血小板抗原抗体检测及其临床应用(检验科) -课件
流式细胞术检测血小板功能及其临床应用
由于血小板的活化程度可由血小板 酶作外源激动剂时 ,为防止血小板聚集
膜糖蛋白表达水平的高低来判断 ,近年 并形成纤维蛋白凝块 ,可在全血标本中
来 ,文献报道利用流式细胞术 ,特别是全 加 入 四 肽 化 合 物 Gly2Pro2Arg2Pro
血法流式细胞术 ,检测血小板膜糖蛋白 ( GPRP) [3] 。固定这一步若不干扰单抗
它仅在血小板活化时才因构象变化而显 活化血小板检测的一些代表性单抗 。
21 血小板缺陷性疾病 :全血法流式
露出来 。因此 ,使用这个表位的荧光单 抗 ,我们能更精确地在更早阶段检测到
三 、诊断学意义及临床应用
细胞术提供了一个简单 、迅速的方法来
利用全血法流式细胞术检测上述血 诊断血小板膜糖蛋白缺陷性疾病 ,如巨
号 。探测器收集每个细胞的荧光讯号和 的百分率 。阳性血小板百分率法与荧光
光散射 ,然后传入计算机进行分析 。 传统的流式细胞术检测血小板膜糖
蛋白的表达 ,常用的样本是经洗涤的血 小板或富含血小板的血浆 。由于血小板 极易活化激惹 , 样本经离心 、洗涤等步 骤 ,容易人为地导致体外血小板激活 ,影 响临床诊断价值 。为此 ,Shatti 等[2] 引入 了全血法流式细胞术 。该技术能使用全 血样本测定循环中血小板的活化状态以 及血小板对激活剂的功能应答 。
抽血抗凝 →稀释 →生物素化的检测
板相关疾病的诊断中 ,检测血小板功能 用单克隆抗体 (单抗) →激动剂或缓冲液
的方法常常是有争议的 。这通常是由于 →固定 (1 %多聚甲醛) →FITC 标记的鉴
方法本身的原因造成的[1] ,譬如 ,静脉阻 别用单抗 →PE2卵白素 →稀释 。
滞 、抗凝剂选择 、离心 ,甚至标本处理不
血小板抗体检测和相容性血小板输注的应用
血紫癜 （Ｔ ） Ｐ Ｐ 相符合 。 对血小板输注疗效 的评价 ， 由于血小板
输 注后 患 者 出血症 状 不易 量化 ，故 以血小 板恢 复 百分 率
的 １ ３例 进 行 ２次 以 上 血 小 板 输 注 治 疗 的血 液 病 及 肿 瘤 患 １
上普遍采用机采血小板输注 ， 但有妊娠史 的女性或 多次输血
的患者 ， 易产生同种免疫 ， 导致血小板输注无效 （Ｔ 。本文 Ｐ Ｒ） 通过对 １ ３例多次输注 机采血小板 的患者进行 血小板抗体 １
展 ， 腔镜 、 腹 宫腔 镜 下 处 理 子宫 肌 瘤 已成 为手 术 发 展 的方 向 ， 具 有 创 伤 出血 少 、 复 快 的 特 点 。 恢
［ ］ 黎培毅 ， ４ 刘宏伟 ， 杨延林 ． 腹式筋膜 内子宫 切除术． 用妇产科 实
杂志，９ ８ １ （ ）３ ． １９ ，４ １ ：６ ［ ］ 唐 良萏 ， ５ 卞度宏． 妊娠合并子宫肌瘤 的处理 ． 实用妇产 科杂志 ，
被检测 。
１ 统计 学 处 理 ． ４
Ａ Ｏ血 型不合而导致血小板破坏 ｌ。若血小板输 注后 １ｈ的 Ｂ ５ ｌ Ｃ Ｉ７ ， Ｃ＜ ． 应首先考虑免疫 因素所 致 ； １ｈ的 Ｃ Ｉ 数在正 ５ 若 Ｃ指
常范 围内， ２ 而 ４ｈ的 Ｃ Ｉ４５ 则应考 虑非免疫性 因素所致 。 Ｃ ＜ ．， 本研究结果显示 ４ ． ６９ ％患者出现 Ｐ Ｒ， Ｔ 与文献 ［ ］ ６ 报道在多次 输血 和慢性血小板减少 患者 中 ，有 ３ ％一０ ０ ７ ％出现血小板输
为正常卵巢组织。我院在全子宫切除术时是否切 除卵巢 已采 取非常慎重的态度 。术中应仔细检查双侧卵巢 ， 若正常 ． 原则 上予 以保 留。
参 考 文 献
检 验 科.ppt
刘海明 主管检验师
检验科
• 检验科是临床医学和基础医学之间的桥梁， 包括临床化学、临床微生物学、临床免疫 学、血液学、体液学以及输血学等分支学 科。
检验科简介
• 英文名称:clinicallaboratory
• 每天承担包括病房、门急诊病人、各 类体检的各种人体标本的检测工作。
•
检验科分组 一般检验科按检查分组
T.Bil、D.bil、M.bil、TBA、A/G
•
⑶ 肝纤三项：层粘蛋白、透明质酸、脯氨酸肽酶
•
⑷ 血氨（NH3）
•
⑸ 胆碱脂酶（CHE）
•
〔检查目〕体检，各种肝胆疾病，急、慢性肝炎，肝硬化，脂
肪肝，肝脏肿物。
• 3.肾功能检查
•
〔检查项目〕
•
⑴ 肾功：K、Nａ、Cl、Ca、Urea、UA、Cr、CO2、GLU
生化检查
• 1.生化全项检查
•
〔检查项目〕 包括肝功，肾功，心功、血脂。
•
〔检查目的〕 参照以下相关内容。
• 2.肝功能检查
•
〔检查项目〕
•
⑴ 肝功8项：ALT、AST、GGT、TP、Alb、Glb、T.Bil、D.Bil、
M.bil
•
⑵ 肝功13项：ALT、AST、GGT、ALP、LDH、TP、Alb、Glb、
•
〔检查目的〕诊断高脂血症。
• 6.心肌损伤相关指标检测
•
〔检查项目〕
•
⑴ 心肌酶谱：AST、CK、CK－MB、A－HBDH、LDH
•
⑵ 心肌损伤指标：心肌肌钙蛋白I、CK－MB
