核酸药物(1)
核酸药物的研究和应用
核酸药物的研究和应用随着现代医学的不断发展和进步，越来越多的药物被发现和应用于临床，其中核酸药物便是其中一种较为新颖的药物种类。
核酸药物，作为一种重要的生物制剂，在治疗癌症、病毒感染和遗传性疾病等方面具有显著的应用前景。
本文将探讨核酸药物的研究现状和应用前景。
一、核酸药物的概念和发展历程核酸药物是一种基于核酸分子的药物，它可以直接干预基因表达和蛋白质合成，是一种具有精准治疗作用的生物制剂。
核酸药物的发展可以追溯到20世纪60年代，随着人们对于基因功能的认识逐渐深入，研究人员开始尝试用核酸分子来干扰基因的表达，并开展了一系列相关的实验。
在经过多年的努力和实验研究后，核酸药物研究方面取得了显著的进展，核酸药物的种类也日益增多。
如RNA干扰疗法和CRISPR-Cas9系统等新型核酸药物，为精准治疗和基因编辑领域的相关疾病带来了新的希望。
二、核酸药物的分类和应用核酸药物可以分为两大类：DNA和RNA。
DNA主要用于基因编辑和基因疗法等领域，而RNA则分为多种类型，包括siRNA （小干扰RNA）、miRNA（微小RNA）、lncRNA（长非编码RNA）等。
siRNA主要用于干扰靶基因的表达，从而达到治疗肿瘤、病毒感染和遗传性疾病等目的。
miRNA则主要作用于调控基因表达、细胞增殖和分化等生理过程，通过调节这些细胞生理功能可以达到治疗慢性病和退行性疾病等目的。
lncRNA则是一类全新的RNA分子，它可以通过与DNA、RNA或蛋白质相互作用来调控基因的表达和蛋白质的合成，具有广泛的理论研究和应用前景。
目前，核酸药物在肿瘤治疗、病毒感染和免疫系统疾病等方面得到了广泛的研究和应用。
例如，在肝癌和黑色素瘤等恶性肿瘤治疗方面，采用RNA干扰等新型核酸药物技术可以有针对性地抑制肿瘤的生长和转移，从而提高治愈率。
而在抗病毒感染方面，RNA干扰技术也可以用于抑制病毒的复制和感染，为患者的康复治疗提供了新的手段。
三、核酸药物的研究难点和解决方案尽管核酸药物在疾病治疗方面具有潜力，但其在实际应用中仍存在一些研究难点，这些难点主要包括生物稳定性、药物传递效率和不良反应等方面。
核酸类药物 命名
核酸类药物1. 什么是核酸类药物？核酸类药物是一类利用核酸作为主要活性成分的药物。
核酸是构成生物体遗传物质的基本分子，包括DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）。
核酸类药物通过干预或修复人体细胞内的核酸分子，调节基因表达，从而实现治疗疾病的目的。
核酸类药物主要包括基因治疗药物和核酸药物。
2. 基因治疗药物基因治疗药物是利用基因工程技术将外源基因导入人体细胞，修复或替代缺陷基因，从而治疗疾病的药物。
基因治疗药物通常包括基因替代疗法、基因修复疗法和基因静默疗法。
2.1 基因替代疗法基因替代疗法通过将正常的基因导入到受损细胞中，代替缺陷基因的功能，从而恢复正常的细胞功能。
这种疗法常用于治疗单基因遗传性疾病，如囊性纤维化、遗传性失聪等。
2.2 基因修复疗法基因修复疗法通过修复受损基因的突变位点，使其恢复正常功能。
这种疗法常用于治疗一些突变基因导致的疾病，如血友病、遗传性视网膜病变等。
2.3 基因静默疗法基因静默疗法通过介入RNA干扰（RNAi）机制，抑制特定基因的表达，从而达到治疗疾病的目的。
这种疗法常用于治疗一些基因过度表达导致的疾病，如肝癌、乳腺癌等。
