啤酒酵母中核苷酸的提取研究
啤酒废酵母核苷类调味剂最佳工艺条件研究
增 昧剂 是补充 或增 强 食 品原 有风 味的 物质 ， 主要
有两 大类 ， 其一 是 氨 基 酸类 Ｌ 谷 氨 酸及 其 钠 盐 ， ＿ 亦称
味剂含 有十几种 氨基酸 、 味核苷 酸 、 呈 维生 素和多 种微 量元 素 ， 具有较高 营养价值 ， 是集 调味营养 两大功 能为
ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉｎｏ ｏ ｉ ｍ ｈｏ ｉ ｅａ ，ｅ ｔａ ｔ ｎｔｍｅａ ０ｍｉ．Ｕｎ ｅ ｈ ｓｃ ｎ ｉｉｎ，ｔ ｅｅ ｔａ — ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆ ｄｕ ｃ ｌｒｄ ｓ６ ６ ｘ ｒ ｃｉ ｉ ｓ３ ｎ ｏ ｓ ｏ ｄ ｒｔ ｉ ｏ ｄｔｏ ｈ ｘ ｒ ｃ
摘要： 采用超 声波 结合 弱碱 盐法提 取啤 酒废 酵母 ＲＮＡ， 以不 同酵母 浓度 、 Ｃ 浓度 、 声功 率 和提取 时 Ｎａ １ 超 间对啤 酒酵母 中核糖核 酸 Ｒ ＮＡ 的提取 进行单 因素和 正 交试 验 。该方 法提 取核 糖核 酸 Ｒ ＮＡ 优 化后 最 佳 工 艺为 ： 酵母 浓度 ５／ Ｎａ １ ， Ｃ 浓度 ６ ， 声波 功率 ２ ０Ｗ ， 取 时间 ３ ｎ 用该工 艺可使核 糖核 酸 ９ ６ 超 ０ 提 ０ｍｉ ，
一
味精 ； 一 种 是 ５一 苷 酸类一 鸟 苷 酸 （ Ｇ 另 核 ５一 ５ ＭＰ） － 和
５ 肌苷酸 （ Ｉ ） 一 ５ ＭＰ 。啤酒废 酵 母是 啤酒 工 业生 产 中
体 的复合调 味品 ， 被誉 为 第三 代 味精 。本 实验 采 用
超声 波与弱盐 相结合 破 壁 的方 法 ， 啤酒 废 酵母 中 从
ｔ ｎ ｒ ｔ ｆ ｉ ａｅｏ ｏ ＲＮＡ ａ ． ｅ ｃ ． ．Ｔｈ ｘ ｒ ｃ ｓ ｃ ｎ ｂ ｓ ｄ ｉ ｒ ｄ ｃ ｉｎ ｏ ｕ ｌ ｏ ｉ ｅ ｆａ ｏ ｉ ｇ ｗｉｈ ｃ Ｄｒ ａ ｈ８ ５ ｅ ｅ ｔａ ｔ ａ ｅｕ ｅ ｎ ｐ ｏ ｕ ｔ ｆｎ ｃｅ ｓｄ ｌ ｖ ｒｎ ｔ ｏ ｈ ｇ ｕ ｌ ｙ ｉｈ ｑ ａｉ 。 ｔ Ｋｅ ｒ ｓ ｗａ ｔ ｅ ｒｙ ａ ｔ ｉ ｈ ｃ ｎ ｅ ｔ ａ ｉ ｎ ｏ ａ ｔ ａ ｄ ｔ ｉ ｌ ａ ｉ ｅ ｓ ｌ ；ｕ ｔ ａ ｏ ｉ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ ｙ ｗｏ ｄ ： ｓ ｅ ｂ ｅ ｅ ｓ ；ｈ ｇ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｆｓ ｌ ｎ ｈ ｎ ａ ｋ ｌ ａ ｔ ｌｒ ｓ ｎ ｃ ｅ ｔ ａ ｔ ； ｏ ｎ ｏ
氨解法在啤酒酵母中提取RNA的应用与研究
TDL-5 离心机、721 分光光度计、pH 计、高压均 质机、电热恒温干燥箱 1.4 方法
收稿日期:2004-7-11
张帅：男，硕士，广东肇庆学院教师，研究方向生物产品分离分析技术
1.4.1 原料预处理 称取 10g 供试酵母，配成 10%酵母溶液。若浓度
表 4 破壁时间对 RNA 得率和纯度的影响
µg/ml；RNA%=[ (甲 OD260-乙 OD260) / (0.022*50) ]* 100%，其中 0.022 是浓度为 1µg/ml 的 RNA 溶液的 OD 值，甲液 OD260 为总的核酸,核苷酸的值，乙液 OD260 为核苷酸小分子的值，两者之差即为核酸大分 子的值。
51.2
1.126
2
1
2(3%)
70.7
0.495Βιβλιοθήκη 313(5%)
69.4
1.040
4
2(40min)
1
77.0
1.155
5
2
2
68.3
1.366
6
2
3
70.6
1.690
7
3(60min)
1
65.8
0.790
8
3
2
68.0
0.880
9
3
3
66.2
0.861
M1i
0.877
1.024
M2i
1.216
0.973
太高，溶液成糊状，不易搅拌；浓度太低，调上清液 等电点时 RNA 不易沉淀，因为 RNA 在水溶液中有一 定的溶解度。 1.4.2 核酸提取步骤
核酸提取主要分三步进行：(1) 破壁，使核蛋白 从细胞中溶出。 (2)加热，使杂蛋白变性沉淀。(3)离 心，使核酸与蛋白分离，得 RNA 清液，再调 RNA 等 电点，使 RNA 粗品沉淀，经纯化、干燥得到成品。 1.4.3 氨解法提取 RNA 的工艺流程
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定—预习报告一、研究背景生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物。
它不仅是生物科学工作者研究者的重要对象，且与化学、医学和食品等工业部门有密切关系。
在科研和医学方面，探讨结构与功能、防治某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质。
然而这类物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起，离体后稳定性较差，含量偏低，且提取的材料复杂，因此纯化的方法也很多。
