淋巴细胞提取
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。
下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。
- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。
- 为实验准备足够数量的外周血样本。
2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。
- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。
3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。
- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。
4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。
5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。
- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。
- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。
6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。
- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。
- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。
请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。
在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。
同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。
希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。
提取外周血淋巴细胞
/bbs/topic/791076?keywords=淋巴细胞分离淋巴细胞是许多实验最基本的技术，也是关键的技术之一。
现在大多数用的密度梯度离心法。
一般我用5ml抗凝血就可以得到pbmc大约4－5x106的细胞。
现在将我分离淋巴细胞的经验于大家共分享。
我的经验1，新鲜血（肝素抗凝20u/ml）＋1640（无血清）培养液按照1：1 稀释2. 在10ml玻璃试管中预先加入淋巴细胞分离液，使分离液：1640：新鲜血=1:1:1(最好用玻璃试管，分离液的量可以增加些，我的经验是1：1；1足够了！！）3.小心的将稀释后的血液加到分离液的上面，开始的加入一定一定要慢，要尽量的贴近液面加。
4. 离心 .转速：1500/分温度20c －28c时间：20分钟no break（就是不要刹车，这个很重要，不然由于急剧的减速度，会把已经分离的单个核细胞层又弄混了，加速度也最好不要太大)5。
取出试管，看看是不是分为好几层？？顺次为血浆---单个核细胞层－－分离液－－红细胞6.用毛吸管吸取上面的血浆层，注意无菌，保存好，留着有用！！！！7.用毛吸管，吸出单个核细胞层（白白的那一层），重悬于（2—5倍体积的不完全培养液中）.你会问：混在其中的淋巴细胞分离液怎么办？别着急。
还有办法的。
8 离心。
转速：2000－2300/分（转速一定要提高，不然淋巴细胞很难与分离液分开！！)时间：10分钟温度：4c9震荡后，用培养液重悬至1ml（为什么？嘿嘿，马上告诉你）10.细胞计数＋洗涤细胞。
刚才不是重悬到1ml吗？取一些放于96孔板中留着计数用（100ul足够了），然后细胞悬液在离心机上离心，在离心的同时，计数你得到的pbmc吧。
这样是不是很节省时间？？11.计数细胞：计数细胞用的细胞计数板的结构是四个角有4个大正方形，每个正方形有16个小正方形.a. 取96板中的细胞悬液10ul，用3％冰醋酸稀释到原来的4倍（这样既能溶解红细胞，又保证细胞浓度不是很大，方便计数）b. 从上面的稀释悬液中取9ul于细胞计数板上，开始计数细胞c.计数原则：对于压线的细胞，只说左边的和上边的。
car-t工作原理
car-t工作原理
CAR-T的工作原理是借助基因改造技术，将患者自身免疫细胞，即T淋巴细胞提取出来，进行改造、加工以及培养，使其拥有特定的抗原受体，从而能够特异性识别肿瘤细胞。
经过改造后的T淋巴细胞，可以表达抗原的靶点，进而有效激活T淋巴细胞，从而表达和释放细胞因子，杀伤白血病以及肿瘤细胞。
在CAR-T细胞疗法中，首先需要收集患者的外周血并提取T细胞，然后在体外进行刺激扩增并通过病毒载体转入特定的CAR基因，使其成为CAR-T细胞。
随后，这些CAR-T细胞被回输到患者体内，对癌细胞进行杀伤。
这一套疗法也被称为CAR-T细胞疗法。
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液的原理
淋巴细胞分离液是一种用于分离淋巴细胞的溶液。
它的原理是利用淋巴细胞和其他细胞在密度上的差异来进行分离。
淋巴细胞分离液通常是由密度梯度离心法制备而成的。
