《生化检验技术基础》PPT课件
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【2024版】生化检验基础知识-PPT课件
2. 血液标本的采集
生化检验用的血液标本可来自于静脉、 动脉或毛细血管。静脉血是最常用的标本， 静脉穿刺是最常用的采血方法。毛细血管采 血主要用于儿童，血气分析多使用动脉血。
（1） 采血前准备
为了使实验室结果有效地用于临床，实验室 应了解在收集标本前和收集标本时，所有会 影响实验室的非患者内在疾病因素。采取各 种措施，提出对患者采集标本前以及采集时 的要求，称之为患者准备。
（2） 注意事项 收集尿液标本的容器必须清洁干燥， 最
好是一次性使用的容器。若容器反复使用， 则须用洗涤液和自来水清洗， 再用蒸馏水冲 洗。尿标本要防止混入月经血、阴道分泌物、 精液、前列腺液、粪便等异物。尿标本收集 后应 12 时内送检，以免细菌作用和化学成分 分解。若不能及时检验（如收集 24 小时尿 液），将标本置冰箱保存，若加入防腐剂， 保存效果更佳。
对不是因操作不当引起的溶血、脂血或胆红 素血，应在检验报告上注明，供医生参考。
尿液、脑脊液和胸腹水等标本常需离心，取 上清液进行分析
Байду номын сангаас
分离后的标本若不能及时检测或需保留以备 复查时，一般应放于4℃冰箱，某些检测项 目的标本存放于-20℃冰箱更稳定。标本存 放时需加塞，以免水分挥发而使标本浓缩。
3.尿液标本的采集
尿液标本的采集 （1） 采集方法 尿液标本有随机新鲜尿、定时尿及 24 小时尿， 根据检查项目选择标本的采集类型。定量生化分析 多收集 24 小时尿液， 24 小时尿标本采集方法如 下：
嘱病人在早晨 8 时排尿弃去，以后每次排尿均 收集于一大容器内，至次日早晨 8 时最后一次尿亦 收集于容器内。测量并记录 24 小时尿液总量，然 后混匀尿液，取适量尿液送检。
通常用量为0．5 ～1．0ml 浓盐酸／100 ml 尿液，适用于24 小时尿儿茶酚胺、秀草 扁桃酸（V M A）、17 －羟皮质类固醇和 17 －酮类固醇等定量测定。
生化检验基本知识ppt课件
血清生化血库试验 快速血清分离生化免疫 全血血常规试验 惰性胶体+促凝剂 K2EDTA 或K3EDTA
全血血细胞沉降率试验 枸橼酸钠
血浆葡萄糖试验 氟化钠+草酸钾
血浆凝血试验 PT， TT， 凝血因子试验
枸橼酸钠 7
（二）尿液标本的采集
1、尿液标本分类
随机新鲜尿 8-20
定时尿
20-8
3h尿
24小时尿
第二章 临床生化检验基本知识-1
• 第一节 生化检验标本 • 第二节 生化检验质量管理要素 • 第三节 检测系统的评价与验证 • 第四节 试剂盒的选择和评价
复习思考题：
1.真空采血 法的优点？ 2. 生化检验常用的抗凝剂和防腐剂？ 3.生化检验血标本采集的注意事项？ 4.接收检测标本应核对的主要标记内容？ 5.血标本不能及时检测时应如何处理？ 6.拒收检测标本的原因？ 7.急诊、常规、危急值报告的时间和要求？ 8.生化检验流程包括哪些程序？
（四）年龄 （五）性别 （六）体形 （七）药 物
第二节 生化检验质量管理要素
一、生化检验前质量管理要素
主要包括：检验人员组成和素质的稳定；实验工作 环境的优化；检测方法的选择与评价；试剂盒的选 择与评价，病人的准备；标本的采集、处理和存储 等。
（一）生化检验申请（与临床医生沟通）
Ｓ申ＥＲ请ＵＭ单内容：条码号、门诊号，住院号；病人的 姓名，性别，出生日期；病房，床位号；临床诊 断，问题或特殊检验注意事项；申请检查项目； 标本类型；采样时间，标本接收时间（年、月、 日、时、分;有关治疗情况(用药情况)医生姓名等。
血浆的分离：取血后与抗凝剂充分混匀 后，可立即离心分离，2500~3000转/min，5min。
血清的分离：取血后将试管放37℃水浴 放置30min左右，离心分离。
生化检验技术基础课件
生化检验技术基础课件一、教学内容本节课我们将学习《生化检验技术基础》教材的第一章“生化检验概述”和第二章“常用生化检验技术”，详细内容将包括生化检验的基本概念、分类、应用范围，以及常用的生化检验技术，如光谱分析、色谱分析、酶联免疫吸附试验等。
二、教学目标1. 理解生化检验的基本概念、分类及应用范围。
2. 掌握常用的生化检验技术及其操作原理。
3. 能够运用所学知识进行简单的生化检验操作。
三、教学难点与重点教学难点：光谱分析、色谱分析等常用生化检验技术的操作原理。
教学重点：生化检验的基本概念、分类，以及常用生化检验技术的应用。
四、教具与学具准备1. 教具：PPT课件、实验设备、实验试剂。
2. 学具：笔记本、教材、实验服、手套等。
五、教学过程1. 导入：通过展示一组临床生化检验的图片，引起学生对生化检验的兴趣。
2. 理论讲解：（1）生化检验概述：讲解生化检验的基本概念、分类、应用范围。
（2）常用生化检验技术：详细讲解光谱分析、色谱分析、酶联免疫吸附试验等技术的原理。
3. 实践操作：（1）分组进行光谱分析实验，观察不同物质的光谱特征。
（2）进行色谱分析实验，了解色谱分析的分离原理。
