单克隆抗体的制备及应用
单克隆抗体制备及应用虚拟仿真实验报告
单克隆抗体制备及应用虚拟仿真实验报告
这是一个非常有趣的话题,我可以为你提供一份关于单克隆抗体制备及应用的虚拟仿真实验报告。
实验目的：
本实验旨在通过虚拟仿真技术掌握单克隆抗体制备及应用的基本原理和操作方法,加深对单克隆抗体的理解,为未来实验研究提供基础知识和技能支持。
实验仪器和试剂：
计算机、网络、虚拟实验软件、单克隆抗体制备试剂盒、细胞培养液等。
实验步骤：
1. 打开虚拟实验软件,进入单克隆抗体制备模拟实验界面。
2. 准备细胞、培养液和单克隆抗体制备试剂盒。
3. 利用虚拟实验软件完成单克隆抗体制备的各项实验操作,包括细胞培养、抗原处理、单克隆抗体的制备和纯化等。
4. 模拟实验完成后,根据虚拟实验结果进行数据分析和实验报告撰写。
实验结果：
通过虚拟实验软件的操作,成功制备单克隆抗体。
经过多次实验的数据分析,得到了以下结果：
1. 培养细胞数目的增加会影响单克隆抗体的制备数量。
2. 抗原处理和单克隆抗体制备的条件对单克隆抗体品质有很大的影响。
3. 单克隆抗体制备后需要进行纯化操作,得到高品质的单克隆抗体样品。
结论：
通过虚拟实验学习单克隆抗体制备和应用可以有效提高学生的实验技能,并且加强对单克隆抗体的理解和认识。
虚拟实验不受时间、空间等限制,能够大大降低实验成本,提高实验成功率,同时也更加安全,是非常有益的教学手段。
单克隆抗体的制备和应用
杂交瘤技术原理
聚乙二醇（）：细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细 胞与小 鼠骨髓瘤细胞融合 培养基的选择培养：反复的免疫学检测筛选克隆化增殖的 杂交瘤 细胞系 单克隆抗体生成：接种杂交瘤 细胞于小鼠腹腔，腹水中 即可得到高效价的单克隆抗体
流程
培养液
培养液 培养液
细胞融合剂
:分子量 的是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排， 使细胞膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分 子量的，其纯度与毒性有所不同
特点：
更高的的灵敏度和清晰度
与的比较
抗原要求 得量 特异性 稳定 沉淀反应 成本
可以不纯 高 高 低 无 高
纯度高 低 低 高 有 低
第三节 基因工程抗体
基因工程抗体
根据研究者的意图，采用基因工程方 法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进 行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进 行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合 抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗 体和双特异性抗体。
免疫脾细胞的制备
× 淋巴细胞 无菌手术
采取饲养细胞
细胞密度过低不利于细胞生长繁殖 常用小鼠腹腔细胞作饲养细胞 其中还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过周，不影响杂交瘤细胞的纯化
饲养细胞
。
融合方法
骨髓瘤细胞与淋巴细胞() 内加完;
内加培养液
细胞融合
细胞与脾细胞的比例为： 的（无菌，预温℃）在分钟内滴完,静置秒,时间一到,将事 先准备的培养液一滴一滴加入,停止作用 根据细胞数量加入培养基，使之分加到孔板中时每孔细胞数 为×个。融合后天，换用培养液。
第四节 单克隆抗体应用
检验医学 体外诊断试剂 标记免疫测定
单克隆抗体的制备及应用
单克隆抗体的制备及应用 It was last revised on January 2, 2021单克隆抗体的制备及应用单克隆是由杂交瘤产生的、只针对复合上某一单个。
技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的，并以此生产抗体。
是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
1 单克隆抗体的优点与局限性：单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。
