小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
小鼠墨汁吞噬实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞对墨汁颗粒的吞噬现象。
2. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫反应中的作用。
3. 掌握小鼠腹腔巨噬细胞的采集和制片方法。
二、实验原理吞噬作用是巨噬细胞等免疫细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。
巨噬细胞在非特异性免疫中起着重要作用，能够识别、结合并吞噬病原体、凋亡细胞及其它异物。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级小鼠（体重20-25g）。
2. 实验材料：墨汁颗粒、生理盐水、载玻片、盖玻片、显微镜、注射器、无菌手术器械等。
3. 实验试剂：台盼蓝染色液、0.1%结晶紫染色液、5%戊二醛固定液、0.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）等。
四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞的采集：- 将小鼠用颈椎脱臼法处死，打开腹腔，取出肝脏。
- 将肝脏剪成小块，放入装有生理盐水的培养皿中，用无菌手术器械轻轻研磨，制成细胞悬液。
- 将细胞悬液离心（1000r/min，5min），弃去上清液，加入适量的生理盐水重悬细胞。
- 用血细胞计数板计数细胞浓度，调整细胞浓度至1×10^6 cells/ml。
2. 墨汁吞噬实验：- 将细胞悬液加入装有盖玻片的载玻片中，滴加适量墨汁颗粒，使其均匀分布在细胞表面。
- 将载玻片放入37℃温箱中孵育30min。
- 取出载玻片，用生理盐水冲洗3次，去除未吞噬的墨汁颗粒。
- 用0.1%结晶紫染色液染色3min，用蒸馏水冲洗，晾干。
- 在显微镜下观察巨噬细胞对墨汁颗粒的吞噬现象。
3. 结果分析：- 观察巨噬细胞对墨汁颗粒的吞噬百分率和吞噬指数。
- 吞噬百分率 = 吞噬墨汁颗粒的巨噬细胞数 / 总巨噬细胞数× 100%- 吞噬指数 = 吞噬的墨汁颗粒总数 / 吞噬墨汁颗粒的巨噬细胞数五、实验结果1. 在显微镜下观察到巨噬细胞对墨汁颗粒的吞噬现象。
2. 吞噬百分率为15.3%，吞噬指数为18.9%。
六、实验分析本实验结果显示，小鼠腹腔巨噬细胞对墨汁颗粒具有较强的吞噬能力。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
02
通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
03
基本原理
STEP1
STEP2
STEP3
STEP4
器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片、盖玻片、吸管等
试剂：
85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；蛋白胨2.0g加水100ml灭菌备用。
材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
实验用品
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
实验前三天，每天向小鼠腹腔注射2%的蛋白胨溶液1ml，实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1ml。
脱椎致死 吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。
吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞
未被吞噬的鸡红细胞
实验报告
镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 活化的吞噬细胞的数量 吞噬百分数= 100个吞噬细胞 活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量 吞噬指数= 100个活化的吞噬细胞
06
实验报告
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了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理
熟悉细胞吞噬作用的基本过程
了解细胞吞噬实验的研究意义
目的要求
吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
五年制免疫实验课 腹腔巨噬细胞吞噬试验
２. ADCC作用杀伤靶细胞。
形态学检测方法 同位素释放法 酶释放法
抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC）
ADCC反应是由多种不同效应细胞群介导的 杀伤性效应机制之一。
NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞具有杀伤作 用。
观察靶细胞被破坏的程度，用来判断它们的 细胞毒性。
补体依赖的细胞毒试验（CDC）
实验原理： 细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)
用40倍镜查找观察100个巨噬细胞，计数其中未 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数、吞噬了鸡红细胞的巨 噬细胞数及被吞噬的鸡红细胞数，计算吞噬百分率 及吞噬指数。 吞噬百分率: 有吞噬作用的巨噬细胞数／100×100％ 吞噬指数:
有吞噬作用的巨噬细胞吞入的鸡红细胞总数／ 100
抗体依赖细胞介导的细胞毒试验（ADCC） 补体依赖的细胞毒试验（CDC） 细胞介导的细胞毒试验 NK细胞介导的细胞毒试验
生理盐水
1瓶
苦味酸
1瓶
• 器材（每组）
• 1ml注射器
1个
• 玻片（载玻片/盖玻片） 4片
• 1ml微量加样器
1支
• 200ul微量加样器 1支
• tips
若干
• 1.5mlEP管
2个Biblioteka • 剪刀、镊子1套
• 显微镜 • 温箱
1. 实验前2天，给小鼠腹腔注射5％淀粉溶液１ml（已完成）。 2. 用1毫升注射器给小鼠腹腔注射3％鸡红细胞悬液0.5ml，用
若干
• 剪刀、镊子、解剖盘 1套
• 显微镜
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在 圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min； 加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min； 自来水轻轻冲洗； 待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测 巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、 载玻片 、吸管等 2．试剂： 生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌， 置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主 要 存 在 部 位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有 溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器 官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞， 在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定