3. 核酸药物核酸药物是利用核酸分子作为药物的主要成分，通过调节基因表达或干扰特定基因的功能，实现治疗疾病的目的。
核酸药物主要包括DNA药物和RNA药物。
3.1 DNA药物DNA药物是利用DNA分子作为药物的主要成分，通过干预人体细胞内的基因表达，调节蛋白质合成，实现治疗疾病的目的。
DNA药物常用于治疗一些基因过度表达导致的疾病，如肿瘤和免疫性疾病。
DNA药物的研发和应用面临一些挑战，如如何提高药物的递送效率、如何避免免疫反应等。
3.2 RNA药物RNA药物是利用RNA分子作为药物的主要成分，通过干扰特定基因的表达或调节蛋白质合成，实现治疗疾病的目的。
RNA药物常用于治疗一些基因过度表达导致的疾病，如癌症和病毒感染等。
RNA药物的研发和应用也面临一些挑战，如如何提高药物的稳定性和递送效率、如何避免免疫反应等。
核酸药物的药理学与应用
核酸药物的药理学与应用核酸药物被认为是未来治疗癌症和其他慢性疾病的重要治疗手段之一。
与传统的药物相比，由于它们的作用机理及代谢特征不同，因此其副作用更低，更加精准有效。
本文将重点介绍核酸药物的药理学与应用。
一、核酸药物的药理学核酸药物根据其作用靶点分为两种类型：DNA药物和RNA药物。
DNA药物通过作用于DNA水平来防止癌症细胞的增殖，而RNA药物则通过干扰基因表达来抑制细胞移动、侵袭和转移。
它们的作用机理均涉及到目标基因的转录和翻译。
1. DNA药物DNA药物能被细胞核吸收并与DNA相互作用，抑制DNA合成、DNA修复和DNA重组过程，进而影响细胞增殖和生物学效应。
其中著名的比如环磷酰胺和环核酸。
环磷酰胺是一种DNA交联剂，具有广谱的抗肿瘤活性，能够干扰DNA的转录和翻译。
而环核酸则是一种DNA链断裂剂，能够引起DNA交叉及DNA损伤，同时还能抑制细胞的DNA重组过程。
2. RNA药物RNA药物是一类新型的药物，由于其可专一性的作用机制，在治疗基因调控及疾病治疗等领域具有极为广泛的应用前景，其中知名的比如小分子抑制剂和siRNA等。
siRNA是一种小分子RNA，通过与靶基因mRNA的互补作用、介导RNA干扰（RNAi）途径来抑制相应靶基因的转录，从而抑制癌细胞的生长、分化与侵袭。
二、核酸药物的应用核酸药物的主要途径是口服和静脉注射。
这些药物可以用于肿瘤、传染性疾病、心血管疾病、风湿性疾病等领域的治疗和预防。
下面以肿瘤作为例子，介绍核酸药物在临床上的应用。
1. 肿瘤治疗核酸药物与传统的化疗药物类似，具有抗肿瘤及增强免疫的作用。
核酸药物作用于癌细胞DNA和RNA，从而使其失去复制和自我修复的能力。
根据对靶点的不同，分别有DNA和RNA两种药物。
著名的核酸药物比如环磷酰胺、多柔比星、长春新碱等。
2. 变态反应性疾病核酸药物的另一个应用领域是治疗变态反应性疾病，比如类风湿性关节炎等。
影响类风湿性关节炎的因素是免疫系统中的细胞、信号分子和抗体。
核酸药物类型及其临床应用
核酸药物类型及其临床应用
核酸药物是一类具有特殊生物学功能的药物，广泛用于治疗疾病、
基因治疗等方面，包括核酸疗法、miRNA治疗、RNAi治疗等多种类型。
下面我们将对核酸药物的类型及其在临床上的应用进行详细介绍。
1. 核酸药物的类型
核酸药物主要包括DNA、RNA等类别，根据其结构和功能的不同，可以划分为以下几种类型：
1.1 DNA药物：DNA药物通常用于基因疗法，可以通过递送外源基因来治疗某些基因缺陷性疾病，如囊性纤维化、遗传性视网膜病变等。
