食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法
胶体金免疫层析技术快速检测谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素
挪I分析与检测胶体金免疫层析技术快速检测谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素□贺丽丽拜发分析系统销售（北京）有限公司1971 年，Faulk 和 Taylor 首次将胶体金引入免疫化学领域，建立了 以胶体金标记抗原（或抗体）检测相 应抗体（或抗原）的免疫学新方法。
自此，胶体金标记技术成为继荧光标 记、酶标记和放射性免疫标记之后的 又一新型免疫标记技术〇经过近50年的 发展，免疫胶体金标记技术已较为成 熟，并被广泛应用于电镜水平研究、光显微细胞化学、免疫沉淀及蛋白质 染色技术中。
此外，这一技术还被引 进免疫诊断/检测领域，并在医学检验、植物学诊断、刑侦、食品安全检测方面应用广泛。
德国拜发生产的 RIDA®QUICK系列就是利用胶体金免疫层析原理制备成胶体金免疫层析横流检测卡，结合德拜发集团独有的RIDA®SM ARTAPP读数仪，能对食品中存在的霉菌毒素进行准确定量检测。
本文通过实验对德国拜发集团生产的RIDA®QUICK霉菌毒素系列在谷物、花生及花生粗榨油中的检测应用进行客观评价。
1材料与方法1.1材料RIDA®QUICK Aflatoxin RQSvRIDA®QUICK Zearalenon RQS、RIDA®QUICK DON 及 RIDA®SMART APP读数仪，均由德国拜发集团提供；用于添加回收实验的标准品为Trilogy®标准品，用于验证实验过程的参考物质为Tri丨ogy®参考物质；用于配合HPLC高效液相色谱使用并进行比对试验的霉菌毒素免疫亲和柱为EASI-EXTRACT®A F L A T O X IN、E A S I-E X T R A C T®ZEARALENONE、D0NPREP®。
以上所有材料均由德国拜发集团生产，购买自拜发分析系统销售（北京）有限公司。
应用胶体金免疫层析技术 更好地进行食品快速检测
食品检测FOOD INSPECTION食品安全问题一直是国家和社会关注的重点问题，因此，相关部门一定要高度重视食品安全检测，并注重新技术的引入，比如胶体金免疫层析技术。
胶体金免疫层析技术可以有效发挥食品检测的作用，更好地保障食品安全，提高人们的生活质量，促进社会的稳定发展。
一、胶体金及免疫层析技术的含义1.胶体金技术。
胶体金技术是指氯金酸在某种环境下的一种变化反应而形成的胶体溶液。
其反应过程首先要用的是还原剂，通常有白磷和柠檬酸钠等，在其作用下将氯金酸按相关要求聚合成固定大小的金颗粒，然后再由静电作用将其凝聚成稳定的胶体溶液。
胶体状态下的金颗粒具有高电子密度的特性，其密度一般能达到107个/mm2，呈圆形的斑点，颜色一般为粉红色，其大小肉眼刚好可见，在检测中常用作一种标记物，对实验结果的影响十分重大。
2.免疫层析技术。
免疫层析技术是一种免疫分析技术，主要是根据抗原和抗体的反应来进行检测。
通常包括两大类，一类是非竞争性免疫层析，一类是竞争性免疫层析。
非竞争性免疫层析技术主要针对一些大分子蛋白质的检测。
首先，将采用胶体金标记后的样品与等待检测抗原中的特异性抗体进行结合，这两类物质结合后会出现沉淀现象，此时需要注意将其沉积物放到结合区域中。
其次，将待检测的样品材料放到样品区位置，再利用毛细管将样品与结合区进行完全融合，其中，带有胶体金标记的样品材料会由于受到张力的作用而不断地向前移动。
此时，样品中已经存在的抗原物质便会自动与带有胶体金标记的样品相互结合，形成一种结合体物质。
紧接着，样品溶液会进行固相化，并在通过固相化后的第一层防线时将含有结合体物质抗体材料进行捕获，然后形成新的结合体复合物材料。
那些没有结合体材料的物质不会被捕获，它们会继续向前移动，然后那些结合体在通过下一道防线时会与另一种抗体结合，形成第三种结合体复合材料。
竞争性免疫层析技术主要针对一些单一抗原的小分子抗原适用，比如兽药残留的检测等。
胶体金免疫层析法在食品快速检测中的应用研究进展
胶体金免疫层析法在食品快速检测中的应用研究进展谢桂芳，赖 飞，王艺蓉，周雪丽，王晓鹭，蔡 滔*（贵州省农产品质量安全监督检验测试中心，贵州贵阳 550001）摘 要：近年来，随着城市化进程加快，各类食品流通更为频繁，食品安全问题日益凸显,人们越来越关注食品安全，而准确、快速的检测方法是保证食品安全的重要手段。
本文介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理和制备方法，并概述了其在检测食品中农药残留、霉菌毒素、食源性致病菌、重金属和非法添加剂等方面的应用及前景，为我国食品安全快速定量检测技术提供思路方法。
