常用染色剂及配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞3 g，冰乙酸40ml。
2．配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中，继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中，边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。
2．配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
苏木精等染料的配制
常用染料的性质和配制（1）代氏（Delafield's）苏木精苏木精4g95％酒精25ml苏木精溶解后，逐滴加入加热（80℃）溶化的10％钱明矾水溶液400ml中，瓶口用纱布封盖，放置光线充足处，3—4天后过滤后再加入：甘油100ml甲醇100ml数日后过滤，两月后成熟，溶液变为蓝紫色，方可使用。
放置时间愈长，染色力愈强。
此染液为动、植物最常用的细胞核染色剂。
染色时间一般为3—5分钟，染色后，细胞质亦稍染上颜色，需用0.1％盐酸水溶液褪去细胞质颜色，保存细胞核颜色，这种区别作用称为分色。
（2）爱氏（Ehrlich's）苏木精苏木精2g纯酒精100ml冰醋酸10ml甘油100ml蒸馏水100ml钾明矾2—3g先将苏木精溶于25ml酒精，再加甘油和醋酸。
然后将其余75ml酒精加入。
将钾明矾溶于水中，加热使其溶化，然后慢慢加入苏木精液中，随加随搅，混合后，应放在有光和通风处3星期使其成熟，成熟后为深红色，即可使用。
用法与代氏苏木精一样，染细胞核结果极好。
用稀释液慢染脊椎动物胚胎及无脊椎的幼虫，作整体染色效果颇佳。
（3）铁矾苏木精液（又名Heidenhain's苏木精液）苏木精0.5g95％酒精10ml重蒸馏水90ml将苏木精先溶于10ml酒精中，然后慢慢倒入重蒸馏水中，瓶口用纱布扎紧静置于有光处。
约1个月后，苏木精被氧化，溶液变为深琥珀色，即可用。
此时要将瓶塞塞好。
此液可以放置很久，是较好的染核结构的染色剂。
（4）伊红（Eosin）伊红又称曙红，为染胞浆、胶原纤维、肌纤维及嗜酸性颗粒等常用的染料，是一种酸性染料。
伊红的种类很多，一般分水溶和酒溶两种。
伊红配法很简单，水溶液一般用0.1—1％，酒精溶液用60—96％酒精溶化，浓度与水溶液相同。
（5）苏丹（Sudan）Ⅲ苏丹Ⅲ 0.3—0.5g70％酒精100ml（6）莱氏（Wright's）染料莱氏染料（粉末）0.1g甲醇（A．R）60ml先把染料放入研钵研细后，加入少量甲醇反复研磨，最后将全部甲醇加入研匀后，用吸管吸入棕色瓶保存备用。
常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
细胞染色剂
1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。
还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。
如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。
2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。
称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。
把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。
用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。
柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。
使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。
3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。
也可用于鉴定多肽。
4、苏丹Ⅲ配制：取0.1g苏丹Ⅲ，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色）。
5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。
作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。
能杀死细胞固定。
6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。
7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。
常用染色液的配制
常用染色液的配制１．染料饱和酒精溶液的配制配制染色液常先将染料配成可长期保存的饱和酒精溶液，用时再予以稀释配制。
配制饱和酒精溶液，应先用少量95％酒精先在研钵中徐徐研磨，使染料充分溶解，再按其溶解度加于95％酒精之中，贮存于棕色瓶中即可。
附表1 几种常用染料在95%酒精中的溶解度(26℃)染料名称美蓝结晶紫龙胆紫碱性复红沙黄溶100mL95％酒精中的重量(g) 1.4813.8710.003.203.412．常用染色液的配制（１）碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液：取美蓝饱和酒精溶液30ml，加入0.01％氢氧化钾水溶液l00mL，混合即成。