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中酵母最为理想。
本次实验以干酵母粉为实验材料，提取RNA，并测定其含量。
二、研究目标掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。
三、研究策略酵母细胞中RNA通常与蛋白质结合。
要提取RNA就要破细胞壁，让它释放出来。
浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质，然后沸水浴使RNA水解酶失活。
再通过调节pH将RNA充分沉淀，洗涤，干燥，测量。
四、研究方案及可行性分析浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
提取RNA时需注意掌握温度，直接在90~100℃浸提，避免在20~70℃之间的时间过长，磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
洗涤沉淀时要反复抽提，离心以纯化RNA。
测定提取的核酸含量，只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。
碱基在260nm有光吸收，采用紫外吸收法可测定核酸含量。
五、具体实验设计1、所需主要材料：食品用干酵母粉；试剂：10%NaCl, 6MHCl , 95%乙醇，2%氨水，RNA沉淀剂（0.5g钼酸铵+193ml水+7ml70%过氯酸）；仪器设备：烘箱，离心机，天平，紫外分光光度计，移液器，恒温水浴锅，玻璃匀浆器，pH计。
主要器皿：研钵，离心管，容量瓶25ml 50ml；具塞试管；三角瓶；小烧杯。
2、具体操作步骤1.提取：称取7g酵母粉，于研钵中小心研磨成面粉状粉末，转移至三角瓶。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定酵母核糖核酸的提取及测定⼀、实验背景及⽬的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍⽣物在⽣物化学、医药、⾷品添加剂、农业等领域有着⼴泛的应⽤。
⽐如能够促进作物的⽣长，在⽔稻、⼩麦、柑橘及多种蔬菜⽣产中应⽤，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强⼒助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为⽣产治疗癌症、肝炎及冠⼼病等药物的原料。
⽽利⽤微⽣物资源提取氨基酸、核苷酸等⽣物⼩分⼦，具有成本低、⾮化学合成、⽆毒、⽆害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵⾏业的快速发展，产⽣了相应的⼤量发酵副产物，如何利⽤这些副产物，既做到不污染环境，还能产⽣良好的经济效益，⼀直是研究的热点。
⽽啤酒废酵母中RNA 含量达6%~8%，是⽣产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋⽩质(占⼲菌体的50%)还具有很⾼的利⽤价值。
所以利⽤啤酒废酵母⽣产RNA形成了⾮常有益的产业链。
[2] 本实验⽬的就是学习从酵母中提取RNA的⽅法并掌握其测定⼿段。
⼆、实验原理微⽣物是⼯.业上⼤量⽣产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋⽩质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调⾄其等电点，使之沉淀，进⾏离⼼收集。
提取RNA的⽅法很多，在⼯业⽣产上常⽤的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利⽤碱使细菌细胞壁⽔解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利⽤⾼浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于⽔，在含盐的菌体溶液中，RVA 有较⾼的溶解度。
⼆者均通过控制温度使蛋⽩质变性沉淀，通过离⼼将RNA及蛋⽩质和酵母菌体分离，进⽽在等电点沉淀RNA，从⽽达到提取⽬的。
本实验采⽤浓盐法(10% NaCl),是⾷品医药卫⽣领域制备RNA 制剂的经典⽅案。
酿酒酵母RNA的提取
酿酒酵母RNA的提取酿酒酵母RNA的提取一．准备工作&注意事项1.准备好手套，口罩，帽子，实验过程中经常更换手套。
2.使用过的枪头和离心管要及时更换，避免交叉污染。
3.所用的玻璃器皿（研钵）使用之前在150℃的烘箱干烘4个小时。
4.操作动作要迅速。
二．RNA提取操作步骤1.取处于生长期中期的新鲜菌液（接种量6%培养8小时）或4℃保存的菌液一毫升，在离心机中短暂离心。
2.去除上清液，用枪头吸取100微升TRNzol-A试剂吹打几次。
3.在事先烘烤完成的研钵中倒入液氮，将菌液打入研钵的液氮中，快速用力研磨。
在保持菌液冻结状态的情况下，用小匙将菌液转移至新的离心管中。
1：1加入1mlTRNzol-A试剂。
4.将匀浆样品在15~30℃放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。