关键词：胶体金免疫层析技术；食品安全；快速检测The Progress of the Application of Colloidal GoldImmunochromatography in Rapid Food DetectionXIE Guifang, LAI Fei, WANG Yirong, ZHOU Xueli, WANG Xiaolu, CAI Tao* (Guizhou Agricultural Products Quality and Safety Supervision and Testing Center, Guiyang 550001, China) Abstract: In recent years, with the acceleration of urbanization, the circulation of various foods has become more frequent, and food safety issues have become increasingly prominent. People are paying more and more attention to food safety, and accurate and rapid detection methods are important means to ensure food safety. This paper introduces the basic principle and preparation method of colloidal gold immunochromatography technology, and outlines its application and prospects in the detection of pesticide residues, mycotoxins, foodborne pathogens, heavy metals, and illegal additives in food, providing ideas and methods for rapid quantitative detection of food safety in China.Keywords: colloidal gold immunochromatographic technology; food safety; rapidly detection近年来，食品安全事件频发，食品安全问题也受到了社会的高度关注。
胶体金免疫层析法快速检测食品中呋喃妥因及其代谢物残留
科Hale Waihona Puke 视界胶体金免疫层析法快速检测食品中 呋喃妥因及其代谢物残留
张亚琴 陈月琴 渊 江 苏 省 无 锡 市 无 锡 卫 生 高 等 职 业 技 术 学 校 袁 江 苏 无 锡 214028 冤
揖摘 要铱本文采用胶体金免疫层析技术测定测定食品中的呋喃妥因及其代谢物残留袁结果显示胶体金免 疫 层 析 法 的 检 测 限 为 0 . 5滋g / kg 袁 假 阳 率 不 大 于 5 % 袁 假 阴 率 为 0 袁 研 究 表 明 胶 体 金 试 纸 条 法 操 作 简 便 尧 快 速 尧 成 本低袁是食品中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了快速筛选方法遥
Rapid detection of nitrofurantoin and its metabolite residues in food by colloidal gold immunochromatography ZHANG Ya - qin CHEN Yue - qin
( Wuxi Higher Health Vocational Technology School , Wuxi Jiangsu 214028 , China ) 揖Abstract铱In this paper , the determination of nitrofurantoin and its metabolite residues in food was determined by colloidal gold immunochromatography . The results showed that the detection limit of colloidal gold immunochromatography was 0 . 