层析技术
层析技术名词解释生物化学
层析技术名词解释生物化学
层析技术是一种用于分离化学物质、检测其组成以及研究它们之间相互作用的技术。
生物化学中层析技术是分离复杂组分，研究有机分子结构和行为的重要工具。
它通常用于研究大分子样品中小分子组分的组成，以及研究大分子行为的机理。
层析技术通常分为几种，包括高效液相色谱（HPLC）、柱层析和质谱法（MS）。
这些技术的主要原理是使用不同的条件来把一个大的物质分解成若干小的部分，以便更好地分析其结构。
HPLC分解液体原料的未知成分，它的原理是利用压力将液体溶质在固定条件下分解成不同组分。
而柱层析技术则是通过混合不同浓度的溶剂来萃取和精炼溶质，以便更好地观察它们的分子结构和行为。
MS则是利用电离和其他物理原理来辨别溶质的分子结构，这需要极强的精确度和精细度。
层析技术在生物学中用于研究生物体内各种物质的组成及其作用机理、行为和互作关系。
它用于分离有机化合物的各种组分，比如氨基酸、糖类、蛋白质和脂质。
它也可以研究有机物质、毒素和药物之间的相互作用，以及与生物物质的相互作用。
此外，层析技术可以以最佳状态和最佳梯度方式研究有机物质的组成和配合，用于精确测定有机物质的结构和性能。
此外，层析技术也用来研究血清中的各种成分的比例，以促进病毒或疾病的检测和诊断。
层析技术名词解释生物化学
层析技术名词解释生物化学
层析技术是一种分离、鉴定物质的技术，用于分离、鉴定和分析
生物分子的组成，以及它们之间的作用关系。
它将生物体的组成成分
分离出来，使得各成分可以进一步深入地分析和研究。
生物化学是一门研究生物体内的化学过程的多领域学科，它涉及
生物体中的活动物质，如氨基酸、蛋白质、核酸、糖类、脂类、核苷
酸和多糖等，以及这些物质之间的相互关系。
它也涉及分子生物学部分，以及生物体如何在环境条件变化时反应的机制。
层析技术在生物化学研究中具有重要意义。
它通过高效液相色谱法、液相色谱联用串联质谱法、质谱联用液相色谱法以及质谱联用质
谱法等技术，能够快速、准确地研究生物体内的活性物质，并分析其
相互关系。
该技术能够彻底检测出未知物质，可以解决复杂的生物化
学问题，为新药物开发提供可靠的理论和实验技术支持。
层析技术可以有效地揭示生物体中物质的细节，即物质在不同状
态和环境中的行为，还可以深入研究复杂生物体的构造、功能及活性，并发现物质间的相互作用。
此外，该技术也可以用于研究生物体内的
元素循环、营养的传递和调节、物质的识别及代谢过程等，从而确定
物质的作用机制，为治疗疾病提供有效的手段。
总之，层析技术是一种重要的研究生物化学的技术，能够深入研
究生物体组成的构造、功能及活性，及其之间的相互作用，为药物开
发及治疗疾病提供方法和技术支持，是生命科学研究的重要工具。
层析分离技术图文
利用层析分离技术，如活性炭吸附、 聚合物吸附等，可去除水中的有机污 染物，提高水质，保障饮用水安全。
05
层析分离技术的未来发展与挑战
新材料与新技术的研究与应用
新型吸附剂
研究具有高选择性、高吸附容量的新型吸附剂，以提高层析分离 的选择性和效率。
新型固定相
探索具有优异性能的新型固定相，以适应不同分离需求和条件。
层析分离技术图文
• 层析分离技术概述 • 层析分离技术的分类 • 层析分离技术的操作流程 • 层析分离技术的应用实例 • 层析分离技术的未来发展与挑战
01
层析分离技术概述
定义与原理
定义
层析分离技术是一种基于不同物质在 两相中的分配系数不同而实现分离的 物理分离方法。
原理
利用流动相和固定相的相互作用，使 混合物中的各组分在固定相和流动相 之间进行吸附、脱附、溶解、挥发等 过程，从而实现各组分的分离。
上样量控制
控制上样量，确保样品在柱子上得 到有效分离。
洗脱
洗脱液选择
根据分离需求选择合适的洗脱液，如有机溶剂、缓冲液等。
