菌株生理生化鉴定实验方法
菌株鉴定方法
菌株鉴定方法《菌株鉴定方法，宝子们看过来！》宝子们，今天我就像打开宝藏盒子一样，把菌株鉴定方法分享给你们。
这就好比我们在一个超级大的微生物世界里，要准确地找出每个菌株这个独特的小居民的身份，是不是很神奇又很有挑战性呢？首先呢，我们得收集菌株样本。
这就像是我们要找一个神秘人的时候，先得找到他可能在的地方，然后把他“抓”过来。
你可以从各种环境里收集，像土壤啦、水啦、甚至是那些有点奇怪但又很有趣的地方，比如腐烂的树叶堆里。
不过在这个过程中，一定要小心哦，就像你在森林里采蘑菇，有些是能吃的好蘑菇（有用的菌株），有些可是毒蘑菇（其他干扰的微生物）。
你得用合适的工具，像无菌的采样棒之类的，把菌株取出来，然后放到无菌的容器里，这就相当于给这个菌株安排了一个单独的小房间，不让其他乱七八糟的东西影响它。
接下来就是培养菌株啦。
这一步就像是在养小宠物一样，要给菌株创造一个舒适的家。
我们得选择合适的培养基，这培养基就像是小宠物的食物和住所合二为一的东西。
不同的菌株喜欢不同的“食物”和“环境”，有的喜欢甜一点（富含糖类的培养基），有的喜欢咸一点（含特定盐分的培养基），所以要根据你初步判断或者你想鉴定的目标菌株类型来选择培养基。
把菌株放到培养基里后，要把它放到合适的温度、湿度和光照条件下（如果需要的话）。
我之前就闹过一个笑话，我以为所有的菌株都喜欢温暖的环境，就把一个应该放在低温环境培养的菌株放到了很暖和的地方，结果就像把北极熊放到了热带，那菌株根本就长不好，还差点把我这个鉴定计划搞砸了。
等菌株在培养基里长了一段时间，我们就可以开始观察它的形态特征了。
这时候就像是我们看一个人的外貌一样。
你可以用显微镜这个超级放大镜来观察。
看看菌株的形状，是像小球球（球菌），还是像小棒棒（杆菌），或者是弯弯曲曲的像小蚯蚓（螺旋菌）。
除了形状，还要看它的颜色、大小，有没有特殊的结构，比如说有没有芽孢，芽孢就像是菌株给自己穿的一件超级防护服，在恶劣环境下能保护自己。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。
固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）加上碘液染色1分钟，水洗。
（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
②玻片通过火焰温度不能太高。
③碘液变透明，则不能使用。
④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。
细菌的生理生化实验
1 目的1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法2 原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物的特性，这种差异就表现的更加明显。
不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具有不同的酶系统。
即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料3.1 菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种3.2 培养基葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3 试剂40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验5 步骤(一) 糖类发酵试验1 目的了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．2 原理可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。
是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料3.2菌种大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种3.３培养基葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管４流程发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录5 步骤5.1 试管标记图9-1 糖发酵产气取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各Ａ不产气；Ｂ产气4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白对照。
土壤菌株筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。
2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。
3. 筛选具有特定生理功能的菌株。
二、实验原理土壤中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。
通过选择合适的培养基和分离方法，可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。
本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法，对土壤样品进行分离纯化，并对筛选出的菌株进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的土壤样品，用无菌水进行稀释，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。
