胶体金检测技术
胶体金快速检测技术试验(传染病实验课)
实验四胶体金快速检测技术试验一、胶体金试纸条诊断技术的原理：以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。
二、层析法免疫胶体金检测方法的优点：• 1.方便使用，体现在操作简单，不需经过特殊培训。
• 2.短时间获得检测结果，一般10－15分钟即可得出结论。
• 3.不同环境下的稳定性好，不需冷藏。
• 4.相比而言，其生产成本和检测成本均较低。
• 5.检测标本种类多：可用于查血、尿液或粪便。
•三、应用•猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡•原理：猪伪狂犬抗体检测试剂盒（胶体金法），系采用国际最先进的胶体金免疫层析技术检测样本（全血、血清、血浆）中抗猪伪狂犬抗体的方法。
整个试验只需20分钟，操作简便、快速、准确，灵敏度高、结果直观、容易判定。
• 1.操作方法：•①在检测卡的加样孔内加入100μl待检血清或血液样品。
•②将检测卡平放于桌面上，在室温下静置5-20分钟内判定结果。
超过20分钟的结果只能作为参考。
• 2.结果判定：•♦阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线。
猪伪狂犬抗体滴度越高，检测线（T）颜色越深。
•♦弱阳性：在观察孔内，检测线区（T）及对照线区（C）同时出现紫红色线，但检测线区（T）出现的颜色很浅。
•♦阴性：在观察孔内，只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
•♦失效：在观察孔内，对照线区（C）和检测线区（T）都不出现色线；或仅检测线区（T）出现色线。
•猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病抗体快速金标检测卡原理、操作方法、结果判定与猪伪狂犬病抗体快速金标检测卡的基本相同••••。
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究胶体金免疫层析技术是一种在食品检测中广泛应用的方法。
该技术利用胶体金颗粒的特性，在固体支撑上进行免疫层析反应，实现对分析物的检测。
本文将从胶体金免疫层析技术的原理、方法和应用等方面进行介绍，并探讨该技术在食品检测中的优势和未来发展方向。
首先，胶体金免疫层析技术是基于免疫学原理的一种快速、灵敏、特异的检测方法。
该技术利用胶体金颗粒的特殊性质，即在纳米尺度下具有高度可控的光学和电化学性质。
由于胶体金颗粒的尺寸和形态可以通过调整合成条件进行控制，因此可以用于检测不同大小和形态的分析物，包括蛋白质、DNA、细菌等。
其次，胶体金免疫层析技术的方法简单、操作便捷、成本低廉。
在实际操作中，只需将样品滴加到含有胶体金颗粒和特异抗体的免疫纸条上，然后等待几分钟即可观察到胶体金颗粒在纸条上的迁移情况。
通过观察纸条上的色带出现与否以及色带的颜色变化，可以判断样品中是否存在目标分析物，并进行定量分析。
相比于传统的基于酶标记技术的免疫层析方法，胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备和多步酶标记过程，因此更加简便快速。
再次，胶体金免疫层析技术在食品检测中具有广泛应用前景。
目前，该技术已被应用于多种食品中的残留物检测，包括食品中的农药、重金属、毒素等。
例如，研究人员利用胶体金免疫层析技术能够检测到食品中的抗生素残留、农药残留、酶毒素等，在食品安全监测中起到了重要的作用。
此外，胶体金免疫层析技术还可以应用于快速检测食品中的转基因成分、食品中的过敏原等。
最后，尽管胶体金免疫层析技术在食品检测中已经取得了一定的成就，但仍面临一些挑战和未解决的问题。
例如，该技术在样品预处理、灵敏度、特异性等方面还需要进一步优化和改进。
此外，胶体金颗粒的稳定性和存储问题也需要解决，以确保该技术能够在实际应用中长期稳定地实现。
因此，未来的研究方向应该着重解决这些问题，提高胶体金免疫层析技术的准确度和可靠性。
综上所述，胶体金免疫层析技术作为一种快速、灵敏、特异的检测方法，具有广泛的应用潜力。
胶体金 检测方法
胶体金检测方法1. 背景介绍胶体金是一种由纳米粒子组成的胶体溶液，具有广泛的应用领域，包括生物医学、材料科学和化学分析等。
在这些领域中，准确、快速地检测胶体金的浓度和性质非常重要。
本文将介绍几种常用的胶体金检测方法。
2. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种常用的胶体金检测方法。
胶体金溶液在紫外可见光谱范围内具有特征吸收峰，根据吸收峰的强度可以确定溶液中胶体金的浓度。
这种方法简单、快速，并且不需要复杂的仪器设备。
然而，紫外可见光谱法对溶液中其他物质的干扰较大，因此在实际应用中需要进行适当的预处理。
3. 动态光散射法动态光散射法是一种通过测量溶液中颗粒子散射光强度来确定颗粒子浓度和尺寸的方法。
胶体金颗粒在光照射下会发生散射，散射光强度与颗粒子浓度成正比。
通过测量散射光的强度随时间的变化，可以得到胶体金的浓度和颗粒大小分布。
动态光散射法具有高灵敏度和较好的准确性，但需要专用的仪器设备和复杂的数据处理。
4. 原子力显微镜法原子力显微镜法是一种直接观察胶体金颗粒形貌和尺寸的方法。
通过扫描溶液中的胶体金颗粒表面，可以得到纳米级别的分辨率。
这种方法可以提供关于颗粒形貌、大小和分布等信息，并且不需要稀释样品或特殊处理。
然而，原子力显微镜法需要高昂的设备投资，并且操作相对复杂。
5. 表面增强拉曼光谱法表面增强拉曼光谱法是一种结合了拉曼光谱和表面增强效应的检测方法。
胶体金颗粒具有优异的表面增强效应，可以大幅增强溶液中分子的拉曼散射信号。
通过测量胶体金溶液中分子的拉曼光谱，可以确定分子的种类和浓度。
表面增强拉曼光谱法具有高灵敏度和较好的选择性，但需要专用的仪器设备和复杂的样品制备。
6. 其他方法除了上述方法外，还有一些其他胶体金检测方法，如电化学法、质谱法和电子显微镜法等。
这些方法各有优缺点，在特定应用领域中有其独特的价值。
7. 结论胶体金检测方法多种多样，每种方法都有其适用的场景和限制。
在选择合适的检测方法时，需要考虑实验条件、样品特性和所需结果等因素。