洗脱方式
采用适当的洗脱方式，如分段洗脱、梯度洗脱等。
洗脱速度控制
调节洗脱速度，确保样品得到充分分离。
检测与收集
检测方式
01
根据待分离组分的性质选择合适的检测方式，如紫外可见光谱、
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术，开发具有高分离性能的纳米尺度层析分 离材料。
提高分离效率与分辨率
优化分离条件
深入研究层析分离的原理和动力 学过程，优化分离条件，提高分 离效率和分辨率。
联用技术
将层析分离与其他分离技术联用， 实现多维分离，进一步提高分离 效果。
层析技术的分类
层析技术的分类层析技术是一种非常重要的分析方法，广泛应用于科学研究、工业生产等领域。
根据其原理和应用范围的不同，层析技术可以分为多种分类。
本文将从不同的角度对层析技术进行分类和介绍，以帮助读者更好地了解和应用这一技术。
一、按照原理分类1. 液相层析（Liquid Chromatography，简称LC）：液相层析是一种基于溶液流动的原理进行分离的层析技术。
在液相层析中，样品溶解于流动相中，通过与固定相相互作用的不同程度，实现样品分离和定量分析。
2. 气相层析（Gas Chromatography，简称GC）：气相层析是一种基于气体流动的原理进行分离的层析技术。
在气相层析中，样品通过与固定相相互作用的不同程度，实现样品分离和定量分析。
气相层析常用于挥发性物质的分离和分析。
3. 薄层层析（Thin-layer Chromatography，简称TLC）：薄层层析是一种基于固定相分离原理的层析技术。
在薄层层析中，样品在薄层固定相上进行分离，通过固定相与样品分子之间的相互作用，实现样品分离和定量分析。
二、按照固定相分类1. 水相层析（Normal-phase Chromatography）：水相层析是指在分离柱中使用极性固定相、非极性流动相进行的层析技术。
水相层析常用于极性化合物的分离和分析。
2. 反相层析（Reversed-phase Chromatography）：反相层析是指在分离柱中使用非极性固定相、极性流动相进行的层析技术。
反相层析常用于非极性化合物的分离和分析。
3. 离子交换层析（Ion-exchange Chromatography）：离子交换层析是一种基于离子交换原理进行分离的层析技术。
在离子交换层析中，样品离子与固定相上的离子交换，实现样品分离和定量分析。
三、按照分离模式分类1. 亲和层析（Affinity Chromatography）：亲和层析是一种基于生物分子间相互作用进行分离的层析技术。
层析技术名词解释生物化学
层析技术名词解释生物化学层析技术是一种分离和纯化生物化学物质的重要方法，它基于物质在不同介质中的吸附、分配和扩散特性，通过调节介质的性质使得不同成分在介质中的分布系数不同，从而实现物质的分离和纯化。
本文将对层析技术中的一些重要名词进行解释，以帮助读者更好地理解和应用该技术。
1. 层析柱层析柱是层析技术中的核心部件，它是一个管状容器，内部填充着特定介质。
物质在层析柱中的分离和纯化过程中，都是通过介质表面上的吸附、分配和扩散来实现的。
层析柱的大小、形状和介质种类都会影响到分离和纯化的效果。
2. 介质介质是层析柱中的填充物，它是层析技术中的重要因素之一。
介质种类的选择会对分离和纯化的效果产生直接的影响。
常见的介质有离子交换树脂、凝胶过滤介质、亲和层析介质等。
3. 扩散扩散是物质在介质中分离和纯化的重要过程之一，它是指物质分子在介质中的自由运动和相互碰撞的过程。
扩散速度受到介质孔径大小、温度和浓度等因素的影响。
4. 吸附吸附是介质表面吸附物质的过程，它是层析技术中的重要过程之一。
吸附速度受到介质表面特性、温度和浓度等因素的影响。