1.2 RNA药物：RNA药物主要包括mRNA、miRNA、siRNA等，
用于调控基因表达、靶向RNA分解、抑制蛋白质合成等，具有很好的
治疗前景。
1.3 合成核酸药物：合成核酸药物是指通过化学合成制备的核酸分子，具有较强的稳定性和生物活性，可用于抗病毒、抗肿瘤等方面。
2. 核酸药物的临床应用
核酸药物在临床上有着广泛的应用，主要包括以下几个方面：
2.1 基因疗法：核酸药物可通过递送外源基因来治疗基因缺陷性疾病，如囊性纤维化、遗传性视网膜病变等，为基因治疗提供了新的途径。
2.2 抗病毒治疗：RNA药物可靶向病毒RNA，抑制病毒复制，用于治疗HIV、乙肝病毒等感染性疾病，具有很好的抗病毒效果。
2.3 抗肿瘤治疗：合成核酸药物具有抗肿瘤活性，可通过靶向RNA 分解、抑制肿瘤细胞增殖等方式，用于治疗多种恶性肿瘤。
综上所述，核酸药物作为一类新型的生物治疗药物，具有很好的应用前景和疗效，对于一些传统药物难以治疗的疾病具有重要意义。
未来随着技术的不断进步和临床试验的深入，相信核酸药物将在各个领域展现出更广阔的应用空间。
核酸类药物1 PPT课件
2019/9/1
12
生物制药工艺学——核酸类药物
4、注解
三磷酸腺苷生产工艺
①应用兔肌肉为原料的提取法生产ATP，曾采用三氯乙酸沉淀蛋白质，以 钡盐和汞盐纯化ATP。此法耗用试剂多，成本高，易造成环境污染和直接 危及操作人员身体健康。后改用蒸馏水提取ATP，树脂精制纯化 从根本 上解决了上述存在的问题．又可回收AMP、ADP，兔肉渣还可食用，总 收率并不比汞盐法低。 ②产氨短杆菌B1是生物素缺陷型菌株，其诱变菌株也依赖生物素作为生 长因子。玉米浆中含有丰富的生物素，加入培养基中使ATP的产量显著提 高。
2019/9/1
9
生物制药工艺学——核酸类药物
三磷酸腺苷生产工艺
2、以兔肌肉为原料
⑤除热原、杂质 将洗脱液按总体积计加入0.6％的硅藻土，0.4％的 活性炭搅拌10min，用4号垂熔漏斗过滤，收集ATP滤液。
⑥结晶、干燥 用6M盐酸调滤液至pH2.5—3，在28℃的水浴中恒温, 加乙醇，不断搅拌，使ATP二钠结晶，用4号垂熔漏斗过滤，分别用 无水乙醇、乙醚洗涤，收集ATP二钠结晶，置五氧化二磷干燥器内 真空干燥，即得ATP成品。次滤液，冷处静置3h，经布氏漏斗过滤 至澄清，得提取液。
提取液上柱流速控制在0.6一1ml／(cm2.min)左右，吸附ATP。上柱过程 中用DEAE—C薄板检查。
④洗脱饱和ATP柱，用pH3、0.03M氯化钠液洗涤柱上滞留的AMP、ADP 及无机盐等，流速控制在1mL／(cm2.min)。再用pH3.8、1M氯化钠液洗 脱 ATP ， 流 速 控 制 在 0.3ml/(cm2.min) ， 收 集 洗 脱 液 。 操 作 温 度 在 0 一 10℃。
生物制药工艺学——核酸类药物
核酸类药物 基本概况 核苷酸生产工艺 三磷酸腺苷生产工艺
核酸药物的研究与应用
核酸药物的研究与应用核酸药物是一种新型的生物制剂，通过介入细胞的核酸代谢过程来治疗疾病。
它可以通过干扰核酸的表达、修复异常的核酸序列以及靶向一些基因和蛋白质来达到治疗的目的。
核酸药物的研究与应用正在不断发展，具有广阔的发展前景。
一、核酸药物的研究进展1. 小干扰RNA：siRNA是一种大小为21-23个核苷酸的双链RNA，可以通过靶向特定的mRNA进行选择性基因沉默，从而抑制蛋白质的表达。
