盐酸艾司洛尔注射液中杂质的分离、合成与结构鉴定
盐酸艾司洛尔及其制剂杂质检测技术和安全性探究
盐酸艾司洛尔及其制剂杂质检测技术和安全性探究【摘要】当前，随着人们生活节奏的不断加快，人们的生活压力也就逐渐增加，加之物质生活异常丰富，使人们的生活规律发生了紊乱，从而诱发了各种疾病的发生，严重影响着人们的身体健康，威胁着人们的生命财产安全。
在这其中心血管疾病一直是威胁人类的一大杀手，其发病率呈逐年上升趋势，患者的年龄也趋于年轻化，在此环境下，如何能够有效的治愈心血管疾病一直是医学科研工作者的重点课题。
盐酸艾司洛尔就是一种治疗心血管疾病的特效药物，它具有疗效确切、见效快速、消除率高、没有蓄积作用等优点被广泛应用于临床治疗当中，基于此本文将对盐酸艾司洛尔及其制剂杂质检测技术和安全性进行探究，希望能为心血管疾病的治疗提供帮助。
【关键词】盐酸艾司洛尔；制剂杂质检测；检测技术；安全性现如今，由于人们的不健康饮食，抽烟、酗酒等不良习惯导致了心脏血管疾病发病率的增加，据不完全统计，心脑血管疾病每年将会导致全世界大约1500万人的死亡，在各种致死原因中位列第一，即便该病没有导致患者的死亡，也拥有超高的致残率，使病人的生活不能自理，足以见得心血管疾病的可怕之处。
盐酸艾司洛尔是临床上用于针对性治疗心血管疾病中室上性心动过速的药物，其治疗机理是药效作用于人类心肌的肾上腺受体，从而降低人类运动产生的心跳速度，以达到治疗的目的。
其疗效与副作用与制剂中杂质的含量有着直接的关系，为了使盐酸艾司洛尔能够取得更好的治疗效果，提高其使用安全性，对该药及其制剂杂质检测技术和安全性进行探究就十分的必要。
1盐酸艾司洛尔的临床应用和不良反应盐酸艾司洛尔在临床上治疗由异丙肾上腺素引起的心率加快有出色的表现，现阶段在临床上主要用于以下几方面的治疗：（1）用于预防患者进行气管插管引起的心血管反应。
在患者进行气管插管或拔管时，由于人体的应激性会导致患者血压的升高和心跳速度的加快，使用盐酸艾司洛尔会降低病人术后的血压、心率、NE浓度、等各项指标达到预防病人心血管反应的目的。
HPLC法测定盐酸艾司洛尔注射液含量的改进分析
HPLC法测定盐酸艾司洛尔注射液含量的改进分析【摘要】目的：对盐酸艾司洛尔注射液含量进行测定，测定时采用的方法为HPLC法。
方法：在对盐酸艾司洛尔注射液的含量进行测定时，采用的测量方法为HPLC法，色谱柱为WelchXltimateC18柱，流动相为乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液，缓冲液的比例为65:20:15，在对盐酸艾司洛尔注射液的含量进行测量时，进样体积为20μl，波长为222nm，缓冲液的流速为1．0ml·min－1，浓度和峰面积的线性状态良好，实验的回收率为101.2%。
结论：采用HPLC法对盐酸艾司洛尔注射液的含量进行测量，具有专属性非常强、简便、快捷的特点，相较于现在采用药物的真实水平而言，HPLC法更适用于对盐酸艾司洛尔注射液的含量进行测量。
【关键词】盐酸艾司洛尔注射液；含量测定；HPLC法盐酸艾司洛尔注射液主要用来治疗心房颤动、老年人心房扑动、高血压等症状，是由美国百特公司研发的短期药物，能够有选择的对β1受体进行阻断，广泛用于临床治病治疗过程中，能够有效患者的运动心率，减缓患者出现的静息等症状，患者服药后不良反应非常轻微，并且这些不良反应本身具有一过性的特点，患者常见的不良反应症状为低血压。
1仪器与试药戴安DionexUltimate3000高效液相色谱仪，包括DIONEXDAD检测器(美国戴安公司);LC-10A高效液相色谱仪，包括SPD-10紫外检测器(日本岛津公司);XS205DU电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。
