尿蛋白电泳扫描及图谱
尿蛋白电泳在肾脏疾病诊断中的临床应用
［ ｙｗ ｒ ｓ ｕ ｉｅｐ ｏｅｎｅｅｔｏ ｈ ｒ ｓｓ Ｓ － Ｋｅ ｏ ｄ ］ ｒｎ ｒ ｔｉ ｌｃｒ ｐ ｏ ｅｉ； ＤＳ ＡＧＥ； ｋ ｄ ｅ ｉｅ ｓ ｉｎ ｙｄｓ ａｅ
用 于 肾脏 疾病 诊 断 的 传 统 。 能 测 定 ， 能大 体 了解 肾 脏 肾功 只 功 能 的情 况 ， 能 判 断 肾脏 损 伤 的 部 位 和 程 度 。尿 液 成 分 的 分 不
疾 病 患者 尿 液 进 行 电 泳 分析 。 结 果 根 据 尿 蛋 白 电 泳 图谱 扫 描 测 定 ， ０ １ ４例 尿 蛋 白 电泳 显 示 １ Ｏ例 为 生 理 性 蛋 白 尿 ， ７例 为 肾小 球 性 ３ 蛋白尿 ， ２例 为 肾小 管 性 蛋 白尿 ， ５例 为 混 合 性 蛋 白尿 ， 中 ２ １ ４ 其 Ｏ例 同 时做 肾 活检 ， 系膜 增 生 性 肾 小球 肾 炎 １ ８例 ， 增 生性 肾 小球 肾 炎 ２ ， Ｄ － ＧＥ尿 蛋 白 电 泳 结 果 与 肾活检 结 果基 本 相 符 。 结 论 琼 脂糖 尿 膜 例 Ｓ ＳＡ
析 ， 其 是尿 蛋 白 电泳 成 分分 析 ， 据 各 组 分 的 出现 与否 及 含 量 尤 根
３０ ０ｒｒｉ 心 ５ｍｉ ， 在 生 化 分 析 仪 上 测 定 尿 蛋 白 总 量 ， ０ ／ ｎ离 ａ ｎ先 若 尿 蛋 白 含 量 大 于 １ ５ｇ Ｌ， 用 生 理 盐 水 将 尿 液 作 相 应 稀 ． ／ 则
１ ｉ ｅ ｓ ｍ ｐｌｓ ｗ ｅ ｅ ｃａ ｓｆｅ ｓ ｔ ｅ ｆ ｌ ｗ ｉ ａｔｇｏ ｉｓ： ０ ｗ ｅ ｅ ｐｈｙ ｉ ｏ ｃ ｌｐｒ ｅｎ ｉ ３ ｗｅｒ ｏ ｅ ｕ ａ ０４ ｕｒｎ ａ ｅ ｒ ｌｓ ｉｉｄ ａ ｈ ｏｌｏ ｎｇ ｃ ｅ ｒｅ １ ｒ ｓｏｌｇｉａ ｏｔｉ ｕｒａ； ７ ｅ ｇｌｍ ｒ ｌ ｒ ｐｒ ｅｎｕ ｉ １ ｗｅ ｅ ｔ ｂｕｌｒ ｐ ｏ ｅｎｕｒａ；４５ ｗ ｅ ｅ ｍ ｉ ｄ ｐｒ ｔ ｉ ｉ．Ａ ｍ ｏ ｈｅ ２ ｔｅ ｓ ｗｈｏ ｕｎｄ ｒ ｎｔｐｅ ｃ ｔ ｏｔ ｉ ｒａ； ２ ｒ ｕ ａ ｒ ｔｉ ｉ ｒ ｘｅ ｏ ｅｎｕｒａ ｎｇ ｔ ０ ｐａ ｉｎｔ ｅ ｗｅ ｒ ｕ ａ ｎ ｏｕ ｅ ａ ｏ ｙ ｓｒ ｕ１ａ ｏ ｌ １ ｅ ｅ ｍ ｅ ａ ｇｉｌｐｒ ｌｆ ｒ ｔｖｅ ｇｏｍ ｅ ｕｌ ｅ ｓ ｒ ｎ ｌｂｉｐｓ ｉｎ ｔ ｎｅ ｕｓｙ， ｗ ｒ ｓ ｎ ａ ｏ ｉｅ ａ ｉ ｌ ８ ｒ ｏｎｅ ｈｒｔｓ， ｅ ｅ ｍ ｅ ｂｒ ｎｏｐ ｏｌｆ ｒ ｔｖ ｐ ｉｉ ２ ｗ ｒ ｍ ａ ｒ ｉｅ ａ ｉ ｅ ｇｌｍ ｅ ｕｌ ｅ ｏ ｒ ｏｎ ｐｈｒｔｓ ｈ ｅ ｕｌｓ ｆ ｕ ｉ ｏｔ ｉ ｌ ｃ ｒ ｈｏ ｅ ｉ ｅ ｅ ｎ ｃ ｏｒ ｎ ｅ ｉｉ．Ｔ ｅ ｒ ｓ ｔ ｏ ｒｎｅ ｐｒ ｅｎ ｅ ｅ ｔｏｐ ｒ ｓｓ ｗ ｒ ｉ ａ ｃ ｄａ ｃ ｗｉｈ ｒ ｎ ｌｂｉ ｙ． ｎｃｕ ｉｎ ｔ ｅ ａ ｏｐｓ Ｃｏ ｌｓｏ
非浓缩尿蛋白电泳法和免疫散射比浊法测定尿免疫球蛋白G的比较
６ ２ ｃ ａ ｓ ｅ ｓ ｗｉ ｔ ｈ ｕ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ （ ＋ ～ ＋ ＋ ＋ ＋ ）ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｄ ｒ ｙ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｔ ｗｅ ｌ ｖ ｅ ｓ ｏ ｄ ｉ ｕ ｍ
ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏｐ ｈｏｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｗａ ｓ ５３ ，ａ ｎｄ ｔ ｈａ ｔ ｂｙ ｉ ｍ ｍ ｕｎｅ ｎｅ ｐｈｅ ｌ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｗａ ｓ ６ ４ ，ｗ ｉ ｔ ｈ ｎ ｏ ｓ ｉ ｇｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａｎ ｔ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ （ Ｐ ＞ Ｏ． ０５） ． Ｔｈｅ ｃ ｏ ｍ ｐｌ ｅ ｔ ｅ ｃ ｏ ｉ ｎｃ ｉ ｄｅ ｎｃ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ ｔ ｗｏ ｋｉ ｎｄ ｓ ｏｆ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄｓ ｉ ｎ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎｇ ｎ ｏｎ — ｃ ｏｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎａ ｒ ｙ Ｉ ｇ Ｇ ｗａ ｓ ８ ９ ，ａ ｎｄ ｃ ｏｅ ｆ ｆ ｉ — ｃ ｉ ｅ ｎ ｔ ｃ ｏｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｗａ ｓ ０． ９５， ｓ ｈｏ ｗｅ ｄ ｓ ｉ ｇｎｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎｔ ｌ ｙ ｐ ｏｓ ｉ ｔ ｉ ｖｅ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏｎ（Ｐ＜ ０．０１ ） ．Ｃｏｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｎｏｎ － ｃ ｏ ｎｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｄ ｐ ｒ ｏ— ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏｐ ｈｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ａ ｎｄ ｉ ｍ ｍ ｕｎｅ ｎｅ ｐ ｈｅ ｌ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ｓ ｈ ｏｗｅ ｄ ｎｏ ｏ ｂｖ ｉ ｏｕ ｓ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｉ ｎ ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏｎ ｏｆ ｕｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ ｌ ｇ Ｇ ． Ｔｈｅ ｔ ｗｏ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄｓ ｈ ａ ｖ ｅ ａ ｓ ｉ ｇｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｃ ｏｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ａ ｎｄ ａ ｒ ｅ ａ ｃ ｃ ｕｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎｄ ｈｉ ｇｈ ｓ ｅ ｎｓ ｉ ｔ ｉ ｖ ｅ ．
正确分析血清蛋白电泳扫描图
正确分析血清蛋白电泳扫描图苏洁平,张晓静(吉林大学中日联谊医院,吉林长春130031) 血清蛋白电泳虽然是一个传统的检验项目,但目前在临床上对一些疾病的诊断(如对肝病、肾病、多发性骨髓瘤,以及一些自身免疫性疾病等)仍起着不可替代的作用。
