.095、0.088、0.021、0.039μg/mL ；精密度、稳定性、重复性试验的RSD 均＜2.0％（n ＝6）；平均加样回收率分别为98.70％（RSD ＝0.69％，n ＝9）、99.74％（RSD ＝1.2％，n ＝9）、99.89％（RSD ＝1.0％，n ＝9）、99.25％（RSD ＝1.2％，n ＝9）。
HPLC法同时测定多维元素胶囊中烟酰胺、维生素B6、维生素B1和维生素B2的含量
２１ ０ ０年
第２ ２卷 第 ３期
［３ 刘荔荔， １］ 邢旺兴 ， 贾暖． ． 等 近红外漫反射光谱法测定西 洋参 中人
参 的 掺 人 萤 ［］ 中 国 中药 杂 志 。０ ３ ２ （ ） １ ．７ ． Ｊ． ２ ０ ， ８ ２ ： ８１ ９ ７
［４ 马群， １］ 郝贵奇。 延江， ． 乔 等 近红外漫反射 光谱法结合支持 向量机 测定天然牛 黄粉 中人工牛 黄的掺人 量 （］ Ｊ ．光谱学 与光谱分 析，
分析新方法 ［］ 化学学报 ，０ ３ ６ （ ）７ ２７ ７ Ｊ． ２ ０ ， １５ ：４ ．４ ．
Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 同时 测定 多维 元素 胶 囊 中烟 酰 胺 、 生 素 Ｂ 、 生 素 Ｂ 和 维 生 维 ６维 １
素 Ｂ 的含量 ２
王 琛 陈彬 彬 邹梅娟 程 刚。１ 厦门 医学 高等 专科 学校 厦门 ３ １０ ；． 门仙 岳 医院 厦 门 ３ １１ ； ， ， ， （． ６０ ８２ 厦 ６０ ２
［９ 覃锋。 １） 杨辉 华，吕琳 昂， ． Ｒ光 谱结 合 Ｌ ＥＰ Ｓ建 模用 于安 等 ＮＩ Ｌ ．Ｌ
神 补 脑液 提 取 过 程 分 析 的 研 究 ［］．中 成 药 ， ０ ８ ３ （０ ：４ ５ Ｊ ２０ ， ０ １ ） １６ ．
１ ６ ４ ８．
叶提取物 粉末中总黄酮的含量 ［］ Ｊ ．药物分析杂志 。０ ４ ２ （ ） ２０，４ １：
海峡 药学
（３ ３ 王钢 力 ， 黎 行 ， 继 ， ． 用 近 红 外 光 谱 技 术 鉴 别 红 参 药 材 聂 张 等 应 ［］ 中草 药 ，０ ８ ３ （ ）４ ８４ ０ Ｊ． ２０ ， ９３ ：３ ．４ ． ［］ 驰 ， 红 ， 爱 萍 ． 红 外 漫 反 射 光 谱 法 建 立厚 补 药 材 的 定性 模 ４余 姜 刘 近 型 （］ 药 物分 析杂 志 ，０ ９ ２ （ ） ６６６ ８ Ｊ． ２ ０ ， ９ ４ ：５ —５ ．
HPLC同时测定保健食品中4种水溶性维生素
Ｊｉ ａ ｎ ｇｓ ｕ Ｐｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ａ ｎ ｄ Ｐｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ，Ｎａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ０ ９ ，Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔｏ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ａ ｎ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ｆ ｏ ｒ ｓ ｉ ｍｕ ｌ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ４ ｗａ ｔ ｅ ｒ － ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｌ ｅ ｖ ｉ ｔ ａ ｍｉ ｎ ｓ（ ｎ ｉ ｃ ｏ ｔ ｉ ｎ ａ ｍｉ ｄ ｅ ，ｖ ｉ ｔ ａ ｍｉ ｎ
（ ＨＰ Ｌ Ｃ ） 同时 测 定 法 。方 法 样 品 经 提 取 液 提 取 、 过 滤后 ， 以Ｚ ＯＲ Ｂ ＡＸ Ｅ ｃ ｌ ｉ ｐ ｓ ｅ Ｘ Ｄ Ｂ — Ｃ １ ８化 学 键 合 硅 胶 为 固 定 相 ， 甲 醇一 １
（ 体积分数 ） 冰乙酸溶液（ 含 ５ ． ３ ｍｍｏ ｌ ／ Ｉ 己烷 磺 酸 钠 ， ｐ Ｈ２ ． ８ ， 体 积 比为 ２ ５ ： ７ ５ ） 为流 动相 ， 等度洗 脱 ， 紫外检测 器于 ２ ８ ０ ｎ ｍ 波
长 下 检 测 。结 果
４种 水 溶 性 维 生 素 在 １ ０ －１ ５ ０ ｇ ／ Ｌ线 性 范 围 内均 呈 较 好 的 线 性 关 系 ， ｒ ＞０ ． ９ ９ ９ 。该 方 法 的 检 出 限 为 ２ ～５
ｍｇ ／ １ ０ ０ ｇ・ ｍＬ， 平 均 回 收率 为 ８ Ｏ ． ９ ～１ １ ２ ． ２ ， 相对标准偏差（ Ｒ ｓ Ｄ） 为０ ． ４ ～３ ． ６ 。 结 论 高 效 液 相 色 谱 法 快 速 简 便 ，
固相萃取-HPLC测定13种复合维生素中抗氧剂BHT的含量
