连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响
清热解毒类中药抗新型冠状病毒肺炎研究进展
第39卷第1期2 0 2 1年1月中华中医药学刊CHINESE ARCHIVES O F TRADITIONAL CHINESE MEDICINEV〇l.39N o.1Jan. 2021D O I：10. 13193/j.i s s n. 1673 -7717. 2021.01.045清热解毒类中药抗新型冠状病毒肺炎研究进展杨安辉1’2，刘宇灵1，林龙飞1，罗玉辞1，吴艳秋1’2，李慧，(1.中国中医科学院中药研究所，北京100700;2.江西中医药大学药学院，江西南昌330004)摘要:20丨9年12月以来发生的新型冠状病毒肺炎（C O V m-19)引起了全世界的广泛关注。
在此次抗击疫情中，我 国中医药显示出独特优势，其中清热解毒类中药“清热解毒”的功效针对新冠肺炎患者病证治疗发挥出重要积极作用：总结具有潜在抗新型冠状病毒肺炎作用的清热解毒类中药种类，梳理清热解毒类中药抗新冠肺炎作用机制研究，整理了 清热解毒类中药在临床治疗组方应用，以期更好发挥清热解毒类中药对于新型冠状病毒的防治作用及对于后续相关药物研究提供一定的参考。
关键词：清热解毒类中药；新型冠状病毒肺炎（<：0\'10-19);3八1«-(：{^-2;细胞因子风暴；炎症中图分类号:R259.631;R511 文献标志码：A文章编号：丨673-7717(2021 )0丨4)18146Research Progress of Heat - Clearing and Detoxifying Traditional ChineseMedicine in Treatment of Corona virus Disease 2019Y A N G A n h u i1'2,L I U Y u l i n g',L I N L o n g f e i1 ,L U0Y u t i n g1,W U Y a n q i u1'2,L I H u i1(1. Institute of Chinese Materia Medica, China A c a d e m y of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, C h i n a；2. School of Pharmacy, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, N a n c h a n g 330004Jiangxi,China)Abstract：C O V I D- 19,w h i c h h a s o c c u r r e d s i n c e D e c e m b e r2019, h a s c a u s e d w i d e s p r e a d c o n c e r n.In t h e fight against C0- V I D- 19, traditional C h i n e s e m e d i c i n e h a s s h o w n its u n i q u e a d v a n t a g e s.T h e effect of h e a t—c l e a r i n g a n d detoxi f y i n g traditional C h i n e s e d r u g s p l a y a n i m p o r t a n t a n d positive role in th e t r e a t m e n t o f c o r o n a virus d i s e a s e2019 (C O V I D- 19). T h i s p a p e r s u mm a r i z e d the t y p e s of traditional C h i n e s e d r u g s w i t h potential anti - C O V I D - 19 effects a n d th e r e s e a r c h o n th e m e c h a n i s m of p h a r m a c o l o g i c a l action a n d its a p p l i c a t i o n in clinical t r e a t m e n t,s o a s to g ive better p l a y to t h e p r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n t of C O V I D- 19 a n d p r o v i d e s o m e r e f e r e n c e s for th e s u b s e q u e n t r e s e a r c h o n related d r u g s.Keywords：h e a t- c l e aring a n d detoxifing traditional C h i n e s e d r u g s；c o r o n a v i m s d i s e a s e 2019 (C O V I D - 19)；S A R S - C o V -2；c y t o k i n e s s t o r m；i n f l a m m a t i o n2019年年底，我国湖北省武汉市地区发现有市民感染不明病毒的情况,出现较多患者有发热、干咳、头痛、腹泻等症状，少数严重者快速发展为急性呼吸窘迫综合征、多器官功能衰竭 等，其病情发展迅速，且具有人传人特性:2020年2月II 日世界卫生组织正式将该疾病命名为新型冠状病毒肺炎（C0- V I D- 19)，国际病毒分类委员会将引起该病的病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (S A R S-C o V-2) 51。
1.连翘提取物的体外抗菌试验
［ ］ 卫生部药政管理局0 中药新药研究指南 ［)］ 北京： 中华人民共 ! 0 和国卫生部药政管理局， ! T T / 0 ! # ( 0
.
