基因工程 外源基因导入及转化子筛选鉴定
基因工程操作的基本步骤
基因工程操作的基本步骤
基因工程是指人为地将外源基因导入到宿主生物体中，并使其在宿主中表达出来的技术。
基因工程的操作一般包括以下基本步骤：
1.确定目标基因：确定想要转入宿主生物体的目标基因，这可能是来自其他生物体的其中一种特定基因。
2.获得目标基因：获得目标基因的DNA序列，通常通过基因重组、合成或从源生物中提取。
3.构建载体：将目标基因插入到一个载体DNA中，以便将其导入宿主生物体。
载体可以是人工合成的质粒或病毒，能够稳定地带有外源DNA。
4.转化宿主生物体：将构建好的载体导入到宿主生物体中，使其接受外源基因。
转化方法可以包括化学方法、电击法、基因枪等。
5.筛选转化体：通过筛选方法，如对转化体进行培养基的筛选、对荧光标记的筛选等，来选出成功转化了外源基因的宿主生物体。
6.验证基因表达：通过PCR、蛋白质表达分析等实验方法验证外源基因是否成功表达。
7.优化表达：根据目的需要，可以通过引入启动子、启动子增强子、终止子等调控元件，优化外源基因的表达。
8.传代培养：将成功表达外源基因的宿主生物体进行传代培养，以使其后代继续表达目标基因。
9.应用研究：将表达目标基因的宿主生物体应用于研究中，如表达重要药物、生产工业化酶、改良农作物等。
14 第十四讲(2) 重组子的筛选和鉴定
2 营养缺陷型检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌 株呈现抗性标记，或者基因产物与某些药物 作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直 接筛选含目的基因的克隆子。
亮氨酸(leu)为leu菌所必须 。 在不含leu的基本培养基中，只有重组子 表达的leu才能被leu缺陷菌所利用而能生 长，形成菌落。 因此，能生长的菌落是阳性的重组子克 隆，没有重组子的leu缺陷菌在不含leu的 培养基中不能生长，不能形成菌落。
催化4-甲基伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酸， 产生萦光物质4-甲基伞形花酮，以此筛选 含gus基因的转化子。 尤其是gus基因的3’端与其他结构基因连接 产生的嵌合基因仍能正常表达，产生的融 合蛋白中仍有GUS活性，可用于外源基因在 转化生物体中的定位分析。
Hale Waihona Puke 萤火虫萦光素酶基因（luc）
luc表达产物萤火虫萦光素酶（LUC）在 Mg2+的作用下，可以与萦光素和ATP底物发 生反应，形成与酶结合的腺苷酸萦光素酰 化复合物，经过氧化脱羧作用后，该复合 物转变成为处于激活状态的氧化萦光素， 可以用萦光测定仪快速灵敏地检测出产生 的萦光，是目前研究动植物转基因很好用 的一种报告基因。
3 依赖于重组子结构特征分析的筛选法
⑴ 快速裂解菌落鉴定分子大小 主要是根据有外源DNA片段插入载体后的 重组DNA与载体DNA之间的大小差异来鉴 定重组子。 分别提取不同转化子的DNA，经琼脂糖凝 胶电泳，在琼脂糖凝胶板上出现的DNA带 中，落后的带是重组DNA的带。 此方法只用于重组子的初步鉴定。
7 插入失活法
基本原理： 是将特定的DNA随机插入到重组DNA分子 中，获得一系列插入重组子，根据其突变 的类型鉴定失活的基因，进一步利用此插 入DNA作为标记物，对失活基因进行定位。
基因片段与载体连接、转化和重组子筛选
1、ＤＮＡ分子的体外连接
ＤＮＡ分子的体外连接就是在一定条件下，
由ＤＮＡ连接酶催化两个双链ＤＮＡ片段组 邻的５’端磷酸与３’端羟基之间形成磷酸 酸脂键的生物化学过程， ＤＮＡ分子的连接 是在酶切反应获得同种酶得注意的几个问题：
1.ＤＮＡ连接酶
常用的ＤＮＡ连接酶有两种：
制备感受态细胞
