血小板抗原抗体检测及其临床应用(检验科) -
流式细胞术检测血小板功能及其临床应用
由于血小板的活化程度可由血小板 酶作外源激动剂时 ,为防止血小板聚集
膜糖蛋白表达水平的高低来判断 ,近年 并形成纤维蛋白凝块 ,可在全血标本中
来 ,文献报道利用流式细胞术 ,特别是全 加 入 四 肽 化 合 物 Gly2Pro2Arg2Pro
血法流式细胞术 ,检测血小板膜糖蛋白 ( GPRP) [3] 。固定这一步若不干扰单抗
它仅在血小板活化时才因构象变化而显 活化血小板检测的一些代表性单抗 。
21 血小板缺陷性疾病 :全血法流式
露出来 。因此 ,使用这个表位的荧光单 抗 ,我们能更精确地在更早阶段检测到
三 、诊断学意义及临床应用
细胞术提供了一个简单 、迅速的方法来
利用全血法流式细胞术检测上述血 诊断血小板膜糖蛋白缺陷性疾病 ,如巨
号 。探测器收集每个细胞的荧光讯号和 的百分率 。阳性血小板百分率法与荧光
光散射 ,然后传入计算机进行分析 。 传统的流式细胞术检测血小板膜糖
蛋白的表达 ,常用的样本是经洗涤的血 小板或富含血小板的血浆 。由于血小板 极易活化激惹 , 样本经离心 、洗涤等步 骤 ,容易人为地导致体外血小板激活 ,影 响临床诊断价值 。为此 ,Shatti 等[2] 引入 了全血法流式细胞术 。该技术能使用全 血样本测定循环中血小板的活化状态以 及血小板对激活剂的功能应答 。
抽血抗凝 →稀释 →生物素化的检测
板相关疾病的诊断中 ,检测血小板功能 用单克隆抗体 (单抗) →激动剂或缓冲液
的方法常常是有争议的 。这通常是由于 →固定 (1 %多聚甲醛) →FITC 标记的鉴
方法本身的原因造成的[1] ,譬如 ,静脉阻 别用单抗 →PE2卵白素 →稀释 。
滞 、抗凝剂选择 、离心 ,甚至标本处理不
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测血小板功能及其临床应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测血小板功能及其临床应用血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
关键词：血小板临床应用流式细胞术血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。
然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。
这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。
这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。
由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表达水平的高低来判断，近年来，文献报道利用流式细胞术，特别是全血法流式细胞术，检测血小板膜糖蛋白的表达［2］。
该技术能灵敏、特异地检测血液中活化血小板，并评价其功能。
现就全血法流式细胞术检测血小板功能的方法及临床应用现状和潜力进行综述。
一、全血法流式细胞术1.方法学：流式细胞仪能快速测定大量个体细胞的特性。
样品中欲分析的细胞预先进行荧光标记，然后由压缩氮经硅管送达标本室，再以5 000～10 000个细胞/秒的速率逐个射入光敏感区。
在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。
探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。
传统的流式细胞术检测血小板膜糖蛋白的表达，常用的样本是经洗涤的血小板或富含血小板的血浆。
由于血小板极易活化激惹，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。
为此，Shatti等［2］引入了全血法流式细胞术。
血小板抗原抗体检测及其输血科应用课件
流式细胞术
一种利用流式细胞仪进行检测的方法
将待测样品与特异性抗体结合，通过 流式细胞仪对细胞表面抗原进行检测 ，可同时对多个抗原进行定量和定性 分析。
微量淋巴细胞毒试验
一种用于检测人类白细胞抗原抗体的 试验方法
通过将待测血清与淋巴细胞混合培养 ，观察淋巴细胞的死亡情况，从而判 断血清中是否存在针对特定抗原的抗 体。
