脂肪鉴定脂类细胞化学实验报告
7.脂质化学实验报告-TLC-TED
TLC-FID分析油脂成分一、原理TLC-FID法是根据吸附剂对待分离组分吸附能力的不同，在流动相浸湿色谱柱的过程中，样品随着流动相展开，不同的组分随流动相以不同的速度向前移动，最终保留在色谱柱的不同位置，从而达到分离，然后再用氢火焰使化合物使化合物燃烧裂解形成离子碎片和自由离子，再由电极收集它们并产生与化合物量成正比的电流信号，根据出峰位置和峰面积计算出各组分在样品溶液中的百分含量。
二、步骤分别将两个平行样品溶解在正己烷中，配制浓度为1％～2％(10～20mg/mL)的溶液，点1µL样品于薄层色谱棒上，在配制好的溶剂体系下展开，然后进行仪器分析。
在仪器检测前，应先进行空扫，此时TLC-FID操作条件为氢气流速：180 mL/min；扫描速度：60 s/棒。
检测时TLC-FID操作条件为氢气流速：90 mL/min；扫描速度：30 s/棒。
三、结果与讨论图1 样品1的色谱图表1 样品1各甘油酯形成的峰信息峰 保留时间(min) 开始时间(min) 结束时间(min) 峰宽 峰高(mV) 峰面积(%) 1 0.085 0.039 0.130 40417 30.23 86.30 2 0.163 0.149 0.186 3948 6.46 8.43 3 0.198 0.186 0.231 2409 3.58 5.14 40.4530.4450.463610.200.13注：峰一为甘三酯；峰二、峰三为甘二酯（分别为sn-1,3甘二酯、sn-1,2甘二酯）；峰四为甘一酯，含量较少。
表中最后一列为各峰峰面积，表示样品中各组分相对百分含量。
表2 样品1各甘油酯的含量名称甘三酯 sn-1,3甘二酯sn-1,2甘二酯甘一酯 含量86.308.435.140.13图2 样品2的色谱图 表3 样品2各甘油酯形成的峰信息峰 (min) (min) (min) 峰宽 (mV) (%) 1 0.068 0.027 0.108 33884 0.000 85.34 2 0.138 0.121 0.157 3558 0.000 8.96 3 0.169 0.157 0.203 2214 0.000 5.58 40.3950.3870.404490.0000.12甘一酯，含量较少。
生化基础物质检测—脂类检测
主 要 试 TG试剂盒 剂 蒸馏水
主
采血器材
要
微量加样器
器
吸量管
材
恒温水浴箱
分光光度计
实验步骤
第一步
制备合格样本
第二步
反应液制备
第三步
混匀水浴测定
第四步
计算
第一步
用真空负压管采血，离心，待 用
第二步
取试管3支试管编号，按下表依次加样。
加入物 (μl) 蒸馏水 标准液 血清 工作液
空白管
20 － － 2000
第二步
洗板，阴性对照孔每孔加入PBS 50μl， 样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔 抗人AIF抗体工作液50μl。
第二步
每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀 10s，置37℃暗处反应15-20min。每孔 加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
第二步
分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光 值W2，最终测得的OD值为两者之差 （W1-W2），以减少由容器上的划痕或 指印等造成的光干扰。
误差分析
实验原理
空腹血浆脂蛋白主要为低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL），PTA-Mg2+具有选择性 沉淀载脂蛋白为 apoB 的脂蛋白 LDL，则上清液为 HDL，HDL 以 HDL-C 表示含量。
胆固醇酯酶
胆固醇酯+H2O————→胆固醇+RCOOH
胆固醇氧化酶
胆固醇+O2————→△4-胆甾烯酮+H2O2
试剂和器材
主 要 apoa试剂盒 试 校准液 剂 蒸馏水
主
采血器材
要
微量加样器
器
吸量管
材
恒温水浴箱
检测脂肪实验报告
检测脂肪实验报告
《检测脂肪实验报告》
在现代社会，肥胖成为了一个严重的健康问题，影响着越来越多的人们的生活质量。
为了更好地了解和管理脂肪含量，科学家们进行了一系列的实验研究。
本文将介绍一项关于检测脂肪含量的实验报告。
实验目的是通过不同方法检测食物中脂肪的含量，以便更好地了解食物的营养价值和对人体健康的影响。
