小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬实验
吞噬细胞的实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的原理和方法。
2. 掌握吞噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。
3. 通过实验，观察吞噬细胞对不同颗粒物质的吞噬能力，评估吞噬细胞的功能状态。
二、实验原理吞噬细胞是机体免疫系统的重要组成部分，具有吞噬和消化病原体、衰老细胞和外来颗粒物质的功能。
本实验通过观察吞噬细胞对颗粒物质的吞噬情况，评估吞噬细胞的功能状态。
三、实验材料1. 实验动物：ICR小鼠2. 实验试剂：3%硫代乙醇酸钠、1%羊红细胞悬液、瑞氏染液、甲醇、生理盐水、注射器、尖吸管、橡皮吸头、试管、载玻片等。
3. 实验仪器：显微镜、恒温水浴箱、天平、解剖器材等。
四、实验方法1. 实验动物分组：将ICR小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组处理：实验组小鼠腹腔注射3%硫代乙醇酸钠3ml，对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。
3. 巨噬细胞聚集：注射后4天，实验组小鼠腹腔注射1%羊红细胞悬液1ml，对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。
4. 采集吞噬细胞：注射后1小时，将小鼠用颈椎脱臼法处死，解剖暴露腹腔，收集腹腔吞噬细胞。
5. 吞噬细胞染色：将收集到的吞噬细胞用瑞氏染液染色，镜检观察。
6. 吞噬细胞计数：计算每个视野中吞噬细胞的数量，并计算吞噬细胞吞噬羊红细胞的百分比。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔吞噬细胞数量明显多于对照组。
2. 实验组小鼠腹腔吞噬细胞吞噬羊红细胞的百分比明显高于对照组。
六、实验分析1. 吞噬细胞是机体免疫系统的重要组成部分，具有吞噬和消化病原体、衰老细胞和外来颗粒物质的功能。
2. 本实验结果表明，硫代乙醇酸钠可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞的聚集，而生理盐水对巨噬细胞聚集没有明显影响。
3. 实验组小鼠腹腔吞噬细胞吞噬羊红细胞的百分比明显高于对照组，说明实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能较强。
七、实验结论1. 本实验成功观察了吞噬细胞对羊红细胞的吞噬情况，评估了吞噬细胞的功能状态。
2. 硫代乙醇酸钠可以刺激小鼠腹腔巨噬细胞的聚集，而生理盐水对巨噬细胞聚集没有明显影响。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬实验
PFC实验准备
1、免疫小鼠：0.5 ml 5％ SRBC腹腔注射免疫小鼠
五、实验结果
➢巨噬细胞内吞噬了鸡红细胞，有其细胞核。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞的 吞噬细胞
六、结论
1、吞噬百分比： 巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞的百分率。
2、吞噬指数： 吞噬的红细胞总数与巨噬细胞的比值（如100个吞噬细
胞中吞噬红细胞总上电源，打开开关； 2、放标本； 3、找油镜（Oil或100×）； 4、标本上加香柏油； 5、镜检； 6、去标本； 7、擦镜纸蘸石油醚擦镜头； 8、干净擦镜纸擦镜头； 9、关电源，送显微镜。
大吞噬实验
（小鼠巨噬细胞的吞噬实验）
文金生 jshwen78@
7AJ208/213
实验成绩
➢ 操作考核：5分 ➢ 实验报告： 5分，目的、原理、材料、方法、结果、
结论 ➢ 平时及作业： 10分。出勤、纪律、值日情况，以及作
业本完成情况打分（注：作业本可以购买、复印或自 行抄写，学期末理论考试结束后由学习委员统一收齐 交任课老师评阅打分）。
2．材料： 8%淀粉溶液，PBS缓冲液，5％鸡红细胞，瑞氏染液， 小白鼠等。
四、实验方法
1、向小鼠腹腔注射2ml的8%淀粉溶液（刺激剂, 3d前） 2、向小鼠腹腔内注射2ml的5%的鸡红细胞（异物） 3、40min后,颈椎脱臼法处死小鼠,暴露腹腔,取腹腔液 4、腹腔液涂片(推片）, 自然干燥 5、瑞氏染液2－3滴，染色30秒，自来水冲洗。吸水纸吸干 油镜下镜检。
一、实验目的
➢ 了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理及过程。
二、实验原理
➢ 巨噬细胞/单核细胞（大吞噬细胞）和中性粒细胞 （小吞噬细胞）等具有吞噬功能。病原微生物或其 他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便 向异物处聚集，将异物吞入胞质。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
02
通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
03
基本原理
STEP1
STEP2
STEP3
STEP4
器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片、盖玻片、吸管等
试剂：
85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；蛋白胨2.0g加水100ml灭菌备用。
材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
实验用品
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
实验前三天，每天向小鼠腹腔注射2%的蛋白胨溶液1ml，实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1ml。
脱椎致死 吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行瑞氏染色。
吞噬了鸡红细胞的吞噬细胞
未被吞噬的鸡红细胞
实验报告
镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 活化的吞噬细胞的数量 吞噬百分数= 100个吞噬细胞 活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量 吞噬指数= 100个活化的吞噬细胞
06
实验报告
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了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理
熟悉细胞吞噬作用的基本过程
了解细胞吞噬实验的研究意义
目的要求
吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合，将异物消化分解。
实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
三、实验用品 、
1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、 剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。 2、试剂： ①0.85%生理盐水 ②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50 ml即可。 ③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）： 将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏 水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置 4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混 匀，使其呈蓝色。