盐酸艾司洛尔对照品(中国食品药品检定研究院，批号:100749-200501，纯度:100%);甲醇和乙腈为色谱纯;其余试剂均为分析纯;水为超纯水;盐酸艾司洛尔注射液分别由3家企业提供，涉及3种规格:10ml∶0．1g(51批，68．0%)、2ml∶0．2g(22批，29．3%)、1ml∶0．1g(2批，2．7%)。
2方法与结果2．1现行标准含量测定项存在的问题检验中发现，在“新药转正42册”色谱条件下，杂质峰与内标峰未完全分离;在“YBH12282005”色谱条件下，溶剂峰干扰主峰测定。
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限度实验：至少应关注和验证专属性、检测限、耐用性
充分的方法验证
专属性研究
原料药合成中间体、粗品等的分离度考察 原料药及其制剂的强制破坏实验 制剂的辅料干扰实验 杂质加入实验 和药典方法或经论证的其它方法进行比较 峰纯度检查（二极管阵列检测、质谱检测）
前提：被仿品的杂质已得到充分研究，安全性已得到
论证
仿制药杂质研究的特点
杂质对比研究结果分析
杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，无超过鉴定 限度的新杂质；各杂质含量不超过被仿品
——试制品的杂质控制达到了研究目标 杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，无超过鉴定
限度的新杂质；但已知杂质含量超过了被仿品 ——改进工艺，降低杂质含量
..\..\化学药品指导原则\化学药物杂质研究技术指导原则.pdf
例：盐酸帕罗西汀
F
O
O
N , HCl , 1/2H2O
O
EP、USP收载，列出7个已知杂质A-G
HPLC法：控制杂质A（去氟物）0.3％，其它单一杂 质0.1%，总杂质不得过0.5％
手性HPLC控制杂质D（对映异构体）不得过0.2％
以EP标准中的检验方法及限度为参考依据，进行必要的方法 验证
试制样品杂质检查结果符合EP标准要求，无超过鉴定限度的 其它杂质——达到研究目标
若杂质谱与EP标准一致，但杂质量超过限度要求——完善工 艺（精制：优化工艺参数；控制起始原料及中间体质量）
出现超过鉴定限度（0.1％）的新杂质——鉴定结构，分析原 因，修改完善工艺，降低杂质量至0.1％以下。
HPLC法实验结果
杂质达7％以上
方法的比较研究显示，TLC法不适于本品的有关物质检查
盐酸艾司洛尔注射剂有关物质检查方法和限度
审评四部审评七室赵慧玲摘要本文对现阶段盐酸艾司洛尔注射剂有关物质检查方法和限度制定的现状及审评中存在的问题进行分析讨论，提出了一些建议。
关键词盐酸艾司洛尔注射剂；稳定性；有关物质；方法学验证；限度盐酸艾司洛尔是一种选择性肾上腺受体（心肌选择性）阻滞剂，适用于需要短期控制的室上性心动过速，手术中和手术后的心动过速和高血压。
盐酸艾司洛尔注射液在美国1986年12月已由FDA批准百特医疗用品公司产品上市。
到目前为止尚无进口产品。
国内在1996年批准齐鲁制药厂和山东省医药工业研究所制药厂的本品新药上市，质量标准于2003年转正。
在审评本品时发现：各申办人所提供的稳定性研究的结果不一致，部分品种在放置过程中无降解产物，故制定标准中未定入有关物质检查项；部分申办人的研究结果证明降解产物略有变化，故将此项检查订入质量标准，限度为1.0％或1.5％。
