实验四 茶叶中茶多酚含量的测定
实验四 茶叶中茶多酚含量的测定
实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶叶中茶多酚类物质的提取与含量测定
茶叶中茶多酚类物质提取与含量测定系别：生物医药工程系班级：食品科学与工程一、目的要求1、了解茶叶中茶多酚及茶多酚的组成及性状；2、掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法；3、掌握萃取法分离有机溶剂中的茶多酚的操作方法；二、茶多酚总述1、组成：茶多酚是茶叶中酚类及其衍生物的总称，因此常称为多酚类。
其主要成分是黄烷醇类、羟基-4-黄烷醇类、花色甘类、黄酮醇类和黄酮类。
这些化合物都具有2-苯基苯并吡喃的基本结构，故统称为类黄酮物质。
茶叶中绿原酸、鸡鈉酸、咖啡酸等酚酸类化合物也是茶多酚的组分之一。
在茶多酚各组分之一黄烷醇类为主，黄烷醇类优异儿茶素类物质为主。
2、性状：茶多酚是介于淡黄色至茶褐色之间的无定型粉末，味涩，略有吸湿性，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂，不溶于氯仿及苯等有机溶剂。
茶多酚具有较好的耐酸性，在pH<7时较稳定，在pH>7时则不稳定且氧化变色加快，呈红色。
3.茶多酚的提取方法茶多酚提取工艺效果较好的是有机溶剂萃取法、离子沉淀提取法、树脂吸附分离法、超临界二氧化碳萃取法，其次是超声波浸提法、层析法、膜技术。
4.贮存方法：贮存于阴凉通风干燥环境，并与有毒、有气味的物品隔离，避免直接与三价铁离子及碱性物质接触。
三、实验原理有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。
是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%～40% ，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。
茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。
溶剂萃取法一般的工艺路线图所示溶剂萃取法一般的工艺路线本法的优点是：稳定、可靠；缺点是：有效成分的含量和提取率较低，通过以上工艺获得的茶多酚含量通常仅能达到50%～65%。
茶多酚的测定实验报告
茶中茶多酚的测定
检测时间：2014年3月19日
检测方法：GB/T 8313—2002《茶茶多酚测定》
检测样品：立顿红茶
检测仪器：752W 紫外分光光度计
检测结果：
实验总结：
1.学习提取茶多酚的方法和技术
2、学习溶剂提取法的操作方法和步骤。
3、掌握用分光光度计法测定茶多酚的总量的方法。
茶中的多酚物质能和亚铁离子形成蓝色的络合物，则可以用分光光度法测定其含量。
由于茶多酚易溶于热水，因此本实验要用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶提取出来。
食品质量与安全专业生物和化学实验中心。
从茶叶或茶叶下脚料中提取茶多酚
实验4 从茶叶或茶叶下脚料中提取茶多酚一、实验目的（1） 掌握从茶叶或茶叶下脚料中提取茶多酚的方法。
（2） 掌握用分光光度法测定茶多酚总量的方法。
二、实验原理目前，茶叶消费日趋高档化，而中、低档茶受国际市场影响常滞销、积压严重，这种现象制约的茶叶产业的发展。
与此同时，在茶叶生产及加工过程中还有大量修剪枝叶及加工副产品，这些产品多作为废物而为加以充分利用。
因此，寻求经济新增长点及开辟茶叶新用途成了各国各地区茶学界的重要议题。
茶叶综合利用已成为茶叶发展中的新亮点。
茶的综合利用是以茶（含茶树的根、茎、花、果、种子等）为原料，对茶的内含物进行综合开发，达到物尽其用，以增加收益。
众所周知，茶叶有诸多保健作用，这与茶叶中富含茶多酚、咖啡因、茶多糖和茶氨酸等有效成分有密切关系。
茶多酚不仅是一种天然的食品抗氧化剂，而且还是多种保健品及药品的生产原料；咖啡因是多种饮料的添加剂，在医药上也有广泛的应用；茶多糖有降血糖、血脂和增强机体免疫力等功效；美国科学家发现茶氨酸能使人体抵御SARS 病毒感染的能力增强5倍，是极有潜力的新型抗病毒、细菌和真菌的新型药品和保健品的成分。
由此可见，对这些有效成分进行制备并加以利用，不仅是解决中、低档茶及茶副产品出路的有效途径之一，而且可产生重大的经济效益和社会效益。
从清洁生产的思想出发，对有效成分进行有效提取，提出清洁生产工艺，考虑到实验整体安排这里主要以提取茶多酚为主开展讨论。
热水 乙酸乙酯 HCl 氯化锌 升华 浓缩有机相 上清液 浓缩→萃取（氯仿）→水相→沉析（乙醇）→茶多糖 脱盐结晶 沉淀剂 滤液 咖啡因 茶氨酸 茶渣茶叶中富含多烃基的酚性物质——茶多酚。
茶多酚的主要组分是儿茶素，占茶多酚含量的80%左右。
茶多酚中几种主要儿茶素所占的比例分别为：L-表没食子儿茶素没食子酸酯（L-EGCG ）50%~60%，L-表儿茶素没食子酸酯（L-ECG ）15%~20%，L-表没食子儿茶素（L-EGC ）10%~15%,L-表儿茶素（L-EC ）4%~6%。
实验报告
提取茶叶中的茶多酚
徐成郡
经济管理学院12-1班
实验名称：提取茶叶中的茶多酚
实验目的：计算茶叶中的茶多酚含量
实验器材：试管、烧杯、量筒、加热器、加压过滤器、胶头滴管、 移液管、比色皿
实验药品：磷酸氢二钾溶液、磷酸二氢钾、茶叶、酒石酸亚铁溶 液
实验原理：茶叶中含有很多的酚类，酚类会与酒石酸亚铁发生反 应生成紫蓝色络合物，通过测量器吸光度计算其含量
计算公式为：茶多酚（%）=
100**1*10002*957.1*m
V A % 实验步骤：
1.取磷酸二氢钾溶液15ml 和磷酸氢二钾溶液85ml
于
烧杯中混合均匀。
2.称取5g 茶叶，加入200ml 水煮沸，静止20分钟， 加压过滤，量取滤液体积，记为V=150ml.
