同位素二甲基标记和串联质谱
同位素稀释液相色谱串联质谱法测定人血清未结合雌三醇
〔关键词〕同位素稀释；液相色谱串联质谱；未结合雌三醇
〔中图分类号〕R446.11 〔文献标识码〕B 〔文章编号〕1002-2376（2019）09-0043-03
血清未结合雌三醇（unconjugated estriol，uE3 ）为人体胎 盘产生的一种甾体雌激素，在血清中含量低，uE3 的检测可及 早发现疾病的异常变化，为临床诊断提供重要数据 [（2 ）
其中，CS 为血清样品中所含的 uE3 浓度；RM 为校准曲
线溶液中 uE3 与其标记物实际质量比；ML 为加入血清样品
中 uE3 标记物溶液的质量；CL 为加入血清样品中 uE3 标记物
I (CA-I) Concentration in Feces and Urine as a Temporary Marker of Occult Blood in Beagle Dogs[J]. Exp Anim, 2017, 56(1): 43-49.
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医疗装备 2019 年 5 月第 32 卷第 9 期 Medical Equipment, May. 2019,Vol. 32, No.9
收稿日期：2018-12-05
司，98%）；氟化铵（美国Sigma公司，纯度99.99%）；
结石方面，对于输尿管结石、肾脏结石或者膀胱结石患者， 均可能存在潜血，此外，便秘以及生理期患者也可能出现 潜血。对于单纯尿潜血患者，如果临床完成显微镜检查后 未发现红细胞，且无尿液颜色以及症状变化，则分析原因 为氧化物等干扰物存在，使得假阳性出现，对此在进行疾 病诊断期间，不能单纯通过对尿潜血进行观察而获得诊断 结果，因为即使正常人在正常情况下也存在尿潜血可能 [6]。
研究，2015，13（15）：68-69. ［4］ 杨士峰 . 用两种不同检测方法进行尿潜血检测的准确性对比 [J].
超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量
超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中精氨酸及衍生物含量田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【摘要】建立了超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定使用艾普拉唑后人血浆中二甲基精氨酸(ADMA)、对称二甲基精氨酸(SDMA)、单甲基精氨酸(NMMA)、瓜氨酸(Cit)和L-精氨酸(L-Arg)的浓度.采用HILIC亲水相互作用色谱和非衍生化的蛋白沉淀法进行分离分析,色谱柱选取Waters Atlantic HILIC柱(2.1 mm×50 mm×3μm),流动相由乙腈(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)-水(含0.5％乙酸和0.025％三氟乙酸)(85:15,v/V)组成,流速0.25 mL/min.采用多反应离子监测(MRM)模式,以电喷雾离子源(ESI)正离子方式检测.结果显示,ADMA、SDMA、NMMA、L-Arg和Cit的线性关系良好,相关系数r均大于0.994 0;ADMA、SDMA和NMMA的线性范围为0.1～5 mmol/L,L-Arg和Cit的线性范围为10～250 mmol/L;5种氨基酸的日内、日间精密度均小于15％,准确度在85％～115％之间.该方法快速、简便、灵敏,可为相关疾病的临床诊断提供一种高效的检测手段.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2016(037)005【总页数】7页(P446-452)【关键词】超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS);艾普拉唑;蛋白沉淀法;亲水性色谱【作者】田晔;江骥;胡蓓;薛金萍;王洪允【作者单位】福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730;福州大学化学学院,福建省功能材料工程研究中心,福建省光动力治疗药物与诊疗工程技术研究中心,福建福州350108;中国医学科学院北京协和医院临床药理中心,北京100730【正文语种】中文【中图分类】O657.63一氧化氮是人体重要的信使分子，L-精氨酸(L-Arg)在一氧化氮全酶(NOS)的催化下，产生一氧化氮(NO)和瓜氨酸(Cit)[1-2]。
高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸
