坂崎肠杆菌
阪崎肠杆菌检验技术
生态分类
一、阪崎肠杆菌概况
阪崎肠杆菌属肠杆菌科，是人和动物肠道中寄生的一种革 兰阴性无芽胞杆菌。是肠道正常菌群的一种，在一定条件 下可引起人和动物致病。1980年以前命名为黄色阴沟肠 杆菌，1980年更名为阪崎肠杆菌。
一、阪崎肠杆菌概况
生态分布 家庭、温泉、鼠、苍蝇、植物根围、沉积物，沼泽地、土壤、食品等均有检出阪 崎肠杆菌的报导。有报导推测，昆虫可能是阪崎肠杆菌的环境宿主。 婴儿配方粉的污染： 内在污染：--由加工环境中微生物的存在；加工装置内表面微生物的存在；热处理 后，与干燥基粉混合的加入成分中存在的微生物造成。 外源性污染：--受阪崎肠杆菌污染的配方粉或调制好的配方奶在较高温度下存放， 食用前不加热，或加热不彻底，喂食时间较长等都可导致阪崎肠杆菌有机会生长繁 殖，增加患病的危险性。
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
1g(mL)×3
取样量 10g(mL)×3
100g(mL)×3
BPW 1：10 稀释
mLST-Vm
DFI、TSA
生化鉴定
报告 （MPN值）
操作规程
前增菌 选择性增菌 显色培养基 验证试验 结果报告
三、阪崎肠杆菌菌定量检测
各100ml（g)
各10ml（g)
各900ml（g) 各移1ml
900 ml BPW
样品
100mL（g） 溶解 预热
44℃
36±1℃ 18h±2h
选择性增菌 44±0.5℃
24h±2h
10mL mLST-Vm肉汤
挑取蓝绿色菌落
操作规程 API20E鉴定系统
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
TSA平板上直接挑取黄色菌 落进行鉴定
结果鉴定
二、阪崎肠杆菌菌定性检测
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程
长春阪崎肠杆菌科鉴定流程肠杆菌科是一类重要的革兰氏阴性菌，包括了大肠杆菌、沙门氏菌、鲍曼不动杆菌等多种细菌。
其中，长春阪崎肠杆菌是一种致病菌，能够引起食物中毒、泌尿生殖道感染等疾病，因此对其的鉴定非常重要。
下面介绍一下长春阪崎肠杆菌科鉴定的流程。
1. 样本采集首先，需要对患者的样本进行采集。
常见的样本包括粪便、血液、尿液等。
在采集样本的过程中，需要注意保持样本的无菌状态，避免外界细菌的污染。
2. 细菌培养然后，需要将样本进行细菌培养。
将样本接种到适宜的寒暖贮藏培养基上，进行培养。
需要注意控制培养基的温度、湿度等条件，保证细菌能够生长繁殖。
3. 形态观察在细菌培养的过程中，需要不断观察菌落的形态、颜色等特征。
长春阪崎肠杆菌的菌落一般为圆形或不规则形状的，表面光滑或稍微粗糙。
颜色一般为乳白色、淡黄色或灰白色。
4. 生化试验接下来，需要进行生化试验。
长春阪崎肠杆菌一般可以通过氧化-发酵反应、氧化酶试验、甲烷蓝试验等生化试验进行鉴定。
其中，氧化-发酵反应是一种常见的鉴定方法，可根据菌落的形态、气泡、酸碱度等鉴定细菌。
氧化酶试验可检测细菌是否含有氧化酶，通过观察菌液的颜色、气味等来判断。
甲烷蓝试验可检测细菌是否能够分解葡萄糖产生酸。
5. 分子生物学检测最后，对于一些难以通过传统生化试验鉴定的长春阪崎肠杆菌，可以进行分子生物学检测。
常见的分子生物学检测方法包括PCR、DNA测序等，能够检测菌株的基因序列，进一步确认菌株的种属。
总之，长春阪崎肠杆菌科的鉴定流程是一个较为复杂而严格的过程，需要仔细控制每一个步骤，细致地观察每一项指标，保证鉴定结果的准确性。
浅论阪崎肠杆菌的危害及其检测方法
长春
１０６； ０２ ３
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１ ０ ６） ０２ ３
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文章编号