固相萃取-HPLC测定13种复合维生素中抗氧剂BHT的含量朱海燕;潘晓芳【期刊名称】《广东化工》【年(卷),期】2015(042)019【摘要】建立一种简便、快速的固相萃取-高效液相色谱(HPLC)测定13种复合维生素(注射用)中2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)的方法.色谱柱为Inertsil(R)ODS-SP,(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇与水(体积比90:10),流速为1.0mL/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃.结果:BHT在0.5005～32.032 μg/mL 范围内具有良好线性关系,检测限为0.12 μg/mL,定量限为0.30 μg/mL;加标回收率为86.66 ％～92.48％,相应RSD为2.77 ％～3.89％.结论:本方法快速简便,准确可靠,可用于13种复合维生素(注射用)中BHT的质量控制.【总页数】3页(P152-153,159)【作者】朱海燕;潘晓芳【作者单位】广东省医疗器械质量监督检验所,广东广州510663;广东省医疗器械质量监督检验所,广东广州510663【正文语种】中文【中图分类】O65【相关文献】1.固相萃取-高效液相色谱法测定极性注射液中抗氧剂BHT含量 [J], 曲亚南;徐苏华;陈浩瀚;谢新艺;颜林2.HPLC法测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076含量 [J], 吴漪;曲亚南3.HPLC法测定高密度聚乙烯桶包装血液透析浓缩液中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076、抗氧剂168的含量 [J], 李兴春;路杰;李洁;李来玲4.HPLC法测定高密度聚乙烯桶包装血液透析浓缩液中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076、抗氧剂168的含量 [J], 李兴春;路杰;李洁;李来玲;5.固相萃取RP-HPLC同时测定复合维生素注射液中的VA棕榈酸酯、VD3和VE醋酸酯 [J], 刘红菊;闫冲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素
血清样品在采血后立即离心，分离 血清； 置5ml塑料试管中，充氮、密封，于 -40℃保存备用。
在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入 0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶 液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空 气置换，37℃水浴1h。
冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷 /乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空 气置换，盖紧塞子，水平振荡器上振 荡5min(40次/min)；
β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏， 所以应临用新配，并注意避光保存。 样品的提取液比较稳定，可以隔夜 后进行分析。
五、思考题
1. 维生素A族维生素与能量代谢有关？
四、质量控制
1. 配制标准液时：
若有条件应对配制好的标准稀释液 维生素A、维生素E、β-胡萝卜素 200～600nm扫描，观察最大吸收峰 的波长。
如果所用HPLC仪能作波长变换，则 在测定组分的最大吸收波长下测定 可取得较高的灵敏度。
2. 吸取上清液时：
注意不可触及界面；
否则： 一方面会吸入水，影响分析和柱 的分离能力； 另一方面，界面上的脂肪层可能 会影响分析结果。
β-胡萝卜素以氯仿配制成不同浓 度的标准液，同样品一样处理。
分别以标准应用液浓度为横坐标， 峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。
三、数据处理
将样品中三种待测组分平行测定的峰面 积均值分别代入各自的工作曲线，求得 测定样液中各自的含量。
再乘以样品处理时的稀释倍数，即得 到血清样品中维生素A、维生素 E及β胡萝卜素的含量。
高效液相色谱法测定血清中 维生素A、E、β-胡萝卜素
HPLC法测定复合维生素B片中四种成分的含量
ＨＰＬＣ法测定复合维生素Ｂ片中四种成分的含量目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定复合维生素B片中烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2 四种成分的含量。
