小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察
细胞生物学实验四巨噬细胞吞噬观察
吞噬过程
? 大致分为四个阶段： ? 识别结合 ? 部分吞入 ? 形成内吞体（或称吞噬体） ? 形成吞噬溶酶体。
结果观察
? 用40倍镜或油镜观察巨噬细胞吞噬鸡红 细胞情况。画出不同吞噬阶段的图。
注意事项
? 1、粘附过程要防止液体干掉； ? 2、吞噬时间应掌握好，过短，鸡红细胞
尚未被吞入；过长，已吞噬消化。
? 4、制片。（ 1）直接观察：滴 1滴腹腔液，盖上 盖玻片直接观察；
（2）染色观察
? 加0.2ml-0.3ml腹腔液于盖玻片上，放湿 盒置37℃恒温培养箱30min使巨噬细胞粘 附；
? 用带针头的注射器吸取0.01M，PH7.2的 PBS 5ml冲洗掉未粘附的细胞及腹腔液；
? 将玻片浸入甲醇中固定3－5min，凉干； ? Giemsa染色30min； ? 流水冲去浮液，凉干观察。
实验操作
? 1、巨噬细胞诱导。实验前 1天，每只小鼠腹腔 注射1ml 4％淀粉肉汤。
? 2、体内吞噬。实验当天，先给每只小鼠腹腔注 射2ml 1%鸡红细胞生理盐水悬液，轻揉腹部， 使其在腹腔分布均匀。吞噬 45min。
? 3、处死小鼠，吸取巨噬细胞。脱颈处死小鼠， 随即向腹腔注入 1ml生理盐水，揉匀。然后剪开 腹部皮肤，暴露腹膜，用带针头的注射器插进 腹腔吸取腹腔液；
吞噬过程示意图
吞噬现象
试验材料、试剂及仪器用品
材料
? 1、6－8周龄健康雄性小鼠 ? 2、5％鸡红细胞。 ? 采血1ml，放入4ml阿氏液中，用PBS洗3
细胞生物学实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察
实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察〔实验目的〕1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及意义2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法〔实验原理〕巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。
当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。
巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。
〔试剂材料〕1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2、试剂：（1）0.85%生理盐水（2）Alverse溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。
pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃保存（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其溶解，煮沸灭菌，4℃保存。
用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）3、材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞〔内容方法〕一、腹腔巨噬细胞的吞噬1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。
2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。
4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。
5、甲醛固定10min。
实验十一小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察『目的要求』1
捉拿方法：
将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持 其尾巴向后拉，小鼠那么会尽力向前蹬。 用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤， 然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。
腹腔注射
给药方法：
小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静 脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们 常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如 前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用 酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下， 进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹 腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿 左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的 液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。
『实验原理』 高等动物体内存在着具有防疫功能的吞