单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。
由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
2 单克隆抗体的制备：单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。
这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与、细胞融合、选择杂交瘤细胞及检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。
免疫学研究中单克隆抗体的制备及其在疾病预防和治疗中的应用
免疫学研究中单克隆抗体的制备及其在疾病预防和治疗中的应用中文版：免疫学研究中单克隆抗体的制备及其在疾病预防和治疗中的应用单克隆抗体(mAb)是由单一的淋巴细胞克隆所产生的抗体，是目前广泛应用于疾病预防和治疗的一类生物制品。
单克隆抗体具有高特异性、高亲和力以及高度稳定性等优点，因此研究和开发单克隆抗体已成为生物制品领域的热点之一。
本文将简要介绍单克隆抗体的制备原理及其在疾病预防和治疗中的应用。
单克隆抗体的制备原理制备单克隆抗体的基本原理是从一个淋巴细胞中获得特异性单一的抗体基因并进行扩增，从而得到大量相同的单克隆抗体。
其过程包括以下几个步骤：1. 免疫原选择首先需要选择合适的免疫原，一般采用纯化的蛋白质、多肽或者病毒、细胞等生物体的整体或部分结构。
此外，也可以利用人工合成的类似物或其他不同来源的物质进行免疫原选择。
2. 免疫反应将免疫原注射到动物体内，动物的免疫系统便会针对该免疫原产生相应的抗体。
这个过程需要仔细控制免疫原的种类、用量和注射方式等因素，以确保获得高效的及特异性的免疫反应。
3. 细胞融合将免疫细胞和肿瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞(Hybridoma)。
该过程需要注意克隆合适的融合细胞和免疫细胞，以保证融合后的细胞能够稳定分泌特异性的单克隆抗体。
4. 筛选与鉴定对杂交瘤细胞进行筛选和鉴定，以获得产生高效的单克隆抗体的细胞株。
筛选方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞术、免疫组化等多种方法。
5. 生产和纯化选优的杂交瘤细胞株进行大规模生产，获得相应的单克隆抗体。
此外，还需要对其进行充分的纯化和质量分析等，以保证单克隆抗体的稳定性和高纯度。
单克隆抗体在疾病预防和治疗中的应用单克隆抗体广泛应用于疾病预防和治疗领域，其疗效与其优越的结构和性质密切相关。
在疾病预防中，单克隆抗体可用于对特定细菌、病毒等病原体的识别和清除，从而预防感染和疾病的发生。
目前已经有多种单克隆抗体用于疾病预防，其中包括白喉疫苗、流感疫苗等。
单克隆抗体的制备及应用实验原理
单克隆抗体的制备及应用实验原理1. 简介单克隆抗体是指由单一B细胞克隆扩增得到的抗体，在医学研究和生物制药等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法及其在实验中的应用原理。
2. 单克隆抗体的制备方法单克隆抗体的制备需要经历以下几个步骤：2.1 免疫原的选择免疫原的选择是单克隆抗体制备的第一步。
通常选择与所需抗体结构最为相似的蛋白质作为免疫原，可以是纯化的蛋白质、重组蛋白、细胞表面抗原等。
2.2 免疫动物的免疫选择适当的免疫动物，常见的包括小鼠、大鼠、兔子等。
将免疫原与免疫佐剂混合注射到动物体内，触发免疫反应，使得免疫动物产生特异性抗体。
2.3 细胞融合将免疫动物的脾细胞和癌细胞进行融合，常用的癌细胞包括骨髓瘤细胞、淋巴瘤细胞等。
通过融合方法，使得脾细胞和癌细胞融合成为杂交瘤细胞。
2.4 杂交瘤细胞的筛选与培养对融合后的杂交瘤细胞进行筛选，常用的方法包括喷洒法、限稀稀释法等。
筛选出具有单克隆性的杂交瘤细胞后，进行培养、扩增。
2.5 单克隆抗体的纯化将培养得到的杂交瘤细胞进行离心、洗涤等操作，得到含有目标抗体的上清液。
通过柱层析、电泳等方法，对上清液进行纯化，最终得到单克隆抗体。
3. 单克隆抗体的应用实验原理单克隆抗体在实验室中有多种应用，包括免疫组化、免疫印迹、流式细胞术等。