血清蛋白电泳就是根据血清中各组分蛋白质分子量的不同,将各组分蛋白质分离开,分子大的泳动慢、分子小的泳动快,依次分为白蛋白、α12球蛋白、α22球蛋白、β2球蛋白(有时可出现前β2球蛋白带区属正常)和γ2球蛋白5个带区(或6个带区)[1,2]。
常见几种疾病的蛋白电泳变化见表1。
表1 几种常见疾病的血清蛋白电泳扫描图的变化特征病名白蛋白球蛋白α12球蛋白α22球蛋白β2球蛋白γ2球蛋白肾病↓↓↑↑↑↑↓弥慢性肝损伤↓↓↑↓↓↑肝硬化↓↓↓↓β2γ桥原发性肝癌↓↓AFP↑多发性骨髓瘤↓↓↑↑↑慢性炎症↓↑↑↑妊娠↓↑↓无丙种球蛋白血症↓↓双血蛋白血症双峰 注:↑轻度增高,↑↑明显增高,↓轻度降低,↓↓明显降低 下面对几种血清蛋白电泳扫描图作简要说明[3,4]。
1 图1:为正常人血清蛋白电泳扫描图,由左至右为白蛋白峰、α12球蛋白峰、α22球蛋白峰、β2球蛋白峰、γ2球蛋白峰。
其含量分别为52%～63%,4%～5%, 6%～9%,9%～12%,15%～23%。
2 图2及图3:见增高的γ2球蛋白峰。
肝病患者病程较长,当白蛋白和α12球蛋白降低,γ2球蛋白增高,提示病情较重。
当肝细胞严重受损时,β2球蛋白可降低,重症肝炎转为肝坏死后γ2球蛋白增高。
3 图4:可见β区到γ区连续一片,难以分开,是由于IgA、IgM、IgG同时增高所致,称β2γ桥。
β2γ桥为肝硬化所独有的特点。
如伴有α12球蛋白、α22球蛋白降低即可诊断肝硬化。
若治疗后白蛋白回升,标志治疗有效。
4 图5:见明显增高的α22球蛋白峰,β2球蛋白峰同时增高,而白蛋白峰明显减低。
由于肾病患者长期丢失白蛋白,故血清中的蛋白明显减少。
蛋白测定、电泳
（五）染料结合法
• 考马斯亮蓝常用于需更高呈色灵敏度的蛋 白电泳中，也可用于测定尿液、脑脊液等 的蛋白质，
• 优点：简便、快速、灵敏 • 缺点：不同蛋白质与染料的结合力不一 致，且试剂对比色杯有吸附作用。
（六）紫外吸收法
• 测定原理：蛋白质中的色氨酸、酪氨酸 的共轭双键，在280nm处有一吸收峰。 • 尿酸和胆红素在280nm附近有干扰，不 适合血清、尿液等组成复杂的蛋白质溶 液测定
表3-2
三种比色法和紫外分光光度法测定蛋白质的比较
灵敏度
化学干扰程度 不同蛋白质
快速性和
(最低测定值)
间的误差
复杂性
双 缩脲 100μg 酚试剂 1μg 考马斯亮蓝 1μg 紫外分光光度 10μg
中等 严重 低 较严重
小 大 大 大
快速简单 较复杂 快速简单 快速简单
表3-6
方 法 1．凯氏定氮法
• 用于较纯酶、免疫球蛋白等蛋白质测定
（六）紫外吸收法
• 生物样品也常混有核酸，核酸最大吸收峰为 260nm，在280nm也有较强的光吸收，因而 测定蛋白质可采用两个波长的吸光度予以校 正. • 蛋白质浓度（g/L）＝1.45A2800.74A260nm。
（六）紫外吸收法
• 优点： 操作简便、快速，线性 20-100mg/l 灵敏度高(较双缩脲法约10倍)， 样品少，且无需处理可直接测定 样品可全部回收，特别适用于来源不 便，成本较高的微量蛋白的定量。 • 缺点:不适用成分复杂的蛋白
免疫透射浊度法如图3－23所示
（四）比浊法
• 优点 操作简便、灵敏度高
• 缺点 准确性差、各种蛋白质形成的浊度有
较大差异，影响因素多，包括加入试剂的
手法、混匀技术、反应温度等。 • 一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度 较低的样品
尿蛋白电泳及尿本周蛋白检测在肾病中的应用
4• 浆细胞 合成抗体蛋白,即免疫球蛋白.
Immunoglobulin
5• 免疫球蛋白 在免疫系统中被用来识别和消 灭如细菌或病毒等外源物
正常浆细胞
正常免疫球蛋白的合成 骨髓瘤或其他恶性浆细胞增生
Normal Immunoglobulin
• 电泳技术就是利用在电场的 作用下, 由于待分离样品中 各种分子带电性质以及分子 本身大小, 形状等性质的差 异, 使带电分子产生不同的 迁移速度, 从而对样品进行 分离, 鉴定或提纯的技术.