4. 例题讲解：讲解光谱分析和色谱分析在实际检验中的应用案例。
5. 随堂练习：让学生结合教材，完成课后习题。
六、板书设计1. 生化检验概述基本概念分类应用范围2. 常用生化检验技术光谱分析色谱分析酶联免疫吸附试验七、作业设计1. 作业题目：（1）简述生化检验的基本概念、分类及应用范围。
（2）论述光谱分析和色谱分析的原理及操作步骤。
（3）结合实际案例，说明生化检验在临床诊断中的应用。
2. 答案：八、课后反思及拓展延伸1. 生化检验技术的发展趋势。
2. 生化检验在疾病诊断和治疗中的应用实例。
3. 探索新的生化检验技术，如微流控芯片、生物质谱等。
重点和难点解析一、教学内容1. 生化检验的基本概念、分类及应用范围。
2. 常用生化检验技术的原理及操作步骤。
临床生化检验基本知识PPT课件
（二） 常规检验 根据项目 要求一般 3-4小时， 最长不超
2天
（三） 特殊检验 标本因素 技术因素 疾病因素 法律因素 时间不定
（四） 危急值报告 指检验人员 发现危及患 者生命的极 限值时要立 即电话报告
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第二节 临床生化检验质量管理要素
一、临床生化检验流程
检验前阶段
检验中阶段
ⅲ抽血后取下针头再将血液沿容器壁徐徐注入容 器内，切勿用力过猛。
ⅳ若需血浆可用抗凝管作容器，应轻轻倒转容器 与抗凝剂混匀，切勿用力振摇。
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ⅴ 避免充血和血液浓缩 ⅵ 若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧 手臂采血；若女性病人做了乳腺切除术，应在 手术对侧手臂采血 ⅶ 采血的体位 ⅷ 采血时只能向外抽，决不能向静脉内推，以 免注人空气，形成气栓而造成严重后果。 ⅸ 晕血处理
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• 2.年龄:人在不同的年龄阶段，其生理指标是不 同的。新生儿红细胞计数和血红蛋白含量比成 人高很多，乳酸脱氢酶(LD)、苹果酸脱氢酶 (MD)、异柠檬酸脱氢酶(ICD)高于成人2～3倍。 血液中碱性磷酸酶含量提示成骨细胞活性，在 青春期会达到一个高峰，活性从500 U/L左右 升到750 U/L左右，18岁以后逐渐降到200 U/L以下。
教学
➢ 1、了解生化检验报告单的申请和报告方式， ➢ 2、说出生化检验工作流程， ➢ 3、简述生化检验质量管理要素， ➢ 4、说出影响标本采集的生物学因素有哪些？ ➢ 5、熟练叙述标本采集的注意事项。
目
标
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第一节 临床生化检验的申请方式与报告
一、单项检验与组合检验
单项检验 组合检验 急诊检验 常规检验
生化检验实验室基本知识PPT医学课件
三、生化检验项目
（二）急诊生化检验项目
急诊项目：指对临床危急、重症病人的诊断、 抢救和治疗有重要指导意义的检验项目。一 般要求从“标本采取”到“检验报告”发出 控制在2h内。如血气分析、肾功、电解质、 心功等
急 诊 项 目
危 急 值
常 规 项 目
检验项目
三、生化检验项目
（三）特殊项目 指标本采集技术高，或标本数量少，或含有
转动后，方可打开离心机盖，取出样品
(二)电解质分析仪
溶液中被测离子接触电极时 ，在离子选择电极基质的含 水层内发生离子迁移，迁移 离子的电荷改变存在电势， 使膜面间的电位发生变化， 在测量电极与参比电极间产 生一个电位差，测量电位差 大小可求得待测离子浓度
(三)血气分析仪
血气分析仪不仅能在几分钟 内检测出病人血液中的氧气、 二氧化碳等气体的含量和血 液酸碱度及相关指标的变化， 还能快速反映血液中钾、钠、 钙的含量，为危重病人抢救 中快速、准确的检测提供了 有利的保障。
2.饮食因素： 下降：Alb、铁、钾、总胆
3.药物因素： 4.溶血因素： 5.储存因素：
受饮食影响的项目
项目：GLU、TG、ALP、血酯、丙酮酸、乳酸、 BUN、UA、转氨酶等
原则：空腹6-12h后采血
受药物影响的项目
药物影响检验结果途径： 1.药物本身对检验方法的影响 2.药物代谢产物对检验方法的影响 3.药物对代谢器官功能的影响 原则：检验受某种药物影响的项目之前3天，
固定相具有离子交换性能。主要用于分离氨基酸、多肽、蛋 白质、核酸、同工酶等
高效液相层 分离能力强、测定灵敏度高、可室温下进行。主要用于分离
析法
蛋白质、核酸、氨基酸等
操作简单、快速、分离效率高，但必须针对某一分离对象， 亲和层析法 制备专一配基和寻求层析的稳定条件，应用范围受到限制。
生化检验课件.ppt
敏感的指标，其血清水平与冠心病发病率呈负相 关。急性心肌梗塞时，Apo-A 1 水平降低。Ⅱ 型糖尿病Apo-A 1 值常偏低，其心血管并发症 的发生率增高。脑血管病变，肾病综合征、肝衰 竭以及Apo-A 1 缺乏症时Apo-A 1 水平也降低。
二）载脂蛋白 B测定