此染色液在密闭条件下可保存多年。
若将其在瓶中贮至半满，松塞棉塞，每日拔塞摇振数分钟，并不时加水补充失去的水分，约1年后可获得多色性，成为多色美蓝染色液。
（２）草酸铵结晶紫(亦称赫克结晶紫)染色液：取结晶紫饱和酒精溶液2mL，加蒸馏水18mL稀释10倍，再加入1％草酸铵水溶液80mL，混合过滤即成。
（３）革兰氏碘溶液：将碘化钾2g置乳钵中，加蒸馏水约5mL。
再加入碘片1g，予以研磨，并徐徐加水，至完全溶解后，注入瓶中，被加蒸馏水至全量为300mL即成。
此液可保存半年以上，当产生沉淀或褪色后即不能再用。
（４）沙黄水溶液：沙黄也称番红花红。
将沙黄饱和酒精溶液以蒸馏水稀释10倍即成。
此液保存期以不超过4个月为宜。
（５）石炭酸复红染色液：取3%复红酒精溶液10mL，加入5％石炭酸水溶液90mL混和过滤即成。
（６）稀释石炭酸复红染色液：将石炭酸复红染色液以蒸馏水稀释10倍即成。
（７）3％盐酸酒精(亦称含酸酒精)：加浓盐酸3mL于95%酒精97mL中即成。
（８）瑞士染色色液：取瑞氏染料0.1g置乳钵中，徐徐加入甲醇，研磨以促其溶解。
将溶液倾入有色中性玻瓶中，并数次以甲醇洗涤乳钵，亦倾入瓶内，最后使全量为60mL即可。
将此瓶置暗处过夜，次日滤过即成。
此染色液须置于暗处，其保存期约为数月。
常用染色液和试剂的配制
一、埃利希(EhrIiCh)氏苏木精染液先将苏木精2g溶于IOOm1乙醇中，再加冰醋酸IOm1,混合后加蒸储水IOOm1和IOOm1甘油，然后加硫酸铝钾(约Iog)至饱和，搅拌均匀，倒入瓶中。
将瓶口用1层纱布包着小块棉花塞上，放在暗处通风的地方，并经常摇动促进“成熟”，直到液体颜色变为深红色为止。
成熟时间约2-4周。
若加0.4g碘酸钠可加快成熟。
二、吉姆萨(GiemSa)氏母液将吉姆萨粉末Ig先溶于少量甘油，在研钵内研磨30min以上，至看不见颗粒为止，再将全部(66m1)剩余甘油倒入，于56℃温箱内保温2h。
然后再加入甲醇(66m1),搅匀后保存于棕色瓶中。
母液配制后放入冰箱可长期保存，一般刚配制的母液染色效果欠佳，保存时间越长越好。
临用时用PH6.8的磷酸盐缓冲液稀释10倍。
三、瑞(Wright)氏染液称取瑞氏染料粉末OJg于研钵内研细后，加入少量甲醇再反复研磨，最后将全部甲醇(总共60m1)加入研匀，染料全部溶解后，将染液保存于棕色瓶内备用。
四、醋酸洋红染液将洋红粉末Ig倒入IOOm145%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s),冷却后过滤，即可使用。
也可再加入1%~2%铁明矶水溶液5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。
如制作永久标本染色时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。
五、硫堇染液(工作液)①干液(硫堇)：硫堇Ig或2g溶于Ioom150%乙醇中，溶解后过滤备用；②醋酸钠缓冲液：醋酸钠∙3H2O9.7g,巴比妥钠14.7g,溶于50Om1蒸储水中；③0.1mo1/1盐酸；按①：②：③=40：28：32比例配成混合液，调pH5.7±0.2,即得硫堇工作液。
六、0.02%盾纳斯绿B(JanusGreenB)用0.9%生理盐水溶液配制。
七、甲基绿一派洛宁染液(Unna试剂)派洛宁0.25g,甲基绿0.15g,95%乙醇20m1,甘油20m1。
生物实验中常用的化学试剂
中学生物实验中常用的化学试剂临洮玉井职专黎伟730502一、常用的染色剂1．苏丹III染色剂：它是一种弱酸性染料，红色粉末，易溶于脂肪和酒精（溶解度0.15%），使用时取0.01克苏丹III、加90%的酒精5毫升溶解，并加甘油5毫升，即成为苏丹III。
该试剂遇到脂肪反映产生橘黄色，木栓层、角质层也能染色。
2．苏丹IV染色剂：该物质和苏丹III相似，使用时取该物质0.1克溶解于100毫升的氯仿中，即成为苏丹III染色剂，该试剂遇到脂肪产生红色。
3、龙胆紫染色液；它是由结晶紫和甲基紫混合而成的碱性染料，它能使细胞核中的染色体（染色质）染成紫色。
4．醋酸洋红液：取45毫升的冰醋酸，加蒸馏水55毫升，再加入洋红1克，搅拌均匀，加入一颗生绣的铁钉，煮沸10分钟，冷却过滤，成为常用的醋酸洋红液，储存在棕色瓶中。
5．二苯胺试剂：主要用于DNA鉴定，使用时取二苯胺0.8克，溶解于180毫升的冰醋酸中，再加入8毫升的过氯酸，使用前加入1.6%的乙醛0.8毫升，溶液为无色，该试剂遇DNA产生紫色反应。
6．番红：是从藏红花中提取出来的一种天然染料，染色时先将木质化的组织切成片，浸于50%的酒精中，再用1%的番红染色，70%的酒精脱色木质化的细胞壁染成红色。
7．间苯二酚：在酸性环境中间苯二酚可使木质化的细胞壁染成红色，配制液为5%的水溶液，染色后易退色，适合做临时装片的染色剂。
8．苯胺蓝：使用时配制成9%的酒精溶液，苯胺蓝把纤维细胞壁染成蓝色（未着色的部分为淡蓝色）。
9．固绿：主要用于纤维素细胞壁的染色，固绿呈现绿色，使用时与番红配合使用。
染色的方法是先用番红染色30分钟，75% 酒精脱色，纤维素细胞染成红色，再用固绿染色，最后使细胞壁呈绿色，其他部分呈红色。
10．碘——氯化锌：该染色剂能把细胞壁染成蓝紫色；配制方法：20克氯化锌、6.5克黄化钾、1.3克、碘1.5克水混合而成，该试剂储存在避光处。
11．碘——碘化钾：配制方法是取3克KI溶于5毫升蒸馏水中，再加入1克碘，置于棕色瓶中保存；染色时将配制的原液稀释，碘——碘化钾能将细胞质染成黄色，使淀粉染成蓝色。