后续审评中发现申办人经HPLC方法研究、质量和稳定性对比，其有关物质质量达不到已批准上市的药品1.5％限度，分别要求限度放宽到2.0％、3.0％、4.0％或6.0％等。
由于杂质的检查方法和限度制定直接关系到药品质量与安全性，我们对盐酸艾司洛尔注射剂有关物质检查方法和限度制定进行了回顾分析。
1 质量标准回顾1.1 原料药的质量标准由于历史原因，原料药的质量标准中，有关物质检查采用TLC方法，用于检查合成过程的工艺杂质及降解产物。
1.2 制剂的质量标准由于含量测定采用HPLC法，原料药控制了有关物质检查，制剂未定有关物质检查项，显然认为此制剂稳定，没有必要将有关物质检查项定入标准。
1.3 标准中存在的问题本品化合物结构主要为苯丙酸甲酯，酯类药物易水解，其在水溶液中不稳定，理论分析降解产物为苯丙酸和甲醇等。
有文献报道，本品小水针的剂型采用最终灭菌后并不稳定，放置24个月后水解，降解产物可达8%。
由于历史原因未对其降解产物进行深入研究，造成我国批准的转正质量标准较低。
1.3.1 分析方法不当分析研究结果存在较大差距的原因，可能是分析方法不一致，而导致在稳定性研究时未能检测出肯定会产生的降解产物。
HPLC法测定盐酸丁咯地尔注射液中的杂质及含量
HPLC法测定盐酸丁咯地尔注射液中的杂质及含量冯继承;于芳【摘要】目的:建立HPLC法测定盐酸丁咯地尔注射液的含量及杂质.方法:用C18烷基硅烷键合硅胶为填充剂;CH3OH-H2O-CH3COOH-(C2H5)3N(250:300:0.8:1.0)为流动相;检测波长为282nm.按盐酸丁咯地尔峰计算理论塔板数,理论塔板数应不低于2000.结果:盐酸丁咯地尔注射液溶液稳定性RSD 为0.4％(n=6);重复性试验RSD为0.6％(n=6);回收率为99.3％,0.74％(n=3)最低检测限为0.005μg/ml.结论:该方法对于盐酸丁咯地尔注射液的含量及杂质具有专属性好,简捷、快速,灵敏度高,重现性好的优点.【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2018(031)001【总页数】4页(P4-7)【关键词】盐酸丁咯地尔注射液;HPLC法;含量及杂质检测【作者】冯继承;于芳【作者单位】黑龙江省食品药品审核查验中心哈尔滨150076;黑龙江迪龙制药有限公司哈尔滨150070【正文语种】中文【中图分类】R927.2盐酸丁咯地尔[1]（Buflomedil hydrochloride），化学名称为：4-（1-吡咯烷基）-1-（2.4.6.一三甲氧基苯基）-1-丁酮盐酸盐，为α肾上腺素受体拮抗剂。
主要用于外周血管疾病（间歇性跛行、雷诺综合症，Burger综合征、血管性痉挛）和血管疾病（血管性痴呆），慢性脑血管供血不足引起的症状:眩晕、耳鸣、智力减退、记忆力或注意力消退、定向障碍等。
1 仪器与试药1.1 仪器日本某高效液相色谱仪，检测器：SPD-10A。
1.2 试药盐酸丁咯地尔注射液[2]由黑龙江某制药有限公司提供；盐酸丁咯地尔含量测定对照品由中国生物制品检定所提供；甲醇、冰醋酸、三乙胺、苯甲酸等均为分析纯。
2 色谱条件与系统适用性试验[3-4]2.1 色谱柱用以C18烷基硅烷键合硅胶为填充。
2.2 流动相2.3检测波长为282nm，盐酸丁咯地尔峰计算理论板数按应不低于2000，主峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
艾司洛尔盐酸艾司洛尔注射液说明书
