巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬功能 检测指标
巨噬细胞吞噬功能检测指标
巨噬细胞的吞噬功能是其重要的免疫反应机制之一，用于摄取和消化病原微生物、细胞残骸、死亡细胞等。
以下是常用于检测巨噬细胞吞噬功能的指标：
1. 吞噬指数（Phagocytic index）：用于评估巨噬细胞吞噬能力的定量指标。
它代表了单个巨噬细胞吞噬过的颗粒数量。
2. 吞噬率（Phagocytic rate）：表示巨噬细胞吞噬某种颗粒的能力，通常以百分比形式呈现。
它反映了吞噬事件在总细胞群中的发生率。
3. 吞噬效能（Phagocytic efficiency）：衡量巨噬细胞吞噬过程中的效率，即吞噬活跃度与吞噬细胞总量的关系。
4. 黏附因子（Adhesion molecules）：这些分子介导巨噬细胞与被吞噬物颗粒的结合，对吞噬功能起着重要作用。
常用的黏附因子有CD14、CD11b等。
5. 溶酶体活性（Lysosomal activity）：巨噬细胞内的
溶酶体是吞噬过程中的关键器官，其酶活性可以反映巨噬细胞的消化能力。
这些指标可以通过多种实验方法进行测定，如流式细胞术、显微观察、免疫组化等。
评估巨噬细胞吞噬功能的变化可帮助了解免疫系统活性和疾病状态。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定,实验报告（共2篇）
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能测定,实验报告(共2篇)实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察实验6小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察姓名：李思露学号：131140040一、实验目的1. 通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；2. 了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法二、实验原理吞噬作用也称为胞吞作用（cellular eating），指细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质（直径一般大于250mm）的过程。
许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。
不同动物来源的巨噬细胞或同一动物来源的不同巨噬细胞吞噬功能强弱不同，个体吞噬细胞的平均吞噬能力是机体非特异性免疫功能强弱的重要反映。
吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。
内吞内吞体吞噬溶酶体胞吐巨噬细胞吞噬自身衰老凋亡细胞而不吞噬正常细胞，原因是，凋亡细胞细胞膜内侧面的磷脂酰丝氨酸反转到胞膜外侧面而被巨噬细胞模式识别受体识别。
吞噬功能一般用吞噬百分率和吞噬指数两个指标反映。
吞噬百分率＝吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100％吞噬指数＝吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数三、实验材料、试剂及器材（一）材料：1. 健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，每只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL。
2. 抗凝鸡血（二）试剂:1. 4%淀粉肉汤2. D-Hanks液3. 0.85％生理盐水4. 180IU/mL肝素钠生理盐水溶液（三）用品普通光学显微镜、10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃）、5mL一次性注射器、10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验操作1. 巨噬细胞收集：脱颈处死小鼠；腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带(转载于: 写论文网:)针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。
巨噬细胞吞噬功能测定的原理
巨噬细胞是免疫系统中的一类重要细胞，具有吞噬功能。
巨噬细胞通过吞噬和消化病原微生物、细胞碎片和其他异物，起到保护机体免受感染和清除废物的作用。
巨噬细胞吞噬功能测定是评估巨噬细胞活性和功能的一种方法。
巨噬细胞吞噬功能测定的基本原理如下：1.制备巨噬细胞：首先需要从人或动物体内获取巨噬细胞，常用的来源包括骨髓、外周血单个核细胞、脾脏等。
这些组织中含有大量未分化或分化成熟的巨噬细胞前体，经过适当培养条件可以诱导其分化为成熟的巨噬细胞。
2.刺激剂处理：为了评估不同刺激剂对巨噬细胞吞噬能力的影响，常常将刺激剂加入到培养基中与巨噬细胞共同培养。
常用的刺激剂包括细菌成分（如脂多糖）、细菌、病毒等。
刺激剂的添加可以模拟体内感染环境，激活巨噬细胞。
3.吞噬实验：巨噬细胞吞噬功能测定通常采用荧光标记的微粒（如琼脂糖微球、细菌等）来评估巨噬细胞吞噬能力。
首先将荧光标记的微粒加入到培养基中与巨噬细胞共同培养，一定时间后，通过显微镜观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量，进而评估巨噬细胞的吞噬能力。
4.统计分析：通过对多个样本进行重复实验，可以得到吞噬率、吞噬指数等数据。
根据不同实验设计和目的，还可以进行其他统计学分析，如t检验、方差分析等。
总结起来，巨噬细胞吞噬功能测定就是通过将刺激剂处理后的巨噬细胞与荧光标记微粒共同培养，然后观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量来评估巨噬细胞的吞噬能力。
这种测定方法可以用于评估巨噬细胞在不同条件下的活性和功能，进而研究免疫应答、感染和疾病发展等相关问题。