高效液相色谱—串联质谱法测定人体内30种氨基酸作者：李鹏飞等来源：《分析化学》2013年第09期摘要：建立了以12种同位素标记氨基酸做内标，采用衍生化方法，LC-MS/MS采用MRM方式同时定量30种氨基酸的检测方法。
生物样本加入含有同位素内标的甲醇溶液，沉淀蛋白后氮气吹干加入衍生试剂，样本氨基酸与同位素氨基酸内标同步衍生，减小实验误差。
选用TC-C18色谱柱，以水-乙腈（均含有0.01%七氟丁酸和0.1%甲酸）为流动相，采用梯度洗脱进行分离，30种氨基酸及其中的同分异构体都能基线分离。
选用3200QTRAP型质谱仪的多重反应监测（MRM）扫描方式进行检测。
本方法用于实时监测恶性血液病患者血浆氨基酸谱的变化，可以直接反映机体的代谢及营养状况，对患者的移植成功率及改善移植后患者的生存质量均有重要意义。
关键词：高效液相色谱-串联质谱；氨基酸；高通量定量；同位素内标；恶性血液病1 引言氨基酸是生命的基石，是人体基本营养物质，也是蛋白质的组成单位。
生命的产生、存在和消亡，均与蛋白质有关，而氨基酸是蛋白质的基本单位，如果人体缺乏氨基酸，就会导致生理功能异常，影响机体代谢的正常进行，导致疾病。
检测复杂样本中氨基酸的含量对临床和科研等都具有重要意义。
目前，氨基酸检测技术繁多，1958年Spackman等首先提出了用阳离子交换色谱与柱后茚三酮衍生结合的方法分析蛋白质中的氨基酸[1]，实现了氨基酸分析的自动化[2]。
其后，新的氨基酸分析方法不断涌现，柱前衍生反相高效液相色谱法[3～5]、毛细管电泳法[6]、质谱法等相继应用于氨基酸分析[2，7～14]。
液相色谱-串联质谱技术（LC-MS/MS）充分整合了液相色谱对复杂样本的高分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度等优势，在生物体内源性小分子定性与定量方面有广泛应用，LC-MS/MS用于体内外氨基酸的检测在一定程度上解决了复杂基质干扰问题，极大地提高了检测水平和检测灵敏度，并实现了高通量检测。
串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用_韩炳娟
串联质谱技术在新生儿遗传代谢性疾病筛查中的应用韩炳娟韩炳超邹卉①山东省济南市妇幼保健院新生儿疾病筛查中心250001中国图书分类号Ｒ174文献标识码A文章编号1001-4411（2013）29-4907-03；doi ：10.7620/zgfybj.j.issn.1001－4411.2013.28.55①通信作者提高出生人口素质是当今预防医学极为关注的问题。
先天性遗传代谢病的新生儿在出现临床表现前其体内生化、激素水平已有明显变化。
对新生儿进行先天性遗传代谢病筛查，可以在未出现疾病表现之前，做出早期诊断，从而有助于疾病的有效治疗。
随着新生儿疾病筛查技术的发展，可筛查的疾病越来越多。
近几年串联质谱技术的引入，使得筛查更多严重的遗传代谢病成为可能，筛查的疾病种类迅速扩大，实现了“一种实验检测多种疾病”的要求，大大提高了实验效率和准确性。
1新生儿疾病筛查的概况新生儿疾病筛查是指在新生儿期通过对某些危害严重的遗传代谢缺陷、先天性疾病进行群体筛查，早期诊治，从而避免或减轻疾病的危害。
自1961年开展苯丙酮尿症筛查以来，随着医学科学技术的发展，符合新生儿疾病筛查标准的疾病在不断增加，新生儿疾病筛查的技术方法也有了非常显著的进步。
我国自20世纪80年代初开始新生儿疾病筛查项目，在2000年之前全国大多数只针对先天性甲状腺功能减退症、苯丙酮尿症、先天性肾上腺皮质增生症和葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏症四种疾病进行筛查。
近年来，质谱技术逐步发展成为应用广泛的分析手段，随着串联质谱仪的研究和发展，使串联质谱技术（tan-dem mass spectrometry ，MS /MS ）作为遗传代谢病的常规诊断工具成为可能。
2串联质谱技术基本原理质谱技术主要是将被测物质分子电离成各种质荷比（m /z ）不同的带电粒子，然后应用电磁学原理，根据它们所形成的谱图、离子峰强度对分析物进行鉴定和定量。
串联质谱则是由两个MS 经碰撞室（CID ）串联而成，通过检测样品离子的特定质荷比进行定性分析，通过同位素内标进行定量分析，显著增加了方法的特异性和灵敏度，可同时检测30多种疾病的指标物以提示某一种或多种遗传代谢病的发生。
串联质谱技术新生儿遗传代谢病筛查
80%属常染色体隐性遗传
单病发生率低，群体患病率高
单基因缺陷所致代谢通路阻,大多为单基因遗传病，少数为线粒体基因遗传病 表现非特异性，有赖遗传学或生化方法确诊，代谢物、酶学和分子检测
常规试验检测：缺乏特异标志物
儿科、血液科、神经科、骨科等不同诊室就诊 早期症状多无特异性，累及部位和病情轻重差异很大，极易造成误诊
串联质谱检测指标
名称
游离肉碱C 乙酰肉碱
缩写
C0 C2
名称
己酰肉碱 己二酰肉碱
缩写
C6 C6DC
名称
肉豆蔻二烯酰肉碱 3-羟基肉豆蔻酰肉碱