阪 崎 肠 杆 菌 属 于 肠 杆 菌 科 ， 它 对 所 有 年 龄 由 于 该 菌 对 所 有 年 龄 段 的人 都 有 感 染 性 ， 所 以
维普资讯
浅论阪 崎肠杆菌 的危 害及其 楦测方法 李兆辉 ’ ，柳增善 ’ Nhomakorabea张大伟
（ 吉林 大学农 学部人 畜共 患病研 究所 ，吉林 １ ． ２ 吉林 大学农 学部化 学教研 室 ，吉林 ．
中图分类号 Ｓ ５ ． １２ ８２６＋ 文献标识码 Ａ
表１食品及相关设备和环境中的阪崎肠杆菌
食品及相关的设备 环境
中的 阪崎肠 杆 菌 能 引起新 生儿 的脑 膜 炎 、败 血
症 、 坏 死 性 小 肠 结 膜 炎 等 疾 病 ， 由 于 我 们 对 阪
大酒 儿 粉 豆 竺杯婴鼍塑 ， 粉 孝兰 热矿 水 的泉 篡 翟 原 油 老 鼠 兰 设（ 匙 ： 地 品类童乳 备 、瓶浣 谷 品 挽 、 食加 （ ＊
段 的人都 易感 。本 文 就 阪 崎肠 杆菌 的来源 、传 引起 了医 生 、生产 商 和 消 费者 的广泛 关注 。阪 播 途 径 及 其 危 害 、 最 新 的 检 测 方 法 作 以 综 述 。 崎 肠 杆 菌 作 为 一 个 普 通 的 细 菌 ， 被 广 泛 地 发 现
并根据我 国的实 际情 况提 出了预 防措施 。
１ 背 景
于 家 庭 和 医 院 的 食 品 、 水 和 环 境 中 （ 表 １， 见 ） 而 且 从 制 造 婴 儿 食 品 工 厂 的 环 境 中 也 发 现 了该
阪崎肠杆菌的研究进展
龙道崎、邹妍、关郁芳、 雷丹丹、边伟、胡鹏
目录
概述
生物学特性
检测方法 致病性 预防和控制
阪崎肠杆菌概述
阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)属肠杆菌科， 是人和动物肠道内寄生的一种周生鞭毛、能运动、 无芽孢的革兰氏阴性菌，一直以来被称为黄色阴沟 肠杆菌 (Enterobacter cloacae)，于1980年以日 本细菌学家 Riichi Sakazakii的名字命名。 阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠 炎和败血症，近年来受到了研究者的广泛关注
阪崎肠杆菌的毒力因子可能是一类肠毒素样 化合物。在组织培养过程中一些菌株产生细 胞毒效应，且菌株间的毒力作用有差异。 细菌内毒素（脂多糖），是构成革兰氏阴性 细菌细胞外壁的主要成分。具有热稳定性， 能增加小肠上皮细胞通透性，促使细菌侵入 肠壁中而致病。
Байду номын сангаас防与控制
预防 坚持母乳喂养 选择检查合格的奶粉 开水冲调婴幼儿配方食品，再次食用前应重新加热。 控制 制定婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌微生物标准 制定加工、使用和操作婴幼儿配方食品的导则 制定有效的环境监测计划 建立实验室监测网络，对阪崎肠杆菌的来源、传播途径 等进行调查研究
阪崎肠杆菌的致病性
阪崎肠杆菌是存在自然环境中的一种
“条件致病菌”，由其引发的危害人群 主要是婴儿以及早产儿。偶尔还可引起 成人局部感染。
阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、
菌血症和坏死性小肠结肠炎，并可能遗 留严重的神经系统后遗症，死亡率20 ％～50％。
阪崎杆菌的致病性
致病机制研究不多，尚不清楚。 目前所知阪崎肠杆菌致病性可能与肠毒素和内毒 素有关
阪崎肠杆菌显色培养基原理
阪崎肠杆菌显色培养基原理
阪崎肠杆菌显色培养基是一种针对阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）的检测工具，通过显色原理，可快速、准确地检测食品中的阪崎肠杆菌。
其原理主要包括以下几个方面：
1.选择性生长：阪崎肠杆菌显色培养基中的成分专门针对阪崎肠杆菌的生长需求，为其提供适宜的营养环境。