血小板抗原抗体
是指人体免疫系统对血小板表面抗原产生的特异性抗体，通过与血小板抗原结 合，引发一系列免疫反应。
血小板抗原
指血小板表面存在的特异性抗原，这些抗原在正常生理状态下通常不会引起免 疫反应，但在某些情况下，如免疫系统异常、药物作用等，可能会引发免疫反 应，产生血小板抗原抗体。
血小板抗原抗体的分类
02
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测的方法
酶联免疫法
一种常用的免疫学检测方法
通过酶与抗体或抗原的结合，将抗原或抗体的性质、定位及数量“放大”，从而 对样品中的抗体或抗原进行定性或定量的检测。
固相放射免疫法
01
一种将放射性同位素与免疫反应 相结合的检测方法
02
利用放射性同位素作为示踪剂对 抗体或抗原进行标记，通过测量 放射性强度来检测样品中的抗体 或抗原。
04
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测在输血科的应用
交叉配血
血小板交叉配血是输血科的重要工作之一，通过检测受血者和供者之间的血小板抗 原抗体，确保输注的血小板与受血者配型相合，减少输血反应的风险。
交叉配血试验包括主侧配血和次侧配血，主侧配血是将受血者的血清与供者的血小 板反应，次侧配血是将供者的血清与受血者的血小板反应。
感谢观看
临床应用范围的扩大
血小板抗原抗体检测与血小板输注的临床应用
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血小 板 抗 原 抗 体 检 测 与 血 小 板 输 注 的临 床 应 用
蒋利星 （ 西壮 族 自治 区桂 林 市 中心血 站 ５ １ ０ ） 广 ４ ０ １
抗 体 （ Ａ） 包 括 ＩＧ、ｇ ＩＡ 其 中一 项 出 现 阳 性 ， 为 血 小 Ｐ ， ｇ ＩＭ、ｇ 即
板 抗 体 检 测 阳 性 ， 且 其 量 往 往 与 外 周 血 的 血 小 板 数 量 呈 负 而
相关 。
人类 血 小 板 抗 原 系 统 有 多 种 ， Ｐ Ａ、 Ｏ、 ａ Ｙｕ 、 ｒ 如 １ Ｋ Ｂ Ｋ、 ｋ Ｂ 等 ， 中 Ｐ Ａ 系 统 是 最 常 见 的 引 起 新 生 儿 免 疫 性 血 小 板 减 少 其 １ 症 （ Ｉ ） 血 小 板 减 少 性 紫 癜 （ Ｉ 的 抗 原 系 统 ［ 。 有 研 ＮＡ ＴＰ 和 ＰＰ） １ ］ 究发 现 ， １ 等 位基 因 之 一 的 Ｐ Ａ ＰＡ １ ２基 因 与 血 栓 形 成 有 关 Ｌ 。 ２ ］
一பைடு நூலகம்
血小 板 表 面具 有 复 杂 的血 型抗 原 ， 些 抗 原 是 由遗 传 因素 决 定 这
的 。通 常 将 血 小 板 血 型 抗 原 分 为 两 大 类 ， 一类 是 存 在 于 血 小 板 膜结 构 糖 蛋 白上 的特 异 性 抗 原 ， 即人 类 血 小 板 抗 原 （ Ａ） 另 ＨＰ ；
缺 陷 患 者 的 出 血 ， 年 来 在 Ｉ 上 的使 用 日益 普 及 。但 是 部 分 近 临床 患 者 在 多 次输 注 血 小板 后 可 产 生 血 小 板 相 关 抗 体 ， 致 血 小 板 导
血小板抗体检测及临床应用
荧光法
√
√
极高 一般 ＞2h 荧光显微镜 或流式细胞仪
敏感性高 特异性不足
固相凝集法
√ √
高 较好 ＜1h 平板离心机，洗板机
血小板交叉配型应用最 为广泛的方法
03 固相法血小板检测
MASPAT试剂盒组成
MASPAT试剂盒 (K1360)
• 96孔板 (12 条 *8 孔) • 微孔上包被有血小板单克隆抗体 • MASPAT LISS液：10 ml • MASPAT 抗人 IgG: 6 ml • 阳性质控(混合血小板特异性抗体): 1 ml • 阴性质控(不含血小板特异性抗体): 1 ml
非溶血性输血反应风险评估
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体是引起临床非溶血性发热输血不良反应的最主 要原因，尤其是有输血史、输血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等患 者临床输血工作中，输血不良反应约70%. 文献报道输注红细胞为2-6%，输注血小板为20-30%，多次输血患者高达27-63%.