缩写
C14:2 C14-OH
丙酰肉碱
丙二酰肉碱 丁酰肉碱 3-羟基丁酰肉碱 异戊酰肉碱
C3
C3DC C4 C4-OH C5
辛酰肉碱
辛烯酰肉碱 辛二烯酰肉碱 葵酰肉碱 葵烯酰肉碱
新生儿期、幼儿或儿童期发病,某些可至成人期开始发病。
临床特征
多在新生儿期、幼儿或儿童期发病。某些可至成人期开始发病。 新生儿期发病：呕吐、喂奶困难、反应力低下、呼吸暂停、急促等 儿童期发病：可表现为全身多器官受累 以神经肌肉系统、呼吸系统、消化系统等症状为主
乏力、智力发育迟缓、肌张力增高或降低、癫痫、黄疸、肝脾肿大、
衍生化法
操作繁琐(3h) 过程难以标准化 对环境和人员有害
非衍生化法
操作步骤简单(40min)
易于标准化 不涉及酸腐、有毒物 扩展性好
需要氮吹设备
发达国家的遗传代谢病筛查已从传统衍生化法逐步转 为非衍生化法（近5年美国12.20%→46.84%）
标本前处理方法比较
串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测中的应用
串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测中的应用作者：崔芸菲来源：《中国科技纵横》2019年第15期摘要：串联质谱技术具有灵敏度高、特异性高、选择性高等多种优良性能，在新生儿代谢疾病检测领域具有突出的优势。
本文综述了串联质谱技术的工作原理以及检测方法，讨论了串联质谱技术在新生儿代谢疾病检测领域的优越性，并展望了串联质谱技术在该领域的发展前景。
关键词：串联质谱；新生儿代谢疾病；检测中图分类号：O657.63 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2019）15-0202-020 引言新生儿代谢疾病在新生儿疾病的检测中十分特殊，这一类疾病大多没有特异性的临床表现，且部分患儿在确诊患该疾病之前就已经发病，新生儿代谢疾病不仅给患儿身体及家长的心灵带来莫大的痛苦，此外也极大地增加了家庭负担和社会损失，因此新生儿代谢疾病的有效诊断越早越好。
根据目前的临床医学诊断结果来看，当前新生儿代谢疾病的主要类型有三类，分别是氨基酸代谢疾病、脂肪酸代谢疾病以及有机酸代谢疾病，现在医学领域已发现了多达1000余种新生儿代谢疾病，提早诊断和预防新生儿代谢疾病对家庭和社会具有重要意义。
目前医疗上主要以串联质谱技术来检测新生儿代谢疾病，该技术只需通过一次实验检测过程，便能快速高效地筛查出新生儿是否存在氨基酸代谢异常、有机酸代谢紊乱等疾病，因此广泛应用于临床检测中，成为新生儿代谢疾病检测的有效技术手段。
1 串联质谱技术工作原理及检测方法1.1 串联质谱技术工作原理及检测仪器组成1.1.1 串联质谱技术工作原理质谱技术的工作原理是，通过将被测的化合物分子离子化，使其变成具有不同质荷比（m/z）的带电离子，利用电磁场将具有不同的质荷比的带电粒子分离，进而完成对化合物的成分和结构的分析。
1.1.2 质谱检测仪器组成质谱仪的主要结构包含离子源、分析器、检测器三部分。
其中，离子源的功能是将分子实现离子化形成带电粒子，而分析器的作用则是将离子化后的分子在合适的电场或磁场中在空间或时间上按照质荷比的大小进行有效的分离，再由检测器接收并检测出离子的相关信息。
液相色谱-串联质谱生物分析方法的基质效应和对策
液相色谱-串联质谱生物分析方法的基质效应和对策刘晓云;陈笑艳;钟大放【摘要】Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method has the characteristics of high sensitivity, high selectivity and high throughput, and has become the mainstream approach for bioanalytical assays.It is widely used for the quantitative analysis of new drug entities (NCEs) and their metabolites in the discovery and development of new drugs.However, due to the complex composition of the biological sample matrix, the co-eluting material affects the ionization of the analyte, result in increases or decreases the mass spectral response of the analyte, thus affecting the accuracy and precision of the LC-MS/MS analysis method.In