对照组 京万红组 ( S三效愈创软膏组 / S三效愈创软膏组 ! " S三效愈创软膏组 ! ( S三效愈创软膏组 / S含挥发油三效愈创软膏组
& 0 / & 0 ’ & 0 ’ ! " " 0 " ! ! 0 ! " " 0 " ! ! 0 % ! " " 0 " ! ! 0 / ! " " 0 " ! ! 0 T ! 与京万红组相比， ， 其余 值为与对照组比较 ." " U " ( .
盐化局职工医院） 摘要： 目的 结果 艺较优。结论 筛选连翘制剂工艺。方法 液体两倍稀释法分别测定提取物的最低抑菌浓度 （) 和最低杀菌浓度 （) 。 * +） , &炎链球菌较敏感； 对大肠杆菌不太敏感； 对白色念珠菌不敏感。样品-和样品(的工 体外抗菌试验为筛选抗菌药物的有效途径之一。实验为连翘制剂的工艺研究提供了可靠的依据。 文献标识码： 3
表! 样品 ! $ # ) ( 表’ 样品 ! $ # ) ( ／ ） # 种供试液对四种菌株的 $ % & （+ + , 1 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 白色念珠菌 !3 " * * ! ) 2 " . # . " ! 3 !3 " * * # ) . " * 2 ( " 2 2 2 ( " 2 2 !( 3 " * * $ . ! " $ ! ( " 3 ! ( " 3 !) $ " * !! ) . " $ . # " ( # ) " ( * ! 2 " ) # ! ) . " $ ) " ( * 3 " * !! ) " * * !. * " * * ! 2 . " * $ # " ) # # . " * * ／ ） #种供试液对四种菌株的 $ ( & （+ + , 1 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 !3 " * * # ) . " * ) $ " * . # " ( # ! ) . " $ # . " * * 3 " * * # ) . " * ! ( " 3 3 " $ * ! 2 " ) ! 3 # " . . ) " # 2 2 ( " . ) ! ( " 3 ! 2 " ) ! ! 2 " ) ! # . " * * 白色念珠菌 !3 " * * !( 3 " * * !) $ " * !! ) . " $ !! ) . " $ !. * " * *
益智仁杜仲续断骨碎补
益智仁益智始载于《本草拾遗》，并指出："益智出昆仑及交趾国，今岭南州群往往有之。
"《图经本草》说："益智子似连翘子头未开者，苗叶花根与豆蔻无别，惟子小耳。
"《证类本草》载有雷州益智子，产地与现今益智相似。
李时珍引《南方草木状》说："益智二月花，连着实，五六月熟。
"作者对益智花果物候记载颇为确切。
综上所述，古代药材益智基本为一种，与现代药材益智相同。
【植物名】益智【药名】益智仁【别名】益智子、摘艼子【药材基源】为姜科植物益智的成熟果实。
【科属】姜科【性味】味辛；性温【归经】入心，脾；肾经【功效】温肾固精缩尿，温脾开胃摄痰【功效分类】补益药，摄痰药【主治】脾胃虚寒；呕吐；泄泻；腹中冷育；口多唾涎；肾虚遗尿；尿频；遗精；白浊，多唾液等症。
【用法用量】内服：煎汤，3-9g；或入丸、散。
【制成剂型】汤剂，丸剂，散剂[2]3功用编辑温补固摄，暖脾止泻,固唌摄唾，温肾固精缩尿，主治脾肾虚寒，腹痛腹泻；或肾气虚寒小便频数，遗尿，遗精，白浊；或脾胃虚寒所致的慢性泄泻及口中唾液外流而不能控制者。
用法用量内服：煎汤，3～9克；或人丸、散。
5现代研究编辑益智仁含挥发油、益智仁酮、维生素B1、维生素B2、维生素C、维生素E及多种氨基酸、脂肪酸等。
益智仁煎剂具有健胃、抗利尿、减少唾液分泌的作用。
