细菌半数致死量测定张玉晴

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暗纹东方纯致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

暗纹东方纯致病性维氏气单胞菌的分离鉴定作者：常燕，王兆慧，刘思园，等来源：《湖北农业科学》 2013年第3期常燕，王兆慧，刘思园，徐磊，曹军（南通大学生命科学学院，江苏南通２２６０１９）摘要：从濒死的暗纹东方鲀（Ｔａｋｉｆｕｇｕｏｂｓｃｕｒｕｓ）体内分离到一株优势菌株，经形态观察、生化、１６ＳｒＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰＣＲ）以及人工感染健康暗纹东方鲀和ＩＣＲ小鼠等试验可知，该菌对小鼠和暗纹东方鲀半数致死量（ＬＤ５０）分别为２．２６×１０６ＣＦＵ／ｍＬ、５．９６×１０４ＣＦＵ／ｍＬ；其１６ＳｒＤＮＡ序列与维氏气单胞菌具有高度的同源性，根据该菌的形态特征、生理生化特性，初步鉴定该菌为维氏气单胞菌（Aeromonas veronii），命名为ＮＴ－HＶ。

选择９种水产常用药物进行药敏试验，结果显示该菌对氟苯尼考、复方新诺明、新霉素、氧哌嗪青霉素敏感，对养殖场常用的四环素、强力霉素、羧苄青霉素、氨苄青霉素不敏感，提示在药物的使用过程中应注意药物的浓度和合理轮换。

关键词：暗纹东方鲀（Ｔａｋｉｆｕｇｕｏｂｓｃｕｒｕｓ）；维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）；致病性；分离；鉴定中图分类号：Ｓ９４１．４２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０13）03－0629-04２０１０年１０月，江苏某特种水产养殖场养殖的暗纹东方鲀（Ｔａｋｉｆｕｇｕｏｂｓｃｕｒｕｓ）发生死亡。

病鱼主要表现为腹部极度膨大，肛门红肿，体表及胸鳍、腹鳍和臀鳍残缺，鳍条基部充血、出血。

解剖发现腹腔内有大量淡黄色带血的腹水流出；肝脏肿大，呈土黄色，有大小不一的出血斑块；胆囊膨大；肠道无食，充满泡沫状黏液，肠黏膜出血。

取症状典型的濒死暗纹东方鲀心脏、肝脏病灶进行细菌分离培养，获得一株优势菌株。

本研究通过对分离菌进行形态观察、生理生化试验、１６ＳｒＤＮＡ序列分析，初步鉴定该菌为维氏气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｖｅｒｏｎｉｉ），命名为ＮＴ－ＨＶ，同时对其毒力及药物敏感性进行试验，旨在分析该菌的分类地位、致病因素、筛选敏感药物，为有效防治暗纹东方鲀维氏气单胞菌病提供依据。

细菌性食物中毒病原菌分布及微生物检验结果评价余军亮孔晓翠通讯作者

细菌性食物中毒病原菌分布及微生物检验结果评价余军亮孔晓翠通讯作者发布时间：2023-07-05T06:08:53.084Z 来源：《健康世界》2023年9期作者：余军亮孔晓翠通讯作者[导读] 目的探讨细菌性食物中毒病原菌分布及微生物检验结果。

方法调查2019年11月-2022年11月细菌性食物中毒事件，均检测原菌分布及微生物情况。

结果突发细菌性食物中毒共28起，中毒人数共166人，检出菌株共309株，其中后厨厨具12株（3.88%），粪便195株（63.11%），呕吐物14株（4.53%），残余食品88株（28.48%）。

沙门菌108株（34.95%），金黄色葡萄球37株（11.97%），致泄性大肠埃希菌125株（40.45%）。

沙门菌中，肠炎44株（40.74%），鼠伤寒25株（23.15%），德尔卑25株（23.15%），14株（12.96%）；金黄色葡萄球菌中，A型17株（45.95%），A-C型12株（32.43%），A-D型8株（21.62%）；致泻性大肠埃希菌中，致病性78株（62.40%），侵袭性32株（25.60%），产毒性15株（12.00%）。