现在制备感受态细胞通常用CaCl2处理，在低温中 与外来ＤＮＡ分子相混合. ＤＮＡ分子转化分以下几步: １．吸附－－双链ＤＮＡ分子吸附于受体菌表面； ２．转入－－双链ＤＮＡ分子解链。一条链进入受 体菌，另一条降解； ３． 自稳－－外源质粒ＤＮＡ分子在细胞内复制成 双链； ４．表达一供体基因随同复制子同时复制，分裂， 转录翻译。
四．结果与分析讨论
１．计算转化率。 ２．根据转化率和阴性对照分析实验结果。 问题与讨论： １．根据本实验认为影响转化率的因素有哪
些？ ２．抗性法筛选和互补筛选原理是什么？
2.重组子的筛选
这和受体菌：质粒ＤＮＡ的选择相关，
原则
上要注意： １．受体菌必须是限制与修饰系统缺陷的菌 株； ２． 根据质粒基因型和受体菌基因型互补原 则而定。 重组子的筛选方法常用的有两种方法：
１．抗生素筛选法
菌株为某种抗生缺陷型， 而质粒上带有 该抗性基因（如氨苄青霉素， 卡拉霉素等 ）这样只有转化子才能在含该抗生素的培养 基上长出。 本实验利用抗生筛选转化子。
四．结果与分析
电泳检查连接结果
１．如何判断连接效果的成功性？
问题与讨论：
１．简述Ｔ４ＤＮＡ连接酶作用机理。 ２．简述一个完整外源ＤＮＡ的克隆过程。 ３．连接反应中应注意些什么问题及如何提
DNA的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定
第二次分子生物学实验报告DNA的酶切、连接、转化和重组子的筛选与鉴定一、实验目的1、学习和掌握限制性内切酶的分类、特性与作用原理，掌握载体和外源目的DNA酶切的操作技术。
2、学习利用T4 DNA 连接酶把酶切后的载体片段和外源目的DNA 片段连接起来，构建体外重组DNA 分子的技术，了解并掌握几种常用的连接方法。
3、掌握利用CaCl2 制备感受态细胞的方法；学习和掌握热击法转化E. coli 的原理与方法。
4、学习并掌握使用红白菌落法筛选获得重组子以及α互补筛选法的原理及方法。
5、学习和掌握使用试剂盒抽提质粒的方法；6、复习琼脂糖凝胶电泳的原理和方法；7、通过对重组子进行重组质粒DNA 的抽提与酶切鉴定，进一步确定重组质粒中含有外源目的DNA 片段，并验证重组子是期望的重组子。
二、实验原理1、限制性内切酶限制性核酸内切酶是一类能够识别双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构的酶，主要是从原核生物中分离纯化出来的。
在限制性核酸内切限制酶的作用下，侵入细菌的“外源”DNA 分子便会被切割成不同大小的片段，而细菌自己固有的DNA 由于修饰酶(通常是一种甲基化酶)的保护作用，则可免受限制酶的降解。
目前已经鉴定出3 种不同类型的限制性核酸内切酶，即Ⅰ型酶、II 型酶和III 型酶。
Ⅰ型酶切割位点是随机的，至少距识别位点1000bp。
Ⅲ型限制酶的切割位点距识别序列3'端为24—26bp。
Ⅱ型限制酶的切割位点一般在识别序列上或与之靠近，而且具有序列特异性，故在基因克隆中有特别广泛的用途。
Ⅱ型核酸内切限制酶具有3个基本的特性：①在DNA 分子双链的特异性识别序列部位切割DNA 分子，产生链的断裂；②2个单链断裂部位在DNA 分子上的分布通常不是彼此直接相对的；③断裂结果形成的DNA 片段往往具有互补的单链延伸末端。
限制性核酸内切酶对DNA 底物的酶切作用是否完全，直接关系到连接反应、重组体分子的筛选和鉴定等实验结果。
6、转化及筛选技术
0.8 kb P B
HindIII SphI PstI SalI BamHI SmaI KpnI EcoRI
用PstI酶切转化子质粒DNA
目的重组子： 3.2 kb + 3.5 kb 或者： 0.8 kb + 5.9 kb
lacZ’
pUC18 2.7 kb
Apr
ori
至含有Ap和Tc的平板上 ； 在Ap平板上生长、但在Ap和 Tc平板上不长的转化子即为目 的重组子。
Ap + Tc
Ap
挑选
影印
显色筛选法
显色筛选法的基本原理： 载体分子上携带某种显色酶基因，其表达产物能 使细胞产生颜色反应，从而易于辨认和挑选，如大肠 杆菌质粒pUC18携带的lacZ’基因（蓝色反应）、链霉
用硝酸纤维素薄膜影印克隆平板；