实验过程中，我们选取了不同类型的食物样本，包括肉类、油脂、坚果和乳制品等，使用了化学分析、生物化学分析和光谱分析等多种方法进行检测。
实验结果显示，不同食物中脂肪含量存在明显差异。
其中，油脂类食物的脂肪含量最高，而坚果和乳制品中的脂肪含量相对较低。
此外，我们还发现了一些意外的结果，比如某些低脂食物中含有较高的反式脂肪酸，这对人体健康可能存在潜在风险。
通过这次实验，我们不仅对食物中脂肪含量有了更深入的了解，同时也意识到了食物标签中所标注的脂肪含量并不一定准确。
因此，我们建议消费者在选择食物时应该更加注重食物的成分和营养价值，而不仅仅只是关注脂肪含量。
总之，这次实验为我们提供了宝贵的数据和见解，对我们更好地了解和管理脂肪含量具有重要意义。
希望我们的实验报告能够为更多人提供有益的参考，促进人们更加健康地饮食和生活。
脂肪蛋白质鉴定实训报告
通过本次实训，掌握生物组织中脂肪和蛋白质的鉴定方法，了解实验原理，提高实验操作技能，培养观察能力和分析问题能力。
二、实验原理1. 脂肪的鉴定：脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色（或被苏丹染液染成红色）。
脂肪在显微镜下呈现为大小不一的橙黄色或红色颗粒。
2. 蛋白质的鉴定：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。
蛋白质在显微镜下呈现为大小不一的紫色颗粒。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：花生仁、黄豆、鸡蛋清、蓖麻籽等。
2. 试剂：苏丹染液、双缩脲试剂、酒精、碘液等。
四、实验步骤1. 脂肪鉴定：（1）取花生仁，切片，用苏丹染液染色。
（2）用显微镜观察花生仁子叶细胞中的脂肪颗粒。
2. 蛋白质鉴定：（1）取黄豆或鸡蛋清，制备样液。
（2）向样液中加入双缩脲试剂，观察蛋白质与双缩脲试剂反应后的颜色变化。
（3）用显微镜观察蛋白质颗粒。
五、实验结果与分析1. 脂肪鉴定结果：花生仁子叶细胞中的脂肪颗粒被染成橘黄色，符合实验预期。
2. 蛋白质鉴定结果：黄豆或鸡蛋清中的蛋白质与双缩脲试剂反应后，产生紫色。
在显微镜下观察到蛋白质颗粒呈紫色。
1. 通过本次实训，掌握了脂肪和蛋白质的鉴定方法，了解了实验原理。
2. 提高了实验操作技能，培养了观察能力和分析问题能力。
3. 发现了实验过程中可能存在的问题，如样品处理不当、试剂配比不准确等，为今后的实验提供了借鉴。
4. 认识到实验过程中注意事项，如避免污染、保持实验环境整洁等。
5. 通过本次实训，对生物组织中的脂肪和蛋白质有了更深入的了解，为今后的生物学学习和研究奠定了基础。
七、实验反思1. 实验过程中，应严格按照实验步骤进行操作，确保实验结果的准确性。
2. 注意观察实验现象，及时调整实验参数，提高实验效果。
3. 在实验过程中，要注重实验安全，避免发生意外事故。
4. 加强与同学之间的交流与合作，共同完成实验任务。
5. 深入学习生物学知识，为今后的生物学学习和研究打下坚实基础。
高中生物脂肪的鉴定实验
高中生物脂肪的鉴定实验
实验名称：脂肪的鉴定实验
实验目的：通过实验掌握脂肪的检测方法和鉴定方法。
实验原理：脂肪是一类较为简单的脂类化合物，主要是由甘油和脂肪酸组成。
常用的脂肪鉴定方法有油滴实验、酸值测定法、皂化值测定法等。
实验材料：
1. 油脂样品：可选植物油、动物油或人工合成的脂肪。
2. 96%乙醇
3. 酚酞指示剂
4. 氢氧化钠（NaOH）
5. 硫酸
实验步骤：
1. 接受待测样品，将其倒入实验室用品杯中。
2. 向样品中加入少量的酚酞指示剂，并用玻璃棒轻轻搅拌均匀。
3. 在取另外一个已干燥的实验室用品杯中加入一定量的氢氧化钠溶液，并用试纸检查其是否为碱性。
4. 将第2步中得到的样品沿着试管壁缓缓滴入第3步的氢氧化钠溶液中，同时用玻璃棒轻轻搅拌，直至样品完全加入。
5. 在此时，颜色变化为红色，接下来加入96%乙醇，直到试管填满，并用试管摇晃均匀，使两层液体充分混合。
6. 将试管置于离心机中离心，离心过程大约需要5分钟左右。
待离心完毕之后，观察试管中的液体。
实验结果：
1. 在试管底部，观察到了白色、类似油滴的物质，这就提示了该样品中含有脂肪。
2. 如果样品中含有较高的脂肪含量，可以看到较大的油滴。
注意事项：
1. 实验过程中需要非常注意安全，不要直接用手触摸实验室用品杯和试管，避免触摸到化学药品。
2. 实验结束后需要及时清理实验器材，并注意正确处理化学废液。
脂肪检测生物实验报告
脂肪检测生物实验报告引言脂肪是人体中重要的能量储存物质，它在维持机体正常功能和健康方面起着重要作用。