其水提取物有抑制腹水型肉瘤S180。
细胞增长的作用。
其水提取物和乙醇提取物有抑制回肠收缩的作用。
此外，其甲醇提取物有增强左心房收缩力、抑制氯化钾引起的免主动脉收缩和抑制前列腺素合成酶的活性等作用。
6进补应用编辑1.脾虚多涎，口水自流，质地清稀益智仁、白术、党参、茯苓各9克，陈皮6克。
水煎服，每日1剂。
2.肾虚遗尿、尿频益智仁、乌药各等份。
研为细末，酒煎山药未为糊，制丸如梧桐子大。
每服9克，用淡盐汤或米饮送下，每日3次。
或用盐炒益智仁、盐炒补骨脂各60克。
共研为细末，分作6包，每天早晨以米汤泡服1包（成人加倍），6日为1个疗程。
连翘药理作用小议
清 丸等 为 代表 方 ； 果腿 部 肌 肉虽 然丰 腴 但 比较 如 柔 软 ， 乏 弹 性 及 光泽 ， 于 浮肿 者 ， 示 为黄 芪 缺 易 提 体 质 『］ 白术 体 质 ， 要 考 虑 使 用 黄 芪 桂 枝 五 物 ４、 就 汤 、 己黄 芪汤 等 ； 有 ， 归芍 药 散 证 的腿 证 也 防 还 当 多粗 ， 面色萎 黄 或浮肿 ， 但 常有 头痛 头 晕 、 悸 、 心 肌 肉痉 挛 跳 动 ， 痛 ， 便 不 成 形等 。肌 肉少 者 ， 腹 大 气 虚、 血虚 体质 多见 ， 常用 人参 、 当归等 。 ５ 腿部浮肿与否 下 肢浮 肿 也有 多种情 况 ， 伴精 神 萎靡 ， 寒 如 畏 肢冷， 脉沉 细 ， 舌胖 大苔 滑 ， 即大 家 常说 的“ 阳虚 水 泛 ”就 要 用 真武 汤 ； ， 如在 此 基 础 上 见 口渴 或 心 烦 者， 考虑 瓜蒌 瞿麦 丸 。如伴有 口渴 、 小便 不利 ， 容易 拉稀 者 ， 考虑 五苓 散 ［］３并 有 阴伤者 ， 猪 苓 等 ， 。１， ０ 加
参考文献
【 ］ 大冢敬节， １ 中医诊疗要 览【 ］唐 正有， 北京： 民卫生 出 Ｍ． 译． 人 版社， ９ ７ １． １ ５ ：４ ［ ］ 黄煌． ２ 黄煌经方使用 手册［ 】北京： Ｍ． 中国中医药出版社， ０ ０ ２ １．
［】 黄煌． ３ 中医十大类方［ ］３ 南京： ￣． 版． ｆ 江苏科技 出版社，００ ２１：
ａ ｔ ｉ ｆ ｍｍａ ｏ ｙ ａ ｄ ｅ ｈ ｎ ｉ ｇ ｉ ｎｉ ｎ ａ － ｌ ｔ ｒ ｎ ｎ ａ ｃｎ ｍｍｕ ｉ ｙａ ａｙ ｉｇ ａ ｄ ｓ ｍｍａ ｉｉ ｇ ｌ ｅ ａｕ ｅ ｎ ｔ ｂ ｎ ｌｚ ｎ ｎ ｙ ｕ ｒ ｎ ｔ ｒ ｔｒ ． ｚ ｉ
连翘主要有效成分的提取与药理作用
头的血液循环系统，出现微循环障碍，从而导致骨 细胞、骨髓间质细胞向成骨细胞分化能力下降，使 骨样组织形成减少，同时，骨吸收并没有相应减 少，骨小梁变细和消失，出现骨质疏松，导致股骨 头局部坏死、塌陷。人体髋关节面软骨摩擦系数很 小，股骨头承受主要压力。对缺血性坏死的股骨头 应力传递进行的有限元分析发现，坏死区中心部位 的应力水平明显降低，超过生理负荷会导致骨质断 裂、软骨面塌陷，软骨下骨板下面的缺血坏死区容 易引起股骨头塌陷∞１。
王霖娇等【１纠报道了一种连翘酯苷提取新工艺， 原料经乙醇冷浸、大孔树脂粗分离后过葡聚糖凝胶 柱和Ｃ１８中压柱精分离获得厂纯度达９８％的连翘酯苷 产品。高学敏等ｎ引采用回流提取，大孔树脂法分离 制备连翘酯苷，并通过正交试验法考察加醇量，回 流时间．回流次数、醉浓度４个因素，研究不同类型 大孔树脂对连翘酯苷收率的影响，得到了连翘酯苷 纯度为１８．３％～２２．５％的产品。上进东等一４１认为 Ｄ１０１型大孔树脂分离纯化连翘酯苷能显著提高连翘 酯苷的纯度，其最佳工艺为上样液浓度含连翘生药 １．２９／ｍｌ，用６ＢＶ的３０％乙醇液进行洗脱，二次洗脱 后，连翘酯苷的含量可达６０％以上。杨明等¨５１研究 显示Ｄ１０１型大孔树脂提取连翘酯苷的最佳吸附参数 为：药材树脂比ｌ：２、色谱柱径高比ｌ：８、药液浓度 为２倍稀释、上样时ＩＮｌ２ｈ。胡晨旭等。１６１研究显示ＡＢ 一８型大孔吸附树脂为分离纯化连翘酯苷Ａ的最佳大 孔吸附树脂，能显著提高连翘酯苷Ａ的质量分数，最 佳工艺为上样质量浓度为生药０．３９／ｍｌ（最大上样量 为树脂的２倍体积），洗脱剂为３０％乙醇（洗脱剂用 量为６倍量树脂柱体积）。吴昭晖等Ｈ¨研究了ＨＰＬＣ 制备连翘酯苷对照品的工艺，连翘药材经水提醇沉