[参考值] ELISA法：男为1.01±0.21g/L；女 为1.07±0.23g/L
血钾症，高于5.5mmol/L为高血钾症。
2、低血钾症见于： (1)摄取不足： (2)丢失过多： (3)葡萄糖与胰岛素同时使用，周期性麻痹
和碱中毒等，钾过多转入细胞内。
3、高血钾症见于： (1)摄入过多； (2)排泄困难； (3)细胞内钾大量释出； (4)细胞外液因失水或休克而浓缩，使血钾
[临床意义] 血清Apo-B水平升高与动脉粥样硬化、 冠心病发病呈正相关，Apo-B的上升较LDL-C和 CHO的上升对冠心病风险度的预测更有意义，此 外，家族性高胆固醇血症、对胰岛素有抵抗的Ⅱ 型糖尿病、胆汁淤积、肾病综合征和妊娠时， Apo-B也升高，Apo-B降低见于低β-脂蛋白血症、 Apo-B缺乏症、肝硬化。
[临床表现]
1、增高 见于动脉粥样硬化性心脏病、原发性高脂血症、 肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、肾病综合征等。
2、降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减退及严重 肝衰竭。
二、血清脂蛋白检测
一 ) 脂蛋白电泳测定
[参考值]
电泳法：乳糜微粒（ CM）为阴性，HDL为30%～40%， LDL为50%～60%，VLDL为13%～25%。
旁腺功能亢进症
(3)服用VitD过多 (4)骨病 (5)某些肿瘤：肾癌，肺癌，急性白血病等 (6)长期制动引起骨脱钙
二）载脂蛋白 B测定
[参考值] ELISA法：男为1.01±0.21g/L；女 为1.07±0.23g/L
血钾症，高于5.5mmol/L为高血钾症。
2、低血钾症见于： (1)摄取不足： (2)丢失过多： (3)葡萄糖与胰岛素同时使用，周期性麻痹
和碱中毒等，钾过多转入细胞内。
3、高血钾症见于： (1)摄入过多； (2)排泄困难； (3)细胞内钾大量释出； (4)细胞外液因失水或休克而浓缩，使血钾
[临床意义] 血清Apo-B水平升高与动脉粥样硬化、 冠心病发病呈正相关，Apo-B的上升较LDL-C和 CHO的上升对冠心病风险度的预测更有意义，此 外，家族性高胆固醇血症、对胰岛素有抵抗的Ⅱ 型糖尿病、胆汁淤积、肾病综合征和妊娠时， Apo-B也升高，Apo-B降低见于低β-脂蛋白血症、 Apo-B缺乏症、肝硬化。
[临床表现]
1、增高 见于动脉粥样硬化性心脏病、原发性高脂血症、 肥胖症、阻塞性黄疸、糖尿病、肾病综合征等。
2、降低 见于甲状腺功能减退、肾上腺功能减退及严重 肝衰竭。
二、血清脂蛋白检测
一 ) 脂蛋白电泳测定
[参考值]
电泳法：乳糜微粒（ CM）为阴性，HDL为30%～40%， LDL为50%～60%，VLDL为13%～25%。
旁腺功能亢进症
(3)服用VitD过多 (4)骨病 (5)某些肿瘤：肾癌，肺癌，急性白血病等 (6)长期制动引起骨脱钙
临床生化检验基础PPT课件
转速选择：RCF＝1.118×L×（r/1000）2 RCF：相对离心力，在生化检验分析中的
标本相对离心力在1500～1800； L：离心半径，以mm计算，即离心管至旋
转轴中心距离； r：转子每分钟转速。
标本的处理
分离注意事项：
转速不够，离心不彻底，不能很好的将 血清分离，在血清中容易夹杂纤维蛋白，在测 试过程中容易堵针，影响测试。
主要内容
生化检验的概述 生化检验的对象 生化检验的手段
生化检验的作用
概述
临床生化检验：主要是运用物理学、化 学、生物学等实验室技术和方法，通过感官、 试剂反应、仪器分析和动物实验等手段，对 病人的血液、体液、分泌液、排泄物等标本 进行检验，以获得反映机体功能状态、病理 变化或病因等的客观资料。
对象
ε ×Vs×d ε ×d
VS
在临床测试中，外界环境因素、试剂本
检测方法
比浊法：
免疫比浊法： 免疫透射比浊法：是在光源的光路方向 测量透射强度，用终 点法测量。 用于血清特种蛋白的检测。 免疫散射比浊法： 常用于血凝仪中。
化学比浊法
校准品
定标：浓度和反应度关系，找K值。
K＝C标准/（A标准－A试剂空白） 决定因素：
1、标准液浓度，最好是血清基质，否则 可能会因为基质效应而影响定标效果。
肝功能 胰腺炎 前列腺疾病
肾功能 无机离子 免疫性疾病
血糖
痛风
免疫炎症反应
血脂
中毒
心肌酶谱
检测试剂
常见生化项目之间的关系：
GLO＝TP－ALB
A/G＝ALB/GLO
O/P＝AST/ALT
I-BIL＝T-BIL－D-BIL
AⅠ/B＝ApoAⅠ/ApoB CK-MM＝CK－CK-MB
标本相对离心力在1500～1800； L：离心半径，以mm计算，即离心管至旋
转轴中心距离； r：转子每分钟转速。
标本的处理
分离注意事项：
转速不够，离心不彻底，不能很好的将 血清分离，在血清中容易夹杂纤维蛋白，在测 试过程中容易堵针，影响测试。
主要内容
生化检验的概述 生化检验的对象 生化检验的手段
生化检验的作用
概述
临床生化检验：主要是运用物理学、化 学、生物学等实验室技术和方法，通过感官、 试剂反应、仪器分析和动物实验等手段，对 病人的血液、体液、分泌液、排泄物等标本 进行检验，以获得反映机体功能状态、病理 变化或病因等的客观资料。