影印
用0.4N的NaOH溶液浸泡影印薄膜；
用SSC溶液浸泡清洗影印薄膜； 80℃烘干固定影印薄膜； 薄膜置于含有探针的杂交溶液中保温； 用SSC-SDS液洗涤杂交薄膜 ； 用X光胶片覆盖薄膜感光。 感光 杂交 洗涤
B
lacZ’
2.7 kb 2.0 kb
Apr
pUC18 2.7 kb
ori
菌落原位杂交法
菌落或噬菌斑原位杂交法的工作原理是根据克隆的目的 基因或DNA片段的同源序列设计并合成探针，以此搜寻筛 选含有目的基因的目的重组子。其中，DNA同源序列之间
的特异性互补杂交是该技术的基本理论依据。
菌落原位杂交法的基本操作：
例：将外源DNA片段插在BamHI位点： 非重组子呈 重组子呈 Apr、Tcr Apr、Tcs
Pvu I Pst I Apr EcoR I Cla I Hind III Pst I BamH I
何水林版基因工程第五章基因的转移与重组体的筛选和鉴定
带酶切位点的PCR产物 5’- GCAGAATTC
PCR产物 PCR产物
GGATCCGCG CCTAGGCGC BamH I位点
-3’
-5’
3’- CGTCTTAAG
EcoR I位点
EcoR I BamH I 5’AATTC 3’- G PCR产物 PCR产物 G -3’ CCTAG -5’
两头各有一个粘性末端！
4. DEAE-葡萄糖转染法 二乙氨乙基（DEAE）葡聚糖为多聚阳离子试剂，能 促进哺乳动物细胞摄入外源DNA。
葡聚糖
++ ++++++ ++ + + + 二乙氨乙基 + + （DEAE） ++ ++ ++++
++ ++++++ ++ + + + 二乙氨乙基 + + （DEAE） ++ ++ ++++ - - - -- - DNA - - --- -
4、在培养基中生长数小时之后，球形细胞复原并增殖。
操作步骤： 10ng 载体DNA 100L 感受态细胞 10-100L转化液 涂Amp＋平板
（p140）
吸附DNA 冰浴30min
摄入DNA 42℃ 1~2min
37℃ 振荡培养1h
加入1mL LB培养基 （Amp-）
转化率：106-108/g DNA
（一）转化率的计算：
转化率 ＝ 产生菌落的总数 / DNA的加入量
转化子的筛选和重组子的鉴定
双脱氧末端终止测序法旳基本操作：
ssDNA ssDNA ssDNA ssDNA
Prime Prime Prime Prime rKlenow rKlenow rKlenow rKlenow dNTPs dNTPs dNTPs dNTPs ddATP ddCTP ddGTP ddTTP
聚丙烯酰胺凝胶电 泳A C G T
pUC18 2.7 kb
ori
后经过其长度来鉴定其是否为重组子 Apr
区别重组子与非重组子
假如外源DNA片段插pUC18 旳SphI位点处，原则上也可 用SphI酶解鉴定，但这么做 很不经济，因为SphI非常昂 贵（每100单位50美元）。用 HindIII和EcoRI联合酶解一样 能够到达目旳，但这两种酶 旳价格只及SphI旳1 / 50
非重组子：Apr、Tcr
重组子：Aps、Tcs
EcoR I Cla I
Pst I Hind III
Pvu I
BamH I
Pst I Ap r
Tcr
Sal I
pBR322
4363 bp
ROI
ori
ROP
Bal I
Hind II
基本操作： 将转化液涂布含Ap旳平板
再将Ap平板上旳转化子影印 至具有Ap和Tc旳平板上
缺刻前移标识法
5＇ 5＇ 5＇ 5＇
5＇
5＇
DNase I
5＇
DNA聚合酶I
5＇
dNTP、[α-32P]dATP
5＇
变性
5＇
限制性酶切图谱法
所谓旳限制性酶切图谱法就是对载体上插入旳外源 DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目旳基因旳已 知图谱对比，所以利用这种措施不但能区别重组子与非 重组子，而且还能鉴定目旳重组子。但这种措施在用于 数千规模旳转化子筛选时，工作量极大，试验成本也高 。