siRNA研究的重点是选择合适的靶点、优化免疫反应和提高传递效率。
目前，siRNA已被用于治疗一些常见的遗传性疾病，如肝癌、高胆固醇和一些感染性疾病。
2.反义RNA：反义RNA是一种与目标mRNA互补的RNA，可以通过与目标mRNA结合抑制其翻译。
反义RNA研究的主要难题是如何提高传递效率和选择适当的靶点。
已经有一些反义RNA药物用于治疗一些病毒感染和癌症。
3.核酸酶：核酸酶是一类可以切割特定DNA或RNA序列的酶。
它可以用于修复DNA缺陷、靶向DNA分子等。
核酸酶的研究重点是提高酶的活性和稳定性，以及选择合适的靶点。
核酸酶已经被用于治疗一些遗传性疾病和逆转录病毒感染。
二、核酸药物的应用前景核酸药物在疾病治疗中有广泛的应用前景，主要体现在以下几个方面：1. 遗传性疾病治疗：核酸药物可以对特定基因进行靶向沉默或切割，从而治疗遗传性疾病。
例如，可以通过siRNA对突变基因进行靶向沉默，以治疗一些遗传性疾病，如囊性纤维化等。
2.癌症治疗：核酸药物可以通过抑制或修复突变基因，来抑制肿瘤的生长和扩散。
同时，核酸酶可以靶向肿瘤细胞，使其自我毁灭。
核酸药物在肿瘤治疗中具有很大的潜力，可以提高治疗的精确度和疗效。
3. 感染性疾病治疗：核酸药物可以通过干扰病原体的核酸代谢过程，抑制病原体的生长和繁殖。
例如，可以通过siRNA抑制病毒的复制，治疗一些病毒感染，如乙肝和艾滋病等。
4.个性化治疗：核酸药物具有高度的靶向性，可以根据个体基因特征进行精准治疗。
核酸与核苷类药物(1)
AMP GMP
脱氨
还原
酶
酶
SAMP 合成酶
IMPIMP脱 Βιβλιοθήκη 酶GMP合 成酶XMP
馈抑制的。 • 枯草杆菌的腺嘌呤缺陷
强
弱
AICAR
型，当培养基中提供限
量腺嘌呤时就累积肌苷。
SAICAR
• 而枯草杆菌的腺嘌呤、 黄嘌呤缺陷型，当培养 基中提供限量鸟嘌呤时 就累积腺苷。
PRPP PRPP
PRPP转酰胺酶
• ATP：用于心肌炎、心肌梗死、心力衰竭、及动脉或冠状动脉硬化、 肝炎等的治疗或辅助治疗。
• 肌苷(IMP)：用于急慢性肝炎、肝硬化、白细胞减少、血小板减少等。
医学课件ppt
5
核酸类药物分类
——自然结构核酸类物质的类似物和聚合物
• 它们是当今人类治疗病毒、肿瘤、艾滋病的重要药物，也是产生干扰素、 免疫抑制剂的临床药物。
医学课件ppt
2
• 核酸是一种多聚体大分子，它的组成单元是核苷 酸，将核苷酸中的磷酸基团去掉，剩余部分称核 苷，核苷进一步分解可生成戊糖和碱基。
胰核酸酶
胰、肠核苷酸酶
核苷酶
医学课件ppt
3
嘌呤核苷酸
AMP 嘧啶核苷酸的结构
GMP
医学课件ppt
4
核酸类药物分类
——具有天然结构的核酸类物质
• 如：ATP、GTP、CTP、UTP、IMP、CoA、CoI(NAD+) 、 CoII(NADP+) 。
具有生物活性dna的制备可从动物内脏肝脾胸腺中提取制备操作条动物内脏加4倍量生理盐水经组织捣碎机捣碎1分钟匀浆于2500rpm离心30分钟沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次每次洗涤后离心将沉淀悬浮于20倍量的冷生理盐水中再捣碎3分钟加入2倍量5十二烷基磺酸钠并搅拌23小时在02500rpm离心在上层液中加入等体积的冷乙醇离心即可得纤维状dna再用冷乙醇和丙酮洗涤减压低温干燥得粗品dna
核酸类药物!!