实验室常用染色液配方
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。
2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。
将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。
将两者混合即成。
3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。
将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。
两液混合即成。
4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾 2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。
5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。
7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。
8、刚果红染色液刚果红(Congo red)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。
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常用染色剂及配制
常用染色剂及配制
供组织学诊断用的优秀常规染色剂，不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染，也要使结缔组织着色。
苏木素-伊红染色的切片适当分色，可使这些结构得以区分，胞核表现为蓝色，胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红，因此这是一种最常用的常规染色剂。
一、苏木素-伊红染色的基本原理
苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一，百余年来，一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料，它是从苏木树的树心中提炼出来的，为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。
易溶于乙醇、甘油，也可溶于热水。
苏木素本身没有染色能力，它经过氧化后，能产生具有染色能力的苏木红，苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。
苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。
成熟的方法一般有两种：一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上，让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。
故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处，时间愈长，染色的效果愈好。
常配制一大瓶，备长期使用。
另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂，如磺酸钠，过锰酸钾，氧化汞，双氧水等。
用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是，它放置时间愈长，染色的效果愈低。
这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物，故一次不宜配制过多，还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。
它的优点是配制后即可使用。
成熟的苏木素对组织并无亲和力，须加入含金属离子的媒染剂，才能达到染色的目的。
一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。
主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色，对染色质有很大的亲和力，水和酒精都不能使其褪色。
用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子，苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色，不溶于水，因此，故不能配制大量含媒染剂的混合液，一般用时现配，或在染色过程中，先用铁明矾媒染，然后再染苏木素，如磷钨酸苏木素染色即是。
常规苏木素染色的对比染色是用伊红，也有采用焰红，因为焰红比伊红色泽更鲜明，此外还有采用橘黄G，比布里希猩红，波尔多红等作为对比染色。
苏木素-伊红染色，在组织病理学中，是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。
一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。
再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色。
二、染液的配制