3.准确吸取上述试液1ml ，注入25ml 容量瓶中，加 水4ml 和酒石酸亚铁溶液5ml ，充分混匀后，再 加PH7.5的缓冲溶液至刻度线。
然后取一个干净
的25ml 容量瓶，加入4ml 水和酒石酸亚铁溶液
5ml ，充分混匀后再加PH 7.5的缓冲溶液至刻度
线制得空白溶液。
4.用两个10mm 比色皿分别取上述两种溶液，测定
吸光度（A ）=1.315
实验结果：
茶叶中茶多酚的含量 =100**1*10002*957.1*m
V A =100*5*1150*10002*957.1*315.1%= 15.44% 实验总结：在这次的实验中感受到团队合作的重要性，因为我是 一个人做的，当有些东西不懂的时候也没有人可以 问，可以的话下次找个同学搭档，另外就是自己的动
手能力还有些不行，必须加强才行。
茶多酚的提取及测定实验报告
茶多酚的提取及测定实验报告一、实验目的茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，具有抗氧化、清除自由基、抗菌、抗病毒、降血脂、降血压等多种生理活性和药理作用。
本实验的目的是掌握茶多酚的提取和测定方法，了解茶多酚的性质和应用。
二、实验原理茶多酚易溶于水、乙醇、甲醇、丙酮等有机溶剂，可采用溶剂萃取法进行提取。
常用的提取溶剂有乙醇、乙酸乙酯等。
在酸性条件下，茶多酚与金属离子（如铝离子）形成稳定的络合物，可通过分光光度法进行测定。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜绿茶（或市售茶叶）2、实验试剂乙醇（95%）、乙酸乙酯、酒石酸亚铁溶液、磷酸缓冲液（pH ＝75）、蒸馏水3、实验仪器电子天平、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶（100 mL、500 mL）、具塞锥形瓶、移液管、漏斗、滤纸四、实验步骤1、茶多酚的提取（1）称取 10 g 茶叶粉末，放入具塞锥形瓶中，加入 100 mL 70%的乙醇溶液，在70℃恒温水浴锅中浸提1 h，期间每隔15 min 搅拌一次。
（2）提取结束后，冷却至室温，然后用离心机以 4000 r/min 的转速离心 15 min，收集上清液。
（3）将上清液转移至旋转蒸发仪中，在 50℃下减压浓缩至无乙醇味，得到茶多酚粗提液。
2、茶多酚的纯化（1）将茶多酚粗提液用乙酸乙酯进行萃取，萃取次数为 3 次，每次用量为 50 mL。
（2）合并乙酸乙酯萃取液，用蒸馏水洗涤 2 次，每次用量为 50 mL。
（3）将洗涤后的乙酸乙酯萃取液转移至旋转蒸发仪中，在 50℃下减压浓缩至干，得到茶多酚纯品。
3、茶多酚的测定（1）标准曲线的绘制准确称取 01000 g 没食子酸标准品，用蒸馏水溶解并定容至 100 mL，得到 1000 mg/mL 的没食子酸标准储备液。
分别吸取 000 mL、100 mL、200 mL、300 mL、400 mL、500 mL 没食子酸标准储备液于 100 mL 容量瓶中，加入蒸馏水至 50 mL，然后加入 5 mL 酒石酸亚铁溶液和 5mL 磷酸缓冲液（pH ＝ 75），用蒸馏水定容至刻度，摇匀。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL 的高锰酸钾相当于 5.82mg 茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL ，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80 'C烘箱或水浴中加热磺化4〜6h，用蒸馏水定容至1000mL ，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸 6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中(平行3份)，加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80 C水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g,放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶多酚物理实验报告
茶多酚物理实验报告茶多酚物理实验报告茶多酚是一种在茶叶中广泛存在的物质，具有多种生物活性和药用价值。
本实验旨在通过物理实验方法，探究茶多酚的一些基本性质和特点。
实验一：茶多酚的提取首先，我们需要从茶叶中提取茶多酚。
取适量的绿茶叶，将其研磨成细末，然后将茶末与乙醇混合，搅拌均匀。
接着，用滤纸过滤混合物，得到茶多酚溶液。
实验二：茶多酚的紫外吸收光谱将茶多酚溶液置于紫外可见分光光度计中，进行紫外吸收光谱测定。
茶多酚在紫外光区域（200-400nm）具有较强的吸收峰，主要在270-280nm附近。
根据吸收峰的强度和位置，可以初步判断茶多酚的含量和结构。
实验三：茶多酚的溶解度为了研究茶多酚的溶解性质，我们在实验中使用了不同溶剂，如水、乙醇和丙酮。
将茶多酚溶解于不同溶剂中，并观察其溶解情况。
实验结果显示，茶多酚在水中溶解度较高，而在乙醇和丙酮中溶解度较低。
这是因为茶多酚是一种多酚类化合物，其溶解度受到溶剂极性的影响。
实验四：茶多酚的氧化性茶多酚具有较强的氧化性，可以与氧气发生反应产生氧化产物。
在实验中，我们将茶多酚溶液与空气接触一段时间，观察溶液的颜色变化。
实验结果显示，茶多酚溶液由无色逐渐变为深棕色，这是由于茶多酚发生氧化反应产生了氧化产物。
实验五：茶多酚的抗氧化性茶多酚具有良好的抗氧化性，可以抑制自由基的产生和氧化反应的发生。
为了研究茶多酚的抗氧化性，我们使用了DPPH自由基清除实验。
将DPPH溶液与茶多酚溶液混合，观察溶液颜色的变化。
实验结果显示，茶多酚能够与DPPH自由基发生反应，使其从紫色变为淡黄色，表明茶多酚具有较强的抗氧化性。
综上所述，茶多酚是一种具有多种生物活性和药用价值的物质。
通过物理实验，我们可以了解茶多酚的提取方法、紫外吸收光谱特性、溶解度、氧化性和抗氧化性等基本性质。
这些实验结果对于深入研究茶多酚的药理学和生物学活性具有重要意义，也为茶叶的加工和利用提供了科学依据。
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实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法