吸附过程中，物质会在介质表面形成静电相互作用，从而实现分离和纯化。
5. 分配分配是物质在不同相之间分配的过程，它是层析技术中的重要过程之一。
物质在介质中的分配系数受到介质表面性质、温度和浓度等因素的影响。
分配过程中，不同成分在介质中的分布系数不同，从而实现分离和纯化。
6. 洗脱洗脱是层析技术中的重要过程之一，它是指将物质从介质中洗出的过程。
洗脱液的选择和洗脱条件的调节都会对分离和纯化的效果产生影响。
常见的洗脱液有盐溶液、酸碱溶液和有机溶剂等。
7. 层析谱图层析谱图是层析技术中的重要分析手段，它是指将物质在层析柱中分离和纯化后所得到的峰形图谱。
层析谱图可以反映物质在介质中的分布和分离效果，从而辅助分析和定量。
8. 层析法层析法是一种分离和纯化生物化学物质的重要方法，它包括气相层析、液相层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等。
五种层析方法和原理
五种层析方法和原理五种层析方法和原理1. 列点 1•新华字典定义：层析方法是一种通过分析物质内部不同成分在不同条件下的分布情况，从而推断物质组成、性质和结构的方法。
•原理：层析方法基于物质成分在固定相和流动相之间的分配行为。
固定相通常是固体或涂覆在固体上的物质，而流动相则是向上或向下流动的溶剂。
2. 列点 2•薄层层析法：–原理：薄层层析法是一种将样品溶解在溶剂中后涂覆在薄层板的表面上，然后通过毛细作用将溶剂上升至薄层表面，样品成分分离的方法。
根据样品成分的亲疏水性质和与固定相的相互作用，不同成分会以不同的速度在薄层板上移动，从而实现分离。
–应用：薄层层析法常用于化学品分析、食品检测和药物分析等领域。
3. 列点 3•气相层析法：–原理：气相层析法是利用气体（流动相）和涂覆在固体或涂覆在固体上的涂层（固定相）之间的分配作用，使样品成分在涂层上分离的方法。
样品经过蒸发后进入气化室，在高温和惰性气体的作用下，样品成分分解为气体状态，然后进入色谱柱，通过不同成分与固定相的相互作用，实现分离。
–应用：气相层析法广泛应用于环境监测、食品安全检测和生物医药领域。
4. 列点 4•液相层析法：–原理：液相层析法是通过溶液中样品成分与固定相之间的相互作用，实现样品分离的方法。
当溶液通过柱子时，样品成分会根据其与固定相的相互作用力的强度和性质不同，在固定相上停留的时间也不同，从而实现分离。
–应用：液相层析法广泛应用于药物分析、食品检测和环境监测等领域。
5. 列点 5•离子交换层析法：–原理：离子交换层析法利用带电粒子（离子）之间的静电相互作用，在一定条件下，使样品中的离子与固定相中的带电粒子发生相互作用，从而实现分离。
不同离子会在不同条件下被吸附或释放，从而实现分离。
–应用：离子交换层析法常用于水质分析、药物分析和环境监测等领域。
通过以上列点方式，我们对五种层析方法的原理和应用作了简要的介绍。
这些层析方法在不同领域的分析和检测中扮演重要角色，为我们获取准确的数据和信息提供了有效手段。
层析的原理和应用
层析的原理和应用1. 层析的概念和基本原理层析（Chromatography）是一种将混合物中的组分分离和提纯的技术方法。
它基于组分之间在固定相和流动相之间的相互作用力的不同，使各种组分在系统中以不同速度迁移，达到分离的目的。
层析技术广泛应用于化学、生物、环境等领域。
层析技术的基本原理是利用流动相在固定相上的移动来实现物质的分离。
固定相通常是具有一定吸附性或分配性的材料，如硅胶、纸张、亲水性基质等。
流动相则是将待分离的混合物溶解在溶剂中，通过与固定相的相互作用，使各组分在固定相上以不同速率迁移。
2. 层析技术的分类和应用层析技术根据其基本原理和操作方式的不同，可以分为多种类型。
以下是其中几种常见的层析技术及其应用：2.1 薄层层析法（TLC）薄层层析法是一种在薄层材料上进行的层析技术。