盐酸艾司洛尔注射液说明书-国家食品药品监督管理局【药品名称】盐酸艾司洛尔注射液【英文名】Esmolol Hydrochloride Injection【汉语拼音】Yansuan Aisiluo'er Zhusheye【主要成分】主要成份及化学名称：4-（3-异丙氨基-2-羟基丙氧基）苯丙酸甲酯盐酸盐【结构式】【分子式】C 16H25NO4·HCl【分子量】331.84【性状】本品为无色或带黄色的澄明液体。
【药理、毒理】1.药理作用盐酸艾司洛尔注射液是一快速起效的作用时间短的选择性的β1肾上腺素受体阻滞剂。
其主要作用于心肌的β1肾上腺素受体，大剂量时对气管和血管平滑肌的β2肾上腺素受体也有阻滞作用。
在治疗剂量无内在拟交感作用或膜稳定作用。
它可降低正常人运动及静息时的心率，对抗异丙肾上腺素引起的心率增快。
其降血压作用与β肾上腺素受体阻滞程度呈相关性。
静脉注射停止后10~20分钟β肾上腺素受体阻滞作用即基本消失。
电生理研究提示盐酸艾司洛尔注射液具有典型的β-肾上腺素受体阻滞剂作用：降低心率，降低窦房结自律性，延长窦房结恢复时间，延长窦性心律及房性心律时的AH间期，延长前向的文式传导周期。
放射性核素心血池造影提示:在0.2mg/kg/min的剂量下，本品可降低静息态心率、收缩压、心率血压乘积、左右心室射血分数和心脏指数,其效果与静脉注射4mg普耐洛尔(心得安)相似。
运动状态下，盐酸艾司洛尔注射液与心得安相似，均可减慢心率，降低心率血压乘积和心脏指数，但对收缩压的降低作用更明显。
心血管造影提示：在0.3mg/kg/min的剂量下，本品除引起上述作用，还可引起左室舒张末压和肺动脉楔压的轻度升高，停药30分钟后血液动力学参数即完全恢复。
2.致癌、致突变和生殖毒性由于盐酸艾司洛尔注射液的超短期使用方法，尚无其致癌、致突变和影响生殖的研究结果。
【药代动力学】本品在体内代谢迅速，主要受红细胞胞浆中的酯酶作用，使其酯键水解而代谢。
盐酸艾司洛尔注射液说明书
盐酸艾司洛尔注射液说明书【药品名称】通用名:盐酸艾司洛尔注射液英文名:Esmolol Hydrochloride Injection汉语拼音:Yansua Aisiluo'er Zhusheye主要成份及化学名称:4-(3-异丙氨基-2-羟基丙氧基)苯丙酸甲酯盐酸盐分子式:C16H25NO4·HCl 分子量:331.84【性状】本品为无色或带黄色的澄明液体【药理毒理】1.药理作用盐酸艾司洛尔注射液是一快速起效的作用时间短的选择性的β1肾上腺素受体阻滞剂.其主要作用于心肌的β1肾上腺素受体,大剂量时对气管和血管平滑肌的β2肾上腺素受体也有阻滞作用.在治疗剂量无内在拟交感作用或膜稳定作用.它可降低正常人运动及静息时的心率,对抗异丙肾上腺素引起的心率增快.其降血压作用与β肾上腺素受体阻滞程度呈相关性.静脉注射停止后10～20分钟β肾上腺素受体阻滞作用即基本消失电生理研究提示盐酸艾司洛尔注射液具有典型的β-肾上腺素受体阻滞剂作用:降低心率,降低窦房结自律性,延长窦房结恢复时间,延长窦性心律及房性心律时的AH间期,延长前向的文式传导周期放射性核素心血池造影提示:在0.2mg/kg/min的剂量下,本品可降低静息态心率、收缩压、心率血压乘积、左右心室射血分数和心脏指数,其效果与静脉注射4mg普耐洛尔(心得安)相似.运动状态下,盐酸艾司洛尔注射液与心得安相似,均可减慢心率,降低心率血压乘积和心脏指数,但对收缩压的降低作用更明显.心血管造影提示:在0.3mg/kg/min的剂量下,本品除引起上述作用,还可引起左室舒张末压和肺动脉楔压的轻度升高,停药30分钟后血液动力学参数即完全恢复2.致癌、致突变和生殖毒性由于盐酸艾司洛尔注射液的超短期使用方法,尚无其致癌、致突变和影响生殖的研究结果【药代动力学】本品在体内代谢迅速,主要受红细胞胞浆中的酯酶作用,使其酯键水解而代谢.