巨噬细胞吞噬功能测定在实验室中有广泛的应用。
通过该方法可以评估不同刺激剂对巨噬细胞活性的影响，了解它们在感染和炎症过程中的作用。
此外，该方法还可以用于筛选新药物或治疗方法对巨噬细胞吞噬功能的影响，为药物开发提供参考。
然而，在进行巨噬细胞吞噬功能测定时需要注意以下几个方面：1.工作环境：实验室必须具备严格的无菌条件，以避免外源性污染对实验结果的干扰。
巨噬细胞吞噬细胞功能实验
实验一巨噬细胞吞噬细胞功能实验原理：巨噬细胞具有活跃的吞噬功能，能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。
巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。
此次实验我们用体内法来介绍巨噬细胞的吞噬功能。
体内法：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美兰染色，显微镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞内被杀死而染为紫色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
方法：（1）试验前3天，小白鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使鸡红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用滴管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.06%冷美兰溶液，盖上盖玻片（4）高倍镜下进行观察，计数。
实验结果：100个巨噬细胞中已吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞的数目吞噬百分率 = ———————————————————×100%100个巨噬细胞100个已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞中鸡红细胞的数目吞噬指数 = ———————————————————×100%100个已经吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞结果分析：正常值吞噬百分率：62.77±1.38吞噬指数：1.058±0.049我们的实验结果偏低，原因可能是腹腔注射时没有完全注射到腹腔内，部分残留在腹腔壁上。
实验二沉淀反应（双向琼脂扩散实验）原理：双向琼脂扩散试验是定性实验。
将可溶性抗原与相应抗体与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。
本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。
方法：（1）将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。
吞噬功能测定实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。
2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。
3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。
吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。
本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。
2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。
3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。
四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。
2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。
（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。
3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。
2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。
六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。
巨噬细胞吞噬功能检测
肿瘤
肿瘤是指机体细胞异常增生形成的肿块，巨噬细胞在肿瘤的发生和发展过程中也起着重要作用。巨噬细胞能够通过吞噬作用 清除受损或变异的细胞，防止肿瘤的形成。
当巨噬细胞吞噬功能异常时，机体对肿瘤细胞的清除能力减弱，容易引起肿瘤的发生和恶化。例如，某些肿瘤细胞能够逃逸 巨噬细胞的吞噬作用，在体内迅速增殖，形成恶性肿瘤。
巨噬细胞能够释放出生长因子等生物 活性物质，促进受损组织的修复和再 生。
参与免疫应答
巨噬细胞是机体免疫系统的重要组成 部分，能够通过吞噬、加工和呈递抗 原，激活淋巴球和抗体反应，参与免 疫应答。
吞噬作用的过程
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识别和接触
巨噬细胞通过识别被吞噬物质 的表面特征，与其接触并形成
吞噬泡。
内陷和形成吞噬泡
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
巨噬细胞通过与被吞噬物 质的特异性受体结合，对 其进行吞噬。
免疫吞噬
巨噬细胞通过识别抗原， 对其进行吞噬并加工呈递， 参与免疫应答。
02 巨噬细胞吞噬功能的检测 方法
荧光染色法
总结词
荧光染色法是一种常用的巨噬细胞吞噬功能检测方法，通过荧光物质标记被吞噬的物质，在荧光显微镜下观察荧 光信号的强弱，判断巨噬细胞吞噬功能。