化学研究［Ｊ】．中国骨伤．１９９９．１２（２）：１４—１７ 【２｝ 马在山．马氏中医治疗股骨头坏死【Ｍ】．北京：人民卫生出版
中药连翘药理作用的研究近况
中药连翘药理作用的研究近况连翘为中医常用的清热解毒药，现代药理研究表明，连翘具有广谱抗病原微生物作用、抗炎、解热、镇吐、利尿和等作用。
现对其最新研究进展进综述如下。
1 药源分布连翘分布于我国辽宁、河北、山东、江苏、山西、河南、湖北、四川、陕西、甘肃等省。
作为中药材，其主产于我国山西、河南、陕西、山东等地[1]。
2 药理作用2．1 抗菌作用：连翘为广谱抗菌药，对多种革兰阳性及阴性细菌有抑制作用。
如连翘果实煎剂对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、溶血性链球菌（甲型、乙型）、志贺氏痢疾杆菌、史氏痢疾杆菌、鼠疫杆菌、人型结核杆菌、伤寒杆菌、霍乱孤菌、副伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、白喉杆菌均有抑制作用。
青翘作用大于老翘。
连翘酚（forsythol）有抗菌作用。
苯乙醇苷类具有较强抗菌活性。
连翘酯苷对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌均有极强的抑制作用，体外试验发现连翘有很强的摧毁细菌内毒素作用，连翘挥发油对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、白色念珠菌有明显的抑制作用，连翘对结核杆菌也有抑制作用。
大量的试验已证实，咖啡酰糖苷类成份连翘酯苷、suspensaside、β-Hydroxyacteoside 和forsythoside B有很强的抗菌活性，并且是连翘煎剂抗菌的主要有效成分，连翘酯苷和suspensaside还能抗真菌[2]。
2．2 抗炎作用：大鼠巴豆油性肉芽囊实验证明，连翘醇提取物的水溶液腹腔注射有非常明显的抗渗出作用，能够降低炎性部位血管壁脆性作用而对炎性屏障的形成无抑制作用。
用32P标记红细胞实验也观察到其渗入已注射连翘提取物水溶液的大鼠，巴豆油性肉芽囊内的数量明显减少，表明连翘尚能促进炎性屏障的形成[3]。
2．3 解热作用：冯淑怡等[4]制备了小鼠三种细菌(绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡菌球菌)感染模型，观察动物的死亡数，计算死亡率；复制酵母致大鼠发热模型与内毒素致家兔发热模型，现察不同时间动物体温的变化。
连翘叶的化学成分、药理学与毒理学研究分析
连翘叶的化学成分、药理学与毒理学研究分析【摘要】连翘是我国传统药物之一，其枝叶、果实均有很高的药物价值。
在医疗中通常用于温热入营、高热烦渴等症状的治疗。
连翘叶作为药用价值较高的植物，其含有的化学成分能够很好的抗菌、保肝、抗氧化、防衰老。
连翘叶是当下医疗中常用的清热解毒药物，用药后能够有效缓解患者临床症状。
所以本文通过连翘叶的分析，以期能够为医疗事业提供可靠的参考数据。
【关键词】连翘叶化学成分药理学毒理学本文通过数据查询和文献的分析对连翘叶的化学成分、药理学以及毒理学进行分析，了解连翘叶的组成成分主要是由苷类、黄酮类、多糖类和有机酸等[1]。
其具有抗菌、抗衰老、降血糖等多种效用。