第四章基因的转移与重组体的筛选和鉴定
第四章基因的转移与重组体的筛选和鉴定第一节转化基因片段在体外只是一段核酸分子，是化学物质，无法表现出遗传物质的生命活性。
只有当其存在于活细胞后，生命的特征才能充分展示出来。
在分子克隆实践中，在体外操作的核酸分子只有进入细胞以后才能达到克隆的目的。
一、重组DNA分子转入原核生物细胞1. 重组质粒DNA分子转化大肠杆菌转化（transformation）——重组质粒DNA分子通过与膜蛋白结合进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。
转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞，而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。
（1）CaCl2处理后的细菌转化或转染A、制备感受态细胞受体细胞的细菌，经一定浓度的冰冷的 CaCl2（50～100 mmol／L）溶液处理后变成。
所谓感受态细胞，处在感受态状态的菌体有摄取各种外源 DNA的能力。
转化：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程；转染：感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程；好的感受态细胞，每微克的超螺旋质粒DNA可得5×107个转化体。
B、细胞转化（或转染）的具体操作过程：①将处于对数期的新鲜培养物于0℃4000转/分离心10分，回收细菌细胞；②将细胞用0℃的0.1mol/L CaCl2低渗溶液处理30分钟，离心回收细胞，再用适量0℃的0.1mol/L CaCl2重悬细胞，以诱导感受态产生。
③加入适量DNA，于42 ℃热处理混合物90秒，使DNA分子被细胞吸收；④将混合物快速转到冰浴中，冷却1~2分，加入适当的培养基，在37 ℃培养45分，使细胞复苏并表达质粒所携带的转化基因；⑤通过选择培养基上平板培养，选择转化体。
⑥如果用抗菌素筛选转化体，作为对照的受体菌应该在此培养基上不生长。
（2）电穿孔转化法基本原理是利用高压电脉冲作用，在大肠杆菌细胞膜上进行电穿孔（electroporation），形成可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的有效吸收。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
二、 转化率
（一）转化率的定义
转化率是衡量转化效率的重要指标，其定义
为：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体 细胞的分子数。由于在一般的转化实验规模下， 每个受体细胞最多只能接受一个载体分子，因此 转化率的定义也可以表征为：每微克载体DNA转 化后，受体细胞接纳DNA的个数，即克隆数（在 筛选时，未接纳载体或重组子的受体细胞不长）
算出（5 mg），甚至还可以估算需要涂布多少块平板进行筛选
（三）转化率的影响因素 （1）载体及DNA重组分子方面： 载体本身的性质：
不同的载体转化同一株受体细胞，其转化率不同
载体的空间构象：
质粒的超螺旋构象转化率最高，经酶切连接操作后的载
体由于空间构象难以恢复，其转化率一般要比新制备的 超螺旋质粒低两个数量级
如果外源DNA片段也是2.7 kb，
lacZ’ pUC18 2.7 kb Apr ori
最好选用单一切口的酶将质粒线
型化，然后通过其长度来鉴定其 是否为重组子
1.0 kb 区分重组子与非重组子
如果外源DNA片段插在pUC18 的SphI位点处，原则上也可用
0.8 kb P S
S
B
4.0 kb
AP 氨基喋呤 TK 胸腺嘧啶核苷激酶
TR
dTMP
dTDP
dTTP
（三）显色筛选法
（1）显色筛选法的基本原理：
显色筛选法可以区分转化子与非转化子，也可
