巨噬细胞吞噬率实验
细胞生物学实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察
实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察〔实验目的〕1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及意义2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法〔实验原理〕巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。
当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。
巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。
〔试剂材料〕1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2、试剂：（1）0.85%生理盐水（2）Alverse溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。
pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃保存（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其溶解，煮沸灭菌，4℃保存。
用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）3、材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞〔内容方法〕一、腹腔巨噬细胞的吞噬1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。
2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。
4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。
5、甲醛固定10min。
巨噬细胞吞噬功能测定的原理
巨噬细胞是免疫系统中的一类重要细胞，具有吞噬功能。
巨噬细胞通过吞噬和消化病原微生物、细胞碎片和其他异物，起到保护机体免受感染和清除废物的作用。
巨噬细胞吞噬功能测定是评估巨噬细胞活性和功能的一种方法。
巨噬细胞吞噬功能测定的基本原理如下：1.制备巨噬细胞：首先需要从人或动物体内获取巨噬细胞，常用的来源包括骨髓、外周血单个核细胞、脾脏等。
这些组织中含有大量未分化或分化成熟的巨噬细胞前体，经过适当培养条件可以诱导其分化为成熟的巨噬细胞。
2.刺激剂处理：为了评估不同刺激剂对巨噬细胞吞噬能力的影响，常常将刺激剂加入到培养基中与巨噬细胞共同培养。
常用的刺激剂包括细菌成分（如脂多糖）、细菌、病毒等。
刺激剂的添加可以模拟体内感染环境，激活巨噬细胞。
3.吞噬实验：巨噬细胞吞噬功能测定通常采用荧光标记的微粒（如琼脂糖微球、细菌等）来评估巨噬细胞吞噬能力。
首先将荧光标记的微粒加入到培养基中与巨噬细胞共同培养，一定时间后，通过显微镜观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量，进而评估巨噬细胞的吞噬能力。
4.统计分析：通过对多个样本进行重复实验，可以得到吞噬率、吞噬指数等数据。
根据不同实验设计和目的，还可以进行其他统计学分析，如t检验、方差分析等。
总结起来，巨噬细胞吞噬功能测定就是通过将刺激剂处理后的巨噬细胞与荧光标记微粒共同培养，然后观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量来评估巨噬细胞的吞噬能力。
这种测定方法可以用于评估巨噬细胞在不同条件下的活性和功能，进而研究免疫应答、感染和疾病发展等相关问题。
巨噬细胞吞噬功能测定在实验室中有广泛的应用。
通过该方法可以评估不同刺激剂对巨噬细胞活性的影响，了解它们在感染和炎症过程中的作用。
此外，该方法还可以用于筛选新药物或治疗方法对巨噬细胞吞噬功能的影响，为药物开发提供参考。
然而，在进行巨噬细胞吞噬功能测定时需要注意以下几个方面：1.工作环境：实验室必须具备严格的无菌条件，以避免外源性污染对实验结果的干扰。
大吞噬实验的实验报告
一、实验目的1. 观察和了解巨噬细胞对异物的吞噬过程。
2. 掌握巨噬细胞吞噬实验的操作方法。
3. 分析巨噬细胞的吞噬功能。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，主要来源于单核细胞。
在机体受到病原体感染时，巨噬细胞可以吞噬病原体，并激活其他免疫细胞，共同参与机体的免疫反应。
本实验通过观察巨噬细胞对异物的吞噬过程，了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料1. 小鼠：体重20-25g，雌雄不限。
2. 无菌生理盐水。
3. 鸡红细胞悬液。
4. 巨噬细胞培养液。
5. 巨噬细胞培养瓶。
6. 显微镜及配套设备。
7. 吸管、试管、离心机、移液器等。
四、实验步骤1. 实验前准备：将小鼠置于恒温恒湿的环境中饲养，适应环境。
实验前1天，用无菌生理盐水给小鼠灌胃，以提高巨噬细胞的活性。
2. 巨噬细胞培养：取小鼠腹腔巨噬细胞，加入巨噬细胞培养液，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 实验操作：a. 取鸡红细胞悬液，用生理盐水稀释至一定浓度。
b. 将培养好的巨噬细胞悬液加入鸡红细胞悬液中，混合均匀。
c. 将混合液加入巨噬细胞培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。
d. 取出培养瓶，用吸管轻轻吹打，使巨噬细胞与鸡红细胞分离。
e. 将分离后的巨噬细胞悬液离心，弃去上清液，收集沉淀。
4. 观察与记录：a. 取巨噬细胞沉淀，制成涂片。
b. 用姬姆萨染色液染色，置于显微镜下观察。
c. 记录巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，包括吞噬细胞的形态、吞噬的鸡红细胞数量等。
五、实验结果与分析1. 观察结果：在显微镜下，观察到巨噬细胞呈现出典型的吞噬形态，细胞内含有多个鸡红细胞。
2. 分析：a. 巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用，说明巨噬细胞在机体免疫过程中起着重要作用。
b. 吞噬细胞的形态变化与鸡红细胞的吞噬程度有关，吞噬程度越高，细胞形态变化越明显。
c. 通过观察巨噬细胞的吞噬功能，可以了解巨噬细胞在机体免疫反应中的活性。
六、实验结论本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，验证了巨噬细胞在机体免疫过程中的重要作用。
实验八巨噬细胞吞噬现象的观察
实验八巨噬细胞吞噬现象的观察
一、实验原理
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成, 然后进入血液到达各组织内, 并进一步分化为各种巨噬细胞, 当病原微生物或其它异物侵入机体时, 能招引巨噬细胞, 而巨噬细胞又有趋化性, 能响应招引因子的招引, 产生活跃的变形运动, 主动向病原体和异物移行, 在接触到病原体和异物时, 即伸出伪足, 将之包围并内吞入胞质, 形成吞噬体, 继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合, 形成吞噬性溶酶体, 通过其中水解酶等作用下, 将病原体杀死, 消化分解, 最后将不能消化的残渣排了出细胞外。
台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂, 台盼蓝染料进入细胞, 细胞变蓝, 即为坏死。
如果细胞膜完整, 细胞不为台盼蓝染色, 则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性, 区别坏死细胞有一定的帮助。
二、实验步骤
