试验三小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬现象备课笔记
试验三小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬现象备课笔记
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导语：
我们已经知道，白细胞包括粒细胞，单核细胞和淋巴细胞三大类，而其中，粒细胞和单核细胞的吞噬活性较强，因此，这两类细胞称为吞噬细胞。血液中的单核细胞是巨噬细胞的前身，它在血液中停留1-5天以后，穿出血管进入到组织和体腔当中，分化成巨噬细胞，具有活跃的变形运动、明显的趋化性和一定的吞噬功能。
同时，巨噬细胞的吞噬实验也被用作衡量机体免疫功能的一项重要指标。比如在正常情况下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分率为61.39%~64.15%，而恶性肿瘤病人的吞噬百分率通常却在45%以下，同样，吞噬指数也很低。当手术切除肿瘤，或者通过放疗、化疗病情好转时，吞噬率以及吞噬指数都会回升，所以在肿瘤的疗效判断中巨噬细胞的吞噬实验是一项重要的参考指标。可以用来分析判断机体的免疫水平。
三实验器材（课堂展示）
总结以往所学导入新课
讲授
结合临床实例激发学生兴趣
蚌埠医学院教师备课笔记
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四实验步骤
1．实验前1天小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝），诱导小鼠吞噬细胞渗出。
2．小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部使鸡细胞分散。
3．20min后，将小白鼠颈椎脱臼处死。
（2）不同吞噬阶段的巨噬细胞形态：慢慢移动载玻片，在视野中还可以发现处于吞噬过程不同阶段的各类巨噬细胞和鸡红细胞。有的巨噬细胞已经将1至数个红细胞部分吞入；将不同吞噬阶段的巨噬细胞形态动态的连贯起来，就能够绘制出吞噬作用的全过程。有的巨噬细胞已经吞入了1个或者几个红细胞并在细胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬细胞体积缩小，并呈现出圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一.实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二.实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三.实验材料及设备1.实验材料：a）连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b）鸡红细胞悬液c）生理盐水2.实验设备：a）普通光学显微镜b）载玻片、盖玻片若干c）注射器d）染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四.实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a）连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b）选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c）一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d）20-30分钟后，再注射1-1. 5ml生理盐水（0. 9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e）3分钟后，引颈法处死小鼠f）迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
g）在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。
2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。
注意避免玻片液体干涸。
五.实验结果巨噬细胞图2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。
巨噬细胞观察实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本形态和生物学特性。
2. 掌握巨噬细胞的分离和培养方法。
3. 观察巨噬细胞的吞噬功能，并分析其吞噬能力。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，属于单核吞噬细胞系统。
在机体免疫应答中，巨噬细胞起着重要的作用。
本实验通过分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞，观察其吞噬功能，以了解巨噬细胞在免疫应答中的作用。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 实验试剂：无菌生理盐水、台盼蓝染液、鸡红细胞悬液、小牛血清、RPMI-1640培养基等3. 实验设备：解剖显微镜、手术器械、细胞培养箱、细胞培养皿、离心机、显微镜等四、实验方法1. 巨噬细胞的分离和培养（1）无菌操作下，取小鼠腹腔液，加入等体积的生理盐水，混匀。
（2）将混合液以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（3）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（4）将细胞悬液接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察（1）将培养好的巨噬细胞悬液，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（2）加入台盼蓝染液，染色5 min。
（3）用生理盐水冲洗3次，弃上清液。
（4）加入鸡红细胞悬液，混匀。
（5）将细胞悬液置于细胞培养箱中培养30 min。
（6）取出细胞，以1 000 r/min离心5 min，弃上清液。
（7）加入适量RPMI-1640培养基，轻轻吹打，使细胞悬浮。
（8）将细胞悬液滴于载玻片上，置于显微镜下观察。
五、实验结果与分析1. 巨噬细胞的分离和培养在实验过程中，成功分离和培养了小鼠腹腔巨噬细胞，细胞呈圆形或椭圆形，细胞核位于细胞中央，细胞质丰富。
2. 巨噬细胞的吞噬功能观察在显微镜下观察，发现巨噬细胞对鸡红细胞具有吞噬作用。
部分巨噬细胞吞噬了鸡红细胞，细胞质内出现红色颗粒。
3. 吞噬能力分析通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量，可以评估其吞噬能力。
实验结果显示，巨噬细胞的吞噬能力较强，吞噬鸡红细胞的数量较多。
实验三：巨噬细胞
实验前一天， 小白鼠腹腔注 射1ml含台盼蓝 的淀粉肉汤。 巨噬细胞吞噬台盼蓝颗 粒，使巨噬细胞形成显 影。
实验结果
在视野中可以观察到三类细胞： 1、淡黄色、卵圆形、有核的鸡血红细胞； 2、圆形或不规则（似刺毛状的小突起，变形运动产生的伪足）的巨 噬细胞，细胞质内含数目不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的淀粉 肉汤巨噬体）； 3、少量的圆形、双凹、无核的鼠红细胞。变换视野可观察到吞噬的 各个过程。
3、Alsever（阿氏液） 溶液
葡萄糖 柠檬酸钠（Na9C6H5O7 2H2O） 柠檬酸（C6H5O7· H2O） 氯化钠 2.05g
·
0.89g 0.05g 0.42g
蒸馏水100ml。调PH至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，4 ℃冰箱保存。 三、器材 注射器、解剖盘、剪刀、镊子、吸管、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜
实验原理
实验用品
一、材料 1、小白鼠 2、1%鸡血细胞悬液 自健康鸡翼经静脉采血 或从集市杀鸡处接血1ml（防止污染），放入 盛有4mlAlsever 溶液瓶中，混匀置4℃冰箱保 存备用（一周内使用)。使用前加入0.85%生理 盐水离心（1500/min 10min）洗涤两次，再用 生理盐水配成1%浓度悬液。
