紫外分光光度计法测定果蔬中维生素C的含量

紫外分光光度计法

测定几种常见果蔬中维生素C的含量

摘要：利用维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，用紫外分光光度法测定５种常见果蔬中维生素Ｃ的含量。最大吸收波长为243nm，标准曲线方程为A=0.00537c，相关系数为R^2＝0.99539。9种果蔬中维生素Ｃ含量［ｍｇ·（１００ｇ）－１］分别为：青尖椒111.8、上海青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.9。该方法简单、快速，结果令人满意。

1.前言

维生素Ｃ又称抗坏血酸，是一种水溶性维生素。能预防牙龈出血及萎缩、提高人体免疫力，对坏血病、动脉硬化、贫血等有一定疗效。天然存在的抗坏血酸有L型和D型2种，后者无生物活性。维生素C 是呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，不溶于有机溶剂。在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是由氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，可促进其氧化破坏。氧化酶一般在蔬菜中含量较多，故蔬菜储存过程中都有不同程度流失。但在某些果实中含有的生物类黄酮，能保护其稳定性。

维生素Ｃ的测定方法主要有紫外分光光度法、红外光谱法、2,6－二氯靛酚滴定法、高效液相色谱法、钼蓝比色法、原子吸收法、碘量法、电位滴定法、荧光光度法、毛细管电泳法、流动注射化学发光法[2-12]等。其中原子吸收法、高效液相色谱法和荧光光度法仪器相对昂贵；碘量法和电位滴定法操作步骤较繁琐，而且受其它还原性物质、样品色素颜色和测定时间的影响；紫外分光光度法是根据维生素Ｃ对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性，于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度之差，通过标准曲线方程，即可计算样品中维

生素Ｃ的含量。

本实验采用市售的西芹为研究材料，用紫外分光光度法测定韭菜中维生素C的含量。

2.实验

2.1 材料、试剂和仪器

市售西芹

10%HCl、抗坏血酸、1mol/lNaOH、蒸馏水

UV2000-紫外可见分光光度计、KDC-40-电子天平、FA1104-离心机

2.2 方法

2.2.1 标准溶液的配制

准确称取0.050g抗坏血酸，加10ml 10%HCl溶解，用蒸馏水定容至500ml，混匀，即得100ug/ml维生素Ｃ标准溶液。

2.2.2 标准曲线的绘制

分别准确移取100ug/ml维生素Ｃ标准溶液0ml、0.03ml、0.06ml、0.09ml、0.12ml、0.15ml、0.18ml、0.24ml、0.30ml于试管中，分别加入蒸馏水至总体积为3ml。以水为参比，在243nm处测定吸光度，以维生素Ｃ浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3 果蔬样品的处理

将西芹洗净晾干，取10.4489g于研钵中，先加入10%HCl 5ml，再加入5ml，研磨匀浆，转移至50ml容量瓶中，稀释至刻度，混匀。移至离心管中3000r/min离心10min，取上清液即为待测果蔬提取液。

2.2.4 待测果蔬提取液吸光度的测量

取0.1ml待测果蔬提取液，放入盛有0.2ml 10%HCl的试管中，再加入蒸馏水4.7ml，摇匀。以蒸馏水为空白对照，在243nm处测定其吸光度(A₁)。

2.2.5 碱处理果蔬提取液吸光度的测量

依次吸取0.1ml待测果蔬提取液、1ml蒸馏水和0.4ml 1mol/l NaOH溶液放入试管中，摇匀；静置20min后加入0.4ml 10%HCl，混匀，再加入3.1g蒸馏水。以蒸馏水为空白对照，在243nm处测定其吸光度(A₂)。

2.2.6 吸光度确定

果蔬样品吸光度=待测果蔬提取液吸光度（A₁）-碱处理果蔬提取液吸光度（A₂）

2.2.7 维生素Ｃ含量的计算

测得果蔬样品的吸光度后，依据标准曲线方程，即可计算出果蔬中维生素Ｃ的含量[mg/100g]。

维生素Ｃ含量＝(c·V总·V待测总·100）/（V₁·W总·1000）式中：ｃ为依标准曲线方程计算得到的维生素Ｃ浓度,ug/ml

V₁为测吸光度时吸取样品溶液的体积,ml；

V总为吸取样品定容总体积,ml；

V待测总为待测样品总体积,ml；

W总为果蔬质量，g；

100为100g果蔬。

3.结果

3.1 标准曲线

由标准曲线可得线性回归方程为A=0.05371x，相关系数R²=0.99539。

3.2 维生素C含量的测定

由图可知，蔬菜中的维生素C含量分别为[mg/100g]：青尖椒111.8、上海青104.2、韭菜82.5、小白菜78.9、西芹59.70、胡萝卜49.8、西兰花28、茄子26.4、山药14.9。9种蔬菜中维生素c的含量关系为：青尖椒>上海青>韭菜>小白菜>西芹>胡萝卜>西兰花>茄子>山药。

3.3 结论与分析

3.3.1 结论

利用维生素Ｃ在紫外光区有明显的吸收和对碱不稳定的特性，建立了果蔬中维生素Ｃ含量的测定方法。在一定浓度范围内，维生素Ｃ浓度与紫外吸光度呈良好的线性关系，回归方程为A=0.05371x，相关系数R²=0.99539。

9种蔬菜中Vc含量大小依次为：青尖椒>上海青>韭菜>小白菜>

西芹>胡萝卜>西兰花>茄子>山药。

3.3.2 误差分析

（1）. 碾磨不充分，研钵上有残留，导致部分维生素C残留在蔬菜内，故测Vc含量值偏低。

（2）.将研钵中的研磨液转移至容量瓶中时有部分研磨液漏出，仪器清洗不干净，导致定容后容量瓶内Vc 浓度偏低。

(3)取上清液时有少量底层物质吸入其中，导致测吸光光度值有误差。

该方法简单易行、灵敏度高、结果准确，可快速测定果蔬中维生素Ｃ的含量。