黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素B1酶联免疫定量检测试剂盒 说明书
1ELISA kit for quantitative detection of aflatoxin B1一、概要黄曲霉毒素主要是两种霉菌黄曲霉及 A.paraticus的二级代谢物。
这些霉菌在湿热的环境和耕作土地上污染的植物产生。
黄曲霉毒素B1（AFB1）属于自然最强烈的致癌物质，它一般产生于花生、玉米、巴西坚果和棉花种子中。
本试剂盒利用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对各种谷物、饲料及其他食品中的AFB1含量进行快速、定量检测。
二、原理本试剂盒是利用直接竞争酶联免疫吸附微孔模式进行检测，灵敏度可达0.1 µg/kg（ppb）。
样品或标准品中游离的黄曲霉毒素B1与酶标抗原竞争结合包被在微孔中的抗体上的结合位点，经洗板洗去多余的酶标抗原与黄曲霉毒素B1后加入显色剂与反应底物，其与酶标物作用而成蓝色，加入反应停止液后颜色由蓝色转变为黄色，黄色越深则表明黄曲霉毒素B1越少，用酶标仪在450 nm处测定光吸收值可准确定量检测样品中的黄曲霉毒素B1的污染水平。
三、试剂盒构成1、反应板支架……………………………………………………………………………1块2 黄曲霉毒素B1抗体包被反应板……………………………………………………96孔3、黄曲霉毒素B1标准品溶液（0 ppb，0.1 ppb，0.25 ppb，0.5 ppb，1 ppb，2 ppb）…1套4、酶标记物…………………………………………………………………4瓶5、酶稀释液……………………………………………………………………1瓶6、样品稀释液………………………………………………………………1瓶7、显色剂溶液………………………………………………………………………1瓶8、反应底物溶液………………………………………………………………1瓶9、终止液………………………………………………………………………………1瓶10、浓缩洗涤液（20 X）………………………………………………………1瓶四、注意事项1、试剂盒请置放于2-8℃条件下保存，使用过程中不要让微孔干燥，使用后立即将试剂放回至2-8℃条件下冷藏。
黄曲霉毒素AFB1_说明书
6. 浓缩洗涤液 （10×） …………………………… 40ml 7. 样品稀释液（10×） ……………………………… 20ml 8. 操作说明书一份
注意：标准品含有低浓度黄曲霉毒素、终止液含 2M HCl， 需小心取用。勿在有效期外使用本试剂盒。
【需要而未提供的设备及试剂】
设备： ┅┅微孔板酶标仪 450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量 0.01g ┅┅微量移液器：单道 20μl～200μl、200μl～1000μl 多道 250μl ┅┅滤纸
【样本前处理步骤】
（一） 谷物（大、小米，玉米等脂肪含量少的谷物）（稀 释倍数：10）
┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀；
┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取400μl 上清液，加入600μl 样品稀释液进行稀释， 充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （二） 花生（稀释倍数：10）
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┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 2.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇/水溶液混合均匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （三）食用油（稀释倍数：10） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml 石油醚混合均匀； ┅┅再加入 4ml50%甲醇水溶液混合，振荡 1min； ┅┅静置 10min； ┅┅取 400μl 下层清液，加入 600μl 样品稀释液进行稀 释，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （四）饲料（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0g 粉碎的样品与 4.0ml50%甲醇/水溶液混合均 匀； ┅┅强力振荡 3 分钟； ┅┅5000g 离心 10min； ┅┅取上层清液 2.0ml，加入 2.0ml 三氯甲烷用 1.5ml 样 品稀释液进行稀释； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul 50%甲醇/水（1:1）溶液溶解，并加入 750ul 样品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （五）面粉（稀释倍数：10） ┅┅取 1g 面粉样品，加入 4ml 50%甲醇/水溶液； ┅┅充分振荡 3min； ┅┅5000g 离心，10min； ┅┅取上层清液 500ul 并加入1ml 三氯甲烷，轻摇三分钟， 静置分层； ┅┅取 500ul 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 250ul 50%甲醇/水溶液溶解，并加入 375ul 样 品稀释液，充分混匀； ┅┅取 50μl 稀释后液体待测。 （六）葡萄酒（稀释倍数：5） ┅┅取 1.0ml 葡萄酒样品，加入 4.0ml 三氯甲烷； ┅┅轻摇三分钟，静置分层； ┅┅取 1ml 下层液（三氯甲烷层），60℃氮气吹干； ┅┅加入 500ul50%甲醇/水溶液溶解，再加入 750ul 样品 稀释液，充分混匀；
粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法编制说明
《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》编制说明黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。
黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种。