其在人体的总清除率约20L/kg/hr,大于心输出量,所以本品的代谢不受代谢组织(如肝、肾)的血流量影响.本品的分布半衰期(t1/2a)约2分钟,消除半衰期(t1/2b)约9分钟.经适当的负荷量,继以0.05～0.3mg/kg/min的剂量静点,本品于5分钟内即可达到稳态血药浓度(如不用负荷量,则需30分钟达稳态血药浓度).超过上述剂量,稳态血药水平呈线性增长,但清除与剂量无关.本品半衰期短,通过持续静脉点滴可维持稳态血药浓度,改变静脉点滴速度可很快改变血药浓度本品在体内代谢为酸性代谢产物和甲醇,其酸性代谢产物在动物体内的活性仅为原形药物的1/1500,所以在正常人体内无β肾上腺素受体阻滞作用.在用药后24小时内,约73～88%的药物以酸性代谢产物形式由尿排出,仅2%以原形由尿排出.酸性代谢产物消除半衰期(t1/2b)约3.7小时,肾病患者则约为正常的10倍.本品约55%与血浆蛋白结合,其酸性代谢产物10%血浆蛋白结合【适应症】1. 用于心房颤动、心房扑动时控制心室率2.围手术期高血压3.窦性心动过速【用法和用量】1.控制心房颤动、心房扑动时心室率成人先静脉注射负荷量:0.5mg/kg/min, 约1分钟,随后静脉点滴维持量:自0.05mg/kg/min开始,4分钟后若疗效理想则继续维持,若疗效不佳可重复给予负荷量并将维持量以0.05mg/kg/min的幅度递增.维持量最大可加至0.3mg/kg/min,但0.2mg/kg/min以上的剂量未显示能带来明显的好处2.围手术期高血压或心动过速(1)即刻控制剂量为: 1mg/kg 30秒内静注,继续予0.15mg/kg/min静点,最大维持量为0.3mg/kg/min(2)逐渐控制剂量同室上性心动过速治疗(3)治疗高血压的用量通常较治疗心律失常用量大【不良反应】大多数不良反应为轻度、一过性.最重要的不良反应是低血压.有报道使用艾司洛尔单纯控制心室率发生死亡1. 发生率>1%的不良反应:注射时低血压(63%),停止用药后持续低血压(80%),无症状性低血压(25%),症状性低血压(出汗、眩晕)(12%),出汗伴低血压(10%),注射部位反应包括炎症和不耐受(8%),恶心(7%),眩晕(3%),嗜睡(3%)2. 发生率为1%的不良反应:外周缺血,神志不清,头痛,易激惹,乏力,呕吐3. 发生率<1%的不良反应:偏瘫,无力,抑郁,思维异常,焦虑,食欲缺乏,轻度头痛,癫痫发作,气管痉挛,打鼾,呼吸困难,鼻充血,干罗音,湿罗音, 消化不良,便秘,口干,腹部不适,味觉倒错,注射部位水肿、红斑、皮肤褪色、烧灼感,血栓性静脉炎和外渗性皮肤坏死,尿潴留,语言障碍,视觉异常,肩胛中部疼痛,寒战,发热【禁忌】1.支气管哮喘或有支气管哮喘病史2.严重慢性阻塞性肺病3.窦性心动过缓4.二至三度房室传导阻滞5.难治性心功能不全6.心源性休克7.对本品过敏者【注意事项】1.高浓度给药(>10mg/ml)会造成严重的静脉反应,包括血栓性静脉炎,20mg/ml的浓度在血管外可造成严重的局部反应,甚至坏死,故应尽量经大静脉给药2.本品酸性代谢产物经肾消除,半衰期(t1/2b)约3.7小时,肾病患者则约为正常的10倍,故肾衰患者使用本品需注意监测3.糖尿病患者应用时应小心,因本品可掩盖低血糖反应4.支气管哮喘患者应慎用5.用药期间需监测血压、心率、心功能变化【孕妇及哺乳期妇女用药】曾做过本品对大白鼠的致畸研究,给予3mg/kg/min的剂量静脉点滴,每天持续30分钟,未发现对孕鼠、胎鼠的毒性及致畸作用.但10mg/kg/min的剂量对孕鼠产生毒性,并致死.对兔子的致畸研究发现,给予1mg/kg/min的剂量静脉点滴,每天持续30分钟,未发现对孕鼠、胎鼠的毒性及致畸作用.