因此，准确测定脂肪含量对于了解人体健康状况具有重要意义。
本实验旨在通过一系列的生物实验方法，对脂肪的检测进行研究和探索。
材料与方法1. 实验室老鼠10只，分为两组，每组5只。
2. 营养均衡饲料。
3. 精密天平。
4. 无水乙醇。
5. 高速离心机。
6. 均质机。
7. 脂肪提取试剂盒。
实验步骤1. 将10只老鼠随机分为两组，每组5只。
其中，一组作为对照组，继续按照正常饮食喂养；另一组作为实验组，以高脂饮食喂养4周。
2. 实验过程中，记录每组老鼠的体重。
3. 4周后，将两组老鼠置于禁食1小时，然后进行体脂测定。
首先，称取每只老鼠的体重，然后将其处死。
用无水乙醇湿润化妆棉擦拭老鼠体表脂肪，然后将肝脏、脾脏等器官剥离。
利用精密天平分别称取每个器官的重量并记录。
4. 使用高速离心机，将剥离的肝脏放入离心管中，使用超高速离心技术得到肝脂沉淀。
5. 移除上清液，并用无水乙醇洗涤肝脂沉淀。
6. 将洗涤后的肝脂沉淀移到均质机中，加入脂肪提取试剂，进行均质处理。
7. 将均质后的样品置于65C烘箱中，使其脱水。
8. 从烘箱中取出样品，室温冷却。
9. 用精密天平称取样品的重量。
结果与讨论根据实验步骤，我们得到了每组老鼠肝脏的重量数据，并记录如下：组别老鼠1 老鼠2 老鼠3 老鼠4 老鼠5 平均值- - - - - - -对照组25.6g 22.9g 26.4g 24.8g 23.5g 24.65g实验组28.5g 29.1g 32.0g 30.2g 28.9g 29.74g通过对比对照组和实验组的肝脏重量，我们可以得出实验组的肝脏重量较对照组明显增加。
这表明高脂饮食对于老鼠体内脂肪的积累有明显影响。
然后，我们对实验组中的肝脏样品进行脂肪检测。
通过称取样品重量并与初始体重进行比较，计算出样品中脂肪的占比。
最终得到实验组肝脏脂肪含量的平均值为20.5%。
实验报告 脂类的化学——苏丹三染色
姓名 xxxx 班级 xxxxxx 同组人 xxxxxxxx 科目细胞生物学实验题目脂类的化学——苏丹Ш染色组别第2组一．实验目的1.熟悉脂类的显示技术。
2.了解脂类在细胞中的分布。
二．实验原理脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。
很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。
脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。
脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。
其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。
脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。
60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。
丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。
用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。
常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。
用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片，明胶包埋冰冻切片，铺片法。
本实验中使用的脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。
苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。
苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪。
当它与含有脂类的标本接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂结构中使其显色。
三．实验仪器及试剂1.仪器解剖盘，解剖剪，镊子，盖玻片，载玻片，显微镜，胶头滴管2.试剂苏丹Ш染液，甲醛钙溶液，70%乙醇溶液，蒸馏水3.材料小白鼠一只四．实验步骤1.断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