2. 分离纯化：（1）平板划线法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用接种环进行划线分离，培养24小时后观察菌落形态。
（2）涂布分离法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃棒轻轻涂布，培养24小时后观察菌落形态。
3. 菌落鉴定：（1）形态特征观察：观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征，记录下来。
（2）生理生化试验：对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等，以确定菌株的属种。
4. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，对筛选出的菌株进行鉴定，并统计不同生理功能菌株的筛选数量。
五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察：在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到不同形态的菌落，如圆形、卵圆形、长条形等，颜色有白色、黄色、红色等。
2. 生理生化试验结果：（1）革兰氏染色：部分菌株为革兰氏阳性菌，部分菌株为革兰氏阴性菌。
（2）氧化酶试验：部分菌株产生氧化酶，部分菌株不产生氧化酶。
（3）过氧化氢酶试验：部分菌株产生过氧化氢酶，部分菌株不产生过氧化氢酶。
3. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，筛选出以下具有特定生理功能的菌株：（1）革兰氏阳性菌：可能为葡萄球菌、链球菌等。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。
其代谢产物也不同。
例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。
酸的生成可通过指示剂来确定。
在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。
气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。
（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。
此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。
因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。
如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。
因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。
（4）大分子代谢的实验。
靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。
它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定1.引言土壤微生物是土壤生态系统中极为重要的组成部分，对土壤有机质降解、养分转化、生物防治等方面具有重要作用。
其中一些微生物能够分解有机磷和溶解钾，从而提高土壤养分利用效率。
本文旨在分离筛选出一株在土壤中具有有效溶解磷和解钾功能的细菌，并对其进行初步鉴定。
2.方法与材料2.1 样品来源本实验所用的土壤样品来源于田间收集的耕地表层土壤。
2.2 分离筛选条件分离筛选出溶磷解钾菌的培养基配方：蛋白胨10g/L、葡萄糖5g/L、Ca3(PO4)26.0g/L、KCl 15.0g/L、琼脂15.0g/L、pH7.0；分离培养温度：30℃；分离培养时间：3-7天。
2.3 鉴定方法3.1 16S rDNA序列分析：利用PCR技术提取细菌DNA，然后进行16S rDNA基因扩增，并对扩增产物进行测序，最后利用生物信息学分析对其进行鉴定。
3.2 生理生化特性测定：包括对细菌的生长温度范围、pH范围、盐胁迫耐受能力等生理生化特性进行测定。
3.结果与讨论根据以上方法，我们成功分离到一株在土壤中具有溶解磷和解钾功能的细菌，经过鉴定和特性测定，得到如下结果：3.1 经16S rDNA序列分析，鉴定出该菌株为一株假单胞菌属(Pseudomonas)细菌。
经与GenBank数据库比对，该细菌的16S rDNA序列与Pseudomonas属中已知细菌的序列高度相似，确认了该菌株的分类地位。
3.2 该菌株的生理生化特性测定结果显示，其最适生长温度为30℃，pH范围为6.0-8.0，对较高盐浓度也具有一定的耐受能力。
4.结论本研究成功分离出一株溶磷解钾的Pseudomonas属细菌，并对其进行了初步的鉴定与特性测定。
该菌株的分离与鉴定为今后在土壤改良和养分利用方面提供了极为重要的资源基础。
对该菌株的深入研究还将有助于揭示其在土壤生态系统中的生态功能和应用潜力。
产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定
吉林化工学院环境与生物工程学院微生物学实验报告产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定学生学号：10350135学生姓名：郭金洋专业班级：生技1001指导教师：谢莹吉林化工学院Jilin Institute of Chemical Technology产淀粉酶菌株的筛选及生理生化鉴定姜建平，荣荣，赵永红，赵楠，郭金洋摘要：目的：筛选产淀粉酶菌株。
方法：利用碘液显色法，从土壤中筛选产淀粉酶菌株；通过菌落形态、菌体特征观察和生理生化鉴定对菌种进行鉴定。