储存方法
• 低于25℃避光干燥处保存。
愿你健康❤
核酸类药物——
卡介菌多糖核酸
了解核酸
• 核酸是生物大分子化合物，为生命的最基本 物质之一。 • 根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸 （简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA）。 • RNA在蛋白质合成过程中起着重要作用—— 其中转运核糖核酸，简称tRNA，起着携带 和转移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸， 简称mRNA，是合成蛋白质的模板；核糖体 的核糖核酸，简称rRNA，是细胞合成蛋白 质的主要场所。DNA是储存、复制和传递遗 传信息的主要物质基础。
Hale Waihona Puke 它的来源• 卡介菌多糖核酸来源：经卡介 菌培养、破碎菌体，热酚法提 取纯化制成。
成 份
• 主要成分为卡介菌多糖、核酸，辅料为药 用氯化钠。本品为无色透明液体。
功效
• 该品作为一种新型免疫调节剂，主要作用是 调节机体免疫水平，增强机体的抗感染和抗 过敏能力。慢性支气管炎、哮喘、感冒、慢 性感染（如慢性肾炎）、过敏类疾病（如荨 麻疹、过敏性皮炎）、免疫复合物疾病（如 肾小球肾炎）、系统性红斑狼疮、风湿性关 节炎、免疫功能缺陷、肿瘤、神经性皮炎、 尖锐湿疣等。
使用方法
【用法用量】肌内注射， 每次0.5mg，一周2到3次， 3个月为一疗程。小儿酌 减或遵医嘱。
不良反应
不良反应 1、偶见注射部位红肿、结节，热敷后一周内自然消退。 2、偶见低烧。 3、过敏体质偶见皮疹。 4、罕见过敏反应。 禁忌证 1.严重过敏体质者慎用。
2.患急性传染病(如麻疹、百日咳、肺炎等)、急性眼结膜炎、急性中耳炎 及对本品有过敏史者暂不宜使用
核酸类药物的作用
• 核酸类药物是指具有药用价值的核酸、核 苷酸、核苷，以及碱基，是一类药物的总 称。
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核酸药物(1)
核酸药物(1)
3、双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G） 呈味核苷酸的主要品种是肌苷酸钠和鸟苷酸钠，
商品名简称为（I＋G），用核酸酶Pl降解RNA可获得 GMP和AMP，其中AMP经脱氨生成IMP。双酶法生 产（I十G）工艺 。
心，在上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可
得到纤维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温
干燥得粗品DNA。粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5
％ 十 二 烷 基 磺 酸 钠 达 1 ／ 10 体积 ， 搅 拌 1 小 时 ， 经
5000r／pm离心1小时，清液中加入NaCl达1mol／L，
再缓慢加入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗
核酸药物(1)
第二类为自然结构碱基、核苷、核苷酸结构的类 似物或聚合物，这一类核酸类药物是当今人类治疗 病毒、肿瘤、艾滋病的重要手段，也是产生干扰素、 免疫抑制的临床药物。
第二类核酸类药物大部分由自然结构的核酸类物 质进行半合成为结构改造物，近年来发展为化学-酶 合成法。大大提高收率，降低成本。
核酸药物(1)
核酸药物(1)
2、具有生物活性RNA的制备
核酸药物(1)
从核糖核蛋白中分离RNA
(1)乙醇沉淀法：
核糖核蛋白溶于NaHCO3
用含辛醇的 氯仿去蛋白
水相 乙醇
RNA沉淀
(2)盐酸胍法：
核糖核蛋白
2～4盐酸胍 38OC溶解
冷却至0OC
离心 RNA沉淀
核酸药物(1)
（二）DNA的提取与制备
1．工业用DNA的提取
一、叠氮胸苷（Azidothymidine，AZT）
（一）结构与性质
AZT是1987美国FDA批准的治疗艾滋病的新药 。 AZT的药理作用是人体内经磷酸化后生成了3`-叠氮2′-脱氧胸腺嘧啶核苷酸，后者取代了正常的胸腺嘧 啶核苷酸参与病毒DNA的合成，含有AZT成份的 DNA不能继续复制，从而达到阻止病毒增殖的目的。
核酸药物(1)
枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径
（Ⅰ）
腺鸟嘌呤缺陷型 （经诱变缺失46
号或号7酶号）酶）
SAP （一）
7
8
5
AMP
GMP
AICAR
当培养基中提供限量腺嘌呤时
2 SAICAR
Ⅰ 积累IMP 肌苷
Ⅰ＋Ⅱ 积累IMP 肌苷
PRA
Ⅲ 积累XMP 黄苷
（一） （一） 1
ADP PRPP
核酸药物(1)