同时，培养基中还含有抑制其他微生物生长的成分，从而确保只有阪崎肠杆菌能够在培养基上生长。
2.酶反应显色：阪崎肠杆菌在生长过程中，能产生特定酶，这些酶与培养基中的显色底物发生反应，使菌落呈现出特定的颜色。
阪崎肠杆菌显色培养基中的显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成，在特异性酶作用下，游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
3.菌落显色区分：在适宜的培养条件下，阪崎肠杆菌生长出的菌落呈现蓝-绿色，而其他微生物生长的菌落则为无色或黄色。
通过观察菌落颜色，可以快速区分目标菌和非目标菌。
4.生化试验验证：对于显色培养基上呈现典型蓝-绿色菌落的样品，还需进行生化试验以进一步确认阪崎肠杆菌的identity。
常见的生化试验包括氧化酶试验、气泡产生试验等。
5.质量控制：为了确保阪崎肠杆菌显色培养基的可靠性和准确性，需进行质量控制。
主要包括观察培养基的外观、菌落颜色以及生长情况等，确保培养基符合相关标准和要求。
总之，阪崎肠杆菌显色培养基通过选择性生长、酶反应显色、菌落显色区分、生化试验验证和质量控制等原理，实现了对食品中阪崎肠杆菌的快速、准确检测。
在实际应用中，实验室人员可以根据需求选择合适的显色培养基，并按照操作步骤进行检测，以保障食品的安全性。
阪崎肠杆菌检测标准
阪崎肠杆菌检测标准1. 引言阪崎肠杆菌〔Hafnia alvei〕是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。
它在自然环境中广泛存在，也可以在人和动物的消化道内找到。
阪崎肠杆菌可以对人类和动物造成感染，引起各种疾病，如泌尿系统感染、呼吸道感染和胃肠道感染等。
为确保食品和饮用水的平安，阪崎肠杆菌的检测标准十分重要。
2. 检测方法2.1 阪崎肠杆菌的培养方法阪崎肠杆菌可以在一般细菌培养基上生长，常用的培养基包括MacConkey琼脂培养基和Eosin Methylene Blue〔EMB〕琼脂培养基。
培养时一般在37°C下孵育24-48小时。
2.2 阪崎肠杆菌的生化检测阪崎肠杆菌可以通过一系列的生化反响进行检测和鉴定。
常用的生化试验包括氧化/发酵葡萄糖试验〔O/F试验〕和酮糖酸盐〔Voges-Proskauer〕试验等。
2.3 阪崎肠杆菌的PCR检测PCR〔聚合酶链式反响〕是一种常用的分子生物学方法，可以快速、准确地检测阪崎肠杆菌。
通过特定的引物在PCR反响中扩增阪崎肠杆菌的DNA片段，然后通过凝胶电泳进行检测和鉴定。
3. 检测标准3.1 食品中阪崎肠杆菌的检测标准根据国家食品平安标准，食品中阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 生肉制品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过10 CFU； - 加工食品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过100 CFU； - 饮用水：阪崎肠杆菌在每100毫升样品中不得检出。
3.2 环境中阪崎肠杆菌的检测标准根据环境保护标准，阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 水质：阪崎肠杆菌在每升水样中不得超过100 CFU； - 空气：阪崎肠杆菌在每立方米空气中不得超过100 CFU； - 土壤：阪崎肠杆菌在每克土壤样品中不得超过1000 CFU。
4. 检测流程4.1 样品采集从食品、饮用水或环境样品中采集足够数量的样品。
使用无菌容器收集，并确保样品处于最正确的保存条件。
4.2 样品处理将采集的样品经过适当的处理，在无菌条件下进行前处理，如制备悬浮液或稀释样品。
阪崎肠杆菌科菌种鉴定细菌成分
阪崎肠杆菌科菌种鉴定细菌成分一、引言阪崎肠杆菌科（Sakazakii Enterobacteriaceae）是一种常见的细菌科，包含多种致病性菌种。