区分重组子与非重组子。其原理是：载体分子上携
带某种显色酶基因，其表达产物能使细胞产生颜色
反应，从而易于辨认和挑选，如大肠杆菌质粒
pUC18携带的lacZ’基因（蓝色反应）、链霉菌质
（2）大肠杆菌感受态细胞的质粒转化：
取100 ml 感受态细胞，加入相当于50 ng 载体的重组 DNA连接液，混匀 冰浴放置半小时 在42℃保温 2 分钟（热脉冲） 快速将转化细胞转移至冰浴中放置1 - 2分钟 加入1 ml 新鲜培养基，于37℃培养 1 小时（扩增） 涂在合适的固体培养基平板上进行筛选
2.5 重组DNA导入受体细胞
受体细胞 重组DNA导入受体细胞的途径
克隆子的筛选
2.5.1 受体细胞 一、受体细胞应具备的条件
限制性缺陷型
外切酶和内切酶活性缺陷（recB-，recC-，hsdR-）
重组整合缺陷型
用于基因扩增或高效表达的受体细胞（recA-）
具有较高的转化效率
具有与载体选择标记互补的表型
的短时间培养。在实验时，扩增操作往往与转化
操作偶联在一起，如：
Ca2+诱导转化后的37℃培养一个小时
原生质体转化后的再生过程
l噬菌体转染后的30℃培养等，均属扩增操作
扩增操作的目的
增殖转化细胞，使得有足够数量的转化细胞
用于筛选程序
扩增和表达载体分子上的标记基因，便于筛选
表达外源基因，便于筛选和鉴定
需 2ml感受态细胞，大约含有2X1010个大肠杆菌细胞，也
就是说，每200个细胞只有一个细胞能接纳pUC18 DNA
（二）转化率的用途
利用转化率和重组率等参数可以帮助设计 DNA重组实验
规模 例如，某一DNA重组实验的重组率为20%，转化率为107/mg 载体，经切接处理后的载体转化率比天然的载体低100倍， 欲获得104个重组克隆，需投入多少载体DNA进行重组实验？ 若重组率为100%，则转化后产生104个重组克隆需要： 104 / 107 X 10 - 2 = 0.1 mg 载体DNA 考虑到实验系统的重组率为20%，所以实际投入载体应为： 0.1 / 20% = 0.5 mg 载体DNA 载体投入量确定后，外源DNA的投入量即可按10∶1的要求
原生质体转化
109 个原生质体
106 - 107 / mg DNA 105 - 106 / mg DNA 107 - 108 / mg DNA 106 - 109 / mg DNA
50 ng DNA
转化方法：
Ca2+诱导转化 原生质体转化 l-DNA转染 电穿孔转化
三、转化细胞的扩增 扩增操作
转化细胞的扩增操作是指转化完成之后细胞
2.5.3 转化子的筛选和鉴定（检）
载体遗传标记检测
克隆DNA序列检测
外源基因产物检测
由于重组率和转化率不可能达到理想极限， 因此必须借助各种筛选和鉴定方法区分转化子 与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子 与非目的重组子
转化子
重组子
目的重组子
一、 载体遗传标记检测
（一）抗药性筛选法
（1）抗药性筛选法的基本原理：
插入片段的大小：
对质粒载体而言，插入片段越大，转化效率越低
（2）受体细胞方面： 受体细胞必须与载体相匹配，例如： pBR322转化大肠杆菌JM83株，转化率很低； 但对大肠杆菌ED8767株的转化率则较高
（3）转化方法方面：
受体细胞的预处理：影响最大 供受体的比例：
Ca2+诱导转化 0.1 ml 感受态细胞 50 ng DNA
（1）全酶解图谱法：
区分重组子与非重组子 用BamHI酶切转化子质粒DNA 电泳观察酶解产物片段 重组子： 2.7 kb + 4.0 kb 非重组子： 2.7 kb 1.0 kb B E
4.0 kb
0.8 kb P B
HindIII SphI PstI SalI BamHI是Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶
结构，后者经热脉冲发生收缩作用，使细胞膜出
现空隙，细菌细胞此时的状态叫做感受态
（1）大肠杆菌感受态细胞的制备：