小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定摘要】目的建立小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定方法，并测定其吞噬率。
方法用6%淀粉肉汤诱导小鼠腹腔产生巨噬细胞，体内吞噬5%鸡红细胞，并测定其吞噬率。
结果小鼠腹腔巨噬细胞成活率＞98%，平均吞噬百分率和平均吞噬指数分别是38.04%和0.39。
结论本实验方法可以用于小鼠腹腔巨噬细胞的相关研究。
【关键词】巨噬细胞吞噬功能小鼠巨噬细胞属于免疫细胞，有抗肿瘤、免疫调节等多项功能[1]。
巨噬细胞具有很强的吞噬功能，在体内外均能吞噬颗粒物质，将巨噬细胞与颗粒物质(如白色假丝酵母菌、鸡红细胞或葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质可被巨噬细胞吞噬，本次实验颗粒物质是鸡红细胞CRBC，观察巨噬细胞吞噬CRBC的百分率和吞噬指数，了解其吞噬功能。
巨噬细胞可以用各种方法和各种来源获得，以小鼠腹腔巨噬细胞取材最为经济实用。
1 材料与方法1.1 实验动物健康小白鼠，体重20-25g，8-12周龄，雄性，由第四军医大学实验动物中心提供。
1.2 主要试剂 6%淀粉肉汤，5%鸡红细胞，瑞氏染液，台盼蓝染液，小牛血清,EMDM培养液。
1.3 主要仪器 Nikon双目光学显微镜，TDL-60B湘仪离心机。
1.4 材料一次性5ml注射器，手术剪刀，镊子，小试管，尖嘴吸管，牛鲍计数板。
1.5 小鼠腹腔巨噬细胞体内吞噬功能测定小鼠的腹腔注射6%淀粉肉汤液1.0ml，诱导小鼠产生腹腔巨噬细胞。
48h后小鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液1.0ml。
30min后，颈椎脱臼处死小鼠，吸取腹腔液（腹腔液太少可用含10%小牛血清的EMDM液冲洗小鼠腹腔以收集腹腔液），1500r/min 8min离心，洗涤腹腔液，取少量腹腔液置于洁净载玻片上，推成涂片，瑞氏染色后油镜下（10*100）观察小白鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞现象，每片计数200个巨噬细胞，计数吞噬率和吞噬指数[1]。
吞噬率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞/200个巨噬细胞*100%吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞数*2/200个巨噬细胞1.6 细胞活力鉴定取1滴细胞悬液加1滴台盼蓝染液混匀，静置5分钟后滴入牛鲍计数板，观察死细胞，活细胞情况。
小鼠腹腔吞噬实验报告
小鼠腹腔吞噬实验报告小鼠腹腔吞噬实验报告一、引言吞噬作为一种重要的细胞功能，在免疫系统中起着重要的作用。
腹腔巨噬细胞是一类在腹腔内胚胎发育过程中产生的巨噬细胞，它们能够吞噬和消化异物、细菌和坏死细胞等。
本实验旨在观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。
二、材料与方法1. 材料：BALB/c小鼠（8周龄，雄性和雌性各5只）、PBS、0.1%苏木精溶液、0.1%酚溶液、尼龙网、离心管、移液管、顶针、显微镜和实验台。
2. 方法：（1）将BALB/c小鼠以适当的麻醉方式麻醉后置于实验台上；（2）在小鼠腹部剃毛，用70%酒精消毒；（3）用显微镊子将小鼠腹部皮肤拉开，插入15号顶针穿透腹腔；（4）慢慢抽取腹腔中积聚的液体；（5）将抽取的液体均匀滴在一块尼龙网上，用PBS洗涤；（6）将尼龙网取出，放入一滴0.1%苏木精溶液中染色10分钟，洗净；（7）将尼龙网摆到显微镜下，观察包括吞噬细胞数量和吞噬效果等。
三、结果与分析经过腹腔巨噬细胞吞噬实验后，我们观察了吞噬细胞的数量和吞噬效果。
在5只雌性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为10个，吞噬效果良好，吞噬颗粒清晰可见。
在5只雄性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为12个，吞噬效果也良好，吞噬颗粒清晰可见。
通过统计分析发现，雄性小鼠相较于雌性小鼠具有更高的吞噬细胞数量，但两者之间差异不显著。
四、讨论1. 从实验结果来看，小鼠腹腔巨噬细胞具有较好的吞噬能力，能够有效地清除异物和消化坏死细胞等。
2. 在我们的实验中，我们观察到雄性小鼠的吞噬细胞数量略高于雌性小鼠，这可能与性别激素的差异有关，但仅仅依靠本实验无法确定性别激素对吞噬能力的具体影响，需要进一步的研究来证实。
3. 本实验中使用的苏木精和酚溶液可以染色吞噬细胞，便于观察。
但这种方法相对于其他荧光染色方法来说更为繁琐，同时也可能对细胞造成一定的伤害。
4. 本实验中只是通过观察吞噬细胞数量和吞噬效果来判断腹腔巨噬细胞的吞噬能力，后续的实验可以考虑使用其他细胞学和分子生物学技术来进一步验证腹腔巨噬细胞的功能和机制。
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2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
材料
1．小白鼠 2．白色念珠菌液（美兰染液着色） 3．6％可溶性淀粉肉汤 肉汤培养液100 m1，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮 沸灭菌 4．小鼠解剖器械、显微镜、离心机、温箱等 5．试管、验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。
四角的大方格，又分为16个中方格，适用于白细 胞计数。中央大方格以双线等分为25个中方格。每个 中方格又分16个小方格，通常我们取四角的4个中方格 和中间的1个中方格来计数红细胞。
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片 端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数 分钟后，再放在微镜下观察计数。
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温育30min。
取1滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察 计数。
高倍镜下观察计算： 吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
细胞)×100％
吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
注意事项
1、菌与细胞混合后充分混匀非常重要。对于此实验，菌 与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。但 是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比 例为1：1。