•
〔检查目的〕诊断急性心梗，心肌炎，多发性皮肌炎，怀疑心肌
检验科临床实例分析与讨论
检验科临床实例分析与讨论引言：近年来，随着医学技术的不断进步和检验科的快速发展，临床实例分析已成为一种广泛应用的方法。
通过对临床病例的观察和分析，可以提高医生的临床思维和判断能力，为患者提供更准确的诊断和治疗方案。
本文将以几个典型的检验科临床实例为例，展开讨论和分析，并就其中涉及的关键问题进行深入探讨。
I. 血常规检查实例分析血常规检查是临床医生经常使用的一项常规检查，可以提供患者的血液细胞计数和形态学特征。
以下是一个实际的临床实例：患者X，女性，36岁，主要症状为乏力和头晕，经验久治不愈。
血常规检查结果显示血红蛋白（Hb）和红细胞计数（RBC）明显降低，而白细胞计数（WBC）和血小板计数（PLT）正常。
根据这些结果，我们可以初步判断该患者可能患有贫血症。
针对这个实例，我们可以进一步进行分析和讨论。
首先，需要进行进一步的血液学检查，以确定贫血的类型。
其次，结合患者的临床表现和病史，进行相关的疾病筛查，如缺铁性贫血、再生障碍性贫血等。
最后，根据详细的检查结果，制定个体化的治疗方案，以提高患者的生活质量。
II. 生化指标分析实例生化指标检查是评估患者的生理功能和疾病风险的重要手段。
以下是一个典型的生化指标分析实例：患者Y，男性，42岁，主要症状为持续不解的腹痛和黄疸。
生化指标检查结果显示血清胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）显著升高，而转氨酶AST和ALT也出现一定程度的升高。
根据这些结果，我们可以初步诊断该患者可能患有胆道梗阻。
针对这个实例，我们可以进一步进行分析和讨论。
首先，需要进行胆道影像学检查，如超声波、CT或MRI，以明确胆道梗阻的原因和程度。
其次，根据患者的病情和影像学结果，选择合适的治疗方法，如内镜逆行胰胆管造影（ERCP）或外科手术。
最后，对治疗效果进行监测和评估，以调整治疗方案，达到最佳疗效。
III. 免疫学指标分析实例免疫学指标检查在临床医学中发挥着重要的作用，可以辅助诊断和治疗许多免疫性疾病。
检验科检验项目及临床意义
检验科检验项目及临床意义TYYGROUP system office room 【TYYUA16H-TYY-TYYYUA8Q8-STAGO COMPACT 血凝仪检测项目临床意义STAGO COMPACT 血凝仪检测项目指南已开展项目及其临床意义血浆纤维蛋白原（FIB）1.减少:严重的肝实质损害(如肝坏死、慢性肝病晚期、肝硬化等)；严重的低纤维蛋白原血症也可见于肺及前列腺手术中。
2.增加：（1）感染：毒血症、肺炎、轻型肝炎、胆囊炎、肺结核及长期的局部炎症（2）无菌炎症：肾病综合症、风湿热、恶性肿瘤及风湿性关节炎等。
（3）其他：如外科手术、放射治疗、月经期及妊娠期也可轻度增高。
活化部分凝血活酶时间测定（APTT）1.延长:（1）凡参于血浆凝血活酶生成的各种因子缺乏时,均引起APTT延长,尤其Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ因子含量减少所致的各种血友病时多见延长。
（2）凝血酶原、纤维蛋白原严重减少及有抗凝物质存在时也可延长。
（3）可作为血友病治疗和抗凝药物治疗过程中的观察指标之一。
2．缩短：DIC高凝期、血栓前状态及血栓性疾病。
血浆凝血酶原时间测定（PT）1.延长:（1）先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症和低(无)纤维蛋白原血症；（2）获得性凝血因子缺乏，如DIC 、原发性纤溶亢进症、肝病的阻塞性黄疸、维生素K缺乏症、血循环中抗凝物质增多等。
2．缩短：（1）先天性Ⅴ因子增多（2）DIC早期（高凝状态）（3）口服避孕药、其他血栓前状态及血栓性疾病（凝血因子和血小板活性增高、血管损伤等均为血栓形成的基础）。
3．口服抗凝药的监护：临床上，当INR为2-4时为抗凝治疗的合适范围。
当INR>时,如纤维蛋白原水平和血小板数仍正常,则提示抗凝过度,应减少或停止用药。
INR>时,同时伴有纤维蛋白原和(或)血小板减低,则可能是DIC或肝病所致,也应减少或停止口服抗凝剂。
凝血酶时间测定（TT）1.延长：（1）见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在（如SLE、肝病、肾病等）；（2）纤维蛋白原降解产物（FDP）增多及DIC、低（无）纤维蛋白原血症等。
各类血小板功能检测的临床意义
二、血栓弹力实验
图1 血栓弹力图描绘的凝块形成的速度和强度曲线
TEG临床应用
• （一）监测凝血功能 • 目前常规凝血功能检测（如：PT, APTT）只
能检测血浆中凝血因子活性，反映凝血过程中某 一阶段或某种凝血产物。凝血过程中血小板与凝 血因子相互作用，无血小板参与的凝血检测不能 反应凝血全貌。TEG检测能够全面展现血凝块发 生发展的全过程，从凝血因子的激活到牢固的血 小板-纤维蛋白凝块形成再到纤维蛋白溶解，展示 患者凝血状况的全貌和血凝块形成的速率、血凝 块的强度，血凝块的纤溶水平。