但2.5mg/kg/min的剂量对孕兔产生毒性,并致胎兔死亡率增加.尚无合适的人类的有关此问题的研究.尚不知本品是否经乳汁分泌,哺乳期妇女应慎用【儿童用药】本品在小儿应用未经充分研究【老年患者用药】本品在老年人应用未经充分研究.但老年人对降压、降心率作用敏感,肾功能较差,应用本品时需慎重【药物相互作用】1.与交感神经节阻断剂合用,会有协同作用,应防止发生低血压、心动过缓、晕厥2.与华法令合用,本品的血药浓度似会升高,但临床意义不大3.与地高辛合用时,地高辛血药浓度可升高10%-20%4.与吗啡合用时,本品的稳态血药浓度会升高46%5.与琥珀胆碱合用可延长琥珀胆碱的神经肌肉阻滞作用5～8分钟6.本品会降低肾上腺素的药效7.本品与异搏定合用于心功能不良患者会导致心脏停搏【药物过量】一次用量达12-50mg/kg 即可致命.药物过量时会出现心脏停搏、心动过缓、低血压、电机械分离、意识丧失.本品半衰期短,故首先应立即停药,观察临床效果.心动过缓可给予阿托品静推；哮喘可予b2受体激动剂或茶碱类治疗；心功能不全患者可予利尿剂及洋地黄类治疗；休克者可予多巴胺、多巴酚丁胺、异丙肾上腺素、氨力农等治疗【规格】1ml:100mg【贮藏】遮光,密封保存。
盐酸艾司洛尔
盐酸艾司洛尔中国药典2015年版【含量测定】取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸去氣羟嗪0.lg)，置100m l量瓶中，加0.l m ol/L盐酸溶液适量，振摇使盐酸去氣羟嗪溶解并用0.l m ol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2m l,置100m丨量瓶中，用0.l m ol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在224n m的波长处测定吸光度；另取盐酸去氣羟嗪对照品，精密称定，加0.l m ol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每l m l中约含20M g的溶液，同法测定，计算，即得。
【类别】同盐酸去氣羟嗪。
【规格】（l)25mg (2)50mg【贮藏】遮光，密封保存。
盐酸艾司洛尔Yansuan Aisiluo’erEsmolol HydrochlorideC16H Z5N04•HCl331.84本品为4-[2-羟基-3-(异丙氨基)丙氧基]苯基丙酸甲酯盐酸盐。
按干燥品计算，含C16H Z5N04•H C l不得少于98.5%。
【性状】本品为白色或类白色结晶性粉末；无臭。
本品在水中极易溶解，在乙醇或三氯甲烷中易溶，在乙酸乙酯中极微溶解。
熔点本品的熔点（通则0612)为85〜92°C(测定时，每分钟上升的温度为0.5°C)。
【鉴别】（1)取本品约0.3g，加水l m l溶解后，加盐酸羟胺试液2m l与28%氢氧化钾乙醇溶液1m l，加热至沸，放冷，加稀盐酸使成酸性，滴加三氣化铁试液，溶液即显紫红色。
(2)取本品，加水溶解并稀释制成每l m l中约含0.l m g的溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401)测定，在222m n与274n m的波长处有最大吸收，在245n m的波长处有最小吸收。
(3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集635图）一致。
(4)本品的水溶液显氯化物鉴别（1)的反应（通则0301)。