general, ion suppression is more common than ion enhancement.When the analytical method is established, if the ion suppression is not evaluated and corrected, the sensitivity of the analytical method will be seriously affected.Therefore, it is important to assess the matrix effect and use different strategies to eliminate or reduce the impact of matrix effects.In this paper, an overview was provided, including how matrix effect occurs, outline the methodologies used to assess the matrix effect in biological sample analysis and discuss the strategy of overcoming the matrix effect.Substances that cause matrix effects include endogenous substances and exogenous substances.Endogenous substances include phospholipid, salts, urea, metabolites and so on.Exogenous substances such as excipients, anticoagulants, stationary phase release materials and degradationproducts.At present, there are mainly two method to assess the matrix effect, one is post-extraction spike, the other is post-column infusion.The strategies to overcome the matrix effect including the use of stable-isotope labeled internal standard, derivatization of polar drugs, dilute the supernatant after precipitation of the protein, optimize sample pretreatment method, the chromatographic conditions and the mass spectrometry conditions.This paper provides examples of the application of our laboratory, focusing on the difficulties encountered and solutions in the establishment of LC-MS/MS analysis methods.%液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法具有高灵敏度、高选择性、高通量等特点,已经成为生物分析的主流方法,广泛应用于新药发现和开发过程中新化学实体及其代谢物的定量分析.然而,由于生物样品基质成分复杂,共洗脱物质会影响分析物的离子化,使分析物的质谱响应增加或降低,从而影响LC-MS/MS分析方法的准确度和精密度.一般而言,离子抑制较离子增强更为常见.因此,在建立LC-MS/MS法时,需要对离子抑制进行评估和校正,并采用不同的策略消除或减少基质效应的影响.本文综述了生物样品分析中基质效应的来源和评估方法,重点介绍了克服基质效应的策略.引起基质效应的物质包括磷脂、盐类、尿素、代谢物等内源性物质和赋形剂、抗凝剂、固定相释放物质及降解产物等外源性物质.目前基质效应的评价方法主要有提取后加入法和柱后灌注法.克服基质效应的策略主要有使用稳定同位素内标,将极性药物衍生化,沉淀蛋白后稀释上清液,优化样品预处理方法、色谱和质谱条件等.结合本课题组的应用实例,重点阐述了建立LC-MS/MS生物分析方法时,为减少基质效应遇到的困难及解决方法.【期刊名称】《质谱学报》【年(卷),期】2017(038)004【总页数】12页(P388-399)【关键词】液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS);药动学;基质效应【作者】刘晓云;陈笑艳;钟大放【作者单位】中国科学院上海药物研究所药物代谢研究中心,上海 201203;中国科学院上海药物研究所药物代谢研究中心,上海 201203;中国科学院上海药物研究所药物代谢研究中心,上海 201203【正文语种】中文【中图分类】O657.63液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS)于20世纪90年代发展成熟，在灵敏度、选择性、分析通量以及对药物分析的适用性等方面有非常突出的优势，特别适用于复杂基质(如血浆)中微量药物及代谢物的定量分析，是近20年来生物分析的主流技术。