TEG临床应用
• （二）指导成分输血
•
通过血栓弹力图检测能判断导致出血的具体
原因，检出是凝血因子、纤维蛋白、血小板的原
因还是肝素残留导致的出血，这样就能够指导输
注正确的血液成分进行止血治疗。通过对术后出
血原因进行鉴别，还能够减少二次手术风险。欧
美的许多国家将TEG作为进行血液制品管理的重 要工具，文献表明TEG指导输血有助于节约用血 、降低因过度输血引起的副作用及死亡率。
三、血小板功能检测
• 标本采集注意事项 • 总原则采血要顺利，不可反复穿刺，采血
不顺利，容易激活凝血因子，或激活血小 板，影响血小板的凝聚力，标本从采集到 操作完成在4小时内完成，放置过久降低血 小板的聚集强度和速度。用凝血蓝帽的抗 凝管采血3ml，立即轻轻颠倒混匀至少5次 ，不可过于剧烈，防治激活血小板。
二、血栓弹力实验
• 标本采集：与凝血常规管分开单独一管， 全血检测不需要离心，但病人抽血需要空 腹，才能减少食物蛋白的干扰。PS：凝血 常规可以与D2聚体同一管。当另作3P实验 建议单独抽一管。
二、血栓弹力实验
• 临床意义： • 血栓弹力图（TEG）是来观察血液凝固的动态和
血小板相关抗体检测在血小板减少性疾病中的临床意义
［】胡亚 美，江载芳，主编． １ 诸福棠实用儿科 学 ［ ． ７ Ｍ】 第 版．
北 京 ：人 民卫 生 出版 社 ，２ ０ ：２ ２． ０２ ２ ３
［】金汉珍 ， ２ 黄德珉， 官吉希． 实用新生儿学 ［】 第 ３版． Ｍ． 北京：
人 民卫 生 出版 社 ，２ ０ ： ９ ． ０２ ５ ５
者 ，由于尿布未漂净 ， 且大部分婴儿及新生儿使用橡 皮布 、油
布或塑料布 ，使臀部处于湿热状态，也会 引起尿布皮炎 。 鱼肝油滴剂含有维生素 Ａ ，它能促进皮肤组织生长，且有
【】魏小强． ４ 百多邦 （ 匹罗星软膏） 莫 治疗皮肤感染的临床研究
［】 陕西 医学杂志，２ ０，３ （０ ：１４ ． Ｊ． ０ ６ ５ １） １ ３
有效： 红斑程度减轻或部分消失， 糜烂渗出减少； 无效：红斑、 糜烂及渗出未减轻 。
２ 两组 疗 效 比较 ． ２
菌也有效 。 而尿布皮炎引起的不 同程度的皮损， 易并发细菌感
染，主要为金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌。故使用莫匹罗星软 膏后皮肤复原快 。 另外，莫匹罗星软膏还能起到隔水 、 保护创 面、促进皮肤修复效果，能减轻粪便对局部刺激 。 达克宁霜剂对皮肤刺激性较大， 偶可 出现过敏反应， 对照组 中有 ５ 例红肿加重 ，３ 例并发感染，而治疗组中无一例发生不 良 反应 。且本文中显示治疗组总有效率 ９． ８ ，对照组总有效率 ５ ３％ ７ ．６ 。 ０ ９％ 两组 比较， 差异具有非常显著性 （ １． ９６ Ｐ０ ０１ 。 ｘ １９ ５ ，＜ ．０ ） ＝ 故联合使用鱼肝油滴剂、 莫匹罗星软膏疗效显著， 使用方 便，无污染，无任何毒副作用，值得在临床上推广应用 。
的该酶亲和力极低， 故其对人体无副作用。 该药为亲水性软膏， 能透入人体皮肤 ， 所以对人体皮肤细菌感染是一种疗效较好 的
血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效
世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第95期203投稿邮箱：zuixinyixue@·医学检验·血小板抗体检测方法及配型应用与血小板输注的疗效窦广刚（苏州弘慈血液病医院 检验科，江苏 苏州 215000）0 引言血小板输注是当前临床治疗各种恶性肿瘤或者血液性疾病放化疗的重要支持治疗方法，Rh 血型以及ABO 血型同型输注是当前临床常用的血小板输注制品，但是部分患者在骨髓移植、妊娠、输血之后，会产生HPA （人类血小板抗原）、HLA （人类白细胞抗原）抗体，造成血小板输注无效[1]。
临床有研究表明：将近30-70%的慢性血小板减少患者在接受多次输血之后，会出现血小板输注无效、紫癜等，病情严重的患者会出现DIC （弥漫性血管内凝血）、颅内出血等，对患者生命安全构成巨大威胁[2]。
由此可知，对于血小板输注患者在输注之前进行血小板抗体检测，根据检测结果进行配合性血小板输注，对于提升血小板输注临床疗效意义重大。
鉴于此，本文纳入本院2017年1月至2019年1月接受的200例输注血小板治疗者，回顾性分析上述病例临床资料，现将具体研究情况汇报如下。
1 资料与方法1.1 一般资料。
本次研究从2017年1月至2019年1月，纳入该时间段内本院接受的200例输注血小板治疗者，将无输血史100例作为甲组，有输血史100例作为乙组。
甲组女性、男性病例数之比分别是42:58，年龄在3-74岁，平均（38.52±6.25）岁。
乙组女性、男性病例数之比分别是44:56，年龄在4-73岁，平均（38.49±6.21）岁。