本文分析研究的主要目的是为了使得连翘叶进一步合理开发利用，实现药材资源的有效使用。
1 连翘叶的化学成分组成连翘叶中有着丰富的化学成分，例如连翘苷，连翘酯苷A，连翘酯苷F等。
通常采用乙醇提取法、超声辅助提取法对连翘叶中的化学成分进行提取，而在连翘叶化学成分的检测方面往往采用高效液相色谱法以（HPLC）及比色法。
分析发现连翘叶化学成分中主要有下述几种，首先就是苷类。
油盐据表明，连翘叶中苷的含量是连翘果实钟汉良的40倍左右。
王进明，范圣此，李安平等采用HPLC-MS/MS法（HPLC-MS/MS即为高效液相色谱法[2]，其通过Agilent Zorbax SB-C18为色谱柱，利用甲醇联合0.1.%磷酸溶液为流动相，检测波长为227nm，流速为1.0 ml/min，进样量为10 μl，柱温为30度）对连翘叶中连翘酯苷A和连翘苷进行了测定了连翘叶中的9种化学成分，其中最多的极为苷类物质。
其次就为黄酮类，高淑丽，刘丽华，张阳，等利用LC-MS/MS 法同时测定了连翘叶中四种成分，结果显示在连翘叶中粗黄酮占有的比率为8.35%[3]。
同时利用比色法在波长275nm出还测出黄铜总含量为69.2%，采用高效液相色谱法检测出连翘叶中黄酮类维生素芦丁的含量为22.28%，同时该项研究还对连翘叶与果实之间的化学成分进行比较，比对发现新叶中黄酮类含量为0.91%，老叶中含量则为0.35%，而被人们熟知的果实中，黄酮类含量仅占0.27%。
清热类中药防治感染性疾病的作用机理与应用
清热类中药防治感染性疾病的作用机理与应用陈开文【摘要】目的介绍清热类中药的化学成分、药理作用研究及临床应用.方法收集近10年有关文献报道.结果清热类中药具有清热泻火、解毒凉血、疏散风热等功效,在抗病原微生物、解热、抗炎、解毒、免疫调节等方面,均显示出较强的药理活性.结论清热类中药用于治疗瘟病发热、风热感冒、咽喉肿痛、肺炎、胃炎、带状疱疹等多种疾病有较好的疗效,为临床上广泛用于多种感染、各种炎症、高热症以及外感风热等病症,提供了理论依据.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2011(020)020【总页数】3页(P84-86)【关键词】清热类中药;感染性疾病;作用机理;应用【作者】陈开文【作者单位】重庆市涪陵中心医院,重庆,408000【正文语种】中文【中图分类】R285.6;R243热毒是感染性疾病发生、发展的重要原因之一。
祖国医学认为，凡以清解里热为主要作用的药物，称为清热药，其性质均属寒性或凉性，主要用于热症。
热症是疾病病理过程中的综合性反应之一。
清热类药物具有抗病原微生物、解热、抗炎、解毒、调节机体功能活动等，呈现广泛的药理作用。
现就其药理作用及临床应用分述如下。
1 药理作用1.1 抗病原体作用清热药对多种细菌、病毒、真菌、螺旋体、原虫等有不同程度的抑制作用。
体外试验研究表明，黄芩、黄连、大青叶、板蓝根、金银花、连翘等对多种革兰阳性菌和革兰阴性菌有抑制作用，黄连、黄柏对结核杆菌、钩端螺旋体有较好的抑制作用;苦参、龙胆草、金银花、连翘、青黛、鱼腥草等能抗多种皮肤真菌。
黄芩水煎液对铜绿假单胞菌生物膜的形成有抑制作用，为临床有效治疗细菌生物膜感染提供了理论基础[1]。
连翘中的异连翘酯苷和连翘酯苷均有较强的抑菌作用，尤其对金黄色葡萄球菌(SA)的抑制作用比四环素还强，是连翘中极有前景的植物抗菌活性成分[2]。
目前已知的抗菌有效成分有小檗碱(黄连、黄柏)、黄芩素、黄芩苷(黄芩)、绿原酸、异绿原酸(金银花)、秦皮乙素(秦皮)、苦参碱(苦参、山豆根)、连翘酯苷(连翘)、色胺酮(板蓝根、青黛)、葵酰乙醛(鱼腥草)等。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