④Alsever溶液： 称取2.05g葡萄糖、 0.89g柠檬酸钠 Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸 （C6H6O7.H2O）和 0.42g氯化钠，用蒸馏水定 容至100ml，调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌 10min，置4℃冰箱保存。
四、实验材料： 实验材料：
1、小白鼠 2、1%鸡红细胞悬液 1%鸡红细胞悬液制备： 从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放 入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备 用（2 周内使用）。使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜 鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的NaCl 溶液，小心混匀， 1500 r/min 离心5min，如此洗涤3 次，最后配成1%的鸡 红细胞悬液。
六、实验结果
在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞， 其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的 淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核 的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨 噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞 入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭 圆形吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正 在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶 段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
巨噬细胞吞噬酵母菌
在干净的载玻片上用记号笔画一个直径约2cm的圆圈，在 圆圈内滴加50μL细胞悬液，再向其中加50μL酵母液，混
匀后放入湿盒内并于37℃温箱孵育30分钟。
细胞染色
用生理盐水轻轻冲洗并甩干，加1-3滴试剂一固定1.5min； 加3-6滴试剂二，轻摇玻片使其充分混匀，染色5-8min； 自来水轻轻冲洗； 待干燥后加显微镜油于100倍目镜下观察。
本实验是通过小鼠巨噬细胞对酵母菌的吞噬来检测 巨噬细胞的功能
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、 载玻片 、吸管等 2．试剂： 生理盐水；PBS；快速姬姆萨染液。 3．材料：小白鼠；酵母菌（浓度为8*106/ml）
方法与步骤
将菌液置于70℃水浴锅中加热20min以灭活酵母菌， 置4 ℃冰箱备用。
吞噬细胞发育普
巨
噬
细
胞
腹腔巨噬细胞
主 要 存 在 部 位
主要功能：对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬
以及消化），并激活淋巴球或其他免胞吞噬过程
巨噬细胞功能是衡量机体免疫能力的一个很重要指标
测定方法：主要是巨噬细胞的吞噬功能实验，其他的有 溶酶体酶活性检测和表面受体检测。
实验六-吞噬细胞功能测定
免疫学系
目的要求
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞的分离方法 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
• 吞噬细胞有大、小两种。小吞噬细胞一般指血液中
的中性粒细胞。大吞噬细胞是血中的单核细胞和多种器 官、组织中的巨噬细胞，两者构成单核吞噬细胞系统。
单核/巨噬细胞具有很强的吞噬能力，特别是巨噬细胞， 在适应性免疫和固有免疫中均发挥重要作用。
小鼠腹腔巨噬细胞悬液的制备
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实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射 器、载玻片、盖玻片、吸管等 2．试剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）பைடு நூலகம்液保存液； 蛋白胨2.0g加水100ml灭菌备用。 3．材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然 后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐 水，调至鸡红细胞浓度为1%。
活化的吞噬细胞的数量
吞噬百分数=
100个吞噬细胞 活化的吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞的总量
吞噬指数=
100个活化的吞噬细胞
小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
目的要求 实验原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告
目的要求
1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
基本原理
吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动 物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、 单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物或 其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向异 物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡 与溶酶体融合，将异物消化分解。 吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降 解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形 成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用 也有影响。 通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百 分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
实验前三天，每天向小鼠腹腔注射2% 的蛋白胨溶液1ml，实验前1小时，向 腹腔内注射1%鸡红细胞1ml。
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其 中滴加一滴腹腔液，静置10分钟，使腹水细 胞贴壁，弃去生理盐水，待其稍干后，进行 瑞氏染色。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验报告
镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。