一般资料两组相比，P>0.05，可比较。
1.2 方法。
仪器、试剂：TD5 台式低速离心机、血球计数仪（型号：BC6900；生产企业：深圳迈瑞科技有限公司），试剂均由长春博德生物技术有限责任公司提供。
血小板抗体检测：①制备血小板悬液：对冻干血小板稀释处理之后，即可直接使用，浓度在50-150×109，贮于塑料容器中，在20-25℃环境下保存8 h 待检。
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与FMAIT相关的ICH 80%发生在子宫内，其中14%发生在妊娠20 周前，28%发生在妊娠30周前。
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16
NAIT早期诊断与筛查
母体血清抗HPA抗体检测，然而母体抗体水平到 预产期时逐渐下降，约有30%的病例抗体阴性。
抗GPⅡb/Ⅲa抗体
新生儿同种异体免疫 性血小板减少症
HPA1a(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36
血小板输注无效症
HLA-I抗体50~80% ,HPA17~25%(日本人为HPA-2b), HPA-15, anti-CD36
极少数为ABO抗体
同种异 体抗体
血小板输血后紫癜
HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36
少数为抗GPIa/IIa抗体
被动同种异体免疫 性血小板减少症
HPA-1a,HPA-5b
移植相关同种异体 免疫性血小板减少症
HPA-1a,HPA-3,b
自身 抗体
自发性血小板减少症
继发于母体自发性 血小板减少症
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位于 GPIV/V 和 GPIa/IIa
同上
药物依 赖性抗
体
奎宁/奎尼丁抗体 所致疾病
肝素抗体所致疾病
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抗原位于GPⅡb/Ⅲa和
GPIb/IX
抗原表位是PF4
13
举例——NAIT
母体同种异体抗 体通过胎盘
Y
YY Y
母体同种异体免疫
胎儿血小板减少
胎盘屏障 PPT学习交流
14
NAIT
胎母同种异体免疫血小板减少症（fetomaternal alloimmune thrombocytopenia，FMAIT）致病机理与新生儿溶血病（HDN） 相似，前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症，
后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。 由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgG型的抗血 小板抗体，该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原 的血小板结合，此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使 得胎儿血小板减少，出现瘀点和瘀斑，其严重者会导致神经系 统损伤（占已报道病例的20%）、10%出现颅内出血(死亡率近 100%）。 因多数病例在出生后才得以诊断，故此病也称作新生儿同种异
体免疫血小板减少症。 初次妊娠妇女即可发生FMAIT，其发病率大约为1/800-1500 。
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15
NAIT临床表现
FMAIT患儿病情变化较大，具有自限性，常在出生后 2-3周恢复。
轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿 临床表现为皮肤、体内外黏膜出血，出现紫癜、瘀点或瘀斑。
父母双亲的HPA基因检测，在高加索地区采取对 其HPA-1和HPA-5基因检测，而在亚洲地区应考虑进 行HPA-4和HPA-5基因检测。
父母双亲交叉配型实验，将母体血清与父亲血小 板进行交叉配型实验，即使不能确切知道不相合的 抗原，但这种方法也能发现母体是否存在血小板同 种异体免疫反应。
血小板抗原抗体检测 及临床应用
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1
目 录 / contents
01 血小板抗原
02 血小板抗体与疾病
03 血小板抗体检测的意义和临床应用
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2
血小板简介
血小板：D:2-5um V:红细胞*1/5
功能：促进止血和加速凝血 正常范围：100-300×109/L
来源：