常用的薄层材料包括硅胶和氧化铝等。
它具有简单、快速、经济的特点，广泛应用于药物分析、食品安全检测、环境监测等领域。
2.2 柱层析法柱层析法是将固定相填充在柱中，通过流动相沿着柱内固定相的分布，实现各组分的分离。
根据固定相的不同，柱层析法又可分为凝胶柱层析和高效液相层析等。
柱层析法在药物分离纯化、天然产物提取、有机合成等领域具有广泛应用。
2.3 气相层析法（GC）气相层析法是将待分离的混合物蒸发为气体状态，通过在柱中固定相的分离，最终使各组分在检测器上进行定性和定量分析。
气相层析法广泛应用于石油化学、环境监测、食品安全等领域。
2.4 液相层析法（LC）液相层析法是将待分离混合物溶解于液相，在柱中利用固定相进行分离。
液相层析法根据流动相的不同，可分为常压液相层析和高效液相层析等。
液相层析法在制药、生物、环保等领域具有广泛应用。
2.5 离子层析法（IC）离子层析法是利用不同组分之间的化学亲合性进行分离的一种层析技术。
它广泛应用于水质分析、环境监测、生物学研究等领域，尤其是对离子的分析具有很高的选择性和灵敏度。
3. 层析技术的优点和局限性层析技术具有许多优点，使其成为众多分析方法中的重要手段。
层析技术基本原理及应用
层析技术（Chromatography）是一种用于分离混合物中不同成分的重要方法，广泛应用于化学、生物化学、药学等领域。
以下是层析技术的基本原理及应用：
基本原理：
1. 分离原理：
-层析技术利用不同物质在固定相（stationary phase）和移动相（mobile phase）之间的分配系数不同来实现分离。
-样品在固相上受到吸附力和解吸力的影响，在移动相的推动下，不同组分以不同速度迁移，最终实现分离。
2. 类型：
-按照相对位置可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
-常见的层析技术包括气相色谱、液相色谱、离子色谱、薄层色谱等。
应用领域：
1. 生物化学：
-在蛋白质纯化、药物筛选、基因分析等方面广泛应用。
-用于分离和鉴定生物样品中的蛋白质、氨基酸、核酸等生物分子。
2. 制药工业：
-用于药物分析、药物提取和纯化等环节。
-常用于药物配方中主成分和杂质的分离和检测。
3. 环境监测：
-用于水质、大气、土壤等环境样品中有害物质的检测与分析。
-能够帮助监测环境中的污染物并进行有效处理。
4. 食品安全：
-在食品中添加剂、残留农药、重金属等的检测和分析中发挥作用。
-有助于确保食品安全和合规。
总的来说，层析技术通过精密的分离原理和操作流程，可以对复杂混合物进行高效分离和分析，为科学研究和工业生产提供了重要的技术支持。
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2、液相层析仪器
(1)、基本构造
记录器
储液器
层析柱 检测器 收集器
HPLC
•储液器
储存样品和流动相的试剂瓶
• 层析柱 包括：层析介质、柱管和柱管的各种接口。
有机 无机 生物 金属柱 有机玻璃柱 玻璃柱
•填充技术
装柱前介质的预处理:
溶胀、漂洗、再生、转型、脱气等；
湿法填充：将预处理过的介质，加入约1倍体积的溶液，搅
均匀度：介质颗粒大小在一定范围内的正态分布。如 50 μm －150 μm层析过程中，颗粒大小均匀、流速 快，线性关系，峰值集中。 机械强度：即刚性，衡量层析介质耐压程度的一 个重要标志，常用Pa表示。 机械强度高，流速快，保留值小。
理化性质：表示合成介质的材料及合成后的介质的物理 化学性质。 优：性质稳定，非特异吸附少，亲水性好， 能耐受一定浓度的酸碱和有机溶剂。
保留体积：自流动相中的某一组分进入层析柱开 始到出现该组分峰最高点时，所收集的体积.