在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中 关键是铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率 高，易于提取RNA。 很显然在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高， 其确切数值取决于碳、氮比例和培养基组成等。 （2）高RNA含量酵母菌株的筛选 可以从自然界筛选 到RNA含量高的酵母菌株，也可用诱变育种的方法 提高酵母菌的RNA含量。
（二）生产工艺
此合成路线的起始原料是胸苷，目前主要是从 DNA水解法制备，由于原料来源少，合成路线较复 杂，成本很高。
核酸药物(1)
已见报道的胸苷合成方法还有两条途径： ①从2′-脱氧胞苷或2′-脱氧鸟苷或2＇-脱氧腺苷与胸 腺嘧啶反应，经大肠杆菌产生的磷酸化酶催化生成胸 苷。 ② 从 鸟 苷 （ 300mmol ／ L ） 与 胸 腺 嘧 啶 （ 300mmol ／L）反应，在欧文氏菌AJZ992所产生的嘌呤核苷磷 酸化酶和嘧啶核苷磷酸化酶的催化下生成5′-甲基尿苷， 然后经化学法合成胸苷。
来源：提取或发酵 特点：毒副作用小
自然结构碱基、核苷、核酸类结构的类似物 如：巯嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等 来源：以核酸类物质为前体通过“化学法”
或“酶法”进行半合成 特点：毒性较大
核酸药物(1)
第一节 核酸类物质的分离提取及其发酵生产 一、RNA与DNA的提取与制备 （一）RNA的提取与制备 1、工业用RNA的提取 （1）RNA及其工业来源 来源：一些最常见的菌体含有丰富的核酸资源，如酵 母、白地霉、多种抗菌素的菌丝体——青霉素，制霉 菌素等菌体。 通 常 在 细 菌 中 RNA 占 5 ％ ～ 25 ％ ， 在 酵 母 中 占 2.7 ％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。
涤，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制
备需在0～3℃操作）。
核酸药物(1)
核酸药物(1)
二、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸 （一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸
桔青霉产生5`-磷酸二脂酶 红酵母产生3`-磷酸二脂酶
核酸药物(1)
核酸药物(1)
2、酶解法制备戊糖核苷酸 我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产
核酸药物(1)
发酵法生产核苷
核酸药物(1)
第二节 核酸类药物 核酸类药物可分两大类。一类为具有天然结构的
核酸类物质，这些品种都是生物体合成的原料，或 是蛋白质、脂肪、糖生物合成、降解以及能量代谢 的辅酶。缺乏这类物质会使生物体代谢造成障碍， 发生病态。提供这一类药物，有助于改善机体的物 质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺 氧组织恢复正常生理机能。
浓盐法：是用高浓度盐溶液（6%~8%）处理，同 时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内 释放出来。
苯酚法：要避免分子降解，可采用苯酚法制备 RNA。用苯酚处理生物材料，使蛋白质变性，然后 离心，上层水溶液内含有全部RNA，可用乙醇沉淀 出来。
核酸药物(1)
脱氧核糖核蛋白溶于浓盐溶液1mol/L,不溶于 0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L盐溶液。 （4）RNA的提取实例：啤酒酵母是提取RNA的 很 好 的 资 源 。 取 100g 压 榨 啤 酒 酵 母 （ 含 水 份 70%），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以下缓 慢搅拌30分钟。用6mol／L HCl调至pH7，搅拌15 分钟，离心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol ／L HCl调pH2.5，置冷过夜，离心得RNA l.8g （纯度80％）。
1979年用 从E．Coli中分离得到的尿嘧啶磷酸化酶 和嘌呤核苷磷酸化酶，以固相酶的方法将阿糖脲苷 转化为阿糖腺苷。
核酸药物(1)
（二）生产工艺
1、酶-化学合成法
最新的阿糖腺苷的合成法是酶-化学合成法：用 尿苷为原料经氧氯化磷和二甲基甲酰胺反应，生成 氧桥化合物，在碱性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后 利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖经酶法转化成阿糖腺苷。