液相色谱_串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用
分子诊断与治疗杂志2012 年 1 月第4卷第 1 期J Mol Diagn Ther January 2012 Vol. 4 No. 1 59 综述液相色谱- 串联质谱在全谱氨基酸检测中的应用陶蓓蓓1 李鹏飞2 张绪得1 安卓玲2 王燕2 刘丽宏2 ★摘要全谱氨基酸检测是指利用液相色谱串联质谱技术、采用同位素内标的方法，精确测定人体内42 种氨基酸含量。
全谱氨基酸失衡是众多疾病的诱因或表现形式，涉及代谢、肿瘤、免疫、病毒、心脑血管、神经系统、肾病、糖尿病、亚健康、老年病等各类疾病和儿童生长发育、营养健康、肌肉骨骼生长、激素分泌、解毒功能等人体各种健康环节。
关键词全谱氨基酸；液相色谱；串联质谱Liquid chromatography-tandem mass spectrometry in the full spectrum of amino aciddetectionTAO Beibei1 LI Pengfei2 ZHANG Xude1 AN Zhuoling2 WANG Yan2 LIU Lihong2 ★1. Beijing Amino Medical Research CO. LTD Beijing 100088 China 2. Pharmacy Department of the SecondArtillery General Hospital Beijing 100088 China ABSTRACT Liquid chromatography combined with tandem mass spectrometry and isotope internalstandard method can be used for accurate determination of 42 kinds of amino acids in human body. Theimbalance of the full spectrum of amino acids is one of incentives or manifestationsof many diseases involvedin metabolism cancer immune viral cardiovascular nervous system kidney disease diabetes sub-health oldage diseases and other diseases and child growth and development nutrition and health musculoskeletal growthhormone secretion and detoxication functions. KEY WORDS The full spectrum of amino acids Liquid chromatography Tandem mass spectrometry 全谱氨基酸在体内是一个平衡状态，这一状态的高效阴离子交换色谱- 积分脉冲安培检测法、毛细管失衡是众多疾病的诱因或表现形式。
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同位素二甲基标记和串联质谱
同位素二甲基标记和串联质谱是一种常用的生物分析技术。
该技术基于同位素标记分子的原理，通过将分子中的特定原子替换成同位素来标记分子。
其中，常用的同位素有C、H、N、O和S等。
通过同位素标记，可以使分子在质谱中产生特定的质荷比，从而实现定量和定位分析。
串联质谱是一种多级质谱分析技术。
该技术将质谱仪与离子阱、四极杆等多级质谱分析器相结合，可以实现更加准确和精细的质谱分析。
串联质谱技术可用于分析生物样品中的各种分子，如蛋白质、代谢物等。
同位素二甲基标记和串联质谱技术的应用范围广泛，包括代谢组学、蛋白质组学、药物代谢动力学等领域。
通过这些技术的应用，可以更深入地研究生物分子的结构、功能和代谢途径，为生物医学研究和药物开发提供有力的支持。
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