亳芍生物碱提取鉴定及含量测定

亳芍生物碱提取及含量测定

作者周飞

指导教师陈乃东

摘要：用95%乙醇提取亳芍干粉，总提物回收乙醇后以盐酸酸化，继以二氯甲烷萃取，水相加氨水至pH ﹥8.0后以氯仿萃取，回收氯仿获粗提物。对该粗提物的TLC检测表明，亳芍中含有生物碱，且可能是乌头碱类生物碱。酸碱滴定法初步测定的生物碱含量，以乌头碱计，亳芍中总生物碱含量约为0.07%。

关键词：亳芍生物碱显色反应酸碱滴定

The primary research of the extracting and assaying of the alkaloids

from Baishao Paeoniae Radix Alba

Bachelor candidator Fei Zhou

Adviser Nai-Dong Cheng

Abstract：Total extract was extracted from Root of herbaceous peony's dry powder by using95%alcohol.We recover alcohol from the total extract,then join hydrochloric acid,then using

methylene chloride to extract.We join ammonia to pH﹥8.0in aqueous phase,then using chloroform to extract. We recover chloroform to get rough extract.TLC testing indicated that Baishao Radix Paeoniae Alba contains alkaloids,and the alkaloids may be aconitine class.Acid-base titration rough determination showed that Baishao Paeoniae Radix Alba content about0.07%total alkaloid with the aconitine represented.

Key words：Baishao Paeoniae Radix Alba Alkaloids Color reaction Acid-base titration

亳芍(Radix Paeoniae Alba)，即亳白芍，主产安徽省亳州地区，为安徽道地药材之一，是芍药科植物芍药(Paeonia lactiflora)或其变种毛果芍药(Paeonia trichocarpa)栽培品的根。芍药为多年生草本植物，夏秋季采挖其根部，去净泥土和支根，沸水浸或略煮至受热均匀，再经晒干等处理后即炮制成中药亳芍，加工后的亳芍呈粉白色或白色。亳芍具有抗炎、免疫调节、抗病毒、抗氧化、抗惊厥、护肝等作用，对胃肠道疾病和心血管疾病也有一定的疗效[1]。

已有的研究表明，亳芍主要含有单萜[2-7]、倍半萜及三萜[7,8]、单宁[9]、挥发油[10]、黄酮[8,11]、多酚类[13,14]、多糖[15,16]等活性成分，其中，芍药苷（一种单萜类化合物）是亳芍的主要活性成分[5,17-19]。为了进一步揭示亳芍的药效物质基础，为开发利用亳芍资源、繁荣当地经济提供参考依据，我们对亳芍的化学成分进行了一次深入研究。初步的定性鉴定研究结果表明，亳芍中含有生物碱。到目前为止尚未有亳芍中含有生物碱的研究报道，为此，本文对亳芍生物碱的提取、定性鉴定以及亳芍生物碱含量的初步测定等进行了研究，为后续的亳芍生物碱的分离鉴定奠定基础。

1材料仪器试剂

1.1材料

实验材料亳芍购于安徽省亳州市，品种经安徽中医学院黄和平博士鉴定。

1.2仪器

GJ14-DGF3006型电热恒温干燥箱（金坛市荣华仪器制造有限公司），HH-4型数显恒温水浴锅（金坛市国华电器有限公司），LX-02型利祥100g手提式粉粹机（上海江信科技有限公司），RE-52D型旋转蒸发器(上海浦沪仪器厂)，FA-1004型电子天平（上海精科天平厂），WD-9402E型紫外检测器（北京市六一仪器厂），TDL-5Z台式多管架自动平衡离心机（湖南星科科学仪器有限公司），冷凝管，漏斗，分液漏斗，碱式滴定管，250mL锥形瓶2个，150mL 锥形瓶5个，25mL量筒1个，50mL量筒1个，1mL移液管1个，5mL移液管1个，10mL移液管1个，250mL烧杯1个，50mL烧杯3个，100mL容量瓶1个

1.3试剂

无水乙醇(扬州沪宝化学试剂有限公司），氨水(扬州沪宝化学试剂有限公司），无水乙醚（扬州沪宝化学试剂有限公司），氯仿(西陇化工股份有限公司），二氯甲烷(西陇化工股份有限公司），乙酸乙酯(西陇化工股份有限公司），甲醇（河北四友卓越科技有限公司），冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司），甲醛（无锡市展望化工试剂有限公司），浓硫酸(汕头市西陇化工厂有限公司），次硝酸铋，碘化钾（蚌埠化学试剂厂），浓盐酸(汕头市西陇化工厂有限公司），茚三酮，甲基红，溴甲酚绿，硫酸，氢氧化钠以上试剂药品均为国产分析纯。

2方法

2.1工艺流程图

本实验中亳芍总生物碱的提取工艺流程如下：

2.2亳芍总生物碱的提取

2.2.1干燥

亳芍先剪成薄片状，然后粉粹，干燥箱中干燥至恒重。

2.2.2提取

称取25g干燥至恒重的亳芍粉末，以95%乙醇、料液比1:4(g:mL)、85℃冷凝回流提取三次，每次提取4小时。过滤，合并滤液，减压浓缩回收乙醇至提取液无醇味，浓缩液备用。

2.2.3纯化

将在2.2.2中所获生物碱浓缩液加水适当稀释、定容，缓缓加入浓盐酸，使溶液中浓盐酸含量达5%（V/V），摇匀，待充分反应后4000转/min离心5分钟，弃去沉淀，上清液加等体积二氯甲烷萃取萃三次取除杂，水相备用。

2.2.4萃取

向2.2.3所获水相中缓慢滴加氨水至溶液显碱性p H≧8.5（精密pH试纸测定），加入等体积氯仿萃取三次，合并氯仿相，减压回收氯仿，得亳芍总生物碱，加氯仿定容至100mL，平均分成2份，备用。

2.3亳芍生物碱的鉴定

2.3.1薄层层析

取一份总生物碱适当浓缩，在五块G254硅胶薄层板上分别点样，以乙酸乙酯：氯仿：