5滋g / kg , the false positive rate was not more than 5 % , and the false negative rate was 0 . Studies have shown that the colloidal gold test strip method is simple , rapid , and low - cost , and provides a rapid screening method for residue detection of nitrofurantoin metabolites in aquatic products . 揖Key words铱Food safety ; Nitrofurantoin metabolites ; Pretreatment methods ; Results interpretation
食品冷链品控专业《74. 赤霉病麦(呕吐毒素)中毒呕吐毒素的快速检测》
赤霉病麦〔呕吐毒素〕中毒呕吐毒素的快速检测
1 适用范围：快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
2 检测原理：基于竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中如果含有呕吐毒素，其浓度又高于检测试纸的灵敏度，那么会与试纸卡上的抗体结合形成复合物，使应该在试纸上出现的红色T线不显色，结果判为阳性。
反之为阴性。
3 灵敏度：100L常量稀释液，用力振荡2分钟。
静置或离心得到样品上清液。
5测试步骤：取出测试卡，开封后平放在桌面，用滴管逐滴参加3滴样品提取液于测试卡椭圆形孔中，如到30秒时在长方形观测窗中无液体移行，可补加1滴样液，在5～10分钟内判断结果。
6 结果判断
阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
7 备注与考前须知
所有试纸启封后1小时内使用。
本品为一次性产品，请勿重复使用；请勿使用非本品随附的稀释液。
本品为筛选试剂，任何可疑结果请用其它方法作进一步确认。
8 产品包装：试纸卡5片，2021缩稀释液1瓶，15mL离心管1支〔清洗后可反复使用〕。
9 产品保存：4～30℃阴凉枯燥处保存，不可冷冻，防止阳光直晒，有效期18个月。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用【摘要】本文主要介绍了胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用。
首先解释了该技术的原理，接着分析了其在食品安全快速检测中的优势。
然后详细描述了在食品安全现场检测中的具体操作步骤，并提供了多个应用案例。
最后展望了该技术在食品安全领域的未来发展，并总结了其在食品安全现场快速检测中的潜力和重要性，以及在食品行业推广的前景。
通过本文的介绍，读者可以更全面地了解胶体金免疫层析技术在食品安全现场的应用情况，以及其对食品安全保障的重要性，为食品行业的安全监测提供了新的思路和方法。
【关键词】胶体金免疫层析技术、食品安全、现场快速检测、原理、优势、操作步骤、应用案例、发展、潜力、重要性、推广前景1. 引言1.1 胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用胶体金免疫层析技术是一种基于抗原与抗体特异性结合原理的生物分析技术，具有高灵敏度、快速性和简便操作等优点，广泛应用于食品安全现场快速检测中。
通过该技术，可以快速准确地检测食品中的有害物质或符合性指标，为食品安全保障提供了重要手段。
在食品安全领域，胶体金免疫层析技术被广泛应用于检测食品中的农药残留、添加剂、重金属污染等问题。
其高灵敏度和快速性使得可以在现场迅速检测出食品中的有害物质，及时采取相应措施，保障消费者的健康。
通过不断的技术改进和优化，胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用范围和效率将得到进一步提升，为食品行业的发展和食品安全保障贡献更大的力量。
相信随着技术的不断发展，胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用将会更加广泛和深入。
2. 正文2.1 胶体金免疫层析技术的原理胶体金免疫层析技术是一种基于抗原抗体反应原理的检测方法，其原理主要包括抗原抗体反应、胶体金信号放大和光学检测三个部分。
当目标物质（抗原）存在于样品中时，它会与特定的抗体结合形成抗原抗体复合物。
这个复合物具有高度的特异性和亲和性，可以保证检测的准确性。
呕吐毒素在粮食及农副产品中的检测方法
呕吐毒素在小麦及面粉等农副产品中的检测方法呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是单端孢菌素烯烃中的一种。