对象
ε ×Vs×d ε ×d
VS
在临床测试中，外界环境因素、试剂本
检测方法
比浊法：
免疫比浊法： 免疫透射比浊法：是在光源的光路方向 测量透射强度，用终 点法测量。 用于血清特种蛋白的检测。 免疫散射比浊法： 常用于血凝仪中。
化学比浊法
校准品
定标：浓度和反应度关系，找K值。
K＝C标准/（A标准－A试剂空白） 决定因素：
1、标准液浓度，最好是血清基质，否则 可能会因为基质效应而影响定标效果。
肝功能 胰腺炎 前列腺疾病
肾功能 无机离子 免疫性疾病
血糖
痛风
免疫炎症反应
血脂
中毒
心肌酶谱
检测试剂
常见生化项目之间的关系：
GLO＝TP－ALB
A/G＝ALB/GLO
O/P＝AST/ALT
I-BIL＝T-BIL－D-BIL
AⅠ/B＝ApoAⅠ/ApoB CK-MM＝CK－CK-MB
第二章 生物化学检验技术基础知识精品PPT课件
一、实验室规则
1．实验前的准备 实验前，要明确实验目的和要求。必须
认真预习实验的原理、操作步骤及注意事项， 做到实验目的明确：操作步骤及注意事项清 楚。
一、实验室规则
2．实验中的要求 （1）注重培养科学的思维方法、牢固的质量观念和良好的工作习惯 学生进入实验
室必须穿工作服。实验操作时，不能大声喧哗，来回走动，如有问题，举手请示 老师解决。 （2）实验操作过程应有条不紊，实验器具、试剂应摆放整齐有序。 （3）认真对待实验过程中的每一项基本技能训练：标本的制备及取样，试剂的定量 移取及加注，溶液的混匀、沉淀、过滤、’离心、保温、加热、冷却，各种仪器 的正确：操作等，均应在实验中反复多次训练，体会和掌握操作要点，力求做到 熟练、准确、规范。 （4）爱护公物，不管是易损的试管、吸管，还是精密分析仪器，均要按操作规程， 细心、认真操作。如有损坏，要及时登记补领，并按赔偿制度酌情赔偿；要注意 节约，避免不必要的人为浪费。 （5）试验中手脑并用，每进行一步操作，都要积极思考这一步的目的和作用。认真 观察实验现象。这样既能帮助理解实验原理及相关理论知识，又能培养科学的思 维习惯和方法。 （6）注意安全，杜绝安全事故的发生，凡属发烟或带恶臭及有毒气产生的化学操作， 均应在毒气柜中进行。 （7）生化实验大都是微量定量分析。要求在整个实验过程中，牢固树立定量的观念， 一切操作都要考虑到如何减少误差，保证分析结果的准确性。 （8）同学间要团结合作，不允许只顾自己，不顾别人，抢试剂，乱抓吸管。这样容 易导致实验混乱，标准液、标本、试剂间交叉污染，是全组实验失败。
一、实验室规则
3．实验后的清洁 实验结束后，对实验所得结果和数据，
进行整理、分析和计算。重视总结实验中的 经验、教训。认真完成实验报告，使用过的 器皿应清洗干净，放回原处，并安排劳动值 日生打扫实验室。离开实验室前要检查水、 电、煤气、门窗是否关好，经老师同意后方 能离开。
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深绿 绿色带蓝 蓝色带绿
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
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可见
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（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
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2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
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（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
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1
一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
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2
（1）郎伯定律
I0
It
l
L
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透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
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透光率（T）
吸光度（A）
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
1
0.000
0.75
0.125
0.5
0.301
