实验十：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察一、实验目的a)通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬作用的过程；b)了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。
二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质（直径一般大于250nm）的过程。
吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。
许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。
三、实验仪器及试剂a)材料：健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔注射4％淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。
b)试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85％生理盐水，180IU/mL肝素钠生理盐水溶液c)普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃），5mL一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等四、实验步骤a)巨噬细胞收集：分别用脱颈法处死一只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL的小鼠和一只不注射的小鼠。
然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。
b)体外吞噬。
在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆菌悬液，放在37℃水浴锅中吞噬。
c)制片及观察。
分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临时装片，观察现象并作图。
d)在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基蓝染色5分钟后装片观察。
五、实验结果a)0min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（次甲基蓝染色）由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
小鼠巨噬细胞,吞噬观察
三、实验仪器、材料和试剂 （1）仪器、用具：显微镜、、解剖盘、注射器、吸管、载 玻片、盖玻片。 （2）材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。 （3）试剂：6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）。
方法与步骤 （1）实验前24h，每天给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含 台盼蓝）1ml。 （2）实验时，再往腹腔内注射1ml1%鸡红细胞悬液，并轻 柔腹部，使鸡红细胞悬液分散。
（3）20-30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠 尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓 与脑髓间断开致死）。 （4）迅速剖开腹腔，用未装针头的注射器或吸管吸取腹 腔液。 （5）取一张干净的载玻片，滴一滴腹腔液在载玻片上， 盖上盖玻片，显微镜下检查。
四 实验作业和思考题
实验六 小鼠巨噬细胞吞噬的观察
一、实验目的：
通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的实验，
了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功能。
了解吞噬在机体非特异免疫中的重要作用。
二、实验原理：
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细
胞，具有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中
，在机体的非特异免疫功能中起着重要的作用。当病
原微生物或其他异物侵入机体时，能招 动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把异物吸附 在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向内凹陷，伸
出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞噬泡，继而在
细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶 体，把病原体杀死，异物消化分解。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在 圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min； 加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min； 自来水轻轻冲洗； 待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测 巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、 载玻片 、吸管等 2．试剂： 生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌， 置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主 要 存 在 部 位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有 溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器 官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞， 在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备
细胞生物学实验报告(9)
细胞生物学实验报告
实验十实验名称巨噬细胞吞噬现象的观察
1.在高倍镜下绘出在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个(如鸡血红细胞附于巨噬细胞表面、部分吞入鸡血红细胞、吞入形成吞噬泡已开始被消化分解等)，示吞噬作用的过程。
2.实验前一天，给小白鼠腹腔注射含台盼蓝淀粉肉汤的目的是什么?
（1）小鼠腹腔注射含台盼蓝的淀粉肉汤液，可诱导巨噬细胞大量产生，增强巨噬细胞吞噬活性。
（2）在吞噬过程中，细胞吞噬淀粉时，会吞一些台盼蓝进去，而台盼蓝会使巨噬细胞染上一定的颜色。
3.巨噬细胞内有哪几种结构对执行复杂的吞噬功能最为重要?
具有流动性的细胞膜，胞质含有大量初级溶酶体、次级溶酶体、吞噬小泡和吞噬小体，此外还有较发达的高尔基复合体、少量线粒体和粗面内质网等。
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。
方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。
结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。
结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。
【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。
巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。
巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。
1 材料与方法1.1 实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。
1.2 主要试剂 6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。
1.3 主要仪器 Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。