胶体金法和干化学的区别
胶体金法和干化学的区别在医学检测领域，胶体金法和干化学法是两种常见的检测技术。
它们在操作原理、应用范围和准确性等方面存在一定差异。
本文将详细解析胶体金法和干化学法的区别，以帮助大家更好地了解这两种检测方法。
一、定义及原理1.胶体金法：胶体金法是一种基于免疫层析技术的快速检测方法。
它利用胶体金颗粒与抗原或抗体的特异性结合，通过显色条带的出现来判断检测样本中是否含有特定的病原体或物质。
2.干化学法：干化学法是一种以干燥的试剂层为基础的检测方法。
它通过检测样本与试剂层中的干燥化学试剂反应产生的颜色变化，来判断样本中特定物质的含量。
二、操作过程1.胶体金法：操作简便，无需特殊设备。
将待测样本滴在试纸上，通过毛细作用在试纸上移动，与胶体金标记的抗原或抗体结合，形成显色条带，根据条带的出现与否判断结果。
2.干化学法：操作同样简便，但需将样本滴在含有干燥化学试剂的试剂层上。
样本中的特定物质与试剂层中的化学试剂反应，产生颜色变化，通过对比色卡或仪器读取结果。
三、应用范围1.胶体金法：广泛应用于病原微生物检测、激素检测、药物残留检测等领域，尤其适用于现场快速检测。
2.干化学法：主要用于尿液、血液等生物样本中特定物质的定量或定性检测，如尿糖、尿蛋白、血红蛋白等。
四、准确性及重复性1.胶体金法：准确性较高，但受操作者主观判断影响较大，重复性相对较差。
2.干化学法：准确性较好，且重复性较高，但易受试剂层稳定性影响。
五、优缺点1.胶体金法：优点：操作简便、快速，无需特殊设备，适用于现场检测。
缺点：定量分析能力较差，重复性相对较差。
2.干化学法：优点：准确性较高，重复性较好，适用于定量分析。
缺点：对试剂层稳定性要求较高，操作过程中可能受外界因素影响。
总结：胶体金法和干化学法在操作原理、应用范围、准确性等方面存在一定差异。
毒品检测胶体金法标准
毒品检测胶体金法标准一、毒品检测胶体金法的原理毒品检测胶体金法是一种快速、灵敏的检测方法，其原理基于胶体金纳米颗粒与毒品分子特异性结合。
当毒品分子与胶体金标记的抗体结合后，形成一种具有光学活性的复合物，通过检测复合物的吸光度变化，可判断样品中是否存在毒品。
二、毒品检测胶体金法的应用范围毒品检测胶体金法适用于各类毒品，如鸦片类、大麻、可卡因、冰毒等。
该方法在公安、司法、卫生、教育等领域得到广泛应用，为打击毒品犯罪和预防毒品滥用提供了有效手段。
三、毒品检测胶体金法的优势1.快速：毒品检测胶体金法可在几分钟内出结果，大大提高了检测效率。
2.灵敏：该方法对微克级别的毒品检测具有高灵敏度，降低了检测限。
3.操作简便：无需专业设备，操作流程简单，适用于基层检测。
4.稳定性好：胶体金法检测结果稳定，有利于毒品筛查和定量检测。
四、毒品检测胶体金法的操作步骤1.取样：收集待检测样品的生物介质（如尿液、血液等）。
2.提取：将样品与提取液混合，提取毒品分子。
3.洗涤：将提取后的样品进行洗涤，去除杂质。
4.滴液：将洗涤后的样品滴入胶体金试剂盒，与试剂盒中的抗体结合。
5.观察：静置一段时间后，观察试剂盒的颜色变化，判断毒品是否存在。
五、注意事项及优化建议1.操作过程中需严格遵循操作规程，避免误差。
2.选用高质量的提取液和试剂，提高检测准确性。
3.对于疑似阳性样品，可进行多次检测，确保结果可靠。
4.加强对检测人员的培训，提高检测水平。
5.定期对检测设备进行维护和校准，确保设备状态良好。
综上所述，毒品检测胶体金法作为一种快速、灵敏、操作简便的检测方法，在毒品筛查和检测方面具有重要价值。
胶体金检测技术-
阳性结果 样品中可能含有等于或源自于3ng/ml的盐酸克伦特罗。培训资料
四、ß -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无 法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果 风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会 产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空 调的风直吹。
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2. 从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
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图1 金颗粒示意 图
在溶液中金颗粒呈 圆形, 表面带有负电 荷 , 由于静电的排斥 力 , 使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
胶体金检测常用方法
胶体金检测常用方法
胶体金检测是一种常用的生物分析技术，广泛应用于生物学、医学、环境科学等领域。
常用的胶体金检测方法有以下几种：
1. 色谱层析法：将待检样品加入胶体金溶液中，经过色谱层析
柱进行分离，最终观察胶体金试纸的颜色变化，可判断样品是否含有目标分子。
2. 电化学法：将胶体金修饰在电极表面上，通过电化学反应检
测待检样品中的目标分子。
电化学法检测的胶体金电极具有灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 原位杂交法：利用胶体金标记的探针与待测样品中的DNA或RNA进行杂交反应，通过颜色变化来判断目标分子的存在情况。
4. 免疫层析法：将待测样品加入含有特定抗体的胶体金试纸中，观察试纸的颜色变化来判断样品中是否含有特定抗原。
5. 荧光探针法：将荧光染料标记在胶体金表面上，通过荧光信
号来检测待测样品中的目标分子。
该方法具有高灵敏度、高选择性等优点。
这些方法在生物检测中广泛应用，为生物学、医学、环境科学等领域的研究提供了有力的技术支持。
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胶体金法检测梅毒原理
胶体金法检测梅毒原理宝子们，今天咱们来唠唠胶体金法检测梅毒这个事儿。
这梅毒呢，可是个挺麻烦的病，所以能准确检测出来就特别重要啦。
那胶体金法到底是咋检测梅毒的呢？咱先得知道啥是胶体金。