在天然食物中以黄曲霉毒素B1最为多见，危害性也最强，国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。
黄曲霉毒素B1对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麦、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区受污染最为严重。
目前，GB 2761-2011《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中对谷物及其制品中黄曲霉毒素B1的最高限量为20μg/kg。
黄曲霉毒素B1的检测方法主要有高效液相色谱法、酶联免疫法、胶体金免疫层析法等，以往利用胶体金免疫快速检测法可对黄曲霉毒素B1样品进行定性分析，适用于阳性样品的初筛，不能准确定量。
本标准项目是通过化学合成法制备黄曲霉毒素B1人工抗原，利用此抗原免疫实验动物制备黄曲霉毒素B1单克隆抗体，基于此原料基础上开发黄曲霉毒素B1快速检测试纸条，再通过胶体金读数仪进行大米、玉米、小麦样品中黄曲霉毒素B1的定量分析。
本标准有助于提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障从业人员健康安全。
1工作简况1.1任务来源及起草单位本行业标准是在2012年12月国家粮食局标准质量中心组织对美国Charm公司开发的ROSA真菌毒素快速定量测试系统进行测试验证，并对验证结果进行专家评审通过的基础上提出并立项。
根据国家粮食局标准质量管理办公室质检办便函[2014]15号文件《关于下达2014年粮油行业标准制定计划的通知》的要求，由湖北省粮油食品质量监测站牵头负责《粮油检验粮食中黄曲霉毒素B1检测胶体金快速定量法》的起草工作。
起草单位成立了标准起草组负责进行本标准的各项工作。
上海快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡说明书
快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡检测原理：快灵生物黄曲霉毒素B1检测卡基于胶体金免疫层析技术。
检测时，样品中的黄曲霉毒素B1在流动过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体与固相载体膜上的黄曲霉毒素B1-BSA偶联物的结合，如果样品中的黄曲霉毒素B1含量大于灵敏度，检测线在规定时间内不显颜色，结果为阳性，反之，检测线显红色色带，结果为阴性。
无论检测液中黄曲霉毒素B1浓度高低，C线均显红色色带。
适用情况：黄曲霉毒素B1检测卡适用于饲料、粮食、食品企业进行黄曲霉毒素B1的定性或半定量检测；检测样品：谷物、饲料、发酵酒、酱油、醋、食用油等；检测下限：5ppb；试纸特点：黄曲霉毒素B1检测卡可以通过调整稀释倍数准确地检测5ppb、10ppb、20ppb、50ppb或更高阈值；回收率高而稳定（80%左右）；黄曲霉毒素B1检测卡检测背景影响小；通过设置检测梯度实现半定量检测；无毒无害，安全环保；有效期：2~30°C保存18个月。
常见问题：1）用试剂盒定量检测为阳性，但是用试纸卡检测为阴性？答：黄曲霉毒素的生长是呈现不均匀性的，采样不均一可能导致这种结果。
2）说明书后面的残留限量表怎么用？答：残留限量表上面一栏标注有“残留限量”单位是ppb的栏目，是要客户根据自己要测定的标准来选择下面对应稀释液的数量，比如客户是饲料厂，国标规定黄曲霉毒素B1的含量不能超过20ppb，那么在试验中，客户需要加的稀释液的量就是20ppb下面对应的数量。
3）除了产品以外，客户还需要购买其他配套设备和试剂吗？答：配套设备只需要准备基础的实验器材，比如烧杯，电子称等，试剂需要配备乙酸乙酯有机溶剂，规格是分析纯，到普通的化学试剂店就可以买到，价格便宜。
4）试验中提到的纯水可以用蒸馏水代替吗？答：可以。
5）检测时间大概多久？答：加上前处理最多需要半个小时。
6）阴性和阳性各代表什么意思？答：阴性代表样品中不含有毒素或者含有的毒素含量没有超过检测的限量；阳性代表样品中的毒素含量超过了检测限量。
食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201708)
附件2食用油中黄曲霉毒素B1的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201708）1范围本方法规定了食用油中黄曲霉毒素B1的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于花生油、玉米油、大豆油及其他植物油脂等食用油中黄曲霉毒素B1的快速测定。
2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。
样品中的黄曲霉毒素B1经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。
通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中黄曲霉毒素B1进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1甲醇。
3.1.2十二水磷酸氢二钠。
3.1.3二水磷酸二氢钠。
3.1.4氯化钠。
3.1.5吐温-20。
3.1.6提取液：30%甲醇水或胶体金免疫层析检测试剂盒专用提取液或根据产品使用说明书配置。
—1—3.1.7稀释液：称取2.90 g十二水磷酸氢二钠（3.1.2），0.296 g二水磷酸二氢钠（3.1.3），4.50g 氯化钠（3.1.4），溶解于400 mL水中，加入0.5 mL吐温-20（3.1.5），用水稀释至500mL，混匀即成稀释液；或使用胶体金免疫层析检测试剂盒专用稀释液。
3.2参考物质黄曲霉毒素B1参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。
表1 黄曲霉毒素B1参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量注：或等同可溯源物质。
3.3标准溶液的配制3.3.1 黄曲霉毒素B1标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取适量黄曲霉毒素B1标准品（3.2），置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的黄曲霉毒素B1标准储备液；或可直接购买黄曲霉毒素B1标准储备液。