以下将介绍单克隆抗体在这些实验中的应用原理：3.1 免疫组化免疫组化是一种检测组织或细胞中特定抗原表达情况的方法。
通过与组织或细胞中特定分子结合，单克隆抗体可以为我们提供目标抗原的定位和分布情况。
3.2 免疫印迹免疫印迹是一种检测特定蛋白质表达情况的方法。
通过将蛋白质转移到膜上，并与特异单克隆抗体结合，可以用于检测目标蛋白质的存在与定量。
3.3 流式细胞术流式细胞术是一种用于分析和鉴定细胞表面标记物的方法。
通过与特定抗原结合，单克隆抗体可以进行标记，并通过流式细胞仪进行检测和分析。
3.4 免疫沉淀免疫沉淀是一种用于富集目标蛋白质的方法。
单克隆抗体的制备方法与应用
单克隆抗体的制备方法与应用一、前言单克隆抗体是指一种具有高度特异性和亲和力的抗体，其来源于单个B细胞克隆。
相比多克隆抗体，单克隆抗体更加纯净、稳定和可靠，因此在生物医学研究、诊断和治疗等方面有着广泛的应用。
本文将介绍单克隆抗体的制备方法与应用。
二、单克隆抗体的制备方法1. 免疫动物首先需要选取适当的动物进行免疫，通常选择小鼠或大鼠。
在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
2. 免疫原选择选择合适的免疫原是制备单克隆抗体的关键步骤。
常见的选择包括蛋白质、多肽、细胞表面分子等。
在选择时需要考虑到其特异性、稳定性和可重复性等因素。
3. 免疫程序在进行免疫前需要对动物进行预处理，例如注射低剂量的抗生素来消除潜在的感染。
接着，将免疫原注射到动物体内，通常需要多次免疫以增强免疫效果。
在免疫过程中需要对动物进行监测，例如采集血样检测抗体水平。
4. 融合细胞的制备在获得足够的抗体后，需要从动物体内采集B细胞并与骨髓瘤细胞进行融合。
常用的骨髓瘤细胞包括SP2/0和NS0等。
5. 单克隆抗体筛选通过限稀法或单一细胞分离法等方法将融合细胞分离为单个克隆，并通过ELISA、免疫印迹等方法筛选出特异性较高的单克隆抗体。
接着对筛选出的单克隆抗体进行扩增和纯化等处理。
三、单克隆抗体的应用1. 生物医学研究单克隆抗体在生物医学研究中有着广泛的应用，例如作为特定蛋白质或分子的检测工具、用于药物开发和治疗等。
2. 诊断单克隆抗体在诊断方面也有着重要的应用，例如用于肿瘤标志物的检测、病原体的检测等。
3. 治疗单克隆抗体在治疗方面也有着广泛的应用，例如用于治疗癌症、自身免疫性疾病等。
其中一些单克隆抗体已经被批准为药物并用于临床治疗。
四、总结单克隆抗体是一种具有高度特异性和亲和力的抗体，在生物医学领域中有着广泛的应用。
其制备方法包括适当动物选择、合适免疫原选择、多次免疫程序、融合细胞制备和单克隆抗体筛选等步骤。
说明单克隆抗体的制备原理及其商业化产品的应用
单克隆抗体的制备原理及其商业化产品的应用一、单克隆抗体的产生与概念抗体（antibody）是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。
常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。
一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。
即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。
因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。
1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。
这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。
通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗。
单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇的特异性抗体。
淋巴细胞杂交瘤是用人工方法使骨髓瘤细胞（纯系小鼠的腹水瘤型浆细胞）与已用抗原致敏并能分泌某种抗体的淋巴细胞（常用致敏动物的脾细胞，起作用的是其中的B 细胞）融合而成的。
用来使上述淋巴细胞致敏的抗原有人和动物的T细胞、B细胞、红细胞、肿瘤细胞、各种微生物或其他抗原物质等。
用适当方法把杂交瘤细胞分离出来，进行单个细胞培养，使之大量繁殖，则在该培养液中增殖而形成的细胞克隆，只产生完全均一的、单一特异性的抗体，即单克隆抗体。