1. 在小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。
2．24h后注射1%鸡红细胞悬液1ml, 轻按腹部使分散。
3. 20分钟后脱颈骨处死小鼠。
4. 开腹取腹腔液（慎防小鼠血污染）。
5．腹腔液滴于载玻片上, 盖上盖玻片。
6. 显微镜观察吞噬现象。
三、实验结果
四. 结果讨论。
吞噬功能测定实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。
2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。
3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。
吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。
本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。
2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。
3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。
四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。
2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。
（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。
3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。
2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。
六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
武汉大学基础医学院
免疫学教研室
CHENLI
熊洁
1
原 理（体外法）
巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞 噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温 育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百 分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而 评价机体的免疫状态。
本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功 能。
2021/3/27
CHENLI
2
材料
1．小白鼠 2．白色念珠菌液（美兰染液着色） 3．6％可溶性淀粉肉汤 肉汤培养液100 m1，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮 沸灭菌 4．小鼠解剖器械、显微镜、离心机、温箱等 5．试管、吸管、微量加样器、计数板
2021/3/27
CHENLI
3
方法
(1)、小鼠巨噬细胞制备 实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。
2021/3/27
CHENLI
4
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
2021/3/27
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
2021327chenli武汉大学基础医学院免疫学教研室2021327chenli巨噬细胞具有吞噬异物的功能将巨噬细胞与被吞噬物鸡红细胞白色念珠菌白色葡萄球菌等共同温育染色在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数以此判断巨噬细胞的吞噬功能从而评价机体的免疫状态
荧光乳胶微粒法检测巨噬细胞吞噬实验技术方法
荧光乳胶微粒法检测巨噬细胞吞噬实验
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基。
（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。
（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。
流式细胞法
（4）收集细胞，1200r/min，离心5min，弃上清液。
（5）1×流式Buffer重悬细胞，1200r/min，离心5min。
（6）细胞计数，每组调整细胞个数为1×106个细胞，1200r/min，离心5min。
（7）弃上清，加入1×流式Buffer 重悬细胞，清洗2次，1200r/min，离心5min。
（9）弃上清液，加入500μl 1×流式Buffer 重悬细胞，等待上机流式细胞仪检测。
荧光显微镜法
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于含细胞爬片的六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基
（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。
（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。
（4）加入4%多聚甲醛固定30min。
（5）弃甲醛液，加入1×PBS 洗涤5min×3次。
（15）避光条件下，DAPI 染液染细胞核5min。
（16）1×PBS 洗涤5min×3次。
（17）用抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察并保存图像。
巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。
当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。
取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。
计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。
2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。
3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。
4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。
5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。
【步骤和方法】1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。
2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。
3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。
【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。
吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。
2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。
4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。
5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
阿氏液配方：葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。