一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作
二、原理
茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂
仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤
1、供测试液的准备：
准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：
取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
同时做空白测定。
五、结果计算
X=
)
(
12
0.005820.318
m V V
A B
-⨯ω⨯
⨯
式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL
A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω--高锰酸钾的浓度，%
m—样品的质量g，V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL
实验三茶叶中茶多酚含量的测定——酒石酸铁比色法
一、实验目的：
1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。
2、进一步熟悉721－分光光度计的使用。
二、原理：
茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。
按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-［4］-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。
其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80％左右）。
纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。
茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。
对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 ℃并保持30min ，无明显变化。
在碱性条件下易氧化变质。
实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素C 的493倍，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显著功效。
还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。
1988年7月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。
国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TC ）。
茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。
本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。
酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。
因此可以用比色方法测定。
该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。
三、仪器与试剂：
仪器：分光光度计
试剂：
（1）酒石酸铁溶液：称取 FeSO 4·7H 2O 1.000g ，含 4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g ，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL
（2）pH7.5的磷酸缓冲液：60.2g Na 2HPO 4·12H 2O ，5.00gNaH 2PO4·2H 2O ，加蒸馏水溶解后．用蒸馏水稀释至1000mL ．
四、步骤：
（l ）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1g 于200mL 三角烧瓶中，加入沸水80mL ，在沸水浴中浸提30min ，然后过滤、洗涤，滤液倒人100mL 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。
（2）测定：吸取样品溶液 1mL 于 25mL 容量瓶中，加蒸馏水4mL ，加酒石酸铁溶液5mL ，摇匀，再加入pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。
选择540nm 波长和1cm 的比色杯测定吸光度。
五、计算：
式中：ω—茶多酚的含量，%，A —样品溶液的吸光度值，T —样品溶液的总体积，mL
V —测定用样品溶液的量，mL ，m —样品质量，g
3.913—用1cm 比色杯，当吸光度为1.0时，试液中茶多酚的浓度为3.913mg/mL
六、说明及注意事项：
1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。
3.913100%1000A T V m
ω⨯=⨯⨯⨯
2、样品溶液制备中的注意事项：
（1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。
（2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。
（3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，备用。
测定
准确吸取试液1 ml，注人2 5 m L的容量瓶中，加水4 ml和酒石酸亚铁溶液5 ml，充分混合，再加p H 7 . 5 磷酸盐缓冲液至刻度，用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度( A)。