作为一种常见的真菌毒素，呕吐毒素在自然界中广泛存在于小麦等粮谷类农作物中，在世界范围内存在着较高的污染率。
小麦一旦被呕吐毒素产毒霉菌株污染，在适宜生长环境(水分活度Aw>0.87)中，产毒菌株会迅速生长，产生呕吐毒素，而小麦中的呕吐毒素又会随小麦粉的生产过程带入到面粉中，严重威胁人体健康。
呕吐毒素属于剧毒或中等毒物，对人有很强的毒性，当人摄入了被呕吐毒素污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
由于DON的严重影响引起了各国的普遍重视。
美国食品药物管理局规定食品中呕吐毒素安全标准是1000ug/kg,而欧盟制定的限量标准相对较严，谷粉及玉米粉中允许限量750ug/kg 。
我国2013年国家风险监测计划已将小麦和面粉中呕吐毒素含量的检测列为重点。
呕吐毒素的检测标准1、大麦、小麦、麦片、小麦粉≤1000ug/kg2、玉米、玉米面（渣、片）≤1000ug/kg3、大米、小米、高粱米、大麦米、黍米≤1000ug/kg4、米粉、汤圆粉、面条、饺子皮、馄钝皮、烧麦皮、面糊、面筋、八宝粥罐头≤1000ug/kg呕吐毒素检测方法的国标（1）GB/T23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》（2）GB/T5009.111-2003《谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》第二法免疫测定法（ELISA)呕吐毒素检测方法的行标LS/T6113-2015《粮油检测粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇测定胶体金快速定量法》呕吐毒素商检推荐行业标准SN/T《1571-2005进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》测定呕吐毒素的常用方法如：济南痕量生物提供的胶体金定性卡法、酶联免疫吸附测定法、免疫亲和柱高效液相色谱法、胶体金定量卡法。
食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法
食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法1 范围本方法规定了胶体金免疫层析法测定食品中呕吐毒素的快速检测方法。
本方法的适用范围为谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速检测。
2 原理试样中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体发生结合后，抑制了层析过程中抗体与硝酸纤维素膜检测线上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色发生变化，根据检测线颜色变化进行结果判定。
3试剂及耗材除非另有规定，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中三级水。
3.1 试剂3.1.1 提取液：水或胶体金免疫层析检测装置专用提取液。
3.1.2 甲醇：分析纯3.2 参考物质呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。
表1 呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液配制准确称取适量的呕吐毒素参考物质（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配成0.1mg/mL 的标准储备液，-20 ℃保存，有效期3个月。
3.4 材料3.4.1 呕吐毒素胶体金免疫层析检测装置。
3.4.2 中速定性滤纸。
3.4.3 离心管。
3.4.4 滤膜：0.45 µm 水相滤膜。
4 仪器及设备4.1 天平：感量0.01～0.0001 g。
4.2 粉碎机。
4.3 样品筛：0.9 mm。
4.4 漩涡混合器：1500 rpm/min。
4.5 移液器：100 μL，200 μL，1.0 mL。
4.6 恒温装置：（37.0±2.0）℃。
4.7 设备或方法使用环境条件：温度15 ℃～30 ℃，湿度≤80%。
5 分析步骤5.1 扦样和分样，按GB 5491 执行。
5.2 试样制备5.2.1 样品粉碎：将被测样品（5.1）粉碎，过0.9 mm样品筛，充分混合均匀，备用。
5.2.2 质控样品制备：选取经标准方法确认不含呕吐毒素的样品，称取2份平行样，其中一份作为阴性质控样品，另一份添加标准溶液使其样品中呕吐毒素含量为1.0 mg/kg，作为阳性质控样品。