首先，一种或多种高密度物质（如Ficoll、Percoll等）被溶解在无菌
生理盐水或缓冲液中，形成密度梯度溶液。
然后，这个溶液被注入到离心管中。
接下来，待分离的淋巴细胞样品被加入到离心管中的密度梯度溶液上方。
离心管被放置在离心机中进行离心操作。
离心的过程中，样品中的细胞会向下沉降，并在密度梯度中找到自己的位置。
由于淋巴细胞在密度上相对较轻，它们通常会沉降到密度梯度溶液的较低密度区域。
而其他细胞（如红细胞、血小板等）普遍比淋巴细胞密度高，它们会沉降到密度梯度溶液的较高密度区域。
当离心结束后，离心管中的密度梯度溶液会形成不同的层次，每个层次含有不同种类的细胞。
淋巴细胞分离液将淋巴细胞与其他细胞有效地分离开来。
最后，通过使用适当的技术，如离心、吸引、冲洗等，从密度梯度中提取和收集分离的淋巴细胞。
这种方法能够获得高纯度、高活力的淋巴细胞样品，用于进一步的实验研究。
一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法
一种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法
肠道固有层淋巴细胞在小鼠免疫系统中起着重要的作用。
为了更好地研究这些细胞，科研人员开发了一种高效的试剂，用于提取小鼠肠道固有层淋巴细胞，并深入探讨其应用和方法。
这种试剂的开发旨在提高提取过程的效率和细胞存活率。
经过多次实验和优化，科研人员成功地开发出了一种配方，能够快速、可靠地提取小鼠肠道固有层淋巴细胞。
该试剂含有一系列活性成分，能够迅速分离细胞，同时保持细胞的完整性和功能。
通过这种试剂的使用，研究人员可以更准确地分析肠道固有层淋巴细胞的特性和功能。
该试剂的应用范围广泛。
在免疫学研究中，肠道固有层淋巴细胞被认为是调节免疫平衡的重要细胞类型。
通过使用这种试剂，研究人员可以更好地了解肠道固有层淋巴细胞的分布、数量、表面标记物及其功能。
这对于研究肠道免疫相关疾病、肠道菌群和营养吸收等方面具有重要意义。
使用这种试剂提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的方法相对简单。
首先，需要将小鼠的肠道组织取出，并去除周围组织。
然后，将组织切割成细小的碎片，并与试剂混合。
混合物经过一系列处理步骤，包括酶解、过滤和离心等，最终可以得到纯净的肠道固有层淋巴细胞。
这种方法简便、高效，能够在较短的时间内得到大量的细胞。
总结起来，这种提取小鼠肠道固有层淋巴细胞的试剂及其应用和方法为肠道免疫学研究提供了有力的工具。
它不仅提高了提取的效率和细胞的存活率，还为研究人员提供了更深入的了解肠道固有层淋巴细胞的机会。
随着这种试剂的广泛应用，相信对于肠道免疫相关疾病的治疗和预防将有所帮助。
提取淋巴细胞实验报告
一、实验目的本实验旨在学习淋巴细胞提取的方法，掌握淋巴细胞的分离、纯化和计数技术，为后续的淋巴细胞功能研究奠定基础。
二、实验原理淋巴细胞是免疫系统中的一种重要细胞，主要存在于血液和淋巴组织中。
本实验采用Ficoll分离液法，根据不同细胞密度的差异，将淋巴细胞从其他细胞中分离出来。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠2. 仪器：离心机、移液器、加样器、离心管、无菌操作台、眼科剪、眼科镊、显微镜、计数板3. 试剂：Ficoll分离液、磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）、淋巴细胞分离液、75%酒精、无菌生理盐水、10%甲醛固定液四、实验方法1. 小鼠免疫器官分离（1）将小鼠麻醉后，固定在手术台上；（2）用眼科剪剪开小鼠的腹部皮肤，暴露出腹腔；（3）用眼科镊取出小鼠的脾脏，放入装有PBS的无菌皿中；（4）用眼科剪将脾脏剪成小块，放入装有PBS的无菌皿中；（5）用无菌生理盐水冲洗脾脏，去除杂质；（6）将脾脏组织转移至新的无菌皿中，加入淋巴细胞分离液；（7）用移液器将淋巴细胞分离液和脾脏组织充分混合；（8）将混合液转移到离心管中，以1000rpm离心10分钟；（9）弃去上清液，保留沉淀物。
2. 淋巴细胞分离（1）将沉淀物加入适量的淋巴细胞分离液，轻轻混合；（2）将混合液转移到新的离心管中，以1000rpm离心10分钟；（3）弃去上清液，保留沉淀物。
3. 淋巴细胞计数（1）将沉淀物加入适量的PBS，轻轻混合；（2）将混合液转移到计数板上，在显微镜下观察；（3）按照计数板上的网格进行细胞计数。
4. 淋巴细胞纯度鉴定（1）将计数后的淋巴细胞加入适量的10%甲醛固定液，固定10分钟；（2）用PBS洗涤固定后的淋巴细胞，去除甲醛；（3）将淋巴细胞加入适量的细胞染色剂，染色30分钟；（4）用PBS洗涤染色后的淋巴细胞，去除染色剂；（5）将淋巴细胞转移到离心管中，以1000rpm离心5分钟；（6）弃去上清液，保留沉淀物；（7）将沉淀物加入适量的PBS，轻轻混合；（8）用移液器将混合液转移到计数板上，在显微镜下观察淋巴细胞形态，判断淋巴细胞纯度。
肿瘤浸润淋巴细胞提取方法
肿瘤浸润淋巴细胞提取方法
提取肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的方法主要包括以下步骤：
1. 肿瘤组织获取前准备工作：平衡培养基和Ficoll-Paque分离液至室温（18-20℃），这是因为在实验中温度会影响密度梯度分离获得的单核细胞的产率，温度过低容易出现红细胞污染，过度过高会降低淋巴细胞产量和活力。