骨髓干细胞 多功能祖细胞 巨核祖细胞
➢序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
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10
血小板抗原定型
1aa 2aa 3ab 4aa 5aa 6aa 7aa 8aa 9aa 10aa 11aa 12aa 13aa 14aa 15ab 16aa 17aa
用途：
（1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。
血小板抗体的产生方式
输血小板、红细胞（尤其 是没有滤白的红细胞）
怀孕
移植（骨髓、器官）
药物、自身免疫
以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上 的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。
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12
血小板抗体与部分相关疾病
抗体 分类
疾病
HLA / HPA 抗 体
其它抗体
同种 抗体
格兰茨曼血小板功能 不全病
单核苷酸多态性（SNP）:33个HPA中均已搞清楚基因 背景，其中32个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所 致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一
个核苷酸的不同所致。
HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发
生在 AAG1929-31。
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7
HPA抗原
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8
HPA抗原
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9
血小板抗原定型
血清学定型
➢即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 ➢缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。
基因定型
➢限制性片段长度多态性分析（RFLP）
➢序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO)
（2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相
匹配的血小板供者。
（3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输
血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。
（4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关
资料和证据。
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11
1990年国际输血协会血小板免疫学工作组提
出了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1
、HPA-2、HPA-3等系统。
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6
HPA抗原
已确定了33个HPA，其中12 个抗原为双等位基因表 达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高频率抗原命 名a，低频率抗原命名b。其余21个抗原为低频率抗原， 尚未发现对偶抗原，命名为bw。
幼巨核细胞
血小板 胞质块脱落
巨核细胞
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3
血小板形态
静息状态
活化状态
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4
血小板抗原
血小板“非特异性”抗原
HLA-Ⅰ类抗原 ABH抗原
血小板“特异性”抗原
HPA抗原
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5
HPA抗原
主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存
在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细
胞。