结论细菌性食物中毒患者采用微生物检验能有效鉴别病原菌菌属与血清类型，明确污染源，对预防食物中毒具有重要意义。

隆阳区疾病预防控制中心检验科云南保山 678000摘要：目的探讨细菌性食物中毒病原菌分布及微生物检验结果。

方法调查2019年11月-2022年11月细菌性食物中毒事件，均检测原菌分布及微生物情况。

沙门菌108株（34.95%），金黄色葡萄球37株（11.97%），致泄性大肠埃希菌125株（40.45%）。

红茂草水提取物腹腔注射对小鼠半数致死量的测定

的吞噬功能、血清ＩＧ水平、ｇ红细胞Ｃｂ受体花环率和红细胞免疫复合物花环率也普遍增高，随剂量但
增加有下降趋势；荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的增殖功
全草入药，清热解毒、有消肿止痛、杀虫等功效。主治扁桃体炎、痛、喉痛、巴结核，牙咽淋外用于秃疮、疮疖疥癣、疽等症。红茂草能有效抑制由扑热息痈痛、介苗合并脂多糖、Ｃ起的小鼠肝损伤，卡Ｃ１引并
ＭＡｉｈｎｇＺｈ－ｏ
（ａｕＩｓｔｔｏｎｍｌｃｎｅａｄＶｔｉａｙＭｅｉｎ，Ｐｎｌｎａｓ４００，ｈｎ）ＧｎｎｔｕｓｉｅｆＡｉａｉｃｎｅｒｒｄｃｅｉｉｇＧｎｕ７４０ＣｉＳｅｅｎｉｇａａ
Ｋｅｏｄ：ｉａｏｔｍｐｏｏｕ（ａｉ．ｅｄ；ｉ；Ｄ０ｙｗｒｓＤｃｎｓｇａｌｔｄｍＭｘｍ）ＦｄｅｍｃＬ５ｒｉｅｐｅ
红茂草Ｉｉａｏｔｍｅｔｏｕ（ｘｍ．ｃｎｓｇａｌｏｄｍＭａｉ）Ｄｒｉｐｐ
畜牧兽医杂志
第２９卷
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
第５期
２１００年
１３
红茂草水提取物腹腔注射对小鼠半数致死量的测定
马志宏
（肃省畜牧兽医研究所，肃平凉７４０）甘甘４００
摘要：用寇氏法测定了红茂草水提取物腹腔注射小鼠的半数致死量（Ｄ。。取７Ｌ）０只昆明系小白鼠，雄各半，重（０± ），雌体２２ｇ按序贯法测出红茂草水提取物腹腔注射小鼠１０致死率的最小剂０％量和０致死率的最大剂量，％染毒测定其Ｌ如结果红茂草水提取物腹腔注射小鼠的Ｌ为Ｄ。Ｄ。

科学家改进了检测变异炭疽杆菌的方法

科学家改进了检测变异炭疽杆菌的方法
佚名
【期刊名称】《中国动物保健》
【年(卷),期】2004(000)010
【摘要】科学家们利用基因组数据寻找到新的诊断试剂和方法，并对致死性病原菌炭疽杆菌的进化和遗传记载有了进一步的认识。

北亚利桑那州大学(NAU)翻译基因组研究所(TGen)和基因组研究所(TIGR）的研究人员们通过对近1000个专一核苷酸多态性的研究，用极高的分辨率说明了几个不同的炭疽杆菌分离株的遗传和进化类型。

【总页数】1页(P55-55)
【正文语种】中文
【中图分类】S8
【相关文献】
1.炭疽杆菌双重可视化LAMP检测方法的建立 [J], 刘玉;陈文琦;王平;操敏;韩一芳;张琪;张锦海;王长军
2.炭疽杆菌基因检测方法研究进展 [J], 李凤元
3.快速检测炭疽杆菌的实时荧光定量PCR方法的建立及评价 [J], 杜清春;董珊珊;丁奕博;张艳;李伟;王鹏
4.炭疽杆菌RPA等温检测方法的建立和应用 [J], 王素华;袁淑辉;帅江冰;王忠才;蔡军;赵治国
5.科学家采用新一代测序技术为人类基因组结构变异检测提供新方法 [J],
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微毛诃子树皮醇提取液半数致死量的测定及对肠肌的作用