胶体金啊，就像是一群超级小的金粒子在液体里开派对一样，它们特别特别小，小到咱们肉眼都看不见呢。
这些小粒子还有个特别酷的本事，就是它们可以和很多东西结合在一起。
梅毒呢，是由梅毒螺旋体引起的。
在检测的时候啊，这个胶体金法就像是一个特别机灵的小侦探。
检测的试纸上有一些专门为梅毒螺旋体准备的“小陷阱”。
这些“小陷阱”是啥呢？其实就是一些特殊的抗体。
当把疑似感染梅毒的人的血液或者其他体液滴到试纸上的时候，如果这个人真的感染了梅毒螺旋体，那他身体里就会有梅毒螺旋体的抗原。
这个抗原就像是一个小标签，它一碰到试纸上的抗体，就会像两个小磁铁一样紧紧吸在一起。
然后呢，咱们之前说的那些胶体金粒子也没闲着。
它们有的已经和另外一种抗体结合好了，就等着抗原和试纸上的抗体结合呢。
一旦抗原和试纸上的抗体结合了，胶体金粒子和抗体的这个小组合就会跑过去，和已经结合的抗原 - 抗体复合物再结合在一起。
这个时候啊，试纸上就会发生神奇的变化。
就好像是一个小舞台，原本啥都看不见的地方，突然就会出现一条红线或者其他的标记。
这就表示检测到了梅毒螺旋体的存在啦。
要是这个人没有感染梅毒螺旋体呢？那他的体液里就没有梅毒螺旋体的抗原。
试纸上的抗体就只能自己孤零零地待着，胶体金粒子和抗体的组合也找不到要结合的东西，那试纸上就不会出现表示阳性的标记。
不过呢，宝子们也要知道，胶体金法虽然很厉害，但它也不是完美无缺的。
有时候可能会出现假阳性或者假阴性的情况。
假阳性就像是一场乌龙，明明没有梅毒，但是检测结果好像说有。
这可能是因为身体里有一些其他类似的物质干扰了检测。
假阴性呢，就是明明感染了，但是检测结果却显示没有。
这可能是因为感染的早期，体内的抗原还不够多，还没被检测出来。
所以啊，如果胶体金法检测出有问题，或者是有怀疑的情况，还得去医院做更详细、更准确的检测呢。
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3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸 附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状 颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌 抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上， 实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记 在凝集素上的应用。
待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
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四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
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-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
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六、发展方向(Developing)
1.标记技术的探索 顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
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2.生物传感器
谢谢！
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二、 胶体金的概念、原理及结构
1.胶体金概念及来源： 胶体金又称金溶胶，是由金 盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。
2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围 在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuCl2-)， 外层为H+，分散在溶液中。呈球形(小颗粒)或椭圆形 (大颗粒)。
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经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似 样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。
因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶 封装样品，并于0 ~-4℃保存，尽快送到我中心进行确证检测。
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五、常见问题及注意事项
1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温 2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用
果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位 置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电 风扇、空调的风直吹。
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4.尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面 这主要是人手掌的 汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。 5.尿样滴管不可混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体 都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组 成会产生干扰。 6.加样量为70-80μl左右（垂直加三滴）