1.4 材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。
48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。
30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min 8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。
吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞1.6 细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。
对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索
鼓 励学生 将 问题 分析得更 深入一些 ， 拓展到如 何鉴定 未知 的细胞 ， 在这种情况下 ， 促使学生思考该 如何设 计 实验方案 ， 利用什么技术 “。
在 证 实 这 类 特 殊 形 态 的细 胞 是 源 自部 分 失 水 的 小 鼠 红 细胞 后 ， 可 以提 出 新 的 问 题 给 学 生 ， 就 是 ， 还 那 是 什 么原 因 导致 了小 鼠红 细 胞 失 水 ？学 生 会 提 出很 多 分 析 ， 们 就 可 以 让 学 生 进 一 步 设 计 实 验 方 案 来 证 实 他 我
鼠红细胞 。
２ 精 心 引导 ， 计 拓展 方 案 设
对 于 实 验 中 出现 的 这 种 新 现 象 ， 们 可 以加 以 利 我 用 ， 加 这个 实 验 的 探 索 性 ， 发 挥 学 生 的 主 动 性 和 创 增 为 造 性 提 供 空 间 。教 师 可 以 向学 生 提 出 ， 过 怎 样 的 方 通 法 才 能 鉴 定 出这 类 细胞 的 种类 。我 们 知 道 这 类 特 殊 形
ｇｅ ｔｐ ｏ ｌｍｓｉ ｈ ｒ ｉ ａ ｙ ｅ ｐ ｒ ｎ ． ｒ ａ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ｅ ｏ ｄ ｎ ｒ ｘ ｅ ｉ ｔ ｍｅ Ｋｅ ｗｏ ｄ ：ｄ ｖ ｌｐ ｎ ；ｖ ｌ ａｉ ｎ；ｃ ｍｐ ｅ ｅ ｓ ｅ ｅ ｉｎ ｙ ｒ ｓ ｅ ｅｏ ｍｅ ｔ ａｉ ｔ ｄ ｏ ｏ ｒ ｈ ｎ ｉ ；ｄ ｓｇ ｖ
我们在积极探 索新 的综合性 、 设计性 、 创新 性实验
项 目的 同 时 ， 传 统 的实 验 项 目也 需 要 进 行 不 断 地 探 对
方法
。就这个 实验 本身 而 言 ， 发挥 学 生主 动性 和
创造性 的空 间并不 大 ， 但结合 我们 自身 实验教学 的经 历， 发现这个 实验还可 以进行拓展 ， 从而让学 生的主动
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实 验 方 法
1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5％鸡红细胞
lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实
验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈 皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手 的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固 定，即可在腹部后 l／2处的一侧注射。进针勿过深，
在机体的免疫过程中，巨噬细胞承 担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰 老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细 胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降 解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨 噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的 激活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖 和分化具有调节作用。
【实验用品】 1．材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液 2．试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝）， 0.9%生理盐水 3．仪器设备：显微镜、注射器、注射针 头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、 载玻片、盖玻片、记号笔
实 验 原 理
细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物 质的方式，也是原始防御作用。随着动物界 的进化，在高等动物中，则发展生成大小两 类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，
专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要
组成部分。
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后 进入血液到达各组织内，并进一步分化为各 种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入 机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有 趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃 的变形运动，主动向病原体和异物移行，在 接触到病原体或异物时，即‘伸出伪足，将 之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细 胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形 成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下， 将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化 的残渣排出细胞外。
否则易损害肝及血管等，造成出血致死。腹腔注射
1％鸡红细胞悬液lml，轻按小白鼠腹部，使悬液分 散。
2、约20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠(右 手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食 指同时向下按住鼠头，使脊髓与脑髓间断 开致鼠死亡)。
3、将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内 脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管 吸取腹腔液。 4、每人取一张干净载玻片，滴一滴腹腔液， 盖上盖玻片，置显微镜下观察。
5、吸取的腹腔液与 Hank’s 液1：1混 合，并且滴数滴于载玻片上，37OC 温育30分钟。
6、玻片取出，用生理盐水冲洗，吹干， 甲醇固定5分钟。
7、Gimasa染液染色，干燥后油镜观察。
【实验结果】 在高倍镜下可见有许多较大的圆形和形 状不规则的巨噬细胞，因未染色细胞核 不易见到，其胞质中含有数量不等的兰 色圆形小颗粒（即吞入的含台盼兰的淀 粉肉汤所形成）；还可见少量黄色椭圆 形有明显细胞核的鸡红细胞，慢慢移动 玻片标本，仔细观察视野中的巨噬细胞 表面，有的红细胞已部分被吞入；有的 巨噬细胞内已吞入了一个或多个红细胞 形成吞噬泡。
巨噬细胞
吞噬实验 示教照片
鸡红细胞 巨噬细胞
吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞
吞噬鸡红细胞后的巨噬细胞
【实验报告】 1．镜检时，你能在视野中看到几种类型 的细胞？绘图说明巨噬细胞吞噬过程。 2．巨噬细胞将如何进一步处理被吞噬的 红细胞？
实验八：小鼠腹腔巨噬细胞吞 噬现象的观察
【课前预习】 实验前给小鼠腹腔注射台盼兰淀粉肉汤 的目小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活 动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其 意义。
2、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。 观察机体的非特异性免疫现象。 3．熟悉细胞吞噬作用的基本过程