方法：采用C18色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.005 mol/L己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸（70∶30∶0.5）；流速为1.0 ml/min；检测波长：278 nm；柱温30℃。
结果：烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2分别在100.92~605.52、21.24~127.44、97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
结论：本方法简便、快速，可用于复合维生素B片的质量控制。
[Abstract]Objective:To establish a HPLC method for contents determination of the four components in Compound Vitamin B Tablets. Methods: The HPLC system consisted of C18 column(150 mm×4.6 mm,5 μm), 0.005 mol/L sodium hexane sulfonate-methanol-glacial acetic acid(70∶30∶0.5) as the mobile phase with the flow rate of 1.0ml/min ,and 278 nm as the detective length.Results:The linear ranges of nicotinamide,vitamin B6,vitamin B1 and vitamin B2 were 100.92~605.52,21.24~127.44,97.88~587.20，42.13~126.38 μg/ml respectively.Conclusion:This method is simple,rapid and it can be used for the qulity control of Compound Vitamin B Tablets.[Key words]HPLC; Compound Vitamin B Tablets; Nicotinamide;Vitamin B6;Vitamin B1; Vitamin B2;Contents复合维生素B片是由烟酰胺、维生素B6、维生素B1、维生素B2四种成分组成的复方制剂。
HPLC法测定含有多种维生素类制剂中四种维生素含量
HPLC法测定含有多种维生素类制剂中四种维生素含量刘海静;李淑丽;郭欢迎【期刊名称】《中国药品标准》【年(卷),期】2004(5)3【摘要】目的:建立HPLC法测定含有多种维生素类制剂中四种维生素(维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺)的含量.方法:采用C18柱,以0.05mol/L己烷磺酸钠溶液(用冰醋酸调节pH值为3.0)-甲醇(80:20)为流动相,流速为1.0ml/min.紫外检测波长为254nm.结果:本实验中维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酰胺线性范围分别为4～20μg/ml(r=0.9997),4～20μg/ml(r=0.9998),0.8～4μg/ml(r=0.9997),32～160μg/ml(r=0.9999),方法的回收率在98.5%～100.4%,RSD为0.23%～1.10%.各组分间的分离度均符合要求.结论:本方法快速、简便、准确,分离效果好,辅料无干扰,适用于该类制剂中四种维生素组分同时测定.【总页数】3页(P54-56)【作者】刘海静;李淑丽;郭欢迎【作者单位】陕西省药品检验所,西安,710061;陕西省药品检验所,西安,710061;陕西省药品检验所,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R9【相关文献】1.UPLC-MS/MS法测定四种雪莲培养物中九个维生素类成分含量 [J], 张瑜;杨健;赵玉洋;杨光;袁媛;刘雅萍2.浅谈用HPLC法测定复合维生素制剂中维生素C含量的效果 [J], 曹坤;赵海珍3.改进HPLC法测定注射用多种维生素(12)中维生素B12的含量 [J], 徐家根;刁岩忠4.浅谈用HPLC法测定复合维生素制剂中维生素C含量的效果 [J], 曹坤;赵海珍5.浅谈用HPLC法测定复合维生素制剂中维生素C含量的效果 [J], 曹坤;赵海珍;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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HPLC同时测定多种维生素检测方法热★★★
［作者：叶颖慧转贴自：北京市营养源研究所分析室点击数：2076 更新时间：2004-6-22 文