• 在生化检测中, 主要用于分 离各类蛋白分子.
正常的电泳图谱
经过毛细管电泳后, 血清蛋白将会被分离成6个条带并同时标注出检测结果
低免疫球蛋白血症
如果血清中未见异常,建议 做尿本周氏蛋白检测
原因: 先天免疫缺陷, 免疫抑制治疗过程中, 游离轻链病)
通过对血清蛋白电泳结果中出现的单克隆免疫球蛋白检测, 对免疫球蛋白疾病进行诊断
有症状型性免疫球蛋白疾病: - 多发性骨髓瘤 - 巨球蛋白血症 - 非霍奇金淋巴瘤 - 慢性淋巴细胞白血病 - 重链病 - 淀粉样病变
出现的单克隆M蛋白
正常免疫球蛋白 的电泳结果图谱 Normal Proteinogram
单克隆免疫球蛋 白的电泳图谱
Proteinogram showing Monoclonal peak
多发性骨髓瘤
人群分布:
多发性骨髓瘤仅次于白血病, 是目前发病率排第二位 的恶性血液肿瘤
占所有肿瘤的1% (每年超过15 000人死于该疾病) 欧洲目前有60 000患者, 世界范围有250 000 因浆细胞过度增殖,继而影响骨髓
尿蛋白电泳对肾损伤诊断的价值
室指标 ， 具 有临床诊 断 价值Ｌ １ ］ 。我 们 应 用 十 二 烷 基 硫 酸 钠 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电泳 （ ｓ Ｄ ｓ － Ｐ Ａ ＧＥ ） 技术进 行非浓 缩尿 蛋 白 电泳 ， 用 于肾脏损伤的早期诊断 。
１ 资 料 与 方 法
区带 ； ⑤高相对 分 子质 量蛋 白尿 （ 非 选择 性 肾小 球性 蛋 白 尿） ： 相对分子质量 为 ５ ０。 Ｏ Ｏ ～１ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ， 图形 特 征 为 电泳 条 带 出现 在 清 蛋 白 区 带 以 上 ； ⑥ 混 合 性 蛋 白 尿 ：相 对 分 子
生组织／ 国 际 高 血 压 联 盟 制 定 的高 血 压 诊 断 标 准 ， 所 有 的 肾 病 患 者 均 经 肾 穿 刺 病 理 检 查 确 诊 。对 照 组 ３ Ｏ名 均 来 自本
院健 康 体 检 人 群 ， 男性 １ ８名 ， 女性 １ ２名 ， 平均 年龄 ５ ５岁 。
经检查无糖尿 病、 高血压 、 尿 蛋 白定 性 检 查 阴 性 。 ｌ ＿ ２ 标本 采 集 ： 患 者 留取 清 晨 首 次 尿 液 约 ５ ～１ Ｏ ｍＬ ， 若 尿 液 明显浑 浊 ， ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍｉ ｎ离 心 ３ ｍｉ ｎ ， 取 上 清 用 于 电 泳 检 测， 若 不能及 时检 测 ， 密 封 后保 存 于 ４℃冰 箱 中不 超 过 １
条 带 出 现 。病 例 组 与 对 照 组 尿 蛋 白 电泳 检测 结果 ， 见表 １ 。
表 １ 病 例 组 与 对 照 组 尿 蛋 白 电 泳检 测 结 果 比较
３例 ， 肾盂 肾 炎 ５ 例 。糖 尿 病 诊 断 符 合 １ ９ ９ ９年 世 界 卫 生 组 织 糖 尿 病 诊 断 和分 类 标 准 ， 高血压 诊断符合 １ ９ ９ ８年 世 界 卫
电泳技术基本原理和步骤
目录
• 第一节 • 第二节 • 第三节 • 第四节 • 第五节 • 第六节 • 第七节 • 第八节
区带电泳 等电聚焦电泳 SDS-PAGE电泳 二维电泳 印迹技术 免疫电泳 高效毛细管电泳技术 电泳分析仪
基本原理
不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在 一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。
第二节 等电聚焦电泳
• 区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度
• 那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在 泳道中本来就有“固定”位置，蛋白质在相应的位 置上停留？
• 蛋白质如何能够停止电泳？
• 除了切断电源之外？
• 蛋白质不带电了——蛋白质处于等电点溶液中
第二节 等电聚焦电泳
• 基本原理 在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的pH梯度介