其中的阪崎肠杆菌（Cronobacter sakazakii）是一种已知的人类致病菌，能引起新生儿脑膜炎、败血症、肺炎等严重感染。
因此，对于阪崎肠杆菌科菌种鉴定的准确性和全面性要求极高。
二、样品采集与处理1. 采集样品：从食品、环境等来源中采集样品，如奶粉、水源等。
2. 处理样品：将样品进行预处理，如加入缓冲液等，以保证后续操作的可靠性和准确性。
三、培养基选择与制备1. 培养基选择：常用的培养基有Luria-Bertani（LB）、营养琼脂（NA）、大肠杆菌选择性培养基MacConkey（MAC）等。
2. 培养基制备：按照标准配方制备培养基，并进行灭菌处理。
四、细胞分离与纯化1. 细胞分离：将样品接种到培养基中，进行静置或摇床培养，使菌落生长。
2. 细胞纯化：通过不同的方法，如差速离心、磁珠分离等，将目标细菌分离纯化。
五、生化鉴定1. 氧化酶试验：检测细菌是否具有氧化酶活性。
2. 婴儿食品模拟液培养：将细菌接种到婴儿食品模拟液中进行培养，观察是否能够生长。
3. 阳性和阴性反应检测：通过添加不同的试剂观察细菌是否产生阳性或阴性反应。
六、分子生物学鉴定1. PCR扩增：使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。
2. 16S rRNA序列分析：对PCR扩增得到的16S rRNA序列进行测序和比对，并与数据库中的已知序列进行比较。
七、质谱鉴定1. MALDI-TOF MS技术：利用MALDI-TOF MS技术对目标菌株进行质谱分析，并与数据库中的已知质谱图谱进行比对。
八、总结阪崎肠杆菌科菌种鉴定需要综合应用多种方法，包括样品采集与处理、培养基选择与制备、细胞分离与纯化、生化鉴定、分子生物学鉴定和质谱鉴定等。
在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，并注意操作规范和安全性。
GB坂崎肠杆菌检验
2024/6/19 即：不能观察到ES的特征性菌落。
15
显色培养基的选择性较好
• DFI对ES的选择性较好，ES形成的蓝绿色特征性菌落 易于辨认，而且：
硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳 性菌株（如普通变形杆菌）。
ES都可以在DFI平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色
2024/6/19
4
二、培养特征
• G－无芽孢杆菌，兼性厌氧，在6℃-47℃范 围内均可生长，适温35-37℃
• 营养要求不高： VRBGA、TSA、NA、MAC、EMB、其他
与其他常见肠杆菌相似
2024/6/19
5
三、生化反应
生化反应 D-山梨醇 产生吐温80脂酶 细胞外Dnase 氧化酶试验 黄色菌落 α-葡萄糖苷酶
Enterobacter sakazakii(ES)
2024/6/19
1
内容
第一部分：一般特征 第二部分：流行病学特征 第三部分：ES的检验
2024/6/19
2
第一部分：一般特征
命名 培养特征 生化反应 抵抗力 增殖能力 致病性
2024/6/19
3
一、命名
1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌。 • DNA-DNA杂交 • 生化反应 • 黄色素 • 抗生素敏感性
2024/6/19
27
API 20E生化鉴定板典型生化反应图示
API 20E反应编码 3345 373 3305 173 3305 363 3305 373
API 20E结果评价 Excellent identification Excellent identification Very good identification