连翘提取物对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响作者：尹乐乐, 曾耀英, 侯会娜【摘要】目的: 分析连翘(FS )对小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和体外NO释放的影响。
方法: 无菌收集小鼠腹腔巨噬细胞和羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA SE)标记大肠杆菌DH5α, 短期培养3 h后流式细胞术(FCM)分析FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响。
用LPS体外刺激活化腹腔巨噬细胞, Griess Reagent试剂盒检测并分析FS对巨噬细胞体外释放NO的影响。
结果: FCM分析显示, 终浓度为40、 80、 160 mg/L的FS对小鼠腹腔巨噬细胞体外吞噬具有明显的促进作用(P<0.05)。
不同终质量浓度的FS对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞体外NO的释放均有抑制作用(P<0.05)。
结论: FS可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬和抑制NO体外的释放。
【关键词】连翘提取物腹腔巨噬细胞吞噬 NO释放［Abstract］ AIM: To investigate the effect of forsythia suspensa (FS) extract on phagocytosis of peritoneal macrophages and NO production in vitro. METHODS: The peritoneal macrophagess were isolated from BALB/c mice. After stained with CFDA SE, the DH5α were co cultured with peritoneal macrophagess for 3 h. The effect of FS extract on cyto phagocytesis in vitro was analyzed by flow cytometry. The peritoneal macrophages were stimulated and activated by LPS in vitro. The effect of FS extract on NO production of the peritoneal macrophages in vitro was measured by NO assay kit. RESULTS: FCM analysis showed that FS extract significantly promoted the phagocytosis of peritoneal macrophages at the final concentration of 40, 80, 160 mg/L, respectively (P<0.05). It also decreased the production of NO at different concentration induced by LPS (P<0.05). CONCLUSION: FS extract can promote phagocytosis of peritoneal macrophages and inhibit NO production in vitro.［Keywords］forsythia suspensa extract;peritonealmacrophages;phagocytosis; NO production连翘(forsythia suspensa, FS)又名旱莲子、大翘子、落翘等, 为木犀科植物连翘的果实。