保留时间：自流动相中的某一组分进入层析柱开始到 出现该组分峰最高点时，所需要的时间。
二、层析的原理
1、分离现象
完全分离，必须具备两个基本条件：
•两层析峰之间必须有足够远的距离，这是由分配 系数决定的； •每一个层析峰的峰宽尽可能窄，与层析过程中的 传质速度和扩散行为有关。
•吸附类型
物理吸附：范德华力 无选择性，吸附速度快，可逆 吸附力较强，吸附过程中释放的 能量小，吸附的分子层有单层、有 多层，易被解吸附。 化学吸附：化学键 选择性吸附，吸附速度慢，吸附 过程中释放的能量大，吸附力强， 不易被解吸附，被吸附的分子层只 有单层。
复合吸附：物理吸附和化学吸附同时发生
1931年
R
Kuhn 同样方法
蛋黄
黄体素
玉米
1941年 Martin 分配层析 1944年 R Co层析柱 分离aa 第一次上升为理论(塔板论) 滤纸 分离aa 纸层析
为水不溶性多糖聚合物作为新型介质奠定基础
1947年 美国原子能委员会 离子交换层析分
离稀土元素论文
饱和吸附： 吸附 平 衡 解吸附
检测流入和流出溶液中被分离物质的量， 如果相等，表示该层析柱已达饱和吸附。
3、吸附介质的分类及其性质
种类多； 多为天然材料制：如硅胶，氧化铝，沸石， 活性碳，磷酸钙等； 少数为化学合成：聚酰胺，聚苯乙烯等。
以组分的保留值为横坐标，吸光值为纵坐标作图， 得到层析图谱（层析曲线）。
(2)、层析峰的区域与名称
(3)、保留值
死体积：流动相中的溶质进入层析柱后，不被固定相 所吸附，与固定相不发生任何作用，通过柱所收集的 体积。它属于非滞留收集体积，与固定相填料的空隙 体积成正比。 死时间：流动相中的溶质进入层析柱后，不被固定相 所吸附，与固定相不发生任何作用，通过柱所需要的 时间。
20世纪50年代 Cermer 气相层析技术 60年代 高压液相层析技术 80年代 超临界色谱 90年代 微量高效液相
气相色谱仪
超临界色谱仪
高压液相色谱仪（HPLC）
蛋白快速分离系统（FPLC）
2、层析特点
(1)、层析技术的应用范围
范围：无机，有机，生物大分子以及活体 生物等。
（2）、分析参数
缺点：刚性差，不能耐压，分离时间长
•层析介质的性能 a. 形状 球形：实心和空心，网状球 不定形（纤维素粉、沸石等）
MILLIPORE
独特基质和多种特异性亲和配基的 Prosep亲和层析介质,适合不同抗体 的纯化 。
b. 技术指标： 粒度大小：直径（μm）粒度大的介质，流速快，理 论塔板数量低，分离效果差。反之，分离效果好。
2.细胞的破碎
物理法 机械磨碎法 加压破碎法 超声波处理 反复冻融法 自溶法 溶菌酶处理 表面活性剂处理 脂溶性溶剂处理 用低渗溶液
生物化学法
化学处理法
3.提取 将经过处理或破碎的细胞，置于一定条件和溶剂中， 让被提取的生物大分子充分释放出来的过程。 蛋白质和酶的提取 (1)、水溶液提取法： 常用方法 缓冲液，稀盐溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大 用量越大，提取越安全，浓度不能过稀 温度，pH，盐浓度
层析的定量分析： 在一定的层析操作条件下，待测物的含量与层析仪 检测器上产生响应的信号成正比。
积分仪
纯度鉴定： 根据层析峰的数量判断纯度。纯的物质只有 一个保留值。
应用实例
通过适当的样品处理方法，游离的和结合的 植物激素类似物[大豆素(daidzein)，雌马酚 (eguol)，染料木素(genitein)，芒柄花素 (formononetin)，香豆雌酚(coumestrol)和美皂 异黄酮biochanin A)]从新鲜植物材料白三叶草 (Trifolium repens)的提取物中分离出来。并在 不同的紫外光波长下，可被HPLC法定量测定。 根据滞留时间和标准品的添加，可鉴定出植 物激素类似物的层析峰。本方法的测定灵敏度为 2ppm。 通过比较游离植物激素类似物的含量测定， 本方法的提取率比经典的甲醇浸提法更为有效。
实验课人数 实验时间
周次
日期
内容
姓名
实验
2
3 6 7 8
9月13-19
9月 20-26 10月11-17 10月 18-24 10月25-31
分光光度计
色谱技术 芯片技术 实时定量 PCR技术 共聚焦激光 扫描显微技 术 质谱技术 离心技术