标本运动实验法观察微毛诃子树皮醇提液对豚鼠离体肠肌的影响及其作用机制。结果：微毛诃子树皮提取液小鼠灌胃给药的
ＬＤ。为５．６９ｇａｇ，ＬＤ的９５％的可信限为４．６０～７．０５ｇ／ｋｇ；微毛诃子树皮的醇提液对小鼠在体肠肌和豚鼠离体肠肌都具有明显的舒张作用，且组胺对微毛诃子树皮的醇提液的抑制作用具有拮抗作用。结论：微毛诃子树皮的醇提取液具有一定的毒性，同时微毛诃子树皮醇提液能在一定程度上抑制肠肌的收缩，且作用机制可能与阻断组织胺受体有关。［关键词］微毛诃子；半数致死量；肠肌
大理学院学报
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＤＡＬＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
第１３卷第１０期２０１４年ｌ０月
Ｖ０１．１３Ｎｏ．１０Ｏｃｔ．２０１４
［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２ — ２３４５．２０１４．１０．００３
ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｓｃｌｅｉｎｖｉｖｏ．ａｎｄｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎｌａｍｕｓｃｌｅｏｆＧｕｉｎｅａｐｉｇｉｌｆｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｅｘｐｅｉｒｍｅｎｔｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＢｌｉｓｓ．Ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎａｎｄｏｂｓｅｖａｒｔｉｏｎｏｎｔｈｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｄｅａｔｈｓｏｆ５ｄｗｅｒｅｄｏｎｅｉｎｍｉｃｅ．Ｗｉｔｈａｃｕｔｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｉｎｍｉｃｅａｓｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ．ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｔｏｆｔｅｍｉｒｎａｌｉａＬＤ５ｏｆｏｒｍｉｃｅｗａｓｄｏｎｅ；ｃｈａｒｃｏａｌｐｏｗｄｅｒａｎｄａｄｖａｎｃｉｎｇｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔａｌｓｔｕｄｉｅｄｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｒｕｇｓｏｎｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｓｃｌｅ；ｂａｓｅｄＯｎｉｓｏｌａｔｅｄＧｕｉｎｅａｐｉｇｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｓｍｏｏｔｈｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｅｎｓｉｏｎｉｎｄｉｃａｔｏｒ．ｉｓｏｌａｔｅｄｓｐｅｃｉｍｅｎｍｏｖｅｍｅｎｔｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｍｉｃｒｏ — ｔｅｒｍｉｎａｌｉａｂｒｋａａｌｃｏｈｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｎｉｓｏｌａｔｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ

肺曲霉菌感染者的微生物检验与临床诊治

肺曲霉菌感染者的微生物检验与临床诊治高静(涡阳县人民医院,安徽涡阳233600)性染色体数目增加或减少大多智力发育正常,性腺发育不良,副性征不发育[2]。

常见的有特纳综合征(核型为45,X )、X X X 综合征(核型为47,X X X )、克氏综合征(核型为47,X X Y )。

本文中性染色体数目异常有7例,有4例男性核型为47,X X Y ,性染色体多一条,临床表现为身材高大,性发育不良,无精或严重少弱精。

有2例女性核型为45,X ,临床表现为原发性闭经,卵巢及子宫发育不良。

有1例为特纳综合征嵌合体,45,X [72]/46,X X [28],临床表现随异常核型比例的增多而加重。

染色体结构异常包括易位、倒位、缺失等,本文有10例均为平衡易位携带者。

平衡易位是指两条不同源染色体的某一片段发生断裂后相互交换,并没有遗传物质的改变[3],因此,临床表现一般正常。

但是患者生殖细胞数分裂时会形成一种叫做四射体的结构,这种四射体可能产生18种配子,最终产生的胚胎中只有一种完全正常,一种为表型正常的携带者,其余16种均为异常胚胎,这些异常胚胎以孕早期自然流产为主[4]。

罗氏易位是一种特殊的染色体重排类型,是指发生在5条近端着丝粒染色体上的着丝粒断裂短臂丢失,长臂融合成为一条染色体,导致染色体数目减少的现象。

罗氏易位携带者产生的配子与正常配子结合会形成三体或单体,均会导致早期流产。

染色体多态性是指染色体结构或带型强度的微小变异,通常指异染色质区长度改变,但由于异染色质区主要为非编码的D N A ,没有转录活性,所以一般不影响染色体基因的表达,传统观念认为染色体多态属于正常变异,不具有临床病理意义。

随着检测技术的更新和对非编码基因的深入研究,有研究发现在细胞分裂中染色体多态部分会造成同源染色体配对困难,使染色体不分离,从而形成异常的配子,最终引发流产、不孕不育[5,6]。