噬细胞系统，它由粒细胞和单核细胞等白细 胞构成，是机体免疫系统的重要组成局部。 巨噬细胞是体内的一种重要的免疫细胞，具 有非特异性吞噬功能，当机体受到细菌等病 原体及其它异物侵入时，巨噬细胞将向病原 体或异物游走，当接触异物时，伸出伪足将 其包围并进行内吞作用，将病原体或异物吞 入细胞，形成吞噬泡，进而初级溶酶体与吞 噬泡发生融合，将异物消化分解掉。本实验 将观察到小鼠巨噬细胞对进入其体内的鸡血 红细胞进行吞噬的情况。
单核巨噬细胞
『实验内容和方法』 (一)标本制备 1、在实验前一天，每只小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤(含4％
的台盼蓝)lml。 2、实验时每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％的
鸡红细胞悬液lml。然后轻揉小鼠腹部，使鸡红细胞分 散。(腹腔注射时不要刺伤内脏) 3、20分钟后向腹腔注射0.5 ml生理盐水，轻揉小鼠腹部， 使其腹腔液稀释。3分钟后用用颈椎脱臼法处死小鼠。 4、将小鼠置于解剖盘中或卫生纸上，剪开腹腔，把内脏 推向一侧，用吸管或不装针头的注射器吸取腹腔液。 5、每人取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片， 标本便制备好了。 6、实验绘图。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
实验六 小鼠巨噬细胞吞噬现象的观察
一、 实验目的
1.通过观察小鼠巨噬细胞吞噬红细胞的试 验，了解巨噬细胞对异物吞噬的原理和功 能。 2.了解巨噬细胞在机体非特异免疫中的重 要作用。
二、实验原理
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细 胞，具有吞噬作用的功能。它们广泛分布在组织和 血液中，在机体的非特异免疫功能中起着重要作用。 当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬 细胞，而巨噬细胞又有趋化性，它通过产生活跃的 变形运动，主动向病原体和异物移行聚集，首先把 异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域的细胞膜向 内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形成吞 噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。 巨噬细胞吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体 免疫水平的高低。
单核细胞（上）和巨噬细胞（下）
单核巨噬细胞吞噬过程示意图
巨噬细胞正在吞噬衰老的红细胞
巨噬细胞吞噬细菌（电镜）
肺巨噬细胞吞噬大肠杆菌（电镜）
三、实验仪器、材料和试剂
1. 仪器、用具：显微镜、高压灭菌锅、解剖盘、解 剖剪、1ml注射器、吸管、载玻片、盖玻片。 2. 材料：小鼠（体重20g左右），鸡血。 3. 试剂： 4%台盼蓝染液：台盼蓝染粉 0.4克，加0.85%生 理盐水100ml。 6%淀粉肉汤（含0.3%台盼蓝）：牛肉膏 0.3克； 蛋白胨 1.0克；氯化钠0.5克；蒸馏水 100ml。加热后, 可加入6.0克可溶性淀粉，促使溶解，再煮沸灭菌， 置40C冰箱保存，用时水浴熔化，加入适量4%台盼 蓝染液混匀，使呈蓝色。
五、实验结果
六．注意事项
1、给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤时要注意 进针适度，注射量要合适。 2、给小白鼠腹腔注射时，抓小鼠不要太 紧，以免小鼠死亡。 3、使用的载玻片要很干净。
实验十小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
实 验 原 理
细胞吞噬作用原来是单细胞动物摄取营养物 质的方式，也是原始防御作用。随着动物界 的进化，在高等动物中，则发展生成大小两 类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞)，
专司吞噬作用，成为非特异免疫功能的重要
组成部分。
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成，然后 进入血液到达各组织内，并进一步分化为各 种巨噬细胞。当病原微生物或其它异物侵入 机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有 趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃 的变形运动，主动向病原体和异物移行，在 接触到病原体或异物时，即‘伸出伪足，将 之包围并内吞人胞质，形成吞噬体，继而细 胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合，形 成吞噬性溶酶体，通过其中水解酶等作用下， 将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化 的残渣排出细胞外。
在机体的免疫过程中，巨噬细胞承 担着噬菌、杀菌、清除体内被损伤和衰 老的细胞，以及传递抗原信息，巨噬细 胞将捕获的抗原进行加工处理后，把降 解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。巨 噬细胞又是天然杀伤细胞（NK Cell)的 激活剂，而且对B淋巴细胞的激活、增殖 和分化具有调节作用。
【实验用品】 1．材料：小白鼠、1%鸡红细胞悬液 2．试剂：6%的淀粉肉汤（含台盼蓝）， 0.9%生理盐水 3．仪器设备：显微镜、注射器、注射针 头、吸管、试管架、解剖刀、解剖镊、 载玻片、盖玻片、记号笔
Байду номын сангаас
实 验 方 法
1、在实验前一天，给小白鼠腹腔注射5％鸡红细胞
lml/只。注射时，先用右手抓住鼠尾提起，放在实