二、单克隆抗体制备的基本原理要制备单克隆抗体需先获得能合成专一性抗体的单克隆B淋巴细胞，但这种B淋巴细胞不能在体外生长。
单克隆抗体的制备及应用
单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体技术是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。
单克隆抗体B淋巴细胞antibody technique)同骨髓肿瘤细胞杂交，获：一种免疫学技术，将产生抗体的单个(monoclonal得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。
是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
1 单克隆抗体的优点与局限性：1.1 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。
1.2 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。
由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
2 单克隆抗体的制备：单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。
这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。
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4 第四部分
单克隆抗体的应用
单克隆抗体的应用
农兽药的快速测 检验医学诊断试剂
作为亲和层系的配体
作为生物治疗的导向武器
应用
作为免疫抑制剂
增强抗原的免疫原性
作为研究工作中的探针
作为亲和层系的配体
单克隆抗体能与其相应的抗原特异性结合，因 而能能够从复杂系统中识别出单个成分。只要 得到针对某一成分的单克隆抗体，固定在层析 柱上，通过亲和层析，即可从复杂的混合物中 分离、纯化这一特定成分。
人源化单克隆抗体
人源化抗体就是指抗体的可变区部 分或抗体全部由人类抗体基因所编 码。人源化抗体可以大大减少异源 抗体对人类机体造成的免疫副反应。
其抗体的可变区和 嵌源结合构合性 成 抗单 ， 原克 通 ，隆 常 人抗 是 源体 部30是 分%指 用比同 来70时 诱%具 导。有 产鼠人生源恒去副和疗部除作定鼠效分免用区的。用都疫。来来是原。人性源和的毒，
嵌合性单克隆抗体 全人源单克隆抗体
3 第三部分
单克隆抗体的制备
单克隆抗的制备
11
动物免疫
2
细胞融合和选择性培养
3
杂交瘤细胞的筛选及克隆化
4
大量制备及纯化
单克隆抗体制备的简易流程
动物免疫
抗原制备：制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上 说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗 的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此， 免疫抗原是越纯越好，同时应根据所研究的抗原和 实验室的条件来决定。一般来说，免疫用的抗原只 需初步提纯甚至不提纯，但抗原中混杂物很多，特 别是如果这些混杂物的免疫原性较强时，则必须对 抗原进行纯化。
血清 ｜ 50%饱和度硫酸胺
上清 （清蛋白）
沉淀（球蛋白） ｜ 33%饱和度硫酸胺
上清 拟球蛋白
沉淀 r球蛋白
凝胶过滤法：干燥的凝胶颗粒吸水后形成了多孔胶粒，将蛋 白质溶液加在凝胶柱上进行洗脱时，大分子蛋白不能穿过凝 胶网孔进入。胶粒内，留在胶粒间隙的溶液中，随洗脱液最 先流出，小分子蛋白可穿过凝胶网孔进入胶粒内，受到凝胶 的阻留，向下移动较慢洗脱出来较慢，据此将不同大小的蛋 白质分离出来。
交联葡聚糖凝胶(Sephadex）
琼脂糖凝胶(Sepharose)
离子交换层析法 DEAE纤维素：结合溶液中带负电荷的蛋白质，又称 阴离子交换剂 CM纤维素：结合溶液中带正电荷的蛋白质，又称阳 离子交换剂
亲和层析法： • 将抗原（或抗体）连接到固相载体上，特异性吸