0.25
0.602
0.17
0.770
0.1
1.000
0.05
1.301
0.01
2.000
0.001
3.000
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
白蛋白+溴甲酚绿 pH4.2 白蛋白溴甲酚绿复合物
引起在波长630nm范围内吸光度的上升, 与白蛋 白含量成正比
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二、分光光度计
1．光源
热光源: 钨灯、卤钨灯（320～2500nm）
气体放电光源：
氢灯、氘灯（185～375nm）。 氘灯发光强度比氢灯强3～5倍，是目前 紫外光区常用光源。
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2. 单色器
单色器是一种用来把光源发出的复合光分 解成单色光，并能任意改变所需波长的装置。
(1)棱镜 玻璃棱镜的折射率大、色散能力也大，因 而分辨本领高。但它吸收紫外光，因此只适 用于350～3000nm的波长范围。 石英棱镜对紫外光吸收少 ，适用于1954000nm间分光。但由于石英棱镜折射率低 于玻璃，因而色散能力差。
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3．比色法的误差
（1）仪器误差 滤光片，狭缝过宽，光电池疲劳，
仪器结构，散热不良。 （2）方法误差 （3）操作误差
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比色法举例
1. 总蛋白(TP)
蛋白质中的肽键+Cu 2+ 碱性条件 紫红色络合物
引起在波长540~560nm范围内吸光度的上升, 与 总蛋白含量成正比
2. 白蛋白(ALB)
H2O
尿素
尿素＋H2O 脲酶 2NH4+＋CO2 NH4+＋α-酮戊二酸＋NADH 谷氨酸脱氢酶
谷氨酸＋NAD+ ＋H2O
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肌酸激酶（CK）
磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP 葡萄糖＋ATP HK 葡萄糖-6-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP G6PDH
6-磷酸葡萄糖酸＋NADPH＋H+
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三、酶法分析
酶法分析包括两方面的内容： ①借助酶来测定某一化合物的浓度， 如测定体液中的葡萄糖、甘油三酯、胆 固醇、尿素、尿酸、肌酐等。 ②借助酶来测定另一种酶的活性，实 际上是用酶来测定待测酶的产物，如转 氨酶、肌酸激酶、淀粉酶等。
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葡萄糖
葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸＋H2O2 H2O2＋苯酚＋4-氨基安替比林 过氧化物酶 醌亚胺＋
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波长的选择
波长(nm) 750~800 610~750 595~610 580~595 560~580 500~560 490~500 480~490 435~480 400~435 200~400
颜色 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 暗绿 绿色带蓝 蓝色带绿 紫蓝 青紫 紫外
被测溶液颜色
丙氨酸氨基转移酶（ALT）
丙氨酸＋α-酮戊二酸 ALT 丙酮酸＋谷氨酸 丙酮酸＋NADH＋H+ LDH 乳酸＋NAD+＋H2O
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酶催化特点
•高度的特异性 •高催化效率 •作用条件温和
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酶的活性部位
•底物结合部位 •催化部位
-dI∝Idl， -dI＝aIdl， dI/I=-adl
积分
It
L
dI/I ＝ -a dl 得： ln(I0 / It)＝-aL
I0
0
将ln改为lg，则为：lg（ I0 / It）＝-0.434aL＝K’L
令lg（ I0 / It） ＝A，则A＝ K’L
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（2）比尔定律 A＝K”C
（3）郎伯-比尔定律 A＝KLC
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4．检测器
在分光光度计中，把光信号转变 成电信号输出的装置称检测器。
光电池 光电管 光电倍增管