IL-1、IL-6和IL-10等细胞因子可以影响巨噬细胞的吞噬活性。IL-1通常促进吞 噬作用，而IL-6和IL-10则可能抑制吞噬功能。
肿瘤坏死因子（TNF）
TNF-α对巨噬细胞吞噬功能的影响较为复杂，低浓度时可促进吞噬，而高浓度 时则可能抑制。
免疫抑制剂
糖皮质激素
糖皮质激素如地塞米松、泼尼松等 是常见的免疫抑制剂，它们可以抑制 巨噬细胞的吞噬功能，这与其抗炎和 免疫抑制作用有关。
吞噬活性检测实验报告
一、实验背景吞噬活性是机体免疫系统中的重要功能之一，主要由巨噬细胞等免疫细胞执行。
吞噬活性检测对于研究免疫细胞的生物学特性、疾病诊断及药物研发具有重要意义。
本实验旨在通过体外实验方法，检测巨噬细胞的吞噬活性，并分析影响吞噬活性的因素。
二、实验材料与仪器1. 材料：（1）小鼠巨噬细胞：购自某生物技术公司；（2）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）：购自某微生物菌种保藏中心；（3）生理盐水、PBS缓冲液、DMEM培养基等；（4）台盼蓝染液、二甲基亚砜（DMSO）等；（5）激光共聚焦显微镜、倒置显微镜、流式细胞仪等。
2. 仪器：（1）CO2培养箱；（2）低温高速离心机；（3）超净工作台；（4）电子天平；（5）移液器、吸管等。
三、实验方法1. 巨噬细胞的制备与培养（1）将小鼠巨噬细胞接种于培养瓶中，置于CO2培养箱中培养；（2）待细胞生长至80%融合时，用PBS缓冲液洗涤细胞，加入新鲜DMEM培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞悬液均匀接种于24孔板中，每孔200μL，置于CO2培养箱中培养。
2. 吞噬实验（1）将金黄色葡萄球菌接种于培养瓶中，培养至对数生长期；（2）收集菌液，用生理盐水洗涤3次，调整菌浓度为1×10^8个/mL；（3）将巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合，比例分别为1:1、1:5、1:10，置于CO2培养箱中培养1小时；（4）收集混合细胞，用PBS缓冲液洗涤3次，加入台盼蓝染液，室温下染色5分钟；（5）用流式细胞仪检测细胞内台盼蓝的阳性率，计算吞噬活性。
3. 影响吞噬活性的因素分析（1）观察不同温度（37℃、42℃、45℃）对吞噬活性的影响；（2）观察不同pH值（pH 6.5、7.0、7.5）对吞噬活性的影响；（3）观察不同细胞浓度对吞噬活性的影响。
四、实验结果1. 吞噬活性检测结果在不同比例的巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合培养后，细胞内台盼蓝的阳性率随着细胞比例的增加而增加，说明吞噬活性随着细胞比例的增加而增强。
吞噬作用
巨噬细胞吞噬水平的检测（1）实验原理：中性红是大分子的荧光试剂，在波长550nm 有强吸收峰。
由于中性红分子量较大，只能通过内吞作用才能被摄取进入巨噬细胞胞内，所以通过测量不同刺激和药物条件下细胞内中性红量来衡量巨噬细胞的吞噬功能。
本实验利用活巨噬细胞细胞所具有的吞噬活性，将大分子中性红内吞进入细胞内，去除胞外未被吞噬的中性红并用细胞裂解液破损细胞，放出溶解在细胞内的中性红，通过酶联免疫检测仪测出550nm 的光吸收值（A 550），被吞噬的中性红的量与A 550值成正比，所以可以用A 550衡量吞噬细胞的吞噬水平。
这种方法灵敏度较高，是目前较为常用的检测巨噬细胞吞噬能力的一种手段。
药物的恢复率recovery rate 由下面公式计算给出：%100ΑΑΑΑ1rate%recovery ATP 550control 550sample 550control 550⨯⎪⎭⎫ ⎝⎛---=,,,,。
其中A 550，control 为无处理对照组的中性红吸光值；A 550，sample 为加药样本的吸光值；A 550，ATP 为只加刺激的阳性对照吸光值。
（2）实验步骤：通过不同浓度药物孵育的巨噬细胞实验组和参照组中，加入不同刺激，摇匀后再加入无菌（需要抽滤）中性红（最终质量分数为0.1%）。
恒温培养箱中培养30min 让巨噬细胞充分吞噬。
取出细胞用HBSS 溶液清洗2遍以清除残留在胞外未被吞噬的中性红。
加入细胞裂解液（1:1=乙醇：乙酸），震荡15min 使细胞破裂，放出已被吞噬的中性红。
酶联免疫检测仪测出每个样本孔在550nm 的光吸收值（A 550），以表示每个样本内巨噬细胞的吞噬活性。
文献报道35mm 的培养皿中种植500K 细胞，一，加入60000K/皿尼罗红荧光微球（1um 大小），加入ATP 或其他刺激，37℃孵育30 min.二，然后用含有1％血清的PBS 洗三次.,加入胰酶 1000R/5min 用流式细胞仪检测（654~606nm ），并且可以分选到符合吞噬标准的细胞.三，将收集到的细胞铺到盖玻片上，用4％的多聚甲醛固定15min.四，用1ug/ml DAPI(溶于PBS)进行核染色1min ，在荧光显微镜下观察。
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第一步
腹腔注射: 2ml 2% 鸡红细胞 作用30min 标记小鼠
第二步
材料
镊子及眼科剪刀 注射器 PBS 缓冲液 15ml, 50-ml 离心管 离心机 涂片机
方法
6-ml注射器吸取3.0 ml PBS ，注射进小 鼠腹膜腔 按摩小鼠腹部3-5 min. 颈椎脱位法处死小鼠，酒精消毒 腹白线剪口，暴露腹膜壁
实验四 巨噬自于骨髓 腹腔中有固有的巨噬细胞和炎性巨噬细 胞 炎性巨噬细胞可以通过抗原刺激诱导
巨噬细胞功能
固有免疫：非特异性吞噬 获得性免疫：细胞免疫－抗原提呈
试剂与器材
腹腔免疫小鼠 1. 注射器 2. 1% 淀粉溶液 3. PBS 缓冲液 4. 8周昆明鼠 腹膜腔免疫：2ml的1% 淀粉
吸管进入腹膜腔 吸取腹膜液约8ml 收集的腹膜液重置于50ml离心管中离心
制作腹腔巨噬细胞涂片 一滴细胞悬液置于载玻片，1500 rpm离心 5min后风干。 甲醛固定，干燥后吉姆萨染色 镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