本文有15例患者核型为多态染色体,占不孕不育总人数的11.9%,表明染色体多态性是引起不孕不育的重要原因,与国内外研究结果相符。

哈尔滨师范大学梦溪湖细菌总数测定

2021.12科学技术创新问题和困难解决办法和措施1.牛肉膏蛋白胨琼脂培养基不凝固怎么办1.应调节PH 值直至它凝固为止2.培养后观察不到细菌菌落怎么办 2.实验失败，再从头开始操作3.如何做到无菌操作 3.应在超净台上操作4.菌落计数不正确怎么办4.应使用菌落计数器等辅助工具进行计数5.操作过程中培养基凝结怎么办 5.应快速倒完且适量水中细菌总数与水体受有机污染的程度相关，现今国内外对细菌总数测定的方法有：检测片法、测定细胞重量法、显微记数法、稀释倒平皿法，荧光法等。

在本研究通过平板计数细菌总数测定法，采样分析了梦溪湖4个采样点的细菌总数，为梦溪湖水质污染状况评价和水污染改善提供参考依据。

1研究区域概况与采样点的布设本文的研究区域为梦溪湖，位于哈尔滨师范大学中部，其中共分四个区域，均为人工湖，人工湖泊采样点应该尽可能覆盖污染物所形成的污染面积，寻找能够切实反映水域的水质特征的采样点。

2017年5月确定梦溪湖水体的布点，共布设4个点，6-9月分别于每月的同一天取水样，并在取水的当天做实验，隔天进行菌落计数并记录。

共计16个点，采样点的分布如图1所示。

图1采样点示意图2材料与方法2.1水样的采集将水面以下0~15厘米的深水样品浸入带塞的灭菌的玻璃瓶中，将玻璃瓶瓶口朝下翻过来取下玻璃塞使水将流入瓶中，在玻璃瓶满时用瓶塞盖住瓶口，从水中取出后尽快检查。

2.2细菌总数测定方法本文使用平板计数法测定梦溪湖湖水中细菌总数[1-2]。

2.2.1依照国家卫生部于2001年9月份实施的《生活用水卫生规范》操作[3]，按照10倍稀释法和去离子水将水样稀释成倍数不同的水样，每个稀释度重复两次。

然后加入到四十五摄氏度的普通细菌培养基约15mL ，立即充分混匀，等到培养基凝固后，放到三十七摄氏度的恒温培养箱培养四十八小时，取出计数细菌总数。

2.2.2优势菌落种群的鉴定：使用菌落记数方法，通过观察已计数的有菌落的平板上的菌落的颜色、形态等性状，然后根据出现的频率确定优势菌落并进行分离培养。

细菌半数致死量测定张玉晴课件

意义
细菌半数致死量是评价抗菌药物抗菌活性的重要指标，对于临床合理选用抗菌药物、控制感染具有指导意义。
测定方法
01
琼脂平板稀释法
将抗菌药物稀释成不同浓度，分别涂布在琼脂平板上，培养细菌并计数，计算药物的半数致死浓度。
03
02
试管稀释法
将抗菌药物稀释成不同浓度，分别加入试管中，接种细菌并培养，观察细菌生长情况，计算药物的半数致死浓度。
实验案例一：细菌半数致死量测定实验
步骤 1. 将细菌接种于培养基上，培养至对数生长期。
2. 将细菌悬液与药物溶液混合，制备不同浓度的药物-细菌混合液。
实验案例一：细菌半数致死量测定实验
3. 将混合液接种于培养基上，培养一定时间。
4. 观察细菌生长情况，记录死亡和存活数量，计算半数致死量。
结果：得出某药物对某细菌的半数致死量值，为药物筛选和抗菌药物研发提供依据。
微量稀释法
利用96孔或384孔板进行药物稀释和细菌接种，通过自动化仪器进行培养和计数，快速获得药物的半数致死浓度。
实验材料与设备
抗菌药物
不同浓度的待测抗菌药物。
细菌
目标菌株，应保证纯度高、生长良好。
培养基
适合目标菌株生长的培养基。
实验设备
试管、吸管、琼脂平板、微量稀释板、自动化仪器等。
04 注确保实验器材的清洁与消毒，避免交叉污染。
实验操作过程中，应佩戴无菌手套，确保实验的准确性。
在测定过程中，要严格控制实验条件，如温度、湿度等，确保实验的一致性。
在处理细菌时，应避免长时间暴露在空气中，以免细菌散播。
安全防范措施
01
实验室内应保持空气流通，定期进行空气消毒。