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双波长分光光度计
来自光源的光被两个单色器分别分离出 波长为λ1和λ2的两束单色光。经过折波器 后，两束波长不同的单色光交替地照射于 同一样品杯。样品杯背后的光电倍增管交 替地接收到两种波长照射吸收池后所产生 的信号。此信号经电子电路转化为两个吸 光度之差△A。
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(2)光栅
光栅是利用光的衍射、干涉原理制成的色 散元件。目前，全息光栅在质量上，成本上 都大大优于机械光栅。因光栅分光在紫外和 可见光区均适用，且色散力强、分辨率高， 故近年生产的分光光度计大都采用光栅作单 色器。
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3．比色杯
比色杯可由玻璃和石英等材料制成， 玻璃适用于350nm以上光区，而石英 杯则适用于紫外和可见光区。
紫蓝 青紫 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 Ultra-violet
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可见
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（3）光学因素的影响
散射是向空间各个方向，而使透射光 减弱。反射可使光能损失，当光线通过 两种不同介质时，则发生反射。当样本 溶液与空白溶液的折射率有较大差异时， 导致吸收值的偏差。
（4）非平行光通过吸收池时，由于光线 的倾斜使厚度L增大而影响测量值。
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2．影响因素
（1）化学因素的影响
溶液中溶质可因浓度的改变而发生离 解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出 现偏离比尔定律的现象。由化学因素引 起的偏离，有时可控制溶液条件设法减 免。此外，能产生荧光的物质也可导致 偏离比尔定律。
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（2）非单色光的影响
比尔定律的一个重要条件是单色光， 但在比色分析中常有不同波长的光同时 存在。这就使吸光度发生改变，从而偏 离比尔定律。
生化检验技术基础 与进展
上海长征医院实验诊断科
于嘉屏
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一、比色分析
1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律
A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL
I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度
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（1）郎伯定律
I0
It
l
L
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透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0
吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD）
A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为 摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。
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透光率（T）
吸光度（A）
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
1
0.000
0.75
0.125
0.5
0.301
0.25
0.602
0.17
0.770
0.1
1.000
0.05
1.301
0.01
2.000
0.001
3.000
－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－
白蛋白+溴甲酚绿 pH4.2 白蛋白溴甲酚绿复合物
引起在波长630nm范围内吸光度的上升, 与白蛋 白含量成正比
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二、分光光度计
1．光源
热光源: 钨灯、卤钨灯（320～2500nm）
气体放电光源：
氢灯、氘灯（185～375nm）。 氘灯发光强度比氢灯强3～5倍，是目前 紫外光区常用光源。