在实验室内常用的苏木素染液有以下几种，不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点，不过各有优劣。
（一）苏木素染液的配制方法如下
1.Harris氏苏木素液
甲液：苏木素1g
无水酒精10ml
乙液：硫酸铝钾20g
蒸馏水200ml
丙液：一氧化汞0.5g
经典的配制方法是，先将甲液加热溶解后，密封待用，再将乙液加热溶解至沸，去火，待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中，全部混合后，再使溶液在短时间内加热至沸腾，去火，最后，将氧化汞缓慢倾入溶液中（氧化汞一定要慢慢少量分次加入，切忌急躁。
因氧化汞倒入后，溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。
）此时液体变为深紫色，待氧化汞全部放入后，再将溶液加温至沸腾片刻，立即将溶液放入流动的冷水中，并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。
隔夜后过滤，加入冰醋酸（按5%比例）混匀，再过滤后保存于
冰箱内备用。
我们在实验工作中摸索了一种Harris氏苏木素的配制方法，染色效果很好，特介绍如下。
配方：（配制2000ml）
苏木素9g
硫酸铝胺（铵明矾）200g
氧化汞7g（5—10g）
冰醋酸100ml
蒸馏水2000ml
器具：
3000毫升三角烧瓶1个
200毫升量筒1个
1000毫升量筒1个
漏斗1个（大）
滤纸1大张
另备脱脂棉、电炉、湿抹布、大称量纸、流水槽等。
（器具要求达到化学洁净）
配法：
1．将苏木素溶于100毫升无水乙醇中，密封备用。
2．将200克铵明矾溶于2000毫升蒸馏水中，加热至沸。
3．去火。
加入苏木素酒精搅拌，加热至沸。
4．去火。
缓缓加入氧化汞。
5．微火煮至有金属膜产生。
6．去火。
以湿抹布包住三角烧瓶的颈部。
迅速放置于冷水浴中冷却，缓缓摇动烧瓶至液体完全冷却为止。
7．静置避光过夜。
棉花过滤。
滤液中加入冰醋酸（按5%的比例加入），混匀，滤纸过滤，备用。
注意事项：
1．配制好的苏木素液，未经使用的可长期置冰箱（冷藏）内保存。
2．盛液体的烧瓶要质优并且容积要大，防止忽速冷却对破裂和煮沸时液体溢出。
2.Hansen氏苏木素液
甲液：苏木素1g
无水酒精10ml
乙液：硫酸铝钾（钾明矾）20g
蒸馏水200ml
丙液：高锰酸钾1g
蒸馏水16ml
先将甲液加热溶解，然后将乙液加热溶解，将甲、乙两液混合。
再将丙液溶解后缓缓滴入，待全部混合后，再次煮沸一分钟，冷却后过滤，即可使用。
3.Heidenhain氏铁苏木素液
甲液：硫酸铁铵（紫色结晶）5g
蒸馏水100ml
乙液：苏木素0.5g
无水酒精10ml
蒸馏水90ml
此液要求硫酸铁铵只有紫色的透明结晶才能使用；苏木素是溶于洒精中然后加水。
苏木素液需放置4-5周才能成熟。
临用时将甲、乙两液等量混合后使用。
（也可先将苏木素用无水酒精配成5%的贮备成熟，用时取10毫升加蒸馏水至100毫升使成乙液）此苏木素液能染许多结构，但只能用于退行性染色法，需要熟练的分化，初学者宜用减半浓度的铁明矾分色，熟悉后再用原浓度分色。
此液与其它的苏木素染色技术有两个不同a.媒染剂与苏木素分开使用。
b.所用的媒染剂亦用作为分色剂。
4．Ehrilich氏酸性苏木素液
主要应用一般染色和粘液，骨组织的染色
配方：苏木素2g
纯酒精100ml
甘油100ml
蒸馏水100ml
冰醋酸10ml
钾明矾15g
将苏木素溶于纯酒精，再将钾明矾溶于蒸馏水中，溶解后将甘油倾人混合，然后加入苏木素酒精混合，最后加人冰醋酸，溶液全部混
合后，应暴露在日光下使其自然成熟，时间约要三个月。
（若加人300毫克碘酸钠，使苏木素迅速氧化则可立即使用。
）此液贮存愈久染色力愈强。
（可保持数年之久）染色时间5——20分钟，结果甚佳。
5．Delafreld氏苏木素液
主要应用于一般染色，弹力纤维的染色。
甲液：苏木素4g
纯酒精25ml
乙液：饱和铵明矾水溶液（约10％）40毫升
丙液：甘油100ml
甲醇100ml
先将苏木素溶于酒精，再将甲液混合在乙液中，置于白色瓶中并暴露在阳光下约一周，然后过滤，将丙液加人滤液中，待溶液呈暗灰色时再过滤，滤液密封保存。
6．Mayer氏明矾苏木素液
主要应用于一般染色，骨组织染色，及免疫组化染色。
配方：苏木素0.1g
钾明矾5g
碘酸钠0.02g
拘椽酸0.1g
水合氯醛5g
蒸馏水100ml
先将苏木素及水煮沸溶解，加人钾明矾与碘酸钠，搅动直到全部溶解为止。
再加人水合氯醛和拘椽酸，完全溶解后染液呈蓝紫色。
加热煮沸五分钟，冷却后过滤即成。
此染液染切片5——15分钟，不需分化，充分水洗后，可使细胞核显蓝色并且非常细致清晰，通常用于对比染色。
7．Weigert氏铁苏木素液
甲液苏木素1g
无水酒精（或95％酒精）100ml
乙液29％三氯化铁水溶液4ml
蒸馏水95ml
盐酸1ml
临用时，取甲、乙液等量混合即可应用。
混合时应将乙液加人甲液内，染液呈紫黑色。
铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用，因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀，所以铁作媒染液时，必须与染液分别配制和分别保存，染片时临时混合应用。
由于这是一种铁苏木素，它将胞核染成黑色。
能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用，且不会被光线退色，因此比钾矾苏木素染色较为持久。