张学琴
张学琴 闫红 陈智忠 刘毅敏
张学琴，闫红
移至第8周 闫红 陈智忠 刘毅敏(confocal) 闫红(色谱) 冯继东 张学琴
对物质进行定量、定性和纯度鉴定。
3、层析分类
(1)、按层析的分离相状态分类： 气相层析，液相层析，超临界层析
(2)、按层析的分离机理分类
吸附层析，分配层析，排阻层析，离子交换层析， 亲和层析，金属螯合层析，疏水层析，反向层析， 聚焦层析，灌注层析
4、层析技术术语
(1)、层析图谱
HPLCL ： 标准胰蛋白酶峰
吸附容量：指单位质量或体积的层析介质吸附流动相 中溶质的质量，常用mg/g，mg/ml， mol/g, etc.表示 吸附容量大小 分离效率
4、流动相 两类：缓冲液：合适浓度、pH值、离子强度、
缓冲容量等。 有时加保护剂： 如抗氧化剂：DTT，巯基乙醇； 稳定剂：离子强度，糖类，尿素； 蛋白酶抑制剂：PMSF
9 10
11月1-7 11月8-14
冯继东 张学琴
11
11月15-21
电泳技术
张学琴(说明考试方式)
周三下午5-7节理论课；周五下午5-7节实验课
样品制备
生物大分子制备步骤： 材料的选择 和预处理
纯化
细胞的 破碎
提取
浓缩、干燥和保存
1. 材料选择及预处理
微生物： 对数生长期，酶和核酸的含量最高
代谢产物和胞外酶 菌体本身的物质
三、液相层析(liquid chromatography)
1、原理 2、液相层析仪器 3、固定相 4、流动相 5、应用
1、原理
根据萃取过程中被分离物质在有机相和水相的 相似相溶原理进行分离，不同的溶质在有机相和水 相互不相容的两相中分配系数有差异，在层析柱内 的保留值就不同，利用这些性质可以把它们分开。 液相层析中的两相是指固定相和流动相，它是 利用被分离物质的物理、化学及生物学特性，如吸 附力、带电性、分子量、分子极性、生物活性等的 差异，根据这些特性，选择不同的分离模式将各种 物质分开。
1931年，氧化铝作吸附介质 分离胡萝卜素的同 分异构体，表明吸附层析有较高的分辩率。
后来，活性碳、羟基磷灰石、磷酸钙、硅胶、沸石、 聚苯乙烯聚合物作介质，分离aa，核苷酸， 蛋白质，胺类化合物，生物碱类，黄酮类等 生物、有机和天然药物分子。
推出具高分辨率的用于微量分析的吸附层析介质。
2、原理 •吸附现象 吸附：密集行为 吸附现象：溶质从溶液中到停留在固体表面 上这一过程。 固－气，固－液，液－气 吸附介质与被吸附物质：吸附与被吸附 •吸附力的产生
离心等方法分离开
植物:
细胞壁中有大量纤维素，很坚韧 酚类物质多，不易去除 植物品种、生长发育，生物大分子的量变 化大 与季节有关 各器官、组织所含成分也不同
动物：
选择有效成分含量丰富的脏器组织 便于提取 绞碎、脱脂制成丙酮粉
对于预处理好的材料，若不立即进行实验， 应冷冻保存。对于易分解的生物大分子应选 用新鲜材料制备。
（2）有机溶剂提取法
与脂质结合比较牢固的蛋白质和酶， 常用不同比例的有机溶剂提取。
在提取蛋白质的过程中，应加入表面活性剂（SDS）、 还原剂（DTT，巯基乙醇）、变性剂（尿素）、酶 （RNAse, DNAse）、蛋白酶抑制剂（PMSF,aprotinin, Leupeptin, pepstatin）等。
3.固定相
固定相(层析介质、填料、填充剂)：
不溶于溶剂和水的固体化颗粒。
材料：无机----Al2O3，硅胶，沸石、
硅藻土等
有机-----聚苯乙烯，聚甲基丙烯酸等 多糖类----葡聚糖，琼脂糖， 聚丙烯酰胺等。
•层析介质与生物大分子的关系
分离生物大分子的介质
大孔径、亲水性好的球形材料 多糖类凝胶类层析介质 不同胶联度－－不同分子量 适合：多糖、酶、蛋白质、核酸 葡聚糖凝胶（sephadex） 琼脂糖凝胶（sepharose） 聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel）
有机溶剂：极性和溶解度 分离生物大分子：甲醇， 乙醇，乙腈，丙醇等。
5、应用 层析定性分析：
a. 保留值及其测定方法：
绝对保留值：温度、流速、固定相性质、样品杂 质等影响，导致重现性差。 相对保留值：常用法。与柱温，固定相性质关。 b.已知内标法：在未知样品中加入一定的已知 物使层析峰增高来进行定性分析。