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2. 单色器
单色器是一种用来把光源发出的复合光分 解成单色光，并能任意改变所需波长的装置。
(1)棱镜 玻璃棱镜的折射率大、色散能力也大，因 而分辨本领高。但它吸收紫外光，因此只适 用于350～3000nm的波长范围。 石英棱镜对紫外光吸收少 ，适用于1954000nm间分光。但由于石英棱镜折射率低 于玻璃，因而色散能力差。
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3．比色法的误差
（1）仪器误差 滤光片，狭缝过宽，光电池疲劳，
仪器结构，散热不良。 （2）方法误差 （3）操作误差
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比色法举例
1. 总蛋白(TP)
蛋白质中的肽键+Cu 2+ 碱性条件 紫红色络合物
引起在波长540~560nm范围内吸光度的上升, 与 总蛋白含量成正比
2. 白蛋白(ALB)
H2O
尿素
尿素＋H2O 脲酶 2NH4+＋CO2 NH4+＋α-酮戊二酸＋NADH 谷氨酸脱氢酶
谷氨酸＋NAD+ ＋H2O
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肌酸激酶（CK）
磷酸肌酸＋ADP CK 肌酸＋ATP 葡萄糖＋ATP HK 葡萄糖-6-磷酸＋ADP 葡萄糖-6-磷酸＋NADP G6PDH
6-磷酸葡萄糖酸＋NADPH＋H+
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三、酶法分析
酶法分析包括两方面的内容： ①借助酶来测定某一化合物的浓度， 如测定体液中的葡萄糖、甘油三酯、胆 固醇、尿素、尿酸、肌酐等。 ②借助酶来测定另一种酶的活性，实 际上是用酶来测定待测酶的产物，如转 氨酶、肌酸激酶、淀粉酶等。
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葡萄糖
葡萄糖＋O2＋H2O 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸＋H2O2 H2O2＋苯酚＋4-氨基安替比林 过氧化物酶 醌亚胺＋
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波长的选择
波长(nm) 750~800 610~750 595~610 580~595 560~580 500~560 490~500 480~490 435~480 400~435 200~400
颜色 深紫 深红 桔红 深黄 绿色带黄 暗绿 绿色带蓝 蓝色带绿 紫蓝 青紫 紫外
被测溶液颜色
丙氨酸氨基转移酶（ALT）
丙氨酸＋α-酮戊二酸 ALT 丙酮酸＋谷氨酸 丙酮酸＋NADH＋H+ LDH 乳酸＋NAD+＋H2O
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酶催化特点
•高度的特异性 •高催化效率 •作用条件温和
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酶的活性部位
•底物结合部位 •催化部位
-dI∝Idl， -dI＝aIdl， dI/I=-adl
积分
It
L
dI/I ＝ -a dl 得： ln(I0 / It)＝-aL
I0
0
将ln改为lg，则为：lg（ I0 / It）＝-0.434aL＝K’L
令lg（ I0 / It） ＝A，则A＝ K’L
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（2）比尔定律 A＝K”C
（3）郎伯-比尔定律 A＝KLC
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4．检测器
在分光光度计中，把光信号转变 成电信号输出的装置称检测器。
光电池 光电管 光电倍增管
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双波长分光光度计
来自光源的光被两个单色器分别分离出 波长为λ1和λ2的两束单色光。经过折波器 后，两束波长不同的单色光交替地照射于 同一样品杯。样品杯背后的光电倍增管交 替地接收到两种波长照射吸收池后所产生 的信号。此信号经电子电路转化为两个吸 光度之差△A。
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(2)光栅
光栅是利用光的衍射、干涉原理制成的色 散元件。目前，全息光栅在质量上，成本上 都大大优于机械光栅。因光栅分光在紫外和 可见光区均适用，且色散力强、分辨率高， 故近年生产的分光光度计大都采用光栅作单 色器。
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3．比色杯
比色杯可由玻璃和石英等材料制成， 玻璃适用于350nm以上光区，而石英 杯则适用于紫外和可见光区。