目的
检测受血者血清中是否存在待输血小板的抗体，或患者反复输注血小板、全血及血小板 的血液制品后产生血小板抗体，这些抗体能够导致血小板输注无效及输血反应。
临床意义
只有经过血小板筛查和配型，输注与患者相合或基本相合的血小板，才能达到安全有效 输注血小板功效，另外血小板抗体筛查可协助诊断某些血小板减少症。
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热输血反应 非常有意义。
05 血小板抗体检测应用（输血科） 血小板抗体阳性性别比较及发生NHTR比例
吴宇辰，徐笑红，叶宏宇，血小板抗体对非溶血性输血反应的影响，中国输血杂志，2015-28.8
06 血小板抗体检测应用（输血科） 输血反应与血小板抗体关系
临床实验室血小板抗体类型
临床实验室血小板抗体类型血小板抗体是指人体内产生的针对血小板表面抗原的抗体，它对于血小板功能的调节及血小板相关疾病的发生发展至关重要。
临床实验室通过检测血小板抗体类型，可以帮助医生诊断和治疗一系列血液相关疾病，如自身免疫性血小板减少症（ITP）、阵发性血小板减少性紫癜（TTP）等。
本文将重点讨论临床实验室中常见的血小板抗体类型及其意义。
一、IgM型抗体IgM型抗体是最常见的血小板抗体类型之一。
它通常与免疫机制异常相关，包括免疫系统疾病、感染等。
在实验室中，通过抗人全血球血清抗免疫球蛋白M（IgM）抗体检测方法可以确定其存在。
血液检测结果显示IgM型抗体阳性，可能意味着机体免疫系统异常活化，导致血小板破坏增加。
临床医生通常需要进一步评估患者的免疫状态，以确定治疗方案。
二、IgG型抗体IgG型抗体是另一常见的血小板抗体类型。
与IgM型不同，IgG型抗体对血小板产生的影响更为严重。
它可以绑定到血小板表面，并导致血小板破坏和血小板减少。
实验室检测IgG型抗体常采用抗人全血球血清抗免疫球蛋白G（IgG）抗体方法。
检测结果阳性提示血小板破坏增加，临床上可能表现为自身免疫性血小板减少症（ITP）等疾病。
根据抗体滴度的高低，医生可以判断疾病的严重程度，并选择合适的治疗方案。
三、抗磷脂抗体抗磷脂抗体是一类特殊的血小板抗体。
它与Antiphospholipid Syndrome（APS）等自身免疫性疾病密切相关。
实验室检测抗磷脂抗体主要采用凝集试验和酶联免疫吸附试验（ELISA），通过检测患者血清中是否存在抗磷脂抗体，可以协助诊断APS并评估疾病活动性。
抗磷脂抗体阳性还与静脉血栓栓塞症（VTE）等血栓性疾病相关，因此临床医生还需针对血栓风险进行综合评估。
四、HS型抗体HS型抗体是一种罕见的血小板抗体类型，它与Heparin-induced Thrombocytopenia（HIT）等疾病相关。
HIT是一种因使用肝素类药物而引起的血小板减少性血栓性疾病。
血小板抗体检测 宣传
血小板抗体检测项目（固相凝集法）一、基本原理：血小板抗体检测是检测患者血清中是否存在针对血小板的免疫性抗体，包括三类：1.ABO血型系统和HLA系统产生的血小板相关抗体，2.血小板特异性抗原（HPA）产生的特异性抗体，3.药物所致的血小板抗体二、血小板抗体检测的临床应用(一)在临床辅助诊断中的作用1、特发性血小板减少性紫癜（ITP）：ITP的临床症状很重要，但仍为排除性诊断。
如结合血小板抗体检测，则对ITP的确诊有重要价值。
2、血液系统疾病辅助诊断：对白血病、再生障碍性贫血、骨髓异常增生综合症、溶血性贫血、新生儿血小板减少症有辅助诊断意义。
3、孕期流产风险评估：血小板抗体筛查可对孕期流产风险做出评估，尤其适用于有多次妊娠史、习惯性流产史以及不孕不育情况查因。
（二）在临床输血治疗中的应用1、预防红细胞输注中非溶血性发热反应：血小板抗体阳性患者输注红细胞悬液后发生非溶血性发热反应明显高于阴性者，对于血小板抗体阳性采取干预措施后非溶血性发热反应明显降低，极大提高了输血的安全性。
2、预防血小板输注无效：血小板抗体是引起免疫性血小板输注无效最重要的原因，特别是多次输血后出现的血小板输注无效。
检测血小板抗体对提高血小板治疗效率和保证输血安全有重要意义。
三、血小板抗体检查的筛查对象1、血液肿瘤科病人：评价患者体内血小板抗体水平，辅助诊断血液系统疾病：如白血病、再障、溶血性贫血、血小板减少性疾病、骨髓异常增生综合症。
2、需治疗性输注血小板患者：特别是需多次输注血小板患者，建议提前筛查血小板抗体，防止血小板输注无效。