它作为传统中药广泛应用于对炎症、发热和溃疡等方面的［1］。
同时, FS的主要活性成分连翘苷在抗氧化、抗菌、抗病毒和解热抗炎等方面［2］也起着重要的作用。
本研究我们通过检测FS对小鼠腹腔内巨噬细胞体外吞噬和NO释放的影响, 进一步研究其免疫学效应。
1 材料和方法1.1 材料清洁级BALB/c近交系小鼠(雄性, 8～10周龄, 体质量20～22 g)购自广东省实验动物中心。
FS购自四川广汗市维康植化有限公司。
L谷氨酰胺、β巯基乙醇、刀豆蛋白A(concanavalin A, ConA)购自Sigma公司。
羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, CFDA SE)购自美国Molecular Probes 公司。
RPMI1640、胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)为美国GibcoBRL公司产品。
Griess Reagent试剂盒为美国Promega公司产品。
流式细胞仪(FACSCalibur)为美国Becton Dickinson公司产品。
1.2 方法2 结果2.1 FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬的影响表1结果显示, 仅对照组RPMI1640完全培养液和PBS组之间比较, 发现RPMI1640 悬浮的巨噬细胞吞噬率比对照组PBS表现较高。
对照组RPMI1640 完全培养液和(RPMI1640+FS)组比较, 各浓度FS组均可促进巨噬细胞吞噬率的增加, 具有统计学意义。
对照组PBS和(PBS+FS)组比较, 相同浓度FS组也可促进巨噬细胞吞噬率的增加, 具有统计学意义。
不同浓度FS间比较有一定的浓度梯度依赖性。
巨噬细胞体外吞噬的一次代表性实验结果(图1)。
表1 FS对腹腔巨噬细胞体外吞噬影响（略）Tab 1 Influence of FS on the phagocytosis of peritoneal macrophage in vitroaP<0.05 vs RPMI1640 co cultured group; cP<0.05 vs PBSco cultured group; FS: Forsythia suspensa extract.图1 腹腔巨噬细胞体外吞噬DH5α（略）Fig 1 Phagocytosis of peritoneal macrophage on DH5α in vitro2.2 FS对腹腔巨噬细胞体外NO释放的影响表2结果显示, 单纯RPMI1640完全培养液组为阴性对照组。
不同终质量浓度的单纯FS组均可抑制巨噬细胞体外NO释放, 且随着药物浓度的升高其抑制NO释放的程度越高, 具有统计学意义。
LPS组为阳性对照组, 它的NO释放结果为(0.36±0.01)μmol/L。
在(LPS+FS)组中, FS也可抑制LPS诱导刺激巨噬细胞体外NO释放, 不同浓度间也随着药物浓度的升高其抑制NO释放的程度越高, 具有统计学意义。
与单纯FS组作用趋势呈一致性。
巨噬细胞体外吞噬的统计学实验结果见图2。