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附件2
食品中呕吐毒素的快速检测胶体金免疫层析法
1 范围
本方法规定了胶体金免疫层析法测定食品中呕吐毒素的快速检测方法。
本方法的适用范围为谷物加工品及谷物碾磨加工品中呕吐毒素的快速检测。
2 原理
试样中呕吐毒素与胶体金标记的特异性抗体发生结合后，抑制了层析过程中抗体与硝酸纤维素膜检测线上呕吐毒素-BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色发生变化，根据检测线颜色变化进行结果判定。
3试剂及耗材
除非另有规定，所用试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682中三级水。
3.1 试剂
3.1.1 提取液：水或胶体金免疫层析检测装置专用提取液。
3.1.2 甲醇：分析纯
3.2 参考物质
呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥99%。
表1 呕吐毒素参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量
注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液配制
准确称取适量的呕吐毒素参考物质（精确至0.0001g），用甲醇溶解，配成0.1mg/mL 的标准储备液，-20 ℃保存，有效期3个月。
3.4 材料
3.4.1 呕吐毒素胶体金免疫层析检测装置。
3.4.2 中速定性滤纸。
3.4.3 离心管。
3.4.4 滤膜：0.45 µm 水相滤膜。
4 仪器及设备
4.1 天平：感量0.01～0.0001 g。
4.2 粉碎机。
4.3 样品筛：0.9 mm。
4.4 漩涡混合器：1500 rpm/min。
4.5 移液器：100 μL，200 μL，1.0 mL。
4.6 恒温装置：（37.0±2.0）℃。
4.7 设备或方法使用环境条件：温度15 ℃～30 ℃，湿度≤80%。
5 分析步骤
5.1 扦样和分样，按GB 5491 执行。
5.2 试样制备
5.2.1 样品粉碎：将被测样品（5.1）粉碎，过0.9 mm样品筛，充分混合均匀，备用。
5.2.2 质控样品制备：选取经标准方法确认不含呕吐毒素的样品，称取2份平行样，其中一份作为阴性质控样品，另一份添加标准溶液使其样品中呕吐毒素含量为1.0 mg/kg，作为阳性质控样品。
5.2.3 样品溶液制备
准确称取粉碎混匀样品 5.0 g于离心管中，加入25.0 mL 水或专用提取液（3.1.1），漩涡混合器（4.4）提取5 min，静置1 min，中速定性滤纸（3.4.2）过滤，滤液用0.45 µm水相滤膜（3.4.4）过滤，备用；
5.3 测定
5.3.1 将滤液（5.2.3）稀释至呕吐毒素胶体金免疫层析检测装置（3.4.1）检测范围内，漩涡混合器（4.4）混匀，备用。
5.3.2 取150 µL待测溶液加入呕吐毒素胶体金免疫层析检测装置内，恒温装置内反应6 min，结果判定。
6 结果判定
根据检测线（T 线）和控制线（C 线）颜色变化进行结果判定，采用目测法对结果进行判定，比色法和消线法判定原则如下：
6.1 比色法
6.1.1 无效
控制线（C 线）不显色，无论检测卡（T 线）是否显色，表示操作不正确或检测装置已失效。
6.1.2 阳性结果
控制线（C 线）显色，检测线（T 线）显色明显浅于控制线（C 线），判为阳性。
—2—
6.1.3 阴性结果
控制线（C 线）显色，检测线（T 线）比控制线（C 线）显色深或检测线（T 线）与控制线（C 线）显色基本一致，判为阴性。
图1 比色法结果判定示意图
6.2 消线法
6.2.1 无效
控制线（C 线）不显色，无论检测卡（T 线）是否显色，表示操作不正确或检测装置已失效。
6.2.2 阳性结果
控制线（C 线）显色，检测线（T 线）不显色，判为阳性。
6.2.3 阴性结果
控制线（C 线）显色，检测线（T 线）显色，判为阴性。
图2 消线法结果判定示意图
—3—
6.3 质控样品要求
阴性质控样品结果应为阴性，阳性质控样品结果应为阳性，否则实验无效。
7 性能指标
7.1 检出限：1.0 mg/kg
7.2 判定限：0.9 mg/kg
7.2 假阴性率：≤5 %
7.3 假阳性率：≤10 %
8 其他
本方法筛选的阳性样品，需采用标准方法（GB/T 23503）进行确证检测。
本方法测定步骤和结果判读也可以根据厂家试剂盒的说明书进行，但应符合或优于本方法规定的性能指标。
—4—。