3、妇产科孕检：评价孕期流产风险，尤其适用于有多次流产史患者查因。
四、血小板抗体在临床病例中的验证。
血小板抗体检测的意义及检测技术的研究进展
血小板抗体检测的意义及检测技术的研究进展作者：付谦来源：《中国社区医师》2018年第25期摘要长期多次输血维持治疗的患者极易产生血小板相关抗体，从而导致许多严重并发症的发生。
文章对血小板抗体检测在输血中的重要意义、血小板杭体检测技术两个方面作一综述。
关键词血小板抗体;检测;输血随着输血医学研究的不断深入，成分输血越来越广泛地应用于临床，输注血小板成为一种重要的临床输血治疗手段，尤其是对治疗血小板缺乏引起的出血倾向、血小板功能性障碍具有重要价值。
但临床上常面临的问题是血小板输注无效或效果欠佳，其主要原因可能为患者体内产生了大量血小板抗体，对外来血小板造成破坏m，特别是长期多次输血维持治疗的患者极易产生血小板相关抗体，从而导致许多严重并发症的发生，如血小板输血性紫癜、血小板输注无效、重度出血等，给临床治疗带来了难度，并且对血液资源造成了严重浪费。
因此，输血前进行血小板抗体检测对于有效改善输血效果，特别是提高血小板输注效果显得尤为重要。
本文对血小板抗体检测在临床输血中的重要意义及国内几种常用检测技术的研究进展作一综述。
血小板抗体检测在输血中的重要意义血小板抗原、抗体：人类血小板表面的抗原系统较复杂，可以分为两类：①血小板自身特有的抗原，如GP、HPA等;②与其他机体组织或细胞共有的抗原，如HLA-Ⅰ、ABH等。
无论是共有抗原或自身抗原，都能够刺激机体产生异常免疫反应，产生大量血小板抗体，这是血小板输注无效的首要原因。
致使外来血小板破坏增多、功能减低、寿命缩短，特别是在多次输血患者中，55%的患者会出现PTR或（和）PTP[2]。
血小板抗体的产生是由血小板表面不同的相关抗原决定簇引起的一组复杂的免疫性疾病。
血小板抗体包括针对GP抗原的血小板特异性抗体（PB IgG）和针对HLA-Ⅰ类抗原的血小板表面相关抗体（PA IgG）两类。
随着患者输注血小板次数或输注量的不断增加，体内血小板抗原被不断刺激，导致体内血小板抗体水平上升，引起输注无效及非溶血性输血的可能性也相应增高。
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➢ 限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) ➢ 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
血小板抗原定型
1aa 2aa 3ab 4aa 5aa 6aa 7aa 8aa 9aa 10aa 11aa 12aa 13aa 14aa 15ab 16aa 17aa
用途： （1）健康人群HPA基因分型，建立已知HPA基因型的血小板献血员库。 （2）检测受者HPA基因型，以便从血小板献血员库中寻找与其HPA基因型相
匹配的血小板供者。 （3）检测患者HPA基因型，辅助临床胎儿/新生儿免疫性血小板减少症、输
血后紫癜及血小板输注无效症等疾病的病因诊断。 （4）对特定区域或种族人群HPA基因分型，可为人类遗传学研究提供相关
巨核祖细胞
血小板
胞质块脱落
幼巨核细胞 巨核细胞
血小板形态
静息状态
活化状态
血小板抗原
➢血小板“非特异性”抗原
HLA-Ⅰ类抗原 ABH抗原
➢血小板“特异性”抗原
HPA抗原
HPA抗原
主要存在于血小板膜的GP分子上，也少量存 在于血管内皮细胞、结缔组织细胞和平滑肌细 胞。 1990年国际输血协会血小板免疫学工作组提 出了HPA命名，以发现的时间顺序排列：HPA-1 、HPA-2、HPA-3等系统。
极少数为ABO抗体 少数为抗GPIa/IIa抗体
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位于 GPIV/V 和 GPIa/IIa
同上 抗原位于GPⅡb/Ⅲa和
GPIb/IX 抗原表位是PF4
举例——NAIT
母体同种异体抗 体通过胎盘
母体同种异体免疫 胎儿血小板减少
胎盘屏障
Y
YY Y
NAIT
新生儿同种异体免疫 性血小板减少症
血小板输注无效症
血小板输血后紫癜