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表1 HX4菌对斑马鱼的毒力（LD50）
组别剂量 CFU/mL 只数死亡数存活数累计结果(result) 生死死亡比例死亡率
1
2 3 4 5
1.2×1010
4.0×109 1.3×109 4.4×108 1.5×108
5
5 5 5 5
5
4 3 2 0
0
1 2 3 5
0 1 3
限）/2
LD50 95%可信限=lg -1（X50 1.96SX50） LD50平均可信限=L：相邻两组剂量对数值之差 P：各组动物死亡率，用小数表示 ∑P：各组动物死亡率之总和 n：每组动物数
预试验找出引起0%死亡率和100％死亡率剂量的所在范围
细菌LD50测定方法
报告人：张玉晴指导老师：李槿年教授
大纲
1
LD50基本概念
2
LD50计算方法
LD50具体操作步骤注意事项
3
4
1
LD50基本概念
半数致死量：LD50（Lethal dose）表示在规定
时间内,通过指定感染途径,使一定体重或年龄的某种动物半数死亡所需最小细菌数或毒素量。
2
LD50计算方法
1、寇氏法/改良寇氏法
2、累计法（Reed-Muench法） 3、霍恩氏法（Horn氏法）
4、加权法
5、序贯法
6、固定剂量法
7、logistic模型法
1、寇氏法/改良寇氏法公式：LD50= lg -1[Xm –i (∑P – 0.5)] X50=lgLD50
不考虑操作误差, 计算结果不够精确, 粗略判断
LD50。
3
拟态弧菌对草鱼LD50的测定
一、实验准备：
3~5%来苏尔浸泡24h 自来水冲洗
3
1 4
2
5
二、细菌总数测定
8000r/min 离心8min 30℃ 150r/min 振荡培养24h 测量菌落大小 100mLBHI 液体培养基离心收集菌体洗涤菌体3次
反应量大致呈正态分布剂量必须按等比级数分布
各组动物数相等
2、累计法（Reed-Muench法）
它是先将实验死亡动物数和存活动物数进行累计加和, 再用加和的数据计算死亡率。在死亡率中有2个数据A和B,且A刚好大于 50%,B刚好小于50%
计算方便, 更多地运用在微生物学中, 尤其在稀释分析中
10mL生理盐水重悬
平板菌落计 4℃保存用数法计数于攻毒
挑取HX4 单个菌落
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
10-6
10-7
10-8
10-9
记录平板上菌落数量，肉眼观察+放大镜检查
30℃倒置培养24h
数据处理
选取同一稀释度平均菌落数在30～300个之间的平板 1、一个稀释度，平均菌落数在30～300个之间时，乘以稀释倍数报告。 2、如有两个稀释度平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两者总菌数之比，比值小于或等于2应报告平均数，大于2则报告其中较小的数字。 3、如所有稀释度的平均菌落数均多于300个，应按稀释度最高的平均菌落数，乘以稀释倍数报告。 4、如所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则按稀释倍数最低的平均菌落数，乘以稀释倍数报告。 5、如所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一个稀释度大于300，而相邻的另一稀释度小于30，则以接近30 或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
三、攻毒
分别腹腔注射5组鱼
1.2×10 2.4×10 4.8×10 9.6×10 1.9×10 10 9 8
7 7
0.01g/L MS-222 麻醉 0.3mL
三、攻毒
观察7天内草鱼的发病和死亡情况，记录结果，按 Reed-Muench氏法计算LD50 病死鱼无菌解剖，观察内脏病变情况，并用接种环蘸取内脏接种于BHI固体培养基上，30°培养2d，对分离到的细菌进行革兰氏染色镜检。
14 9 5 2 0
14/14 100.0%
9/10 5/8 2/8 0/11 90.0% 62.5% 22.2% 0.0%
6
11
LD50=4.2×107CFU/mL
数据汇总：组别稀释比例 1 原液 2 1:3 3 1:9 4 1:27 5 1:81
死亡率 100% 90.0% 62.5% 22.2% 0.0%
综上所述：拟态弧菌HX4对斑马鱼半数致死量=1/14.3515×1.2×1010×0.05 =4.2×107
7、LD50计算
距离比例r=（高于50%死亡率－50）÷（高于50%死亡率－低于50%死亡率） =（62.5－50）÷（62.5－22.2） =0.310 lgLD50=高于50%死亡率稀释度倒数的对数+距离比例 ×稀释倍数的对数 =lg9+0.310×lg3=1.1021 LD50=14.3515 即当细菌原液稀释成1:14.3515时，腹腔注射斑马鱼，能使50%斑马鱼发生死亡。