附液相中的抗体（或抗原），形成抗原抗体复合 物，然后改变条件，使抗原抗体复合物解离洗脱 出纯化的抗体（或抗原）。
这种杂交瘤，通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单 克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗 原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体 （ mAbs ），简称单抗。
2 第二部分
单克隆抗体技术的发展经历
单克隆抗体技术发展经历
鼠源性单克隆抗体
鼠源性单克隆抗体是来源于 鼠蛋白，因此对于人体而言 是外来物从而易被抵抗。
HAT选择性培养 1964年Littlefield首先发明了HAT (H—Hypoxanthine次黄 嘌呤，A—Aminopterin甲氨喋呤，T—Thymidine 胸腺 嘧啶核苷) 选择性培养。 HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷 酸生物合成途径设计的。
细胞利合用 成内糖核和苷DN氨酸A基，的酸进生物合成途径
免疫动物的选择：一般的杂交瘤生产都选用 BALB/c 小 鼠 或 LOU/c 大 鼠 作 为 免 疫 动 物 。 但 是 ， 有时为了特殊目的而需进行种间杂交，则可免疫其 他动物。就小鼠而言，初次免疫时以8-12周龄为宜， 雌性鼠较便于操作。
免疫程序的确定：在设计免疫程序时，应考虑到抗 原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与 间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力 等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。
单克隆抗体的制备及应用
目录
1 单克隆抗体的简介 2 单克隆抗体技术发展经历 3 单克隆抗体的制备 4 单克隆抗体的应用 5 展望
1 第一部分
单克隆抗体的简介
单克隆抗体的简介
1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交 技术的基础上，创建立杂交瘤技术。他们把可在体外培养 和无限增殖的骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细 胞融合，形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞既具有瘤细胞 易于在体外无限增殖的特性，又具有脾淋巴细胞那样合成 和分泌特异性抗体的特点。
有限稀释法
4
22
m
3
43
42
32
44
m
14 1
4
3
3
3 33
4 44
3 33
大量制备及纯化
大量制备
纯化方法
1、盐析 2、凝胶过滤 3、离子交换层析 4、亲和层析法
盐析：用中性盐使蛋白质沉淀析出的方法为盐析。大量的盐加入到蛋白溶液中， 高浓度的盐离子有很强的水化力，可夺取蛋白质的水化层，使蛋白质胶粒失水 发生凝聚而沉淀析出。
目 前 常 用 的 免 疫 程 序
细胞融合和选择性培养
融合过程中，常采用聚乙二醇（PEG）作为融合诱 导剂。PEG促进细胞融合的机制可能是与临近细胞膜 的水分相结合使细胞间的水分被取代，降低细胞表 面的极性，导致脂质双分子层不稳定，引起细胞膜 的融合 。
注意：PEG 的分子量和浓度与融合效果相关，PEG 的分子量越大，浓度越高，其促融率也越高，但其 粘度和细胞的毒性也随之增大；浓度低于30％时， 融合率低。
而合成DNA
主要生物 合成途径
叶酸拮抗物氨基蝶 呤可阻断主要途径
甲氨喋呤
补救途径
次黄嘌呤
HGPRT+ 次黄嘌呤 核苷酸
胸腺嘧啶 TK+
胸腺嘧啶
脱氧核苷酸
DNA
• 小鼠HGPRT-骨髓瘤细胞（Sp2/0）
• 融合后的细胞在HAT选择培养基中结局
+ Sp2/0
B
Sp2/0 Sp2/0
BB
Sp2/0 B
死亡 死亡 存活
杂交瘤细胞的筛选及克隆化
克隆化：指将抗体阳性孔进行克隆化。目的是将抗体 分泌细胞、抗体非分泌细胞、特异性抗体分泌细胞和 无关抗体分泌细胞分开。 克隆化的原则：尽早进行，反复4-5次 克隆化方法：有限稀释法、软琼脂平板法、显微克隆 法
阳性杂交瘤细胞应及时冻存，防染色体丢失、变异及 污染