被动同种异体免疫 性血小板减少症 移植相关同种异体 免疫性血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1a(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36 HLA-I抗体50~80% ,HPA17~25%(日本人为HPA-2b),
HPA抗原
已确定了33个HPA，其中12 个抗原为双等位基因表 达（HPA-1,-2,-3,-4，-5和-15）。其中高频率抗原命 名a，低频率抗原命名b。其余21个抗原为低频率抗原， 尚未发现对偶抗原，命名为bw。
单核苷酸多态性（SNP）:33个HPA中均已搞清楚基因 背景，其中32个HPA的多态性型是由一个氨基酸置换所 致，而这又是由编码血小板膜糖蛋白（GP）基因的一 个核苷酸的不同所致。
NAIT
NAIT
血小板体检测常用方法
指标
方法 功能性
试验
酶标法
荧光法
固相凝集法
应用 抗体检测 √
血小板抗原抗体检测 及临床应用
长春博德生物技术有限责任公司 郭超
目 录 / contents
01 血小板抗原 02 血小板抗体与疾病 03 血小板抗体检测的意义和临床应用
血小板简介
血小板：D:2-5um V:红细胞*1/5
功能：促进止血和加速凝血 正常范围：100-300×109/L
来源：
骨髓干细胞 多功能祖细胞
资料和证据。
血小板抗体的产生方式
输血小板、红细胞（尤其 是没有滤白的红细胞） 怀孕
移植（骨髓、器官）
药物、自身免疫
以上途径产生的血小板同种抗体与血小板上 的相应抗原结合，导致血小板被内皮网状系统清除。
抗体 分类 同种 抗体
同种异 体抗体
自身 抗体
药物依 赖性抗
体
血小板抗体与部分相关疾病
疾病
格兰茨曼血小板功能 不全病
胎母同种异体免疫血小板减少症（fetomaternal alloimmune thrombocytopenia，FMAIT）致病机理与新生儿溶血病（HDN） 相似，前者是由胎儿父母血小板抗原不合引起的血小板减少症， 后者为红细胞抗原不合引起的溶血性疾病。 由于胎儿遗传自父亲的血小板抗原刺激母体产生IgG型的抗血 小板抗体，该抗体能通过胎盘进入胎儿体内并与具有相应抗原 的血小板结合，此致敏血小板在胎儿的血液循环中被清除而使 得胎儿血小板减少，出现瘀点和瘀斑，其严重者会导致神经系 统损伤（占已报道病例的20%）、10%出现颅内出血(死亡率近 100%）。 因多数病例在出生后才得以诊断，故此病也称作新生儿同种 异体免疫血小板减少症。 初次妊娠妇女即可发生FMAIT，其发病率大约为1/800-1500 。
HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15,
anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b
HPA-1a,HPA-3,HPA-5b
自发性血小板减少症
继发于母体自发性 血小板减少症
奎宁/奎尼丁抗体 所致疾病
肝素抗体所致疾病
其它抗体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
HPA-14bw不具有单核苷酸多态性。其核苷酸置换发 生在 AAG1929-31。
HPA抗原
HPA抗原
血小板抗原定型
血清学定型
➢ 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 ➢ 缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。
NAIT临床表现
FMAIT患儿病情变化较大，具有自限性，常在出生后 2-3周恢复。 轻度血小板减少患儿有时没有任何临床症状。病情较重患儿
临床表现为皮肤、体内外黏膜出血，出现紫癜、瘀点或瘀斑。
严重患儿可能发生颅内出血（intracranial haemorrhage， ICH），占10%。
与FMAIT相关的ICH 80%发生在子宫内，其中14%发生在妊娠20 周前，28%发生在妊娠30周前。
NAIT早期诊断与筛查
母体血清抗HPA抗体检测，然而母体抗体水平到 预产期时逐渐下降，约有30%的病例抗体阴性。
父母双亲的HPA基因检测，在高加索地区采取对 其HPA-1和HPA-5基因检测，而在亚洲地区应考虑进 行HPA-4和HPA-5基因检测。
父母双亲交叉配型实验，将母体血清与父亲血小 板进行交叉配型实验，即使不能确切知道不相合的 抗原，但这种方法也能发现母体是否存在血小板同 种异体免疫反应。