第四节 二维电泳
• 检验医学中的应用
一个问题：如何确定某个条带 是什么蛋白质？
图 6-1 正常血清蛋白电泳图谱 上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分； 下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白
第五节 印迹技术
• 免疫印迹法－－基本原理
图 6-13 免疫印迹法的原理
第五节 印迹技术
区带电泳
• 检验医学中的应用－－ 同工酶电泳
图6-3 LDH同工酶区带电泳图谱 左：5份血清iso-LDH电泳图；右：iso-LDH电泳示意图
第一节 区带电泳
• 检验医学中的应用－－ 同工酶电泳
图6-4 CK同工酶示意图 左：血清iso-CK电泳图，3示正 常血清（CK MB<5%），1、2、 4示急性心梗（CK MB>5%）；4 示CK BB阳性； 右：iso-CK电泳图谱示意图
SDS-AGE尿蛋白电泳技术在肾脏疾病中的应用研究
SDS-AGE尿蛋白电泳技术在肾脏疾病中的应用研究杨小燕;吴泳泳;吕春;雷文辉【摘要】@@ 蛋白尿是肾脏疾病的常见临床表现,尿蛋白的选择性在一定程度上反映肾脏病变的程度.肾活检诊断肾脏疾病的准确性虽然高,但由于肾活检属创伤性诊断技术,存在很多不足,如患者的恐惧;顾虑;可能造成出血;感染等.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2010(028)001【总页数】2页(P82,92)【作者】杨小燕;吴泳泳;吕春;雷文辉【作者单位】江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000;江西省赣州市人民医院检验科,江西赣州,341000【正文语种】中文【中图分类】R446.12+2蛋白尿是肾脏疾病的常见临床表现，尿蛋白的选择性在一定程度上反映肾脏病变的程度。
肾活检诊断肾脏疾病的准确性虽然高，但由于肾活检属创伤性诊断技术，存在很多不足，如患者的恐惧；顾虑；可能造成出血；感染等。
因此，本文采用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶(SDS-AGE)进行非浓缩尿蛋白电泳技术分析，在一定程度上可反映肾脏病变的部位及程度，对临床诊断和早期诊断肾脏疾病，特别对未开展肾活检的基层医院有重要临床意义。
1 资料与方法1.1 标本采集1.1 .1病例组 60例肾病患者均来自我院肾内科2008年1月～2008年12月住院病人，年龄10～70岁，平均42岁，男38例，女22例。
1.1 .2对照组健康人5例，无肾脏病史及其他慢性病史，尿蛋白含量0～100mg/24h。
1.2 仪器与试剂1.2 .1仪器法国Sebia公司产HYDRASYS全自动程序化琼脂糖凝胶电泳仪。
1.2 .2试剂均使用该公司提供的专用标准液和试剂。
1.3 方法1.3 .1 样品采集及处理收集新鲜晨尿5～10ml，标本如不能及时测定放冰箱时间不超过1周，先用尿蛋白筛选定量法测定蛋白含量，如蛋白质高于2g/L，则用生理盐水稀释至1.5g/L。
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尿蛋白电泳扫描及图谱
网络
仪器：Sebia Hydrasys LC、Hyrys
方法：琼脂凝胶电泳
染料：四氮唑盐
HYDRAGEL PROTEINURIA
HYDRAGEL PROTEINURIA
HYDRAGEL HIGH RESOLUTION(HR) PROTEINURIA
聚丙烯酰胺电泳(SDS)可以用来鉴别肾小球与肾小管蛋白尿，此电泳方法能按分子量大小分离尿中蛋白，对于区分生理性、小球性、小管性或混合性蛋白尿较其它方法都好。
SDS可在无损伤情况下，协助临床判断肾脏损害的部位。
中分子及高分子量蛋白尿主要反映肾小球的病变；低分子蛋白尿可以是肾小管及间质的病变，或是溢出性蛋白尿；混合性蛋白尿往往是病变波及肾小球、肾小管及间质。
另外对临床症状不典型及微量蛋白尿或肾
病治疗过程中病情的动态分析，通过尿SDS检测也很有价值。
由于正常肾小球基底膜的屏障作用，尿中不能检出大分子蛋白，如果尿SDS出现大分子蛋白区带，为肾小球基底膜有异常改变。
当尿SDS出现大量小分子蛋白时，提示肾小管回收能力下降，或小管分泌中分子蛋白。