100 ml 菌体培养至OD600 = 0.5，离心收集菌体 用10 ml 冰冷的10 mM CaCl2溶液悬浮菌体，
离心收集菌体
用1 ml 冰冷的75 mM CaCl2溶液悬浮菌体 冰浴放置12 - 24小时，备用
lacZ' ori
pUC18
r Ap
二、 克隆DNA序列检测
（一）限制性酶切图谱法
所谓的限制性酶切图谱法就是对载体上插入 的外源DNA片段进行酶切图谱分析，并以此与目 的基因的已知图谱对比，因此利用这种方法不仅 能区分重组子与非重组子，而且还能鉴定目的重 组子。但这种方法在用于数千规模的转化子筛选 时，工作量极大，实验成本也高。
抗药性筛选法可区分转化子
与非转化子、重组子与非重 组子 将外源DNA片段插在EcoRI位 非重组子呈 点： Apr、Tcr
Pvu I Pst I Apr EcoR I Cla I Hind III Pst I BamH I
Tcr
pBR322
4363 bp
ROI ROP
Sal I
重组子呈 Apr、Tcr 将外源DNA片段插在BamHI位 非重组子呈 点： 重组子呈 Apr、Tcr
（三）l噬菌体DNA的转染
（1）感受态细胞的培养： 将大肠杆菌在含有麦芽糖（不含葡萄糖）和MgCl2的培养 基中培养至OD600 = 0.5 （2）吸附： 加入经体外包装好的重组噬菌体悬浮液，30℃保温10分钟 （3）转染裂解： 加入20倍体积的新鲜培养基，30℃培养2小时，直至培养 液中菌体裂解，培养液澄清度增加，然后涂板筛选
（二）细菌原生质体的转化
革兰氏阳性细菌（如枯草杆菌、链霉菌等）
接纳外源DNA的主要屏障是细胞壁，因而这类 细菌通常采用原生质体（细胞去壁后的形态） 转化的方法转移质粒或重组DNA分子 酵母菌、霉菌、植物细胞也可用原生质体 法进行转化
（1）细菌原生质体的制备：
不同细菌的原生质体制备方法不尽相同，以 链霉菌为例：细菌需生长在高渗培养基中（如 34%的蔗糖溶液，并加入甘氨酸以增加细菌细胞 壁对溶菌酶的敏感性。在制备过程中，菌体应始 终悬浮在10.3%的蔗糖等渗溶液中。与原生质体 接触的所有器皿应保持无水无去污剂
昆虫细胞（家蚕）
具有真核生物的特征，外源基因表达量高，繁
殖相对较快，培养成本低廉，遗传稳定
DNA重组操作系统欠完善
适用于真核生物基因的高效表达
哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞 CHO）
与人的亲缘关系近，分子重组表达系统
健全，具有合适的糖基化修饰系统 细胞培养条件苛刻，生长缓慢 适用于哺乳类动物和人的基因表达调控研究、
粒pIJ702携带的melC基因（黑色反应）等
（2）显色筛选法的基本操作：
将 外 源 基 因 克 隆 在 pUC18 的
lacZ’ 标记基因内部，使之灭活， 此时重组子呈Apr、lacZ-，淡黄 色菌落；而非重组子则呈 Apr 、 lacZ+，蓝色菌落 Ap + X-gal 重组子（Apr + lacZ-）
Bal I
ori
Hind II
Apr、Tcs
（2）抗药性筛选法的基本操作：
先将转化液涂布含有Ap
的平板再将Ap平板上的
Ap
转化子影印至含有Ap和
Tc的平板上 挑 选 影 印
Ap + Tc
在Ap平板上生长、但在
Ap和Tc平板上不长的转 化子即为重组子
（二）营养缺陷型筛选法
（1）营养缺陷型筛选法的基本原理：
例如，pUC18对大肠杆菌的转化率为108，即每微克 pUC18中只有108个分子能进入受体细胞。一微克pUC18 共有3.4X1011个分子（ 6.02X1017 / 2686X660），也就是 说，每3400个pUC18分子才有一个分子进入受体细胞
另一方面，在实际操作过程中，转化一微克pUC18共
感染寄生缺陷型
防止重组细菌扩散污染，生物武器除外
二、各种基因工程受体的特性
大肠杆菌
遗传背景清楚，载体受体系统完备，生
长迅速，培养简单，重组子稳定
产结构复杂、种类繁多的内毒素
适用于外源DNA的扩增和克程的主要受体菌