当病原微生物或其他异物侵入机体时能招引巨噬细胞而巨噬细胞又有趋化性能响应招引因子的招引产生活跃的变形运动主动向病原体或异物移行在接触到病原体或异物时形成吞噬性溶酶体通过其中水解酶等的作用将病原体杀死消化分解最后将不能消化的残渣排除细胞外
实验三：巨噬细胞吞噬现象 的观察
第三组：孙佃鹏 王浈东 王淋淋 王坤安 王存理 覃荣活
实验目的
1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞 的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和 意义。 2、掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼 处死方法。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
山东师范大学生命科学学院 邢维贤
• 目的要求
• 实验原理
• 实验用品 • 方法与步骤
• 实验结果
• 实验报告ຫໍສະໝຸດ 目的要求1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
基本原理
• 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动 物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞 、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物 或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向 异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬 泡与溶酶体融合，将异物消化分解。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验报告
• 镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ • 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。
活化的吞噬细胞的数量
吞噬百分数=
100个吞噬细胞 活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量
吞噬指数=
100个活化的吞噬细胞
• 吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降 解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形 成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也 有影响。 • 通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百 分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器 、 载玻片、盖玻片、吸管等 2．试剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液； 蛋白胨2.0g加水100ml灭菌备用。 3．材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
方法与步骤
• 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后 根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水， 调至鸡红细胞浓度为1%。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在 圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min； 加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min； 自来水轻轻冲洗； 待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测 巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、 载玻片 、吸管等 2．试剂： 生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌， 置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主 要 存 在 部 位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有 溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器 官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞， 在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备
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四实验步骤
1．实验前1天小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝），诱导小鼠吞噬细胞渗出。
2．小鼠腹腔注射1％的鸡红细胞悬液1ml，轻揉腹部使鸡细胞分散。
3．20min后，将小白鼠颈椎脱臼处死。
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导语：
我们已经知道，白细胞包括粒细胞，单核细胞和淋巴细胞三大类，而其中，粒细胞和单核细胞的吞噬活性较强，因此，这两类细胞称为吞噬细胞。血液中的单核细胞是巨噬细胞的前身，它在血液中停留1-5天以后，穿出血管进入到组织和体腔当中，分化成巨噬细胞，具有活跃的变形运动、明显的趋化性和一定的吞噬功能。
实验三小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬现象
一实验目的
1.掌握小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬现象原理和过程。
2.掌握小鼠腹腔注射给药和脱颈椎处死方法。
3.掌握临时细胞制片的制作与观察方法。
二实验原理
在单细胞动物中，吞噬是作为摄取营养物质的一种主要方式而出现的。在高等动物中，吞噬是一种非特异性的免疫防护机制。当病原微生物或者其他异物侵入机体的时候，巨噬细胞在趋化因子的作用下，成为游走的巨噬细胞，由于趋化性会向异物处聚集，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用，形成吞噬泡，将异物内吞入细胞质中，继而，溶酶体和吞噬泡融合，最终将异物消化分解。
4.打开腹腔，用吸管吸取腹腔液，滴1滴在载玻片上，盖上盖玻片，镜检。
提问：为什么要在前一天注射淀粉肉汤？
注意：示教过程中讲解小鼠腹腔给药、颈椎脱臼处死及解剖的注意事项
五实验结果与分析
（1）视野中可见细胞类型及其特征：
在高倍镜下，首先能够辨别出鸡红细胞和巨噬细胞。鸡红细胞略呈淡黄色、椭圆形且有细胞核，而数量较多的，呈圆形或不规则形的较大的细胞为巨噬细胞，其典型的形态特征为细胞表面具有许多像毛刺一样的小突起，为巨噬细胞活化后的伪足
六讨论：
1、为了获得良好的实验结果，在实验过程中需要注意哪些操作？
2、了解非特异性免疫机制的基本内容。
示教
结果观察
同时，巨噬细胞的吞噬实验也被用作衡量机体免疫功能的一项重要指标。比如在正常情况下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分率为61.39%~64.15%，而恶性肿瘤病人的吞噬百分率通常却在45%以下，同样，吞噬指数也很低。当手术切除肿瘤，或者通过放疗、化疗病情好转时，吞噬率以及吞噬指数都会回升，所以在肿瘤的疗效判断中巨噬细胞的吞噬实验是一项重要的参考指标。可以用来分析判断机体的免疫水平。