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4．结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意 图判定结果。
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A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦 特罗或其深度低于检测限。
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B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓 度高于检测限。
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C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已 失效，重新使用新卡。
4.1（以HCG检测为例）
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4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）
（以吗啡检测为例）
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4.3 免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）
（以HIV检测为例）
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克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析 法的应用
采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶 颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦 特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑 制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不 显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。
如果加样量太大或太小，将会影响实验结果。如样品非常 粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1~2滴。 7.以T线的条带为观测点,C线为质量控质线
由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测 时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就 可判定为阴性结果。
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8. 如果尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测； 9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低
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4.1978年Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴 细胞表面抗原。 5.1981年Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗 粒的免疫金银染色方法
（Immunogold-silver staining,IGSS）。 6.1986年Fritz（美，生物）等人在IGSS法基础上成 功地进行了彩色IGSS的染色法,使得检测结果更加鲜 艳夺目—这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心（西安）
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主要内容
一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向
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一、免疫胶体金技术的发展史
放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱 最好，温度控制在8℃左右较为理想。避免在炎热高湿的环境 中保存。 10.阳性疑似样品应在0 ～-4℃冷冻保存 冷藏和常温条件下， 尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下 降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需 确证的尿样必须冷冻保存。 11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照 自来水、 蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应， 不能作为阴性对照。
图1 金颗粒示意图
在溶液中金颗粒呈 圆形,表面带有负电 荷,由于静电的排斥 力,使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
样品垫
胶体金垫 控制线（C线） 吸水滤纸
层析向
PVC底板
测试线 （T线）NC膜（硝酸纤维素膜）
培训资料
4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心)