5.4℃，12000rpm（~13400xg）离心10分钟，取上清。
6.1：0.2的比例加入氯仿，盖好管盖，剧烈震荡15秒，室温放置3分钟。
7.4℃ 12000rpm（~13400xg）离心10~15分钟。
样品分为三层：黄色的有机相，中层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约500微升）转移到新管中。
8.在得到的水相溶液中加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置20~30分钟。
9.4℃ 12000rpm（~13400xg）离心10分钟，去上清。
离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
10.加入1ml 75%乙醇（由DEPC水配制）洗涤沉淀。
每使用1mlTRNzol-A至少用1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
（若要保存样品可以停止在此步骤，将样品保存于-80℃环境。
）11.4℃ 5000rpm （~2300xg）离心3分钟。
倒出液体，注意不要倒出沉淀，剩余少量液体短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
12.室温放置晾干（注意不要晾的过干，RNA完全干燥后很难溶解，大约晾干2~3分钟左右即可），根据实验需要，加入30~100微升DEPC水，反复吹打、混匀，充分溶解RNA。
用啤酒废酵母制备饲料核苷酸的方法[发明专利]
![用啤酒废酵母制备饲料核苷酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/4c055d3691c69ec3d5bbfd0a79563c1ec5dad7bd.png)
(10)申请公布号 CN 102851335 A(43)申请公布日 2013.01.02C N 102851335 A*CN102851335A*(21)申请号 201210348607.X(22)申请日 2012.09.19C12P 19/30(2006.01)A23K 1/16(2006.01)C12R 1/865(2006.01)(71)申请人宜兴市天石饲料有限公司地址214258 江苏省无锡市宜兴市官林镇宜兴市天石饲料有限公司(72)发明人薛宏基 赵传江 邹益东 赵亮刁海霞(74)专利代理机构江苏圣典律师事务所 32237代理人贺翔(54)发明名称用啤酒废酵母制备饲料核苷酸的方法(57)摘要本发明公开了一种用啤酒废酵母制备饲料核苷酸的方法，该方法通过破壁、抽提、酶解等优选工艺将啤酒废酵母制备成5'-核苷酸，本发明选用紫外分光光度法测定抽提液中RNA 的含量，根据抽提得到的RNA 含量，按每克单位RNA 底物需5'-磷酸二酯酶2500-5000活力单位计算，确定并加入5'-磷酸二酯酶的量，将RNA 酶解为5'核苷酸。
本发明具有生产周期短，投资少，成本低，产品收率高，质量稳定，变废为宝，无污染物排放等优点，具有良好的经济价值和社会价值。
(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书6页 附图1页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 1 页1/1页1.用啤酒废酵母制备饲料核苷酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)酵母破壁、RNA 酶解：将啤酒废酵母泥输送到反应罐，加入NaOH ，在20~45℃条件下对啤酒废酵母进行破壁、抽提1-3小时，然后在抽提液内加入盐酸，使抽提液的pH 为6.0~6.5，取样通过紫外分光光度法测定抽提液中RNA 的含量，根据抽提得到的RNA 含量，按每克单位RNA 底物计算需要的5'-磷酸二酯酶量，加入5'-磷酸二酯酶，随后调整酶解液的pH 值在5.5-6.0和温度在65~70℃，进行酶解反应；通过定磷方法，当测得5'-核苷酸达到最高产量时，升温到90~95℃，维持10~15分钟，终止酶解反应；(2)真空减压浓缩、喷雾干燥：将步骤(1)经5'-磷酸二酯酶酶解的料液从反应罐输送到浓缩罐，在真空减压条件下升温在70~75℃，将料液浓缩到原体积2/3-1/2，然后喷雾干燥即得。
利用啤酒废酵母制备高核酸酵母抽提物的应用研究
ＣＨＩ ＮＡ ＣｏＮＤＩ Ｍ ＥＮＴ
中 国 调 味 品
试 验 研 究
利 用 啤 酒 废 酵 母 制备 高核 酸酵 母 抽提 物 的应 用研 究
徐耀 文， 马信 亮 ， 王 丹 萍
（ 烟 台华海 生物制 品有 限公 司 ， 山东 烟 台 ２ ６ ４ ０ ０ ０ ） 摘要： 文章 是 专 门针 对 目前 国 内外 市场 上 对 富合 Ｉ ＋Ｇ 的抽 提 物 的 需 求越 来越 大 而专 门研 制 的 高棱 酸