实验-脂肪的鉴定
实验二：鉴定生物组织中的脂肪一、实验目的尝试用化学试剂检测生物组织中的脂肪。
二、实验原理1.某些化学试剂能够使生物组织中的脂肪产生特定的颜色反应，脂肪可以被苏丹III染液染成色（或被染液染成红色）。
2.苏丹III可以溶于体积分数50%的乙醇溶液。
三、实验材料用具1.实验材料：花生子叶2.用具：载玻片，盖玻片，显微镜，刀片，培养皿，镊子，滴管3.试剂：苏丹III染液，体积分数为50%的乙醇溶液，蒸馏水四、方法步骤1.取材：取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮。
2.切片：用刀片在花生子叶的横断面上平行切下若干薄片，放入盛有清水的的培养皿中待用。
3.染色：从培养皿中选取最薄的切片，用毛笔蘸取放在载玻片中央，在花生子叶薄片上滴2-3滴苏丹III染液，染色3min。
4.洗去浮色：用吸水纸吸去染液，再滴加1-2滴体积分数50%的乙醇溶液，洗去浮色；用吸水纸吸去花生子叶周围的乙醇，滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片，制成临时装片。
5.观察：在低倍显微镜下找到花生子叶的最薄处，移至视野中央，将物像调节清楚，换高倍镜显微镜观察，圆形的脂肪颗粒为色。
注意事项：1.脂肪的鉴定实验最好选择富含脂肪的种子，如花生种子(实验前浸泡3h～4h)。
2.该试验成功的关键是获得只含有单层细胞理想薄片。
3.滴苏丹Ⅲ染液染液染色2-3min，时间不宜过长，以防细胞的其他部分被染色。
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脂类细胞化学（苏丹Ⅲ染色法）
1.实验目的：用苏丹Ⅲ染液对小鼠的肠系膜细胞染色，观察细胞颜色，掌握苏丹Ⅲ染液的
染色方法。
2.实验用品：
（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管
（2）实验药品：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹Ⅲ染液
（3）实验材料：小鼠
3.实验原理：
（1）由脂肪酸和醇作用生成的酯及其衍生物统称为脂类，这是一类一般不溶于水而溶于脂溶性溶剂的化合物。
脂类是机体内的一类有机大分子物质，它包括范围
很广，大体上可以分为类脂和油脂两大类。
类脂包括磷脂(phospholipids)，
糖脂(glycolipid)和胆固醇及其酯(cholesterol and cholesterol ester)三
类。
而油脂可以分为常温下常温液态的油和常温下固态的脂肪两类。
这几种
脂类化学结构有很大差异，生理功能各不相同。
其共同物理性质是不溶于水
而溶于有机溶剂，在水中可相互聚集形成内部疏水的聚集体。
（2）在固定细胞时，通常使用脂溶性固定液。
然而，鉴定的材料是脂肪时，脂溶性的固定液会溶解脂肪，致使把切片放到显微镜下观察时，观察不到被
染色的脂肪，只能看到脂肪细胞中有很大的空洞。
最好的固定材料是甲醛类
的固定液。
如医学上保存尸体采用的是福尔马林，即40%的甲醛水溶液，本次
实验采用的则是甲醛钙溶液。
（3）光学显微镜的切片多是石蜡切片。
在熔接石蜡时，需要用到脂溶性溶剂，而脂溶性溶剂会溶解细胞中的脂肪，因此本次实验不可采用石蜡切片。
但是
锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以采用石蜡切片。
（4）制作切片有多种方法，如冰冻切片、明胶包埋冰冻切片、本次实验采用的是操作简单的铺片法。
（5）脂类染色的原理是，染料溶于脂类显色。
选择溶剂时应注意，溶剂必须既溶解的染料，又不溶解掉脂类。
4.实验步骤：
（1）用断头法处死小鼠，置于解剖盘中。
剪开腹腔，用镊子提起小肠，使盖玻片紧贴于肠系膜。
用剪子将连同盖玻片和其上粘的肠系膜剪下，反扣于已
滴加甲醛钙的载玻片上，固定15分钟,
（2）吸蒸馏水滴于载玻片、载玻片之间冲洗，用滴管不断吸取液体以去除固定液。
（3）用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水重复上一步骤，进行冲洗。
（4）用苏丹Ⅲ染液染色30mins。
（5）染色结束时，用吸水纸吸去多余染液。
擦净盖玻片周边及表面，用显微镜观察。
5.实验结果：脂肪细胞被苏丹Ⅲ染液染成橘红色。
细胞周围有溢出的脂肪粒，呈圆形，橘
红色。
10*4显微镜下观察：
10*10显微镜下观察：
10*40显微镜下观察：
6.分析与讨论