-20℃避光保存备用，有效期3个月。
黄曲霉毒素试剂盒说明书
黄曲霉毒素 B1酶联免疫检测试剂盒使用说明书Ⅰ．样品处理方法一、食品1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
2、酱油、醋称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。
挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。
根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
4、葡萄酒准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。
黄曲霉毒素快速检测卡使用方法
黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉中产毒菌株所产生的有毒代谢产物，最主要的4种分别为：B1、B2、G1、G2。
黄曲霉毒素具有很强的急性毒性，也有明显的慢性毒性及强致癌性。
黄曲霉毒素主要污染粮、油及其制品，其中受污染最严重的是花生、棉籽、玉米及其制品；其次是稻米、小麦、大麦、高粱、芝麻、茶叶等。
【检测原理】该试剂盒采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术进行检测。
【检测范围】酱油检测限为5ppb花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料检测限为10ppb食用油检检测限为10ppb【产品组成】名称数量名称数量黄曲霉毒素B1卡10条样品稀释液11瓶样品稀释液21瓶乙酸乙酯1瓶15ml离心管2只2ml离心管10只一次性手套3只滴管10支说明书1份【检测步骤】1、酱油检测：取100ul酱油加入配套的2ml离心管中，加400ul稀释液1，摇匀. 取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
2、花生、玉米、小麦、大米、茶叶、饲料等检测⑴. 取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15ml离心管中。
⑵．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
⑶．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液1复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.⑷．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
⑸．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
取1ml待测食用油样品于2ml离心管中，加入1ml样品稀释液2，振荡5min，取上清液100ul，加100ul 样品稀释液1稀释，加样检测。
5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
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黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)说明书
【产品名称】
产品名称：黄曲霉毒素B1快速检测卡(胶体金法)
英文名称：Aflatoxin B1 Rapid Test Card (Colloidal Gold)
【产品简介】
黄曲霉毒素是一类丝状真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）产生的有毒代谢产物，黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，其毒性作用主要是对肝脏的损害。
黄曲霉毒素B1污染的食物主要是玉米、稻谷、小麦、花生、花生油等粮油食品，且以南方高温、高湿地区污染最为严重。
本产品用于快速检测玉米油、花生油、葵花籽油等食用油中黄曲霉毒素B1残留，检测过程只需要20分钟，适用于家庭、超市、食堂、食品企业及检测机构的快速筛查。
【包装规格】5次/盒。
【产品组成】黄曲霉毒素B1快速检测卡（5条）；1mL刻度吸管（10支）；提取瓶（内含黄曲霉毒素B1提取液2mL，5瓶）。
【检测原理】本产品采用了竞争抑制免疫层析的原理。
【检出限】本产品检测方法对玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，对其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
根据《食品真菌毒素限量GB2761-2011》规定，玉米油、花生油黄曲霉毒素B1检出限量为20μg/kg，其他食用油黄曲霉毒素B1检出限量为10μg/kg。
【使用方法】
1、玉米油或花生油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样2mL（用吸管移加2次）；
其他食用油检测：用1mL刻度吸管向提取瓶中加入油样4mL（用吸管移加4次）。
2、盖紧提取瓶盖，用手上下振荡30-60秒，静置10分钟，待样品分成上下两层。
3、从包装袋中取出检测卡，平放在桌面，用另一只新吸管从提取瓶中吸取少量下层液体，
垂直滴加3滴（约100μL）于检测卡加样孔（S孔）中。
4、室温环境计时约10分钟，根据示意图判定结果。
【结果判定】
阴性（-）：T线显色比C线深或一样深，均表示样品中黄曲霉毒素B1浓度低于检出限。
阳性（+）：T线显色比C线明显变浅或T线不显色，表示样品中黄曲霉毒素B1浓度等于或高于检出限。
无效：未出现C线，表明操作过程不正确或试纸卡已失效。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸卡重新测试。
【注意事项】
1、请按照使用方法进行测试，检测卡打开包装后1小时内使用，检测前将检测卡和待检样品恢复至室温。
2、尽量不要触摸试纸卡中央的白色膜面，检测时避免阳光直射。
3、本检测卡为一次性产品，请勿重复使用。
4、提取瓶内液体不可食用，避免儿童接触，检测完后液体可倒入下水道，包装可随生活垃圾处理。
5、本产品检测结果仅供参考，如需确证，请参照国家相关标准方法。
【储存及有效期】
原包装应储存于2～8℃，阴凉避光干燥处，切勿冷冻；有效期12个月。