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一、本人情况介绍
1. 科研水平
我于2001年7月来到北京市营养源研究所分析室，工作两年期间一直从事水溶性维生素的检测工作，对于目前水溶性维生素的检测现状有较充分的了解，能够熟练使用荧光分光光度计、紫外-可见光分光光度计及高效液相色谱仪。
现在正参加科技部课题的工作。
2. 科研手段应用方面进步情况
本课题利用维生素B1、维生素B2、维生素B6、泛酸、烟酰胺及维生素C在紫外区域不同波长处均有较强吸收的性质，食品、保健食品和浓缩饲料中6种水溶性维生素经前处理后, 使用反相高效液相色谱法同时进行分离、测定，通过改变波长可以同时测定这六种水溶性维生素。
方法快速、简便、准确。
采用具有二极管阵列检测器的高压液相色谱仪，具有可随意调整波长的能力，并可观察到紫外全波段的三维图像，可对测定后的同一谱图进行分析。
在一次测定后的谱图上通过改变波长至某种维生素紫外最强吸收处，可以得到令人满意的色谱图。
一、合同执行情况介绍
1.项目介绍
由于食品与饲料工业的发展，使得食品与饲料中维生素的分析显得十分重要，但由上文可以看出维生素传统测定方法大多步骤烦琐，检测周期长，操作费时，其中一些方法受干扰因素影响大，灵敏度较低，而用户要求测定结果准确、测定周期短、经济合算，这就导致对维生素快速分析方法的需要越来越迫切。
而由于高效液相色谱法分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快的特点，使得早在二十世纪七十年代，国外就有人采用高效液相色谱法同时测定多种水溶性维生素。
1977年美国的W ills RB和Shaw CG等人首先采用两根色谱柱C18和NH2柱，使用带有离子对试剂的缓冲溶液-甲醇作为流动相测定水溶性维生素。
在这之后的二十几年中也有很多人采用高效液相色谱法测定水溶性维生素，或采用梯度淋洗方式，或对各种维生素含量相差较大的样品需用两种不同的流动相不能同时，测
定分析时间长，大多为单纯方法研究或针对某一种或某一类产品如药物、新鲜草莓、甜玉米、血液、生物发酵液中水溶性维生素的测定。
从检测维生素的种类来看，1999年王雪梅等采用HPLC法测定新鲜草莓中4种水溶性维生素的含量，其回收率为96.1~107.7%，而2000年荷兰人Moreno P等采用HP LC法同时测定药物中8中维生素，其回收率仅为78~116%。
由此可见，检测的水溶性维生素种类越多，其回收率就明显下降。
大多数的较老高效液相色谱仪不具有二极管阵列检测器，每进一针只能在一个波长或两个波长下检测。
本课题使用的Shimadzu LC-10Avp型高压液相色谱仪具有二极管阵列检测器，能够在进一针的情况下看到全紫外波长下的谱图，这样就可以找到六种维生素在紫外波长下的最大吸收处，提高检测的灵敏度。
结合六种维生素最大吸收处的波长，本课题选取了200nm、244nm、269nm三个测定波长，在200 nm下对维生素B1、维生素B6、泛酸、烟酰胺进行测定，244nm下对维生素C进行测定，269nm下对维生素B2进行测定。
本课题提出了两种不同的HPLC法对六种维生素进行测定，方法一为磷酸-乙腈系统，使用色谱柱：DiamonsilTM （钻石）C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈:0.05％磷酸=15: 85；柱温：40℃；流速：0.7mL/min；进样量：20μL的系统对样品中的六种维生素进行测定，出峰顺序为VB1、VC、烟酰胺、泛酸、VB2、VB6，结果发现该系统对于杂质较少，各种维生素含量较高的样品如维生素片，维生素补充剂、多维等适用；方法二为磷酸-乙腈+辛烷磺酸钠系统，使用色谱柱：Di amonsilTM （钻石）C18，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈:0.05％磷酸+5mmol/L辛烷磺酸钠溶液=15:85；柱温：40℃；流速：0.7mL/min；进样量：20μL对样品中的六种维生素进行测定，出峰顺序为VB1、VC、烟酰胺、泛酸、VB2、VB6，结果发现对维生素分离较好，灵敏度相对较高，对于杂质较多，各种维生素含量较低的样品，如预混料等适用，同时也适用于方法一所适用的样品，由于加入离子对试剂，实验完毕后应延长对系统的冲洗时间。
两种方法应当注意的是当样品中各种维生素的含量相差较大时，应稀释后再测定浓度相对较高的维生素。
针对不同样品采用不同的前处理方式，如蛋白、淀粉含量较高的样品就应当使用酶解等的方式去除这些杂质，由于这个过程需要高温，而维生素C作为水溶性维生素中重要的一种遇到高温解离，因此此时应对测定维生素C的样品采用单独的前处理方式：使用3%偏磷酸溶液作为溶剂，置于超声波振荡器中振摇。
偏磷酸不仅可以沉淀蛋白，同时又可以很好的保护样品中的维生素C。
两系统的标准及样品色谱图见附1。
2.合同完成情况
按照合同要求完成了对HPLC法测定水溶性维生素的流动相条件、前处理过程及回收率的研究，实现。