[1]图2 FS对腹腔巨噬细胞体外NO释放影响（略）Fig 2 Influence of FS on NO production of peritoneal macrophage in vitroaP<0.05 vs control group; cP<0.05 vs LPS stimulation group; FS40, FS80, FS160: FS concentration of 40, 80, 160 mg/L, respectively.表2 FS对腹腔巨噬细胞体外NO释放影响（略）Tab 2 Influence of FS on NO production of peritoneal macrophage in vitroaP<0.05 vs control; cP<0.05 vs LPS stimulation group; FS: Forsythia suspensa extract.3 讨论腹腔中的巨噬细胞主要是通过引起和调节局部细胞介导的免疫反应来调节和维持腹腔环境的稳定, 是一种十分重要的免疫辅助细胞。
它在细胞膜上表达MHC I/II类分子和多种黏附分子以及IgG Fc受体(FcγR)、 C3b受体(CRI)和多种细胞因子受体。
在与多种病原微生物识别与结合过程中, 可以高表达I A 抗原和分泌较高水平L10, 通过受体与病原体等抗原异物结合经吞噬或吞饮作用, 主动吞噬、杀伤和消化病原微生物等抗原性物质。
本实验我们采用新的方法, 用CFDA SE标记DH5α在体外被小鼠腹腔巨噬细胞吞噬, 间接证实了FS可促进小鼠腹腔巨噬细胞的体外吞噬。
不同浓度的FS对其吞噬影响呈一定的梯度表现, 与对照相比均有统计学意义。
我们推测FS 可能通过与腹腔巨噬细胞表面的受体间的特异性结合而促进了巨噬细胞的吞噬功能; 或者也可能对作为抗原的大肠杆菌DH5α的受体Fc段存在一定的调理作用, 从而协同促进了腹腔巨噬细胞识别、结合并吞噬的过程。
腹腔巨噬细胞的NO释放是由LPS协同INFγ、 TNFα等细胞因子作用刺激诱导诱导型一氧化氮合酶(iNOS)所达成的［4］。
我们已知NO作为体内重要的生物活性物质, 可以兼具细胞间、细胞内信使以及神经递质作用的信号分子。
它是由血管及机体许多其他组织类型的细胞合成, 以自分泌或旁分泌作用参与正常生理过程和某些疾病的发生, 如血管扩张、血管通透性、血小板黏附和聚集、神经信号转导、宿主防御反应等等。
此外, 在免疫学上NO也具有重要的意义。
它作为机体非特异性免疫系统的组成部分之一, 起着免疫效应分子和免疫调节剂的作用, 可以杀伤细菌、病毒和肿瘤细胞。
但是, NO过量可对宿主细胞产生细胞毒性作用, 损害宿主细胞活性和导致基因突变, 如NO过量可诱发肿瘤, 有研究发现肿瘤的发生和发展与血液NO的浓度可呈正相关［5］。
此外, 临床上NO过量还常表现在的休克和哮喘等［6］。
已知LPS诱导激活巨噬细胞一般是沿2条道路进行启动信号转导途径: 一是LPS与靶细胞膜相应受体作用并启动胞内信号转导途径; 二是LPS作用细胞后, 核内基因表达的变化及其上游信号分子的确定［6］。
研究表明LPS的刺激可激活或增强通路MAPK家族(ERK1/2, JNK1/2以及p38MAPK)的磷酸化, 同时还可促进巨噬细胞分泌释放PGE2使之与其细胞表面G蛋白偶联的受体结合激活腺苷酸环化酶, 导致cAMP 释放增加及PKA的活化［7］。
本试验结果表明FS对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞体外NO释放有抑制作用。
低浓度FS(40 mg/L)即可抑制腹腔巨噬细胞NO的体外释放, 且各浓度梯度FS与对照组比较均有统计学意义。
由此我们推测FS抑制小鼠腹腔巨噬细胞体外释放NO的原因在于FS可能参与和影响了LPS诱导的某些通路的表达。
表明FS可以抑制cAMP磷酸二酯酶的活性并在一定程度上能够降低胞内cAMP的含量［8］; 它还可以抑制p38MAPK的活化、阻断NFκB途径作用以及抑制iNOS蛋白和mRNA的表达［9］, 这些均为FS抑制腹腔巨噬细胞体外释放NO提供了理论依据。