关键词：产淀粉酶菌株，鉴定生理生化性1前言淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类的总称，广泛存在于动植物和微生物中，是最早实现工业生产并且迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种【1】淀粉酶种类繁多，特点各异，可应用于造纸、印染、酿造、果汁、和食品加工、医药、洗涤剂、工业副产品及废料的处理、青贮饲料及微生态制剂等多种领域【2】本实验以土壤为原料，从中筛选出具有产淀粉酶能力的菌株，并对其进行生理生化鉴定，了解并熟悉淀粉酶的筛选及鉴定2材料与药品2.1材料取自学校周围的蛋糕坊附近的土壤，高压灭菌锅，移液管，试管，三角瓶，培养皿，牙签，载玻片，接种针，电炉子2.2药品牛肉膏，蛋白胨，淀粉，琼脂，硫酸铵， K2HPO4， MgSO4·7H2O， CaCl2·2H2O，蔗糖，蒸馏水， NaCl ，硝酸氢二钾，葡萄糖， 0.04%溴甲酚紫，碘液。
3 实验方法3.1 培养基的配制3.1.1.淀粉培养基3.1.1.1淀粉培养基配方牛肉膏 0.3g 蛋白胨1g NaCl 0.5g 淀粉 1% 琼脂1.5g 蒸馏水100ml PH=7.2----7.43.1.1.2淀粉培养基配制方法1）称取按照配方称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠，加入蒸馏水溶于小烧杯中，若有不融物，可加热溶解。
2）称取淀粉于小烧杯中，加入蒸馏水煮沸溶解，直至澄清透明。
倒入上述烧杯中。
3）定容4）在三角瓶中加入琼脂，将定容后的溶液倒入三角瓶，调节PH值。
实验九 细菌的生化鉴定
实验九细菌的生化鉴定一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V. P的原理、方法及相应培养基的制备方法。
3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4、掌握以上实验的用途。
二、实验原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。
由于细菌特有的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。
不同细菌具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。
1、糖发酵实验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）；发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。
2、M.R.及V.P实验很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）-pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
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菌株生理生化鉴定实验方法
1.接触酶实验
用枪头取一个菌落放在载玻片上，加一滴3%的h2o2于菌落上，立即观察有无气泡出现。
2.淀粉水解实验（没透明化圈）
淀粉酶活性鉴定培养基：lb培养基（0.5%酵提、1%蛋白胨、1%nacl），可溶性淀粉1%，琼脂2%
挑实验菌株的单菌落在淀粉酶活性鉴别培养基中划线，30℃培育2天，构成显著菌落后，在平板上几滴加碘液，菌落周围如果存有透明化圈，则则表示淀粉水解为阳性；若仍为蓝黑色则为阴性
3.脂酶活性的鉴定实验（有晕圈）
脂酶活性鉴别培养基：lb培养基，tween801%，琼脂2%
取实验菌株的单菌落在脂酶活性鉴定培养基中划线，30℃培养2天，菌落周围若有晕圈，则为脂酶活性阳性，反之则为阴性。
4．蛋白酶活性的鉴别实验
酪明培养基（不可溶性）：lb培养基，0.3%酪蛋白（先碱化1g酪蛋白加1ml1mol/l 的naoh，加水加热溶解），0.5%明胶（加热溶解），2%琼脂（没有）
牛奶双层板（可溶性）：上层lb培养基提2%琼脂，下层牛奶、琼脂（牛奶琼脂混合后的浓度都就是2%先把下层好像至平板中，等待下层加热后再好像上层（存有透明化圈）
取实验菌株的单菌落在可溶性蛋白酶活性鉴定培养基及不溶性蛋白酶活性鉴定培养基上分别划线，30℃培养2天。
菌株若具有可溶性蛋白酶活性和不溶性蛋白酶活性，则会在菌落周围形成透明圈。
5.纤维素水解实验
纤维素酶活性鉴定培养基：lb培养基，1%纤维素钠
挑实验菌株的单菌落在纤维素酶活性鉴别培养基上划线，30℃培育5-7天，用0.1%刚果红染色液染色30min后，用蒸馏水冲洗，再用1mol/l的hcl复染30min后冲洗，观测与否存有透明化圈。
6．甲基红实验甲基红和v-p鉴定培养基：蛋白胨0.5%，k2hpo40.5%
注射实验菌株于甲基白鉴别培养基中，每次两个重复，30℃培育2d、6d。
在培养液中重新加入一滴甲基白试剂，若为红色，则为甲基白实验阳性反应，反之则为阴性。
7.v-p测定
用上一个实验的培养基
接种实验菌株与v-p鉴定培养基中，每次两个重复，30℃培养2d、6d。
取培养液与40%的naoh等量混合均与，加少许肌酸（加一点粉末）。
反应10min后，若培养液出现红色，即为阳性反应，未出现红色的继续放置一段时间，若仍未变色则为阴性。
8.耐盐性实验
将实验菌株先用普通lb液体培养基活化，接种在含有不同浓度的nacl（0%—10%）的lb液体培养基中(试管中含液体10ml)，每个试管中加入100μl菌液,30℃,160r/min，培养1天，观察菌株的生长情况并测其od值
将实验菌株先用普通lb液体培养基活化，注射在所含相同ph（3—10）的lb液体培养基中(试管中不含液体10ml)，每个试管中重新加入100μl菌液,30℃,160r/min，培育1天，观测菌株的生长情况并测其od值
可用1mol/l的naoh或1mol/l的hcl调节培养基的ph。