（1）结果分析：脂肪细胞中含有大量脂肪，脂肪被苏丹Ⅲ染液染成橘红色，因而使整个细胞呈现橘红色。
某些脂肪细胞破裂，而使脂肪溢出，呈橘红色
的圆球状。
（2）注意事项
①在用盖玻片贴肠系膜：由于小鼠的肠系膜很小，因而应该提前缩小盖玻片的尺
寸。
可以用剪刀剪或用手掰小，并尽量使最后的盖玻片呈正方形。
②肠系膜的选择：肠系膜是一层包裹在小肠外的很细的薄膜，这层膜的大部分地
方是没有脂肪细胞的。
但是，肠系膜血管的周围有一些起保护作用的脂肪细胞。
因此，选材时应注意选择含有血管的肠系膜。
但是有一些血管周围的脂肪细胞
非常厚，肉眼可见呈白色。
这样的地方是无法观察的，所以选材时还要注意材
料的透明度。
③染色：染色过程为30mins，在这一过程中，染料中的水分很有可能蒸发，因此
在染色过程中应不时向载玻片中滴加染料。
④观察：在把物镜由10倍转为40倍时，应考虑到物镜变长，可能会使镜面蹭到
小鼠的小肠。
在观察时可先将小肠切除，只观察肠系膜。
⑤观察：观察时如果血管呈红色，是由于放血时没有放干净，下次实验应该注意
（3）作业：糖类的鉴定
Molisch反应（α- 萘酚反应）：此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。
它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用，形成红紫色复合物。
由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。
α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α- 萘酚一样。
除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。
此反应不能鉴别多聚糖如淀粉，纤维素等。
Benedict反应：班氏试剂是斐林试剂的改良（也是含有Cu2+的碱性溶液），能使具有自由醛基或酮基的糖类氧化，其本身则变成砖红色或黄色的Cu2O，可用来测定还原糖的存在。
它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比斐林试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。
Bial反应（甲基间苯二酚反应）：戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在的条件下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）缩合，形成深蓝色的沉淀物（此沉淀物溶于正丁醇）。
己糖也能发生反应，产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。
Molisch反应（α- 萘酚反应）：此方法是鉴定糖类最常用的颜色反应。
它的原理是：糖类在浓酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以与α- 萘酚作用，形成红紫色复合物。
由于在糖溶液与浓硫酸两液面间出现红紫色的环，因此又称紫环反应。
α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比较稳定，其灵敏度与α- 萘酚一样。
除了糖类之外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈现近似的阳性反应。
因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应只能说明有糖类存在的可能。
Seliwanoff反应：同样的原理，将糖与浓酸作用后再与间苯二酚反应，若是酮糖就显鲜红色，若是醛糖就显淡红色，由此可鉴别酮糖和醛糖。
蒽酮反应：糖类经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）反应生成蓝绿色复合物。
Barfoed test ：检验单糖的一种试验。
将5ml的Barfoed试剂煮沸，在保持其沸腾情况下缓慢地加入待检物。
单糖还原比混合物，形成红色沉淀物；而双糖虽亦能还原，但反应甚慢，可与前者区别。
脂肪的鉴定：脂肪可用?苏丹Ⅲ染液、苏丹Ⅳ染液、油红染色进行鉴定
蛋白质的鉴定：常用的试剂是双缩脲试剂。
其原理是：碱性条件下，双缩脲H2N-CO-NH-CO-NH2可以和Cu离子作用生成紫色沉淀。
蛋白质中有很多和双缩脲结构相似的肽键，所以可以用双缩脲试剂来鉴定蛋白质。