此外，根据种属和细胞类型来选择适合的Ficoll-Paque分离液，例如Ficoll Plaque PLUS广泛用于分离人类单核细胞，小鼠的淋巴细胞密度高于人类，因此建议使用Ficoll Paque PREMIUM从小鼠肿瘤组织中分离TIL。
2. 酶工作液的配制：提前以RPMI-1640或PBS缓冲液配制10×细胞消化液并置于-20℃储存。
包括胶原酶、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶等，每种酶都有一定的工作浓度。
3. 肿瘤组织的处理：把肿瘤组织制成单细胞悬液，可用机械和酶消化法获得瘤组织的单细胞悬液。
4. 密度梯度离心法分离TIL：利用密度梯度离心法等分离纯化TIL，该方法具有简便、快速、有效等特点，且获取得细胞活力高，功能完整。
以上方法仅供参考，具体操作需要依据实验环境和条件进行调整，建议咨询专业人士获取准确信息。
封闭抗体阴性 淋巴细胞提取流程
封闭抗体阴性淋巴细胞提取流程1.在实验室的无菌条件下，取出外周血样本。
In a sterile laboratory environment, take a peripheral blood sample.2.将外周血样本放入离心管中，轻轻旋转离心管混合均匀。
Place the peripheral blood sample in a centrifuge tube and gently mix by rotating the tube.3.将混合后的外周血样本放入离心机中，以3000 rpm离心10分钟。
Centrifuge the mixed peripheral blood sample at 3000 rpm for 10 minutes.4.取出上清液，放入新的离心管中。
Remove the supernatant and place it in a new centrifuge tube.5.向上清液中滴加等体积的PBS缓冲液，轻轻旋转混合。
Add an equal volume of PBS buffer to the supernatant and gently mix by rotating.6.将混合后的上清液＋PBS溶液放入离心机中，以3000 rpm离心10分钟。
Centrifuge the mixed supernatant + PBS solution at 3000 rpm for 10 minutes.7.取出上清液，弃渣，得到淋巴细胞。
Remove the supernatant, discard the sediment, and obtain lymphocytes.8.将淋巴细胞放入新的离心管中，加入PBS缓冲液洗涤。
Place the lymphocytes in a new centrifuge tube, and wash with PBS buffer.9.重复以上洗涤步骤2-3次，以去除残留的血液成分。
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淋巴细胞提取
一实验目的：小鼠脾淋巴细胞提取
二实验对象：B／C 小鼠
三实验器材：
1．试剂：淋巴细胞分离液、1640培养基
2．器材：无菌培养皿、200目尼龙网（裁成90mm*90mm正方形，灭菌）、10mL玻璃注射器内活塞（灭菌）、不同规格的镊子、剪刀若干（灭菌）、细胞实验常用器材（离心管、移液管、加样枪、离心机）、75%乙醇、烧杯（无菌）、大头针、超净台
四实验步骤：
1、断头处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2分钟。
2、在超净台中小心剪开小鼠腹部外皮，用大头针固定，再剪开小鼠腹腔，用镊子摘下小鼠脾脏。
注意无菌操作。
3、参考图一，在35mm培养皿中放入4-5ml淋巴细胞分离液（使用前摇匀淋巴细胞分离液）。
用镊子固定尼龙网，然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏，使得分散的单细胞透过尼龙网进入淋巴细胞分离液中。
（没研磨每一只脾脏话费的时间最好控制在5分钟之内，防止在研磨过程中液体挥发，使得密度与渗透压改变，影响分离效果）
4、把悬有脾脏细胞的分离也立即转移到离心管中，离心潜在覆盖上大约200μL的1640培养基。
5、800g离心30分钟，注意离心设置较慢的加速度和减速度（如果有十档，一般设置在第三档）。
离心结束后淋巴细胞会漂浮上来，在1640覆盖层下面聚集，细胞分层如图二所示
6、析出淋巴细胞层，再加入10mL1640培养基，250g离心10分钟。
倾倒上清液，加入3-5mL Lympho-SpotTM无血清培养基重悬，细胞计数。
五、注意事项：
①离心前在细胞悬液上面加盖一层1640培养基，既有利于漂浮上来的淋巴细胞的聚集，又有利于下一步的吸取操作。
覆盖层不必太厚，2Μl足矣。
②如果实验者一次实验要处理很多只小鼠，需要注意两点：其一，每研磨一只小鼠，立即把脾细胞悬液从培养皿转入离心管中，注意盖严管盖，切不可敞口放在超净台中。
否则，液体挥发，密度与渗透压都会改变，严重影响分离效果。
其二，在所有的小鼠脾脏处理完后，统一再加1640覆盖层。
如果加早了，两层液体会相互扩散，造成最终离心后的淋巴细胞层下移。
③推荐使用尼龙网替代不锈钢网筛，以为尼龙网更柔软些
④使用注射器活塞代替镊子研磨脾脏，由于镊子夹住脾脏的力度不好控制，易造成细胞死亡。