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阪崎肠杆菌是人和动物肠道内寄生的一种革兰阴 性无芽孢杆菌，属肠杆菌科肠杆菌属，是肠道正 常菌丛中的一种，在一定条件下可引起人和动物 致病。在1980年之前一直被称为黄色阴沟肠杆菌
。
阪崎肠杆菌兼性厌氧，营养要求不高，能耐受一 定程度的渗透压和干燥，能在营养琼脂、血平板 、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、脱氧胆酸琼脂等 多种培养基上生长繁殖。
增殖特性
• 所有的阪崎肠杆菌都能在胰蛋白酶大豆琼脂上 36℃快速生长，24小时后形成直径2～3mm的菌落 ；25℃生长24h后形成直径1～1．5mm的菌落， 48小时后形成直径2～3mm的菌落。 • 坂崎肠杆菌在25℃放置10小时可增加30000倍，即 使婴儿配方粉中只有极微量的污染，阪崎肠杆菌 能在婴儿配方粉中也可长期存活，在配方粉食用 前的冲调期和储藏期该菌可能会大量繁殖。
因阪崎肠杆菌这些特性，使得奶粉生产时不易被杀灭，储 存时易生存下来。
致病性
• 阪崎肠杆菌感染的大多数病例都是婴儿，特别是早产儿、 出生体重偏低等身体状况较差的新生儿。感染主要引起脑 膜炎、脓血症、坏死性小肠结肠炎，阪崎肠杆菌引起的脑 膜炎常引起脑梗塞、脑脓肿、囊肿形成和脑室炎等并发症 ，并且可引起神经系统后遗症或迅速死亡。除了感染新生 儿外，该菌偶尔还可引起成人局部感染和菌血症等。
阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是肠杆菌科的一种，1980年 由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。其有周身菌毛，无芽 孢，有动力。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠 结肠炎和菌血症，死亡率高达50% 以上。目前，微生物学家 尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿 配方粉是目前发现的主要感染渠道。 1961年，Franklin等首次报道了2例由阪崎肠杆菌引起的脑膜 炎病例。以后相继在世界范围内(美国、冰岛、荷兰等国家) 报道了一系列新生儿阪崎肠杆菌感有耐热及耐寒性，在外界环境中比其他肠道 杆菌生存率强，培养最佳温度25—36℃，在6～45℃下都 能生长，某些菌株可在47℃下生长。阪崎肠杆菌比其他肠 杆菌耐高温，LEHNER研究发现阪崎肠杆菌在婴儿配方奶粉 中60℃存活2.5min，并且72℃仍能存活。BREELLWER等观 察阪崎肠杆菌在58℃下能持续0.39～0.60min不死。 • 由于阪崎肠杆菌细胞内含有大量的海藻糖酶，累积有大量 的海藻糖，使得阪崎肠杆菌比沙门菌和其他肠杆菌更耐受 渗透压和干燥。 • 阪崎肠杆菌耐酸性并对清洁剂和杀菌剂有较强抵抗力。 LEH—NER的实验表明，阪崎肠杆菌能在pH0.9～2下存活( 胃部的酸性环境)，可能与阪崎肠杆菌周身菌毛结构有关 ，该菌毛结构易使细菌形成共生集合体，也易粘附在各种 物体表面形成一层生物保护膜，对清洁剂和杀菌剂具有较 强的抵抗力。
菌落特征
• 在胰蛋白胨琼脂(TSA)、脑心浸液琼脂(BHI)及血平板上经25 ～36℃培养24h后，形成1.5～2.5mm，黄色菌落，菌落形 态有2种：一种为典型的光滑型菌落，极易被接种环移动 ，另一种为干燥或粘液样，周边呈放射状，不易被接种环 移动，似橡胶状有弹性。后一种经传代后可转化为有光泽 的菌落。 • 阪崎肠杆菌在MAC琼脂上为无色透明菌落，在TSA及BHI上 生长为黄色菌落，在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBG) 能产生紫红色菌落，而在TSA上加5-溴-4-氯-吲哚-α-D-吡喃 葡萄苷(Xα-GLC)仅阪崎肠杆菌能产生兰绿色菌落，现已作 为阪崎肠杆菌快速培养的选择性培养基，在4-甲基-伞形酮 -α-D-葡萄糖苷(NA+α-MUG)培养基上产生荧光菌落。