产率高，周期短，控制容易，产量大。用发酵法生产各种 核苷的菌株有着许多共同特点： ①它们都使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌或短小 芽抱杆菌为诱变出发菌株； ②它们都是通过使用物理或化学诱变方法选育出在遗传性 状上具有特定标记的诱变菌； ③它们在发酵培养时必须提供限量的生长因素，并且好氧， 在某一特定的范围内累积大量核苷。
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4．菌体自溶法生产核苷酸 磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA
可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法 生产5‘-核苷酸。 （1）菌体自溶法生产核苷酸工艺流程：
核酸药物(1)
5．碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸
RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定， 很容易生成2′，3-环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更 不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。 取 RNA 配 成 3 ％ ～ 3.5% 的 水 溶 液 ， 加 氢 氧 化 钠 达 0.3mol／L浓度，升温至38℃，保温16～20小时，用 6mol／L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2′，3＇核苷酸的降解率达95％以上，将2′，3＇-混合核苷酸 制成每片含50～100mg的片剂，经临床使用，对非特 异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和 放疗后的升白血球均有较好疗效。
核酸药物(1)
2020/11/19
核酸药物(1)
依据化学结构和组成分类：分四类
1 核酸碱基及其衍生物 2 核苷及其衍生物 3 核苷酸及其衍生物
4
多核苷酸
核酸药物(1)
核酸药物(1)
核酸药物(1)
依据结构特点及临床应用情况分类
具有天然结构的核酸类物质
如：肌苷、ATP、GTP、CTP、UTP、CoⅠ 等
核酸药物(1)
稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变 性，使核酸从细胞内释放出来。需用酸中和PH7。然 后除去菌体，将pH调至RNA的等电点（pH2.5），使 RNA 沉 淀 出 来 。 上 法 的 缺 点 是 制 得 的 RNA Mr 较 低,(磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 ℃保持 3~4h破坏酶)。
取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状， 加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌， 升温至100℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25℃， 离心除去鱼精蛋白等沉淀物，获得35L含热变性DNA 的溶液，经精确测定DNA含量后直接可用于酶法降解 生 产 脱 氧 核 苷 酸 。 如 要 制 成 固 体 状 DNA ， 在 热 变 性 DNA溶液中逐渐加入等体积95％乙醇，离心可获得纤 维状DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得 DNA粗品，产品含热变性DNA50％～60％。
核酸药物(1)
2、具有生物活性DNA的制备
动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水
经组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分
钟，沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗后
离心，将沉淀悬浮于20倍重量的冷生理盐水中，再捣
碎3分钟，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶剂）十
二烷基磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／pm离
R5P
PRPPPRPP转酰胺酶 PRA
IMP XMP