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｉ ｓ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｉ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｉ ｎ ｇ ｄ ｅ ｍａ ｎ ｄ ｓ ｏ ｆ ｄ ｏ ｍｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｆ ｏ ｒ ｅ ｉ ｇ ｎ ｍａ ｒ ｋ ｅ ｔ ｓ ｆ ｏ ｒ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｓ ｔ ｈ ａ ｔ ａ ｒ ｅ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ｎ Ｉ ＋ Ｇ ｔ ｏ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｂ ｅ ｅ ｒ ｙ ｅ ａ ｓ ｔ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｏ ｆ ｈ ｉ ｇ ｈ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｔ ｙ ｐ ｅ ． Ａｄ ｏ ｐ ｔ ｓ ｔ ｅ ｐ － ｂ ｙ － ｓ ｔ ｅ ｐ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｂ ｅ ｅ ｒ ｙ ｅ ａ ｓ ｔ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｋ ｉ ｎ ｇ ｈ ｉ ｇ ｈ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｙ ｅ ａ ｓ ｔ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ，ａ ｎ ｄ ｏ ｂ ｔ ａ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ －
ｏ ｆ ０ ． ０ ４ Ａ ０ ，ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｆ ２ ２ ｈ ａ ｔ ５ ５℃ ， ｐ Ｈ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ ６ ． ５ ．Ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍａ ｌ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｆ ｏ ｒ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ
酵母RNA的提取实验报告
酵母RNA的提取紫外吸收法测RNA浓度实验报告一、实验目的1、掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。
?2、掌握紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。
?3、熟悉紫外分光光度计的使用方法。
?二、实验原理核酸是生命的最基本物质之一，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内。
对核酸的研究是更深入研究生命体的基本前提之一。
研究核酸需要纯度很高的核酸，所以核酸的提取方法也就在生物学研究中相当重要。
本次实验提取酵母的核糖核酸（RNA）。
RNA离体后稳定性很差，含量低，所以在提取的时候就要注意防止核酸的降解和变性，防止过酸、过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止RNA 酶的作用。
本实验是医药卫生领域与大工业生产的基础方法。
核酸（RNA）都是由核苷酸组成的多聚核苷酸化合物，而核苷酸是由糖、碱基和磷酸以等分子比例构成的，故测定组成核苷酸的任意一种组分即可以测定生物体内核酸的含量或者是提取出来的核酸的含量。
?提取RNA的方法很多，在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。
前者是利用碱使细菌细胞壁溶解，是RNA释放出来，后者是在加热的条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
使用浓盐法提取RNA的时候应该注意掌握温度，直接至90~100℃浸提，避免在20~70℃的时间过长，因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶的作用活跃的温度范围，会使RNA降解而降低提取率。
这两种方法是从废弃的啤酒酵母中提取RNA的一般方法。
但是这两种方法各有利弊，如浓盐法提取的RNA纯度高，而稀碱法提取的时间短，提取率高，更利于工业化生产。
RNA在260nm处有最大吸收峰，一定浓度范围内其浓度与吸光度成正比，故可以用紫外分光光度计通过比色来测定RNA含量。
?由于蛋白质在280nm波长处也有光吸收，对RNA测定有一定的干扰作用，但蛋白质的最大吸收峰在280nm处，如同时测定280nm的光吸收，通过计算可消除其对RNA测定的影响。
因此如其中含有蛋白质时必须同时测定280nm和260nm的吸光度，可通过计算测定溶液中RNA的含量。