验台上，用左手的拇指和食指抓住小鼠两耳和头颈 皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，用左手 的无名指和小指按住尾巴与后肢，前肢可用中指固 定，即可在腹部后 l／2处的一侧注射。进针勿过深，
实验七、小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的观察
三、实验用品 、
1、仪器设备：显微镜、注射器、注射针头、吸管、试管架、 剪刀、解剖刀、解剖镊、载玻片、盖玻片。 2、试剂： ①0.85%生理盐水 ②4%台盼蓝染液：称0.2g台盼蓝，再加入0.85%生理盐水50 ml即可。 ③6%的淀粉肉汤（含台盼蓝染液）： 将0.3g牛肉膏、1.0g蛋白胨、0.5g氯化钠放入100 ml蒸馏 水中，加热后加入可溶性淀粉6.0g，溶解后煮沸灭菌，置 4℃冰箱保存。用时水浴融化，加入适量4%台盼蓝染液混 匀，使其呈蓝色。
④Alsever溶液： 称取2.05g葡萄糖、 0.89g柠檬酸钠 Na9C6H5O7.2H2O)、0.05g柠檬酸 （C6H6O7.H2O）和 0.42g氯化钠，用蒸馏水定 容至100ml，调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌 10min，置4℃冰箱保存。
四、实验材料： 实验材料：
1、小白鼠 2、1%鸡红细胞悬液 1%鸡红细胞悬液制备： 从集市买一只健康活鸡现杀取血5ml（防止污染），放 入盛有20ml Alsever溶液瓶中，混匀后置4℃冰箱保存备 用（2 周内使用）。使用前，取用Alsever’s 液保存的新鲜 鸡血5ml ， 加入8ml 的0.85% 的NaCl 溶液，小心混匀， 1500 r/min 离心5min，如此洗涤3 次，最后配成1%的鸡 红细胞悬液。
六、实验结果
在高倍镜下，可见到圆形或形状不规则的巨噬细胞， 其胞质中含有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝的 淀粉肉汤形成的吞噬泡），还可见少量淡黄色椭圆形有核 的鸡红细胞。慢慢移动玻片标本，仔细观察巨噬细胞吞噬 鸡红细胞的过程：有的鸡红细胞（一个至多个）紧贴于巨 噬细胞表面；有的巨噬细胞已将一至数个鸡红细胞部分吞 入；有的巨噬细胞已吞入了一个或几个红细胞，形成了椭 圆形吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡已与溶酶体融合正 在被消化，体积缩小呈圆形。将所见到的处在不同吞噬阶 段的巨噬细胞动态地联系起来，想一想吞噬作用的全过程。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
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小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察
一、实验目的
a)通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬大肠杆菌活动的观察,加深理解细胞吞噬
作用的过程；
b)了解巨噬细胞吞噬能力检测的形态学方法。
二、实验原理
吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的固体物质（直径一般大于250nm）的过程。
吞噬细胞细胞膜上有识别某些病原体相关分子及凋亡细胞磷脂酰丝氨酸等配体的受体，可以使巨噬细胞识别结合病原体、凋亡细胞及其它异物，引起受体胞内区活化，进而导致与其相连的细胞骨架重排引发吞噬作用。
许多原生动物通过吞噬作用摄取营养；高等动物体内的巨噬细胞和嗜中性粒细胞的吞噬作用成为动物体非特异性免疫的重要组成部分。
三、实验仪器及试剂
a)材料：健康小白鼠：6-8周龄健康小白鼠，实验前1~2天，一部分腹腔
注射4％淀粉肉汤1mL另一部分不注射，大肠杆菌悬液。
b)试剂:4%淀粉肉汤，D-Hanks液，0.85％生理盐水，180IU/mL肝素钠生理
盐水溶液
c)普通光学显微镜、 10mL低速离心机、托盘天平、水浴箱（37℃），5mL
一次性注射器、 10mL玻璃离心管、试管架、胶头滴管等
四、实验步骤
a)巨噬细胞收集：分别用脱颈法处死一只腹腔注射4％淀粉肉汤1mL的小
鼠和一只不注射的小鼠。
然后都在腹腔注入2mL生理盐水，揉匀；剪开
腹部皮肤，暴露腹膜；用带针头的注射器插进腹腔吸取腹腔液。
b)体外吞噬。
在两支10mL玻璃离心管分别加入0.3mL注射淀粉肉汤的腹腔
液+0.3mL大肠杆菌悬液和0.3mL不注射淀粉肉汤的腹腔液+0.3mL大肠杆
菌悬液，放在37℃水浴锅中吞噬。
c)制片及观察。
分别在0min、15min、30min、45min 制备细胞混合液临
时装片，观察现象并作图。
d)在0min和45min时在两管中分别取两滴混合液滴于载玻片上，用次甲基
蓝染色5分钟后装片观察。
五、实验结果
a)0min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（次甲基蓝染色）
由图知，注射淀粉肉汤的巨噬细胞的数量较多。
b)15min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片
c)30min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片
d)45min时注射肉汤（左）与未注射肉汤（右）图片（染色）
六、实验分析
由实验的所得图中可以知道，注射肉汤的巨噬细胞的数量较多。
从0-45min，本应该看到巨噬细胞吞噬大肠杆菌的一个过程，但是可能是大肠杆菌的体积太小，或者是有两个时间段未进行染色，所以我觉得看的不是非常清楚。
可能换成鸡血细胞会更加清楚。
七、注意事项
a)注射时注意不要注入皮下或将针头插进小鼠内脏。
b)抽取腹腔液时应从空隙处抽，放止针头被堵。